酒精性肝病患者血清IL-33高水平的临床意义

目的探讨血清IL-33异常升高在酒精性肝病(ALD)发病中的作用及其临床意义。方法应用ELISA法检测40例酒精性肝炎、17例重症酒精性肝炎、75例酒精性肝硬化和48例健康人血清IL-33及其可溶性受体ST2(s ST2)水平,分析血清IL-33水平与临床生化指标的相关性。结果酒精性肝炎、重症酒精性肝炎和酒精性肝硬化患者血清IL-33水平分别为(85.20±9.44)pg/ml、(68.70±8.14)pg/ml和(64.45±3.78)pg/ml,均显著高于健康人[(42.17±2.41)pg/ml,P0.001],且酒精性肝炎患者血清IL-33水平较酒精性肝硬化患者明显升高(P0.05),而在重症酒精性肝炎患者和酒精性肝硬化患者不同Child-Pugh分级组间差异无显著性(P0.05);酒精性肝炎、重症酒精性肝炎和酒精性肝硬化患者血清s ST2水平分别为(96.75±11.30)pg/ml、(51.92±11.78)pg/ml和(75.82±6.81)pg/ml,均显著高于健康人[(43.97±3.01)pg/ml,P0.001],且酒精性肝炎患者血清s ST2水平较重症酒精性肝炎或酒精性肝硬化明显升高(P0.001或P0.05),而酒精性肝硬化Child-Pugh A组患者较B级或C级明显升高(P均0.001);ALD患者外周血清IL-33水平与s ST2无明显相关性,IL-33水平与淋巴细胞计数(R=0.273,P0.01)、白蛋白(R=0.237,P0.01)、ALT(R=0.462,P0.001)、AST(R=0.387,P0.001)和胆碱脂酶(R=0.225,P0.01)水平呈显著正相关,而血清IL-33水平与中性粒细胞、总胆红素、碱性磷酸酶、总胆固醇和凝血酶原活动度水平无显著相关性。结论酒精性肝病患者血清升高的IL-33可能促进了患者免疫反应而诱导疾病的进展。     

抗肝纤维化的适应患者与治疗时机

1．肝纤维化治疗对象包括大多数慢性肝病患者，病因治疗与抗纤维化治疗同样重要：肝纤维化是存在于许多慢性肝病的共同病理特征，因此大多数慢性肝炎与肝硬化患者都有进行肝纤维化治疗的必要。肝纤维化治疗策略包含去除病因、抗炎症与免疫调节、抑制肝星状细胞（HSC）活化及其胶原代谢、刺激肝细胞再生等多方面，实际是一种广义的抗肝纤维化综合疗法，几乎适合于有慢性肝病，包括慢性病毒性乙型或丙型肝炎、慢性酒精性肝炎、非酒精性脂肪肝与肝硬化等，     

miR-21对肝星状细胞的增殖和成纤维化的影响

目的研究miR-21对肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)的增殖和成纤维化的影响。方法将大鼠HSC-T6传代分为四组,分别为正常组、酒精组、miR-21模拟物组、miR-21抑制剂组。其中正常组不做处理;miR-21模拟物组和miR-21抑制剂组分别将miR-21模拟物和miR-21抑制剂瞬时转染入细胞;然后,再用含有酒精的培养基诱导酒精组、miR-21模拟物组、miR-21抑制剂组的HSC的活化;48 h后,分别做两部分实验,一部分是细胞增殖测试实验(cell counting kit-8,CCK8);另一部分是提取各组细胞蛋白,Western blotting检测因子增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、Smad3、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscles actin,α-SMA)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的表达变化。结果CCK8结果显示,miR-21模拟物能够促进HSC的增殖与活化,从而促进纤维化的进展;而miR-21抑制剂能够抑制HSC的活化,降低HSC的活力值,缓解纤维化的进展。Western blotting检测结果显示,PCNA、TGF-β1、Smad3、α-SMA、CTGF在酒精组的表达量明显比正常组高(P<0.05),而在miR-21模拟物组则比酒精组高(P<0.05),miR-21抑制剂组比酒精组明显降低(P<0.05)。结论miR-21能够促进HSC的增殖,促进HSC成纤维化的进展。     

