浙江省检出带毒力基因的人源性肠出血性大肠杆菌O157:H7

目的了解肠出血性大肠杆菌O157:H7在浙江省人群中的感染情况和菌型分布特征,制定相应的防治对策。方法5～10月份肠道传染病高发季节,在浙江省各地(市)肠道门诊采集腹泻病人粪便,对O157:H7菌株进行分离培养,并用PCR方法检测其毒力基因。结果1998年开始至今的人群监测中,共检出2株无毒力的肠出血性大肠杆菌O157:H7。PCR毒力基因检测,SLT2和Hly阳性,SLT1阴性。结论与以往不同,此次分离到带有毒力基因的人源性肠出血性大肠杆菌O157:H7,说明浙江省O157:H7在菌型特征方面发生了变化,对人群健康构成了更大的威胁。     

产志贺毒素大肠埃希菌的鉴定及分布特征

目的 探讨吉林地区产志贺毒素大肠埃希菌（STEC）分离株的分布和特征。方法 采集牛羊粪便及其肉类食品、蔬菜，分离大肠埃希菌，PCR鉴定毒力因子及血清学分型。结果 380份标本中鉴定出12株STEC,3株为产志贺毒素O157：H7型，9株为产志贺毒素非O157：H17型。结论 STEC存在于不同来源的标本中，菌株血清型与毒力因子存在一定差异。     

安徽省114株EHECO157∶H7菌株毒力因子基因的初步分析

目的　对安徽省近几年分离的肠出血性大肠杆菌O157∶H7(EHECO157∶H7)菌株的毒力因子基因进行实验室检测 ,以分析和研究肠出血性大肠杆菌O157∶H7的毒力特征和致病特性。方法　采用聚合酶链反应(PCR)检测EHECO157∶H7的两种重要的毒力因子志贺样毒素 (SLT)和溶血素 (hly)的特异性基因片段 ,并辅以血清学试验、生化试验进行菌株的生物学特性鉴定。结果和结论　检测结果显示 ,有 63.2%的EHECO157∶H7菌株携带SLT、hly基因 ,动物源的菌株以家禽较高 ,家畜次之 ,3株源自腹泻病人的菌株毒力因子基因携带率为33.3% ,说明分离的EHECO157∶H7菌株具有较强的致病性 ;114株菌株中,有 14.0%的菌株在 24h内发酵山梨醇 ,发酵山梨醇菌株的毒力因子基因携带率 18.8% ,显著低于不发酵菌株的 70.4% ,显示出山梨醇发酵特性变异与毒力因子基因缺失之间具有一定的关联性。     

2008-2010年浙江省衢州市动物粪便O157∶H7监测及其意义

目的 动态了解浙江省衢州市家禽、家畜肠出血性大肠埃希菌O157∶H7带菌情况和菌型分布特征,以制定相应的防制对策。 方法 6、7月肠道传染病高发季节,采集动物粪便标本,对O157∶H7菌株进行分离培养,并用PCR方法检测其毒力基因。 结果 共采集动物粪便标本914份,检出O157∶H7菌2株,总带菌率为0.22%,其中羊、牛各检出1株,带菌率分别为0.62%和0.71%。经PCR检测,其中1株携带stx2+ hly+ eaeA毒力因子,1株hly+eaeA阳性,stx1均为阴性。 结论 衢州市再次分离到带有毒力基因的肠出血性大肠埃希菌O157∶H7,对人群健康构成了威胁,应加强O157∶H7的综合监测。     

非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株血清型鉴定及主要毒力基因分析

目的 了解中国不同来源非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株血清型及主要毒力基因的流行情况。方法 采用O抗原基因簇特异性聚合酶链反应（PCR）结合全套O抗血清凝聚法确定O血清群,以PCR扩增和测序fliC基因确定H型;采用PCR方法对所有菌株进行stx1、stx2、eae及ehxA基因检测。结果 434株非O157 STEC分离株中,除不可分型菌株外,共检测出82种O血清群和28种H型,其中O20:H30、O2:H32和O2:H45为优势血清型。stx1、stx2和stx1+stx2 3种志贺毒素基因型的检出率分别为25.35%、64.98%和9.68%,而eae和ehxA基因的阳性率分别为3.92%和32.95%。仅15株菌同时携带3种毒力基因,且主要为血清型O26:H11的腹泻患者分离株。结论 我国非O157 STEC分离株血清型复杂多样,同时检测eae和ehxA基因对于发现高致病潜力的菌株具有重要参考价值。     

