心房肽cDNA转染细胞微囊化及心房肽近日节律性表达

目的 探讨心房肽(ANP)cDNA转染细胞的微囊化技术，测定其ANP的表达水平，以及研究ANP分泌的近日节律；通过人工调控，改变ANP分泌的近日节律，达到有效治疗高血压或心衰的目的。方法 将人ANP基因(cDNA)转染入CHO细胞，然后将细胞包被在聚己内酯(PCL)管内形成微囊，并检测转基因CHO细胞长时间存活情况和分泌的ANP。检测微囊化转基因细胞分泌ANP的生物节律，并用褪黑素(melatonin)进行调整。结果 在培养期间，长度20mm直径3mm的PCL管内转染CHO细胞在2ml培养基中分泌的ANP水平可达246．1pg／ml／／24h；ANP的分泌呈近日节律性变化，夜间高，而日间低；近日节律变化的时相是4：18，用melatonin处理，近日节律的时相移至7：56。结论 ANPcDNA转染的CHO细胞包被在PCI．管内并能向管外分泌ANP，将来可能适于植入人体。此项研究旨在提供一条心房肽治疗高血压或心衰的新途径。     

植入微囊化hANP cDNA转染细胞治疗大鼠高血压的观察

目的 研究植入微囊化的人类心房肽(hANP)cDNA转染细胞对高血压大鼠的治疗效果,为临床应用基因工程细胞治疗高血压提供新方法。方法 将转染有hANP cDNA的CHO细胞包被在具有免疫隔离作用的聚己内酯(PCL)管内形成微囊化基因转染细胞,其后移植至二肾一夹(2KlC)高血压大鼠腹腔内,检测微囊植入对高血压大鼠的血压及多项生理生化指标的影响,并用放射免疫分析法(RlA)检测血浆hANP水平,用免疫组化结合图像分析法半定量检测肾脏心房肽A型受体(NPR-A)的表达。结果 微囊化的hANP cDNA转染细胞移植10d后,血浆hANP水平显著升高;移植30d后高血压大鼠的血压明显降低,而尿量、尿钠排出量(USO)和尿cGMP明显增加;移植45d后肾小球滤过率(GFR)和肾血流量(RBF)明显增加,同时高血压大鼠肾脏NPR-A的表达下调被抑制。结论 植入的微囊化hANP cDNA转染细胞能产生和向囊外排出hANP,引起明显的利尿利钠和降血压效应;本研究结果为高血压的心房肽基因治疗提供了新途径。     

海藻酸钠—多聚赖氨酸—海藻酸钠微囊化胰岛细胞移植治疗糖尿 …

采用Ｓｕｎ海藻酸钠－多聚赖氨酸－海灌酸钠（ＡＰＡ）微囊制作技术，分别包裹大鼠胰岛素分泌细胞系，移植于糖尿病小鼠腹腔。结果表明ＡＰＡ微囊化大鼠胰岛或胰岛素分泌细胞，均可使糖尿病小鼠血糖降低至拉近正常水平达３周至１１０天，移植微囊无明显的组织学反应。证明该ＡＰＡ微囊化胰岛细胞移植具有较好的治疗效果，微囊具有较好的生物相容性和免疫隔离作用。进一步发展生物型人工胰尊定了基础。     

左房扩大并心房纤颤患者心脏利钠肽变化的意义

 目的研究高血压病左房扩大并心房纤颤患者血浆利钠肽水平的变化,探讨房颤时心脏内分泌的病理生理改变.方法 102例高血压左房扩大患者入选,其中52例伴心房纤颤(Atrial fibrillation,AF),50例无AF,另有36例健康个体为参照.放射免疫法测定脑利钠肽(Brain natriuretic peptide,BNP)和心房利钠肽(Atrial natriuretic peptide,ANP).结果所有高血压病左房扩大者,无论有无AF,血浆ANP、BNP均显著高于健康对照组(P＜0.01),AF组与无AF组BNP水平无显著差异(P＞0.05);AF组ANP显著低于无AF组(P＜0.01).结论左房扩大的高血压患者在心脏功能失代偿前,BNP已经出现代偿性地合成和分泌增加.AF后心房合成和分泌ANP较无AF者显著下降.     