视黄酸影响大鼠肝星状细胞周期素依赖激酶抑制剂的表达

目的 研究视黄酸影响培养大鼠肝星状细胞周期素依赖激酶抑制剂的表达。方法 分离、培养正常大鼠肝星状细胞、传代细胞经1ng/ml转化生长因子β1刺激后再以1nmol/ml视黄酸处理,然后采用MTT法、免疫细胞化学法、原位杂交技术并结合图像定量分析观察细胞增殖、α-平滑肌肌动蛋白、视黄酸受体β2及p16、p21与p27等基因的表达情况。结果 视黄酸明显抑制星状细胞增殖（41．50％,P＜0．05）、降低α－平滑肌肌动蛋白水平（55．09％,P＜0．05）,并诱导视黄酸受体β2基因的表达。同时,视黄酸增高p16蛋白水平（218．75％,P＜0．05）,促进p21蛋白表达;而两组细胞均未能以免疫细胞化学法检出p27。此外,视黄酸对p16、p21与p27 mRNA水平均无影响。结论 视黄酸抑制由转化生长因子β1介导的大鼠肝星状细胞激活与其上调p16、p21基因转录后表达有关。     

血清转化生长因子与白介素-6、-8水平在酒精性肝病病程及预后判断中的作用

目的：探讨血清转化生长因子与白介素-6、-8水平在酒精性肝病病程及预后判断中的作用。方法统计分析2012年5月至2014年5月我院收治的75例酒精性肝病患者的临床资料。结果酒精性脂肪肝组、酒精性肝炎组、酒精性肝硬化组患者的血清TGF-β、IL-6和 IL-8水平均明显比对照组高（P＜0．05）;酒精性肝硬化组患者的血清TGF-β、IL-6和IL-8水平均明显比酒精性脂肪肝组、酒精性肝炎组高（P＜0．05）,且酒精性肝炎组患者的TGF-β、IL-6和IL-8水平均明显比酒精性脂肪肝组高（P＜0．05）。结论血清TGF-β、IL-6、IL-8水平和肝脏病变程度呈正比例关系,可作为判断患者酒精性肝病病程及预后的重要指标。     

内毒素受体在肝星状细胞的表达及其作用

目的了解内毒素受体在肝星状细胞活化中的变化和作用。方法分离正常大鼠的肝星状细胞，以逆转录聚合酶链反应法检测其在体外培养过程中内毒素受体（CD14和TLR4）mRNA的表达变化。以细胞免疫染色法检测肝星状细胞内毒素受体CD14的表达。制作肝纤维化和肝硬化的大鼠模型，免疫组织化学法动态检测肝组织内CD14和α平滑肌肌动蛋白的表达变化和定位。结果初分离的肝星状细胞表达低水平的CD14 mRNA，不表达TLR4 mRNA，培养活化的肝星状细胞内毒素受体的表达增强，内毒素可上调这种表达。体外培养10d的肝星状细胞表达CD14蛋白，内毒素作用后CD14表达更明显。在肝纤维化的发展过程中，肝组织内CD14阳性细胞增多，阳性细胞多分布于肝窦周围，晚期CD14阳性细胞聚集在纤维隔内，与α平滑肌肌动蛋白阳性细胞的分布一致。结论肝星状细胞在体内外的活化过程中内毒素受体的表达增强，因此，内毒素受体可能参与肝星状细胞在肝脏炎症和纤维化中的作用。     

