胞核内高表达M-CSF对HeLa细胞生长增殖的影响

目的分析人宫颈癌HeLa细胞核内M-CSF增高对化疗药物的影响。方法体外培养HeLa细胞、HeLa-M细胞以及转染M-CSF空载体HeLa-C细胞。分别使用紫杉醇和顺铂(浓度分别为0.3、3、30μg/m L)作用48 h,采用MTT方法比较细胞的相对活性,Westen blot分析转染M-CSF对抗凋亡分子Bcl-2表达的影响。结果当两种化疗药物的浓度为3、30μg/m L时,与HeLa-C细胞和HeLa细胞相比,HeLa-M细胞活性明显增高,差异有统计学意义(P0.05);当浓度为0.3μg/m L时三种细胞活性无明显差异。Westen blot结果显示,转染M-CSF后能够使细胞中的抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平明显升高。结论人宫颈癌HeLa细胞核中的M-CSF增高可以使细胞的药抗性提高,从而抑制HeLa细胞的凋亡。     

苦参碱对HeLa细胞粘附和移动的抑制作用及机制

目的:探讨苦参碱(Matrine)抑制HeLa细胞粘附和移动的作用及机制。方法:不同浓度苦参碱作用HeLa细胞24h后,粘附实验检测细胞粘附率,划痕损伤实验检测迁移速度,Westernblotting检测血管扩张刺激磷蛋白(VASP)磷酸化水平,PKA试剂盒检测蛋白激酶A(PKA)活性。结果:5,50,100,250和500μg/ml苦参碱处理24h后,HeLa细胞粘附率分别为74.68%,48.97%,45.66%,40.68%和32.61%,总体呈下降趋势,50μg/ml组分别与5μg/ml和500μg/ml组比较差异有显著性(均为P<0.01);与100μg/ml和250μg/ml组比较差异无显著性(P>0.05)。50μg/ml苦参碱处理24h后HeLa细胞迁移速度明显降低(P<0.01),PKA活性明显降低(P<0.01),VASP处于非磷酸化状态。结论:苦参碱抑制HeLa细胞粘附和运动,并降低其PKA活性及抑制骨架调节蛋白VASP磷酸化,发挥了抑制肿瘤转移作用。     

PPN抑制HBV-DNA表达及复制的体外实验

目的：体外观察PPN对HBV－DNA表达、复制的抑制效果及其细胞毒性作用。方法：取10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml PPN水溶液分别加入2.2.15细胞株培养悬液中，8天后用放射免疫法检测上清液中HBeAg的含量，并计算HBeAg抑制率、细胞存活率、HBeAg抑制率为50％时的药物浓度（ID50）、实验组存活细胞为对照组的50％时的药物浓度（CD50）和治疗指数（TI）。PCR技术检测HBV－DNA阳性血清中加入160μg/ml PPN水溶液后对HBV－DNA复制的抑制作用。结果：当加入的PPN浓度为160μg/ml和80μg/ml时，HBeAg抑制率分别为89．8％和82．4％，细胞存活率分别为98．7％和99．2％；HBV－DNA阳性血清中加入PPN后可有效抑制其复制。结论：PPN可有效抑制HBV－DNA的表达和复制，且对靶细胞（肝细胞）无细胞毒作用，有进一步研究和推广应用的价值。     

平阳霉素对HeLa细胞的大分子生物合成及超微结构的影响

作者用同位数前体参入法及透射与扫描电镜研究了平阳霉素(博莱霉素A_5)对HeLa细胞大分子生物合成及超微结构的影响。结果显示:平阳霉素能抑制HeLa细胞DNA,RNA和蛋白质的生物合成,对DNA的抑制作用强,ID_(50DNA)为42.77μg/ml。表现为:染色质减少,核内电子密度低,核仁分离及“核仁帽”形成,细胞表面微绒毛消失或变形,最终导致质膜破裂等。作者认为,细胞膜是否为此类药物作用的靶位值得进一步研究。     