海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化胰岛细胞移植治疗糖尿病的实验研究

采用Ｓｕｎ海藻酸钠－多聚赖氨酸－海藻酸钠（ＡＰＡ）微囊制作技术,分别包裹大鼠胰岛和胰岛素分泌细胞系,移植于糖尿病小鼠腹腔。结果表明ＡＰＡ微囊化大鼠胰岛或胰岛素分泌细胞移植,均可使糖尿病小鼠血糖降低至接近正常水平达３周至１１０天;移植微囊无明显的组织学反应。证明该ＡＰＡ微囊化胰岛细胞移植具有较好的治疗效果,微囊具有较好的生物相容性和免疫隔离作用。为进一步发展生物型人工胰岛奠定了基础。     

人重组阿片受体样受体在CHO细胞稳定表达系统的建立

目的：在中国仓鼠卵巢（CHO）细胞上稳定转染人重组阿片受体样受体（hORL1）,为体外高通量筛选hORL1受体作用药物及相关药物分子机制研究奠定基础。方法：用脂质体介导法将pcDNA3.1（＋）-hORL1重组质粒稳定转染到缺乏hORL1的CHO细胞中,然后用含G418的选择性培养液进行筛选,挑取耐药克隆;用放射性配体-受体结合实验进一步筛选阳性克隆,对阳性克隆受体亲和力和表达量进行分析,用[35S]GTPγS结合实验分析表达受体的功能。结果与结论：在稳定转染hORL1的克隆细胞中,[3H]伤害感受肽的Kd和Bmax值分别为（0.44±0.21）nmol/L和（0.35±0.06）pmol/mg蛋白。伤害感受肽刺激受体结合[35S]GTPγS的EC50值为3.45nmol/L。以上结果与文献报道的天然hORL1受体的特性相似,说明该细胞株表达的hORL1受体与天然的hORL1受体具有基本一致的生物学特性,证实成功建立了稳定表达人阿片受体样受体的细胞模型。     

烧伤后多系统脏器衰竭患者血浆AⅡ、ANP、AⅡ/ANP水平及临床意义

对烧伤面积（TBSA）＞20％患者59例（其中单脏器功能衰竭6例，多脏器功能衰竭14例）进行前瞻性临床研究。方法：连续测定了血浆血管紧张素Ⅱ（AⅡ）和心房肽（ANP）及血N－乙酰－β－D－氨基葡萄糖苷酶（NAG）活性,以探讨AⅡ／ANP失衡在严重烧伤后多脏器衰竭中的作用。结果：严重烧伤后存在着AⅡ／ANP明显失衡，与烧伤严重程度、低血容量休克、全身性感染有关。MOF患者AⅡ／ANP显著高于non-MOF者，AⅡ／ANP与NAG活性呈显著正相关。结论：AⅡ／ANP在MOF发生发展中起着重要作用。AⅡ／ANP及NAG也是反映烧伤后MOF病情及预后的重要参考指标。     

胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的神经干细胞移植治疗大鼠脑损伤

目的探索移植转染胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因的大鼠神经干细胞（NSCs）能否促进脑损伤大鼠的神经功能修复。方法利用阳离子脂质体转染GDNF基因到大鼠NSCs，在脑立体定向仪引导下分别将PBS、NSCs、转基因NSCs移植到脑损伤大鼠局部损伤灶边缘，通过观察记录大鼠行为能力的变化，评价移植细胞后大鼠神经功能的修复情况。结果转染后72h，荧光蛋白大量表达。转基因细胞移植后可以在14d时仍表达GDNF基因，各实验组于移植后3d时行为学指标差异无统计学意义（P〉0．05），而在移植后7d，移植转基因NSCs组和NSCs组即与对照组在行为学指标上差异有统计学意义（P〈0．05）；在移植后14d，移植转基因NSCs组与其余两组在行为学指标上差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论转基因NSCs移植后可以分泌GDNF并促进脑外伤大鼠神经功能的恢复。     