活化的肝星状细胞通过CCL22/CCR4轴促进肝癌细胞侵袭能力

目的探讨肝星状细胞通过CCL22/CCR4轴促进肝癌细胞侵袭的作用和可能机制。方法 TGF-β1(10 ng/ml)处理肝星状细胞LX-2不同时间,Western印迹检测处理前后肝星状细胞的活化标志物desmin及α-SMA的表达变化以及肝星状细胞LX-2和不同肝癌细胞系CCL22、CCR4表达。Transwell实验检测星状细胞LX-2或CCL22基因沉默后的MHCC-LM3侵袭的影响,Westem印迹检测上皮标志E-cadherin和间质标志N-cadherin及Vimentin的表达变化。结果肝星状细胞LX-2能被TGF-β1(10 ng/ml)活化,其活化的标志物desmin(24h:2.038±0.341;36h:2.562±0.248,相对于0h:1.329±0.172,P=0.008及P0.001)和α-SMA(24h:2.741±0.439;36h:3.126±0.521,相对于0h:1.271±0.182,P0.001)在处理24、36h后显著升高,星状细胞的趋化因子CCL22也随之高表达(24h:1.523±0.263;36h:1.836±0.319,相对于0h:3.126±0.634,P0.001),3株人肝细胞癌细胞系均有CCR4的表达,其中MHCC-LM3细胞表达最强。肝星状细胞LX-2活化后与肝癌细胞MHCC-LM3共培养能诱导其上皮间质分化,活化24h和36h后上皮标志物Ecadherin表达明显下降(24h:1.273±0.207;36h:1.405±0.141,相对于0h:3.126±0.634,P0.001),间质化指标Ncadherin(24h:2.516±0.384;36h:2.392±0.416,相对于0h:1.058±0.021,P0.001)和Vimentin(24h:2.875±0.437;36h:2.924±0.353,相对于0h:1.452±0.121,P0.001)表达则升高,并促进其侵袭。通过RNA干扰技术靶向沉默肝星状细胞CCL22则不能增强肝癌细胞侵袭能力,也不能诱导肝癌细胞MHCC-LM3发生上皮间质分化。结论肝星状细胞通过趋化因子CCL22/CCR4轴促进肝癌细胞侵袭,其机制可能与诱导肝癌上皮间质化有关。     

白细胞介素10对肝星状细胞激活的调节

目的 探讨白细胞介素10(IL-10)通过血小板衍生生长因子(PDGF)和丝裂原活化激酶(MAPK)信号通路蛋白对肝星状细胞(HSC)激活的影响。 方法 将培养的HSC随机分为4组:1组:对照组;2组:加入1 ng/ml IL-10;3组:加入5 ng/ml IL-10;4组:加入25 ng/ml IL-10。培养2d后,逆转录-聚合酶链反应法检测各组细胞中PDGF mRNA的表达;western blot法检测各组细胞PDGF、MAPK信号通路蛋白细胞外信号调节激酶(ERK)和p38以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。 结果 1、5、25 ng/ml的IL-10作用后,与对照组相比HSC的ERK、p38以及α-SMA的表达显著降低(F值分别为240.47、21.39、28.86,P值均<0.01),并呈量效依赖关系;5、25 ng/ml的IL-10可以使PDGF表达显著降低(P值均<0.01),并呈量效依赖关系。 结论 IL-10可通过PDGF/MAPK信号通路抑制肝星状细胞激活。     

影响酒精性肝病预后的危险因素分析

目的探讨影响酒精性肝病预后的危险因素。方法回顾调查141例住院酒精性肝病(包括酒精性肝炎及酒精性肝硬化)患者各种可能影响预后的因素,包括年龄、酒精总摄入量、体质指数(BMI)、AST/ALT比值、GGT、LDH,分析上述各种因素与肝功能受损程度(酒精性肝炎、肝硬化Child-Pugh分级A、B及C)间的关系。结果①酒精性肝炎患者年龄及酒精摄入总量均显著低于酒精性肝硬化患者(P<0.01及P<0.05),但在酒精性肝硬化Child-Pugh各级间无显著差异(P>0.05)。②酒精性肝炎与肝硬化Child-Pugh A级患者间(P>0.05)、酒精性肝硬化Child-Pugh B级与C级患者间的BMI无显著差异(P>0.05),但酒精性肝炎与酒精性肝硬化Child-Pugh A级患者BMI显著高于酒精性肝硬化Child-Pugh B级及C级患者(P<0.05)。③AST/ALT比值与肝功能受损程度呈正相关(r=0.9752,P<0.01)。④LDH水平与肝功能受损程度呈正相关(r=0.9797,P<0.01)。⑤GGT水平在各组间均无显著性差异。结论患者年龄、BMI、酒精总摄入量、AST/ALT比值及LDH均与酒精性肝病的严重程度有一定关系,其中AST/ALT比值及LDH水平可较好地用于评估酒精性肝病患者的预后。     