浙江省衢州市柯城区检出带毒力基因的肠出血性大肠埃希菌O157∶H7

目的　了解浙江省衢州市柯城区肠出血性大肠埃希菌O157∶H7人的感染、食品污染以及动物和媒介昆虫带菌情况。方法　采集腹泻患者粪便、动物粪便以及各类食品、蝇类等标本，MEC肉汤增菌后，用特异性免疫磁珠集菌，以科玛嘉显色平板分离，纯化的菌株经生化鉴定、血清分型及毒力基因检测。结果　2007年采集动物粪便标本300份，共检出O157∶H7菌16株，总带菌率为5.33%，其中牛、羊、猪带菌率较高，分别为20.83%、12.70%和3.61%，腹泻患者、食品和媒介昆虫中均未检出。毒力基因检测所有分离株Istx/I2、hly、eaeA 3种毒力基因均呈阳性，而stx1均呈阴性。结论　衢州市柯城区部分动物中存在O157∶H7感染，且为产毒株，应加强O157∶H7的综合监测。     

一株不产志贺毒素的肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株的鉴定

目的 对一株不产志贺毒素的肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株进行血清生化特征及毒力基因鉴定.方法 对154菌株进行常规血清生化鉴定,使用聚合酶链反应(PCR)方法检测该菌的志贺毒素基因及其他毒力因子,同时以southern杂交、Hela细胞毒实验进行证实.结果 菌株154的志贺毒素PCR检测、shouthern杂交为阴性,Hela细胞毒定量结果显示该菌株不产生志贺毒素,毒力因子eae,hly检测为阳性.结论 菌株154是不产志贺毒素的肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株,且具有O157:H7菌株特异性的毒力因子.     

江苏省建湖地区大肠埃希菌O157:H7毒力基因分析

目的对检测出的17份肠出血性大肠埃希菌0157：H7阳性菌株进行毒力基因分析。方法收集江苏省建湖地区2008年5月～9月监测出的17株肠出血性大肠埃希菌0157：H7阳性菌株,利用单一和多重PCR法检测不同来源菌株0157抗原编码（rfbE）、H7鞭毛抗原编码（fliC）、志贺样毒素（stx1和stx2）、溶血素（hly）和黏附抹平因子（eaeA）。结果通过血清学方法确定的17株肠出血性大肠埃希菌0157：H7阳性菌株,再通过PCR法检测,其中15株大肠埃希菌rfbE和fliC基因检测为阳性,确认为EHEC O157：H7,其中9株菌株扩增出全部毒力基因,5株菌株扩增出除stxl外其它全部毒力基因,1株仅检出stx2,hly毒力基因;2株大肠埃希菌rfbE基因检测阳性、fliC基因检测为阴性,确认为O157：H7-大肠埃希菌,无毒力基因检出。结论该地区存在O157：H7大肠埃希菌强毒株污染,从流行病学角度看具潜在的流行性危险,当地疾控部门应加强O157：H7的综合监测。     

多重PCR检测肠出血性大肠埃希菌O157：H7

目的 建立一种快速、特异的检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7菌株的多重PCR方法。 方法 针对O157:H7菌株的O157、H7抗原特异基因rfbE O157、fliC H7以及stx1、stx2、eaeA和hlyA四种毒力基因设计相应引物,在同一扩增体系中进行PCR反应,通过优化多重PCR 反应条件和循环参数,建立检测O157:H7菌株的多重PCR方法,并测定其特异性和灵敏度。 结果 6 对特异性引物各自扩增相应的基因片段,检测结果与常规PCR 获得的结果一致。细菌纯培养物的检测灵敏度为1.33×10⁴ CFU。 结论 该多重PCR方法能在一次检测中同时反映待测菌株是否为肠出血性大肠埃希菌O157:H7及其携带毒力基因的情况,可为O157:H7大肠埃希菌感染的诊断及流行病学调查提供一种简便、快速的检测手段。     

