胡柚皮黄酮对非酒精性脂肪性肝炎小鼠Th17/Treg平衡的调节作用

主要通过观察胡柚皮黄酮(PTFC)对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠Th17/Treg平衡的调节作用,探讨其干预NASH进展的免疫机制。以高脂饮食16周建立C57BL/6小鼠NASH模型,在造模第7周起分别预以25,50,100 mg·kg^-1·d^-1的PTFC灌胃干预10周,生化法检测血清TG,CHOL,ALT,AST水平,HE染色观察肝组织病理学变化;Real-time PCR检测肝组织RORγt和Foxp3 mRNA表达;流式CBA法检测血清IL-17,IL-6,IL-10,IL-4水平。研究发现,模型组小鼠血清CHOL,ALT,AST水平较正常组升高,TG水平下降;肝组织RORγt mRNA表达增强,Foxp3 mRNA表达下降,RORγt/Foxp3比值下降;血清IL-17,IL-6水平升高,IL-10,IL-4水平降低;PTFC干预后能明显减轻NASH小鼠肝组织炎症程度,改善肝功能,同时能够促进肝组织Foxp3 mRNA的表达而抑制RORγt mRNA表达,有效降低促炎因子IL-17和IL-6的水平而提高抑制性细胞因子IL-10和IL-4的水平。研究表明,高脂饮食诱导的NASH小鼠存在着Th17/Treg的免疫失衡,PTFC能通过调节Th17/Treg的平衡而缓解NASH的炎症反应,防止其进展。     

胃癌患者手术治疗前后血清CA72-4、IL-8和SA检测的临床评估

本文报告胃癌患者手术治疗前后血清CA72-4、IL-8和唾液酸(SA)水平的变化,并就临床价值作初步的探讨。现将结果报告如下。1资料和方法1.1临床一般资料1.1.1病人组:33人(男25,女8),均为我院普外科经临床诊断明确的胃癌患者(包括体征、胃镜,部分实验室检测指标,最后经手术病理切片证实)。1.1.2正常人组:35人(男25,女10),均为我院体检中心经健康体检合格的正常人,无心、肝、肺、肾等重要脏器疾患,肝、肾功能试验正常,家属中无肿瘤病史。     

肾气丸对非酒精性脂肪性肝炎大鼠Bcl-2/Bax、Fas/FasL信号通路的影响

目的:观察Bcl-2/Bax、Fas/Fas L介导的信号转导通路在高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎大鼠的作用及肾气丸对其的影响。方法:采用高脂饲料连续喂养12周建立大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型,同时以肾气丸进行干预12周。HE染色观察大鼠肝组织病理组织学变化,免疫组织化学检测肝组织中Fas、Fas L、Bcl-2、Bax、Caspase-8蛋白的表达;Realtime-PCR法检测肝组织Caspase-8 mRNA表达。结果:模型组大鼠肝组织Bcl-2、Bax、Fas、Fas L蛋白以及Caspase-8 mRNA和蛋白表达均较正常组显著增加(P<0.01),Bcl-2/Bax比值较正常组明显的降低(P<0.05);大鼠肝组织Caspase-8蛋白表达与Fas、Fas L蛋白表达均呈明显正相关(r分别为0.907、0.804,P均<0.01);予以肾气丸干预后,Bax、Fas、Fas L蛋白的表达以及Caspase-8 mRNA和蛋白的表达均较模型组明显的降低(P<0.05),Bcl-2/Bax比值较模型组明显的增加(P<0.05),Bcl-2蛋白的表达与模型组比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论:肾气丸可能通过影响Bcl-2/Bax、Fas/Fas L信号转导通路,下调Bax、Fas、Fas L、Caspase-8表达,减少肝细胞的脂性凋亡,从而防治大鼠非酒精性脂肪性肝炎的发生发展。     

胡柚皮黄酮诱导自噬抑制肝细胞脂肪变性的作用研究

目的 观察胡柚皮黄酮对棕榈酸诱导的肝细胞脂肪变性的影响。方法 棕榈酸诱导HepG2细胞脂肪变性，不同浓度胡柚皮黄酮干预后，采用油红O染色法观察肝细胞脂肪变性；荧光探针法观测细胞内活性氧水平及线粒体膜电位变化；免疫印迹法检测Beclin-1、LC3及P62蛋白表达。结果 棕榈酸诱导后，HepG2细胞内脂滴和活性氧含量明显增高；胡柚皮黄酮处理后，细胞内脂滴和活性氧均明显降低，线粒体膜电位恢复，LC3和Beclin-1蛋白表达上调，P62蛋白表达下调。结论 胡柚皮黄酮能改善肝细胞脂肪变性和氧化应激反应，机制可能与其调控线粒体自噬，维持线粒体功能稳定有关。     