羟基喜树碱对大鼠肝星状细胞转化生长因子β1、α-平滑肌肌动蛋白和I型胶原表达的影响

目的 研究羟基喜树碱(HCPT)对大鼠肝星状细胞(HSC) -T6增殖、转化生长因子β 1、α-平滑肌肌动蛋白、I型胶原表达的影响,探讨HCPT抑制肝纤维化的机制.方法 体外培养肝星状细胞-T6,设立空白对照组和HCPT低剂量组(0.25 μ g/L)、HCPT中剂量组(0.50 μ g/L)、HCPT高剂量组(0.75μ g/L).四甲基偶氮唑盐比色实验测定细胞增殖的情况;RT-PCR检测转化生长因子β 1、α-平滑肌肌动蛋白、I型胶原基因表达;Western blot检测转化生长因子β 1、α-平滑肌肌动蛋白表达;酶联免疫吸附法检测培养细胞上清液中的I型胶原的含量.组间差异用方差分析,两两比较用q检验.结果 (1) HCPT低剂量组、中剂量组、高剂量组A值分别为0.631±0.074、0.469±0.012、0.204±0.001,均较空白对照组(0.793±0.098)降低(F=82.86,P＜0.01);(2)与空白对照组比较,HCPT低剂量组、中剂量组、高剂量组I型胶原(0.716±0.064、0.611±0.040、0.510±0.014、0.403 ±0.026)、α-平滑肌肌动蛋白(0.696±0.075、0.579±0.037、0.470±0.024、0.299±0.017)、转化生长因子β 1(1.019±0.056、0.835±0.022、0.696±0.055、0.322±0.104)mRNA表达均较显著下降(F值分别为133.304,244.501,100.164,P值均＜0.01);(3)与空白对照组比较,HCPT低剂量组、中剂量组、高剂量组α-平滑肌肌动蛋白(0.858±0.050、0.620±0.045、0.525±0.042、0.434±0.052)、TGF β 1蛋白(0.872±0.053、0.654±0.047、0.545±0.042、0.436±0.039)表达均下降(F值分别为234.56,312.34,P值均＜0.01);(4) HCPT低剂量组、中剂量组、高剂量组I型胶原含量分别为(168.367±16.453) ng/ml、(141.284±11.731)ng/ml、(132.910±10.048) ng/ml,均较空白对照组(188.733±18.299)ng/ml下降(F=15.49,P＜0.01).结论 HCPT能下调肝星状细胞-T6 TGF β 1表达,抑制肝星状细胞-T6增殖、活化以及I型胶原的合成和分泌,这可能是HCPT抗肝纤维化的作用机制之一.     

Alpha-SMA expression in hepatic stellate cells and quantitative analysis of hepatic fibrosis in cirrhosis and in recurrent chronic hepatitis after liver transplantation

BACKGROUND: The alpha isotype of actin expressed by hepatic stellate cells reflects their activation to myofibroblast-like cell and has been directly related to experimental liver fibrogenesis, and indirectly to human fibrosis in chronic liver disease. AIMS: To evaluate the changes in distribution and percentage of alpha-smooth muscle actin-positive hepatic stellate cells and the correlation with the degree of the fibrosis in cirrhotic livers, as well as in patients with recurrent HCV chronic hepatitis after liver transplantation. METHODS: Human liver biopsies were divided in four groups: (1) normal livers obtained from cadaveric liver donors (n=35), (2) cirrhosis post-HBV hepatitis (n=11), (3) cirrhosis post-HCV hepatitis (n=10), and (4) post-transplant recurrent HCV chronic hepatitis (n=13). Samples were stained with anti-alpha-smooth muscle actin antibody by immunoperoxidase method and semi-quantitatively evaluated. Liver fibrosis was assessed from specimens stained with Masson's trichrome and quantified by computer image analysis. RESULTS: The percentage of alpha-smooth muscle actin-positive hepatic stellate cells was significantly higher in the HBV cirrhosis, HCV cirrhosis and post-transplant HCV recurrent hepatitis groups (36.1+/-15.2, 23.8+/-19.7 and 27.8+/-16.4%, respectively) compared to the liver donor group (2.9+/-4.0%). The alpha-smooth muscle actin-positive hepatic stellate cells to fibrous tissue ratio were significantly higher in the post-transplant recurrent HCV hepatitis group (2.36+/-1.12) compared to both the donor livers and the HCV cirrhosis groups (0.74+/-1.09 and 1.03+/-0.91, respectively). The alpha-smooth muscle actin-positive hepatic stellate cell percentage and fibrosis correlated positively in the post-transplant recurrent HCV hepatitis group and negatively in the HCV cirrhosis group. No difference in the immunohistochemical and morphometrical variables was found between the HCV cirrhosis and HBV cirrhosis groups. CONCLUSIONS: These results indirectly confirm that, in vivo, alpha-smooth muscle actin expression is a reliable marker of hepatic stellate cells activation which precedes fibrous tissue deposition even in the setting of recurrent HCV chronic hepatitis after liver transplantation, and it could be useful to identify the earliest stages of hepatic fibrosis and monitoring the efficacy of the therapy. In the presence of advanced cirrhosis other factors, rather than alpha-smooth muscle actin-positive hepatic stellate cells, may sustain fibrosis deposition.     