O157大肠杆菌生物学特性及分离鉴定技术研究

目的　研究肠出血性大肠杆菌 (EnterohemorrhagicEscherichiacoli)O15 7:H7和其他O15 7大肠杆菌 (以下简称O15 7:非H7)的生物学特性 ,制定高效、实用的O15 7:H7分离程序及鉴定指标。方法　生化试验和玻片凝集试验分别检测菌株的生化特性和菌体抗原 ;穿刺法接种抗 -H7抗血清琼脂检测H7鞭毛抗原 ,试管凝集试验检测其它鞭毛抗原。聚合酶链反应 (PCR)分别检测特异性基因和毒力基因。结果　 194株O15 7:H7与10 1株O15 7:非H7在山梨醇、蔗糖、赖氨酸和鸟氨酸等生化反应中有差异。 194株O15 7:H7中 192株(98 97% )携带O15 7特异性基因 ,189株 (97 4 2 % )菌体抗原表型阳性 ;10 1株O15 7:非H7均携带O15 7特异性基因同时表型亦为阳性。 194株O15 7:H7均携带H7特异性基因 ,186株 (95 88% )鞭毛抗原表型阳性。 194株O15 7:H7中除 1株 (0 5 2 % )四种毒力基因检测均为阴性外 ,其余 193株 (99 4 8% )均携带 2种及其以上毒力基因 ;10 1株O157:非H7四种毒力基因检测均为阴性。结论 O157:H7特征性生化反应、O157和H7特异性基因检测及其携带毒力基因的特性,在区分不同类型的0157方面有重要意义,据此可以制定针对性强的O157:H7分离鉴定程序。     

37株枸橼酸杆菌的耐药性及PFGE分型分析

目的了解食品及患者来源的37株枸橼酸杆菌的耐药性、毒力基因携带及PFGE的分型情况。方法运用K-B法选择15种抗生素进行药敏试验;以PCR方法检测志贺样毒素（Istx1/I和Istx2/I）、紧密素基因（Ieae/I）及溶血素（Ihly/I）4种毒力基因;用脉冲场凝胶电泳（pulse field gel electrophoresis,PFGE）方法进行同源性分析。结果37株枸橼酸杆菌中,25株为杨氏枸橼酸杆菌,11株为弗劳地枸橼酸杆菌,1株为布雷克氏枸橼酸杆菌。分离菌株对大多数抗生素敏感,但对头孢噻吩100%耐药。其毒力基因检测均为阴性。PFGE结果发现不同菌株带型差异较大。其中5株食品来源,1株为人来源的杨氏枸橼酸杆菌同为MAS007型,具有流行病学相关性。 结论该地区枸橼酸杆菌主要以杨氏枸橼酸杆菌为主;部分菌株具有多重耐药,应加强菌株的耐药性监测;脉冲场凝胶电泳对枸橼酸杆菌有较好的分型能力,有助于分析追踪疫情和来源;患者可能存在食源性感染,应引起疾控部门的重视。     

来自腹泻合并急性肾衰病人疫区的99株E.coli O157∶H7的鉴定结果分析

目的调查研究河南省2000年3月17日-7月6日发生的腹泻合并急性肾衰病人的致病菌。方法采集病人、外环境、家畜和家禽标本620份,采用免疫磁珠集菌法、CHROMAGAR-O157∶H7显色培养基分离及营养肉汤增菌、rfbO157、rfbO111引物多重PCR扩增等方法进行病原菌的检测。结果分离出99份E.coli O157∶H7菌株,其中rfbO157、志贺氏样毒素2(stx2)、溶血素(hlyA)、肠上皮细胞纤毛消除素(eaeA)基因和vero细胞毒性试验均阳性的有56株,其它基因组合7株,36株无毒力基因。结论99株E.coli O157∶H7在CHROMAGAR-O157∶H7显色培养基生长形态、颜色,生化反应及毒力基因表现等方面出现多样化,对于今后在制定对该菌的诊断标准、传染源的控制及细菌毒力学等方面的研究提供了依据。     

Semi-automated fluorogenic PCR assays (TaqMan) forrapid detection of Escherichia coli O157:H7 and other shiga toxigenic E. coli.