二硫键稳定的抗肝癌人源化单链抗体—突变体人TNFα融合基因在CHO（dhfr^—）细胞中的表达

目的：提高抗肝癌靶向人肿瘤坏死因子（hScFv25-hTNFα)的稳定性和杀伤活性,构建二硫键稳定的抗肝癌人源化单链抗体－突变体人TNFα融合基因（ds-ScFv-hTNFα）,并在CHO细胞中表达。方法：常规构建ds-ScFv-hTNFα融合基因,并克隆入真核表达载体pCI(dhfrl）,磷酸钙共沉淀法转染中国仓鼠卵巢细胞株（CHO－dhfr^-）,甲氨蝶呤（MTX）高压筛选高表达细胞株,免疫荧光染色和MTT法检测重组蛋白的抗体和突变体hTNFα的双重活性。结果：目的基因在CHO（dhfr^－）中获得了表达,表达产物具有抗体和突变体hTNFα的双重活性,且稳定性得到大幅度提高,达到4℃放置4个月活性无明显下降。结论：抗肝癌人源化ds-ScFv-hTNFα融合基因在CHO细胞中获得功能性表达,为进一步的临床应用研究奠定了基础。     

胰腺发育相关基因PDX-1诱导小鼠胎肝基质细胞向胰腺细胞分化

目的：利用胰腺发育相关基因PDX-J诱导小鼠胎肝基质细胞向胰腺细胞分化，探讨糖尿病治疗新方法。方法：构建含有胰腺发育相关基因胰腺-十二指肠同源框1（pancreatic duodenal homeoboxl，PDX-1）的真核细胞表达载体pmPDX-J，瞬时转染小鼠胎肝基质细胞，通过RT-PCR的方法，检测转染pmPDX-J质粒的小鼠永生化胎肝基质细胞的胰岛素、胰高血糖素、胰多肽和肝细胞生长因子受体c-met的表达。结果：在mRNA水平上能够检测到胰岛β细胞所分泌的胰岛素、胰岛α细胞所分泌的胰高血糖素和胰腺PP细胞所分泌的胰多肽，表明转染了pmPDX-J质粒的小鼠胎肝基质细胞在向胰腺细胞分化的过程中，具备了转录表达胰腺的内外分泌因子的能力。对肝细胞生长因子受体c-met的检测，提示分化的细胞没有完全失去肝细胞的特性。结论：通过导入PDX-J基因可以诱导小鼠胎肝基质细胞向胰腺细胞分化。     

慢性缺氧性肺动脉高压大鼠心、肺心钠素代谢变化及其机制的探讨

观察慢性缺氧性肺动脉高压(CHPAH)大鼠心,肺心钠素代谢变化,结果表明CHPAH大鼠右心室、肺组织、肺灌流液及动脉血血浆心钠素(ANP)含量较对照组显著增加(P<0.01),但右房心肌组织ANP含量与对照组相比无显著差异(P>0.05).结果提示CHPAH大鼠心,肺合成分泌ANP代偿性增强,其中,以右心室尤为显著.肺脏不仅合成ANP,而且分泌入血,影响循环血ANP水平.     

Postmortem pericardial natriuretic peptides as markers of cardiac function in medico-legal autopsies

Atrial natriuretic peptide (ANP) and brain natriuretic peptide (BNP) in the blood are clinical markers for the diagnosis of cardiac failure. This study was a comprehensive analysis of the postmortem pericardial levels of the natriuretic peptides in serial medico-legal autopsy cases (n=263, within 72 h postmortem) to assess their validity in investigating cardiac function. There was no significant relationship of pericardial ANP or BNP levels with postmortem time or the age of the subjects. The ANP and BNP levels showed negative correlations with the pericardial cardiac troponin T level. The ANP level was significantly elevated in drowning cases. Pericardial BNP and the BNP/ANP ratio were significantly higher for chronic congestive heart disease. However, asphyxiation, sharp instrument injury, hyperthermia, and fatal MA poisoning cases showed lower levels for both markers. These observations suggest that elevations in the postmortem pericardial ANP and BNP may mainly depend on acute atrial overload and subacute or chronic cardiac failure, respectively, and may be reduced by advanced myocardial damage.     