乙型肝炎肝硬化患者血清B7-H3和IL-18水平变化及其临床意义探讨

目的 通过检测乙型肝炎肝硬化患者血清B7-H3和白细胞介素-18（IL-18）水平,探讨它们水平变化与疾病进展的相关性。方法 2015年4月~2017年3月纳入113例乙型肝炎肝硬化患者,其中代偿期肝硬化患者33例,失代偿期肝硬化患者80例,和健康志愿者20名。采用ELISA法检测血清B7-H3和IL-18水平,采用直线相关分析肝硬化患者血清B7-H3与IL-18水平间的相关性。结果 80例失代偿期肝硬化患者血清B7-H3水平为（62.29±22.17） ng/ml,显著高于33例代偿期肝硬化患者的（32.27±10.29） ng/ml（P<0.05）或20例健康人的（11.35±4.48） ng/ml（P<0.05）,代偿期肝硬化患者血清B7-H3水平也显著高于健康人（P<0.05）;失代偿期肝硬化患者血清IL-18水平为（585.63±121.28） pg/ml,显著高于代偿期肝硬化患者的（396.29±86.91） pg/ml（P<0.05）或健康人的（155.31±76.93） pg/ml（P<0.05）,代偿期肝硬化患者血清IL-18水平也显著高于健康人（P<0.05）;肝硬化患者血清B7-H3水平与IL-18水平间呈显著正相关（r=0.4111,P<0.01）;26例Child-Pugh C级患者血清B7-H3水平为（76.53±22.76） ng/ml,显著高于33例Child-Pugh A级患者的（23.27±9.84） ng/ml或54例Child-Pugh B级患者的（52.21±13.94） ng/ml（P<0.05）,Child-Pugh C患者IL-18水平为（594.13±112.21） pg/ml,显著高于Child-Pugh B级患者的（408.06±92.41） pg/ml或Child-Pugh A级患者的（243.82±57.03） pg/ml（P<0.05）,Child-Pugh B级患者血清IL-18水平也显著高于Child-Pugh A级（P<0.05）。结论 乙型肝炎肝硬化患者血清B7-H3和IL-18水平升高,两者呈正相关,提示B7-H3可能是乙型肝炎肝硬化患者一个预后不良因子,通过与IL-18的协同作用,引起体内免疫功能紊乱,加重了肝细胞损伤,从而促进了疾病的发生和发展。     