山楂叶总黄酮对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织解偶联蛋白2表达的影响

目的:观察解偶联蛋白2(UCP2)在高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝组织的表达及山楂叶总黄酮(TFHL)对其的影响.方法:以高脂饮食喂养12周诱导SD大鼠建立NASH模型,同时分别以250,125 mg·kg~(-1)·d~(-1)的TFHL和195.4 mg·kg~(-1)·d~(-1)的易善复进行干预,观察大鼠肝组织的病理改变,血清ALT,AST水平,肝组织匀浆TG,CHOL,MDA含量和T-AOC的活性,RT-PCR检测UCP2基因mRNA在肝组织中表达,ELISA检测肝组织UCP2含量.结果:NASH模型组大鼠肝组织重度脂肪变、炎细胞浸润,血清ALT,AST水平和肝组织TG,CHOL,MDA,UCP2含量较正常大鼠明显增高,UCP2 mRNA表达显著增强,T-AOC活性明显降低.肝组织UCP基因的表达与MDA含量呈明显正相关,与T-AOC活性则呈负相关.TFHL高、低剂量组大鼠肝组织炎症活动程度、肝匀浆MDA和UCP2含量以及肝组织UCP2 mRNA表达均较模型组大鼠显著降低,而肝匀浆T-AOC的活性则较模型组大鼠明显增高.结论:TFHL可能是通过抑制氧应激/脂质过氧化反应和肝组织UCP2过表达的途径减轻肝脏炎症损伤,从而防止NASH的进一步发展.     

理气化痰祛瘀法对非酒精性脂肪性肝炎大鼠脂肪细胞因子表达的影响

[目的]观察理气化痰祛瘀中药对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎（NASH）大鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）、瘦素（1eptin）及其肝组织mRNA水平的影响，探讨其防治NASH的作用机制。[方法]以高脂饮食喂养Wistar大鼠12周，建立大鼠NASH模型，同时以不同剂量的理气化痰祛瘀法中药干预12周，测定大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）及游离脂肪酸（FFA）水平，观察肝组织的病理改变，原位杂交技术检测肝组织TNF-α、IL-6、leptinmRNA表达，放免法测定血清TNF-α、IL-6、leptin水平。[结果]NASH大鼠血清ALT、AST、FFA、TNF-α、IL-6、leptin水平较正常大鼠显著升高，肝组织TNF-α、IL-6和leptinmRNA表达显著增强，理气化痰祛瘀法中药能显著改善NASH大鼠肝组织炎症活动程度，显著降低ALT、AST、FFA、TNF-a、IL-6、leptin水平和肝组织TNF-α、IL-6、leptinmRNA表达。[结论]TNF-α、IL-6、leptin参与高脂饮食诱导的大鼠NASH的发生，理气化痰祛瘀中药能调节TNF-α、IL-6、leptin的分泌，防止NASH的进一步发展。     

瘦素诱导肝星状细胞增殖及银杏叶提取物调控作用的研究

目的:观察银杏叶提取物(GbE)对外源性瘦素(Leptin)诱导肝星状细胞(HSC)增殖功能的影响。方法:分别以不同浓度瘦素(0、10、50、100、200、400μg/L)在不同时相(6、12、18、24h)对复苏后处于对数生长期的HSC-T6细胞进行刺激,同时采用银杏叶提取物(20、40、80、160mg/L)对100μg/L瘦素刺激的HSC-T6细胞作用,设常规培养组为对照,均用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞的增殖情况。结果:不同剂量瘦素在不同时间点对HSC-T6细胞增殖呈现剂量、时间依赖性(P<0.05)。银杏叶提取物能明显抑制瘦素刺激的HSC-T6的增殖(P<0.05)。结论:瘦素可明显刺激HSC的增殖,GbE对瘦素刺激的HSC的活化途径的抑制,可能是其抗肝纤维化的重要机制。     