血管钠肽对低氧性肺动脉高压和肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的：研究血管钠肽（VNP）对慢性低氧性肺动脉高压（HPH）大鼠的治疗作用和肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖的影响,并与C型钠尿肽（CNP）和心房钠尿肽（ANP）作比较。方法：采用整体静脉给药、离体血管灌流和PASMC培养等方法,测定肺血流动力学参数、离体肺动脉的等长张力和PASMC增殖的变化。结果：（1）VNP、CNP和ANP都能有效降低HPH大鼠的平均肺动脉压（mPAP),P＜0．05－0．01,除CNP外,VNP和ANP并能明显降低肺血管阻力（PVR）,P＜0．05－0．01,其中VNP降低mPAP和PVR的作用明显大于CNP和ANP。（2）VNP对离体肺支 浓度依赖性舒张作用,该作用不受内皮细胞的影响;但在浴槽内预先加入格列苯脲或普萘洛尔可显著降低肺动脉对VNP和CNP的最大舒张反应（Rmax),P＜0．05－0．01,而对ANP却无明显影响 。（3）VNP能明显抑制低氧介导的PASMC的增殖及DNA合成,其作用明显大于CNP和ANP。结论：VNP对HPH具有显著的治疗作用,它是一个新型、强效、非内皮依赖性的血管松弛多肽和细胞增殖负调控因子。     

高原缺氧对正常人血浆心钠素的影响

目的 :心钠素是近年来发现从心脏分泌的一种新激素 ,具有强大的利尿、排钠、扩张血管作用。本文观察高原缺氧对人体心钠素含量水平的影响。方法 :血液标本分别取自三个不同海拔地区正常人的空腹静脉血 ,北京地区 (海拔 31m) ;青海省西宁市地区 (海拔 2 2 6 0m) ;青海省果洛州 (海拔 3719m) ;用直接放免法测定血浆中心钠素的含量。结果 :低海拔组 (北京地区 )正常人血浆心钠素含量明显低于中等海拔组 (西宁地区 )及高海拔组 (果洛地区 )正常人 ;其 (P <0 .0 0 1)。结论 :不同海拔高度对正常人体血浆心钠素水平有一定的影响 ,缺氧可能是不同海拔正常人血浆心钠素水平发生的主要原因     

急性缺氧对大鼠多种心血管活性物质的影响

目的　探讨缺氧对心血管活性物质的影响。　方法　利用低压舱对大鼠进行急性低气压重度缺氧实验 ,模拟升空至 75 0 0 m高度 ,停留 30 min,出舱后立即收集各种样本 ,用放射免疫法测定心血管活性物质含量 ,并分别与无缺氧的对照组大鼠比较。　结果　发现实验组血浆内皮素 (ET)、心钠素 (ANP)和右房肌 ANP明显升高 (P<0 .0 1和 P<0 .0 1) ;而血清内洋地黄素 (EDL S)、右房肌ET、肺组织 ANP和 ET均明显降低 (P<0 .0 0 1和 P<0 .0 1)。　结论　本实验说明急性缺氧能够引起大鼠心血管内分泌功能紊乱 ,导致多种心血管活性物质平衡失调 ,提示这些改变在缺氧性机体损害过程中可能起重要作用。     

急性尿路梗阻继发肺部CT表现的动物实验研究

目的:建立动物尿路梗阻模型,了解尿路梗阻后实验动物肺部影像学表现及病理改变,为临床判断尿路梗阻后肺改变提供资料。方法:以新西兰大白兔为实验动物分别制作单侧(单侧组)和双侧(双侧组)输尿管完全梗阻模型,术后第2天始行胸部高分辨CT扫描及血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)和心钠素(ANP)检查,实验中及实验后取肺组织进行病检。结果:单侧组血Cr、BUN、ANP的值与术前比较无统计学意义(P>0.05),胸部高分辨CT扫描表现及病检结果均正常;双侧组动物自术后4 d各项指标均出现异常。结论:单侧尿路梗阻不引起血Cr、BUN、ANP改变及肺高分辨CT和病理异常表现;双侧尿路梗阻后肺部CT表现、病理表现及血Cr、BUN、ANP值出现明显异常。