慢性乙型肝炎和肝硬化患者血清TLR4、TGF-β1和IL-17水平及其临床意义*

目的 分析慢性乙型肝炎（CHB）和乙型肝炎肝硬化患者血清Toll样受体4（TLR4）、转化生长因子-β1（TGF-β1）和白细胞介素-17（IL-17）水平变化及其临床意义。方法 2015年6月~2017年4月本院收治的112例CHB、52例乙型肝炎肝硬化患者和选择的33例健康人,采用ELISA法检验血清IL-17、TLR4、TGF-β1水平,常规进行肝活检。结果 慢性乙型肝炎、肝硬化和健康人血清IL-17水平分别为（264.42±32.53） pg/ml、（271.54±33.71） pg/ml和（64.18±5.52） ng/ml,血清TLR4水平分别为（5.81±0.83） pg/ml、（37.41±6.05） pg/ml和（1.07±0.13）ng/ml,血清TGF-β1水平分别为（3.67±0.42） pg/ml、（7.82±1.07） pg/ml和（1.61±0.07） ng/ml,差异明显（P<0.05）;19例Child-Pugh B级血清IL-17、TLR4和TGF-β1水平分别为（231.38±28.67） pg/ml、（18.61±2.87） pg/ml和（5.76±0.52） ng/ml,16例C级患者分别为（301.72±32.72） pg/ml、（39.47±6.82） pg/ml和（9.42±1.27） ng/ml,均明显高于17例Child-Pugh A级患者【分别为（204.53±26.57） pg/ml、（4.72±0.71） pg/ml和（3.18±0.34） ng/ml,P<0.05】;肝活检组织学检查发现S0 8例、S1 42例、S2 43例、S3 19例、S4 52例,血清IL-17、TLR4、TGF-β1水平随着肝组织纤维化分期严重而升高。结论 乙型肝炎肝硬化患者血清TLR4、TGF-β1和IL-17水平升高,对诊断和指导治疗可能有帮助。     

乙型肝炎肝硬化失代偿期与酒精性肝硬化失代偿期患者血小板参数变化的临床分析

目的探讨不同HBV DNA水平乙型肝炎肝硬化失代偿期与酒精性肝硬化失代偿期血小板计数（PLT）及血小板平均体积（MPV）变化的临床意义。方法对36例健康人、38例HBV DNA〈105拷贝/ml乙型肝炎肝硬化失代偿期患者、36例HBV DNA〉105拷贝/ml乙型肝炎肝硬化失代偿期患者及31例酒精性肝硬化失代偿期患者的外周血PLT及MPV进行测定及分析。结果与健康人相比,乙型肝炎肝硬化及酒精性肝硬化患者PLT均下降,差异有统计学意义（P〈0.05）;与酒精性肝硬化失代偿期患者相比,HBV DNA〉105拷贝/ml乙型肝炎肝硬化失代偿期患者PLT下降,差异有统计学意义（P〈0.05）;不同HBV DNA水平的乙型肝炎肝硬化失代偿期患者PLT均下降,差异有统计学意义（P〈0.05）。与健康人相比,酒精性肝硬化失代偿期、HBV DNA〉105拷贝/ml乙型肝炎肝硬化失代偿期患者MPV均下降,差异有统计学意义（P〈0.05）;与酒精性肝硬化失代偿期患者相比,HBV DNA〉105拷贝/ml乙型肝炎肝硬化失偿代期患者MPV下降,差异有统计学意义（P〈0.05）;不同HBV DNA水平的乙型肝炎肝硬化失代偿期患者MPV变化,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论乙型肝炎肝硬化失代偿期患者高载量HBV DNA对血小板参数降低有一定的影响。     

白细胞介素17促进肝纤维化发生发展的机制

目的研究白细胞介素（IL）17在肝纤维化中的作用及机制。方法腹腔注射CCl4建立小鼠肝纤维化模型,PCR检测肝组织IL-17 mRNA表达变化。大鼠肝星状细胞系（HSC-T6细胞）予以IL-17处理后,PCR检测肌动蛋白α（α-SMA）、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ、纤维连接蛋白mRNA的表达变化,采用t检验进行比较。免疫组织化学检测肝纤维化患者肝组织中IL-17表达量变化及与α-SMA的关系。结果 CCl4诱导肝纤维化模型小鼠肝组织中IL-17表达明显增加。IL-17促进HSC-T6细胞α-SMA、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ、纤维连接蛋白mRNA的合成。免疫组织化学结果显示,在肝纤维化患者肝组织中IL-17表达明显增加,并随着纤维化程度加重而逐渐增加,与肝组织表达α-SMA水平呈正相关（r=0.78,P〈0.05）。结论 IL-17可促进HSCα-SMA、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ、纤维连接蛋白mRNA的合成,从而促进肝纤维化的发生发展。     