肾气丸对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝细胞脂性凋亡的影响

[目的]探讨肾气丸对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎（NASH）大鼠肝细胞脂性凋亡的影响。[方法]采用高脂饲料连续喂养12周建立大鼠NASH模型,40只大鼠随机分为4组,正常组予以标准饲料喂养,其余3组进行高脂饮食造模,除模型组外,其他2组分别以肾气丸、二甲双胍进行干预12周。全自动生化仪检测血脂及血清酶学,ELISA法检测血清游离脂肪酸（FFA）水平;苏木精-伊红染色光镜下观察肝组织病理学变化,计算非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）炎症活动度积分（NAS）;TUNEL法检测肝细胞凋亡水平,计算凋亡指数（AI）。[结果]NASH模型组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、FFA水平均较正常组明显增高（P〈0.05,〈0.01）,血清三酰甘油（TG）水平较正常组明显降低（P〈0.05）,肝组织NAS、AI明显高于正常组（P〈0.01）。应用肾气丸和二甲双胍干预后,血清ALT、AST、TC、LDL-C、FFA水平均较模型组明显降低（P〈0.05）,血中TG、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）与模型组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。肝组织NAS和AI较模型组显著降低。相关性分析发现,大鼠肝细胞的AI与肝组织NAS及血清FFA水平呈明显正相关（均P〈0.01）。[结论]NASH大鼠存在着脂质代谢紊乱和肝细胞的脂性凋亡。肾气丸与二甲双胍作用相似,可能是通过调节脂质代谢,影响FFA,阻断其引发的促肝细胞脂性凋亡的级联启动,从而有效地防治NASH的进展。     

三七对酒精性肝病大鼠肝脏瘦素及其受体表达的影响

目的：观察三七对酒精性肝病大鼠肝脏瘦素及其受体表达的影响，探讨三七抗酒精性肝病的作用机制。方法：70只SD大鼠随机分为正常组、模型组、三七高剂量组、三七低剂量组和硫普罗宁组，大鼠灌服白酒一玉米油一吡唑混合液造模，三七高、低剂量组和硫普罗宁组大鼠造模的同时予以相应的药物进行干预，14周后HE染色及Masson三色染色，观察各组大鼠肝组织病理学改变，免疫组化法检测肝组织中瘦素及其受体的表达。结果：模型组大鼠肝组织出现中一重度脂肪肝和不同程度炎症，2例见轻度肝纤维化表现；肝组织瘦素及其受体的表达较正常组明显增高（P〈0．01）。三七高、低剂量组及硫普罗宁组大鼠肝组织脂肪变程度及炎症程度较模型组明显减轻（P〈0．01，P〈0．05），且无明显纤维化形成；肝组织瘦素及其受体表达也较模型组明显减轻（P〈0．01，P〈0．015）。结论：三七防治大鼠酒精性肝病的作用机制可能与其抑制肝组织局部瘦素及其受体的表达有关。     

膈下逐瘀汤对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏脂肪酸代谢酶的影响

目的:观察膈下逐瘀汤对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝脏脂肪酸代谢酶的影响,探讨膈下逐瘀汤防治NASH的作用机制。方法:30只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、膈下逐瘀汤组,每组10只,正常组予标准饲料喂养,其他两组予高脂饲料喂养,同时膈下逐瘀汤组予14g/(kg.d)的膈下逐瘀汤流浸膏灌胃,正常组和模型组以等容量的蒸馏水灌胃,连续12周。HE染色后光镜下观察肝脏组织病理学改变;生化法测定肝组织匀浆TG、CHOL含量;ELISA法检测血清游离脂肪酸(FAA)和肝组织脂肪酸合酶(FAS)、乙酰CoA羧化酶(ACC)、肉毒碱棕榈酸转移酶-1(CPT-1)、硬脂酰辅酶A去饱和酶-1(SCD-1)含量。结果:模型组大鼠肝组织出现重度脂肪变,肝细胞气球样变,肝小叶出现不同程度的炎细胞浸润和点片状坏死灶;肝脏NAFLD活动度积分(NAS)较正常组明显增高(P0.01),血清FAA和肝组织TG、CHOL含量较正常组明显增高(P0.01);肝组织ACC、FAS表达较正常组显著升高(P0.01),而CPT-1、SCD-1蛋白表达则较正常组明显下降(P0.01)。应用膈下逐瘀汤干预后,大鼠肝组织NAS较模型组明显下降(P0.05);血清FAA、肝组织TG、CHOL水平及ACC、FAS表达均较模型组显著下降(P0.01,P0.05);而肝组织CPT-1和SCD-1表达则较模型组明显升高(P0.01,P0.05)。结论:高脂饮食诱导的NASH大鼠存在着脂肪酸代谢紊乱;膈下逐瘀汤能一定程度纠正肝组织脂肪酸代谢酶的紊乱,减少脂肪酸对肝脏损伤有关,这可能是其防治NASH的作用机制之一。