Semi-automated detection of Enterohaemorrhagic Escherichia coli (EHEC) O157:H7 and non-O157:H7 Shiga toxin-producing E. coli (STEC) was achieved using fluorogenic polymerase chain reaction (PCR). These PCR assays were designed to amplify 80, 120 and 150 bp regions of virulence genes stx1, stx2 and eaeA, respectively, using specific primers. The fluorogenic probes were used for specific detection of amplified products of the stx1 and stx2 genes of STEC, and the eaeA gene of EHEC O157:H7. For multiplex PCR assay, the three sets of primers and fluorogenic probes were included in one reaction to simultaneously amplify and detect any of the three targeted virulence genes. In non-multiplex PCR assay, each of the three virulence genes was amplified and detected in independent reactions. The specificity of these assays was evaluated using suspensions of STEC and other bacterial species lacking stx1, stx2 and eaeA. The multiplex assay detected all STEC harbouring any combination of three virulence genes. Three non-multiplex PCR reactions identified types of Shiga toxin genes carried by a STEC and identified STEC as either EHEC O157:H7 or non-O157:H7 STEC. Sensitivity limits of these assays in beef and faeces inoculated with EHEC O157:H7 were 5.8 to 580 cfu and 1.2 to 1200 cfu, respectively. These assays can be completed within 8-10 h when performed simultaneously or within 13 h if the multiplex assay is used as an initial screen for detecting STEC and the non-multiplex assay is used for subsequent detection of stx1 and stx2 of STEC and eaeA of EHEC O157:H7 Copyright 1999 Academic Press.     

上海市一例肠出血性大肠埃希菌O157∶H7感染病例的病原学分析

目的通过流行病学调查与病原菌鉴定，并结合既往相关菌株资料，对2016年6月上海市腹泻病综合监测中报告的1例肠出血性大肠埃希菌（EHEC）O157∶H7感染病例进行病原学分析。方法对患者开展流行病学调查。 采集标本后进行菌株分离培养、生化鉴定并确定血清型；利用聚合酶链式反应（PCR）检测所携带的毒力基因；采用微量肉汤稀释法进行药敏试验；应用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术进行分子分型；通过全基因组测序获取序列信息进行多位点序列分型（MLST）及单核苷酸多态性分析。结果流行病学调查未发现可疑传染源。 患者样本分离出EHEC O157∶H7；携带eae、stx2基因；对进行试验的16种抗生素均敏感；菌株图谱带型与以往监测中分离菌株带型均不相同；MLST分型为ST11型，与以往分离菌株核心基因组差异较大。结论上海市较长时间无检出EHEC O157∶H7菌株的病例记录，通过对此次分离的菌株的全面检测，确定了其毒力基因、耐药性和MLST型别，并发现新的PFGE带型，其核心基因组与以往菌株呈现出一定差异，值得进一步关注。     

Evaluation of a surface plasmon resonance imaging-based multiplex O-antigen serogrouping for Escherichia coli using eleven major serotypes of Shiga -toxin-producing E. coli

The early detection of Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) is important for early diagnosis and preventing the spread of STEC. Although the confirmatory test for STEC should be based on the detection of Shiga toxin using molecular analysis, isolation permits additional characterization of STEC using a variety of methods, including O:H serotyping. The conventional slide agglutination O-antigen serogrouping used in many clinical laboratories is laborious and time-consuming. Surface plasmon resonance (SPR)-based immunosensors are commonly used to investigate a large variety of bio-interactions such as antibody/antigen, peptide/antibody, DNA/DNA, and antibody/bacteria interactions. SPR imaging (SPRi) is characterized by multiplexing capabilities for rapidly screening (approximately 100 to several hundred sensorgrams in parallel) molecules. SPRi-based O-antigen serogrouping method for STEC was recently developed by detecting the interactions between O-antigen-specific antibodies and bacterial cells themselves. The aim of this study was to evaluate its performance for E. coli serogrouping using clinical STEC isolates by comparing the results of slide agglutination tests. We tested a total of 188 isolates, including O26, O45, O91, O103, O111, O115, O121, O128, O145, O157, and O159. The overall sensitivity of SPRi-based O-antigen serogrouping was 98.9%. Only two O157 isolates were misidentified as nontypeable and O121. The detection limits of all serotypes were distributed between 1.1 × 10⁶ and 17.6 × 10⁶ CFU/ml. Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) revealed the heterogeneity of the examined isolates. In conclusion, SPRi is a useful method for the O-antigen serogrouping of STEC isolates, but the further evaluation of non-O157 minor serogroups is needed.