斑蝥酸钠维生素B6对人肝星状细胞增殖的影响及其机制

目的 探讨斑蝥酸钠维生素B6注射液对人肝星状细胞LX-2增殖活化的影响及其机制.方法 培养人肝星状细胞LX-2,将其分为3个观察组（斑蝥酸钠维生素B6的浓度分别为1、5、10 μg/mL）和1个空白对照组;培养24、48、72 h后,采用MTT法检测细胞增殖活性,采用荧光定量PCR方法检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、转化生长因子β1基因表达变化.结果 与空白对照组比较,观察组人肝星状细胞LX-2增殖活化被显著抑制（P均＜0.05）,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、转化生长因子β1mRNA表达下降（P均＜0.05）.结论 斑蝥酸钠维生素B6可以抑制人肝星状细胞LX-2增殖活化,其机制可能与其抑制、转化生长因子β1信号通路有关.     

慢性乙型肝炎肝脏微循环障碍发生发展机制的研究

目的探讨慢性乙型肝炎患者肝脏微循环障碍的主要分子机制。方法选择不同纤维化分期CHB穿刺肝组织和肝硬化外科活检肝组织及健康肝移植供体肝组织,应用免疫组化EliVisionTM System法,检测肝组织中COX1、COX2、AngII、AT1及α-SMA蛋白表达情况,并分析它们与肝内小血管、微血管或肝窦病理改变的关系。结果在CHB肝组织内COX1、COX2、AngII、AT1、及α-SMA在血窦壁、肝内小的门静脉分支、肝动脉分支、中央静脉及小叶下静脉壁均呈不同程度的阳性表达,随肝纤维化程度的加重其表达水平明显升高,在活动期肝硬化肝组织内上述调节分子表达最强(x2=8.8535,P=0.0120)。结论肝纤维化和肝硬化程度与COX1、COX2等指标之间存在相关性。     

Increased Th17 cells contribute to disease progression in patients with HBV-associated liver cirrhosis

T helper (Th) 17 cells have been demonstrated to participate in the pathogenesis of HBV-associated liver damage. However, little is known regarding the immunopathogenic role of liver fibrosis in patients with HBV-associated liver cirrhosis. The aims of this study were to evaluate whether Th17 cells are related to disease progression in patients and to explore the possible mechanisms. The frequencies of circulating Th17 cells were analysed in 78 patients with hepatitis B and cirrhosis (Child A: 34; Child B: 22; Child C 22) and matched controls. Liver samples were collected from 13 patients with HBV-associated cirrhosis, 23 patients with chronic hepatitis B and 12 healthy controls for immunohistochemical analysis. IL-17 receptor expression was studied on liver biopsies and in human hepatic stellate cells as well as their response to recombinant IL-17 by flow cytometry. Patients with hepatitis B-associated cirrhosis with more severe disease displayed significant increases in peripheral numbers of Th17 cells as well as in IL-17 plasma levels. The increased intrahepatic IL-17(+) cells correlated positively with fibrotic staging scores and clinical progression from CHB to cirrhosis. Moreover, many IL-17(+) cells were located in fibrotic areas in the liver of patients with cirrhosis. In vitro, IL-17 together with IL-17-activated monocytes, could promote the activation of stellate cells, which, in turn, aggravated liver fibrosis and the inflammatory response. In summary, increased peripheral and intrahepatic Th17 cells are enriched in patients with hepatitis B and cirrhosis and contribute further to the severity of disease progression through induction of stellate cell activation.     

Hepatic Stellate Cells and Liver Retinoid Content in Alcoholic Liver Disease in Humans

Body retinoids are stored in the lipid droplets of hepatic stellate (Ito) cells. In chronic liver disease, the stellate cells differentiate into myo-fibroblast-like cells, a process whereby they lose their retinoid-con-taining lipid droplets. We studied the relation between liver retinoid content, the number of lipid droplets per stellate cell, and the number of stellate cells per mm² in human alcoholic liver disease. Semithin sections of liver biopsies from normal subjects and patients with early (steatosis, inflammation, and mild fibrosis) and late (cirrhosis and cirrhosis with acute alcoholic hepatitis) alcoholic liver disease were morphometrically evaluated. Liver retinoid content was determined by HPLC. In normal patients, liver retinoid content was 901 ± 213 lU/g of liver (mean ± SEM). There was a decrease in liver retinoid content in early alcoholic liver disease (409 ± 50 IU/g) and a further reduction in cirrhosis (153 ± 50 IU/g). In patients with acute alcoholic hepatitis, retinoid content was strikingly low (5.2 ± 1.8 IU/g). There was a progressive decrease in the number of stellate cells per mm² associated with progressive liver damage. We found a fair correlation between the number of stellate cells per mm² and liver retinoid content in all patient groups (overall correlation: 0.71). In normal subjects, the mean number of lipid droplets per stellate cell was 7.4 ± 0.7. In patients with early alcoholic liver disease and in patients with alcoholic cirrhosis, this value was increased to 13.6 ± 0.8 and 10.4 ± 2.0, respectively. In patients with acute alcoholic hepatitis, only a few lipid droplets were present (4.2 ± 0.5). There was a good correlation between liver retinoid content and mean number of lipid droplets in normal patients (r= 0.58). In alcoholic cirrhosis, however, correlation was poor (r= 0.34). In early alcoholic liver disease, the correlation was absent (r= 0.004). In conclusion, the major finding of our study is that the correlation between the mean number of lipid droplets per stellate cell and liver retinoid content varies according to the hepatic pathology considered. Marked lipid droplet accumulation occurs in stellate cells in early alcoholic liver disease and, to a lesser extent, in alcoholic cirrhosis, but there is no correlation between the mean number of lipid droplets per stellate cell and liver retinoid content. Therefore, not retinoids but probably lipids are responsible for the accumulation of lipid droplets. We also find that there is a fair correlation between the number of stellate cells per mm² and liver retinoid content in all patient groups. Finally, we confirm the decrease in hepatic retinoid content that occurs in alcoholic liver disease in humans, even at the early stages of the disease.     

酒精性肝病患者肝组织NLRP3炎症复合体基因水平检测及其意义

目的 探讨核苷酸结合性寡聚区蛋白样受体（NLR）P3炎症复合体在酒精性肝病（ALD）发病中的作用。方法 本研究获得酒精性肝炎（AH）12例、酒精性肝硬化（ALC）4例和健康人（HC）12例肝组织,采用RT-PCR法检测肝组织NLRP3、Caspase-1和IL-1βmRNA水平。采集ALD患者84例【AH20例、ALC48例（Child-Pugh A级19例、B级22例和C级7例）和重症酒精性肝炎（SAH）16例】和健康人40例血浆,采用ELISA法检测血浆IL-1β水平,采用Spearman秩相关分析血浆IL-1β水平与临床检验指标的相关性。结果 AH和ALC患者肝组织NLRP3 mRNA水平分别为（28.1±2.8）和（28.4±3.1）,均显著高于HC组【（8. 8±1.8）,P＜0.001】, Caspase-1 mRNA水平分别为（18. 8±1.2）和（24.6±1. 8）,均显著高于HC组【（15.1±1.0）,P＜0.05】,IL-1βmRNA水平分别为（17.0±2.9）和（16.3±4.4）,均显著高于HC组【（7.0±1.1）,P＜0.01】;肝组织NLRP3 mRNA水平分别与IL-1βmRNA或Caspase-1 mRNA水平呈正相关（P<0.05）; AH、ALC和SAH患者血浆IL-1β水平分别为（36.1±1.8）pg/mL、（28.0±1.6）pg/mL和（32.5±2.4）pg/mL,均显著高于HC组【（14.7±0.8）pg/mL,P<0.01】;不同Child-Pugh分级ALC患者IL-1β水平无显著性差异（P＞0.05）;ALD患者血浆IL-1β水平与ALT和AST/ALT比值呈正相关。结论 NLRP3炎症复合体主要组分及促炎细胞因子IL-1β在ALD患者肝组织和血浆水平升高,可能参与了ALD发病的炎症反应过程。