中药提取物9901的体外抗肿瘤活性研究

目的 用体外培养法研究中药提取物9901对肿瘤HeLa细胞生长的抑制作用和作用机制。方法 采用MTT法和激光扫描共聚焦显微镜进行研究。结果 HeLa细胞在9901处理3天后,测得该药的IC50为5.12μg/ml。用不同浓度的9901处理HeLa细胞48h后,用PI染色,HeLa细胞的生长,通过影响细胞的DNA而发挥作用。     

丹参酮ⅡA与5-FU抑制HeLa细胞生长及诱导细胞凋亡的研究

目的 探讨丹参酮ⅡA与5-氟尿嘧啶(5-Fu)对宫颈癌HeLa细胞增殖抑制及诱导细胞凋亡的影响.方法 采用MTT方法 、荧光染色、流式细胞仪及电镜技术等研究丹参酮ⅡA与5-Fu对HeLa细胞增殖抑制及诱导细胞凋亡作用.结果 丹参酮ⅡA对宫颈癌HeLa细胞增殖有明显抑制作用,并呈现浓度和时间的依赖性.与5-Fu合用后细胞增殖抑制率明显增强.8.0μg/mL丹参酮ⅡA作用72h后,电镜下出现细胞核固缩,形成凋亡小体.流式细胞仪检测丹参酮ⅡA 4.0和8.0μg/mL作用HeLa细胞72 h后细胞凋亡率为34.13%、45.84%,在浓度增至32.0μg/mL时细胞凋亡无明显增加.结论 丹参酮ⅡA具有直接抑制宫颈癌HeLa细胞增值作用且在一定浓度范围内诱导细胞凋亡,同时具有增强5-Fu的抗肿瘤作用.     

壳聚糖基因纳米粒子对L02细胞的作用

目的研究壳聚糖基因纳米粒子(CNP)、精氨酸化壳聚糖基因纳米粒子(ANP)和十六烷基化壳聚糖基因纳米粒子(HNP)对人正常肝细胞系L02细胞的作用。方法采用复凝聚方法制备CNP、ANP和HNP,粒度及zeta电位分析仪进行纳米粒子表征。将浓度分别为5、10、30、50μg/ml(以DNA含量计)的各种纳米粒子与L02细胞共育,采用MTT法进行细胞毒性评价,流式细胞分析技术进行细胞凋亡检测。结果CNP、ANP和HNP的zeta电位为12.10～14.63mV,粒径约为148.07～179.47nm。当各基因纳米粒子浓度为30μg/ml时,细胞存活率开始降低;达到50μg/ml时,存活率降至最低。当各基因纳米粒子浓度为30μg/ml时,可以诱导L02细胞发生凋亡,随纳米粒子浓度的升高,凋亡率升高。结论当达到一定浓度时,CNP、ANP和HNP对L02具有一定细胞毒性,可诱导细胞产生凋亡。     

4′-去甲峨参内酯的化学合成及对HeLa宫颈癌细胞和MG-63骨肉瘤细胞体外增殖的抑制作用

目的通过化学合成法制备4′-去甲峨参内酯并探讨不同浓度4′-去甲峨参内酯对宫颈癌细胞HeLa和骨肉瘤细胞MG-63增殖的抑制作用。方法采用MTT法检测不同浓度的4′-去甲峨参内酯对宫颈癌细胞HeLa和骨肉瘤细胞MG-63增殖的抑制作用。结果 4′-去甲峨参内酯对宫颈癌细胞HeLa和骨肉瘤细胞MG-63的IC50值分别为35.58μg/mL和57.89μg/mL。结论 4′-去甲峨参内酯对宫颈癌细胞HeLa和骨肉瘤细胞MG-63增殖具有明显的抑制作用,其机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

奈达铂联合β-榄香烯对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨奈达铂（nedaplatin,NDP）联合β-榄香烯（β-elemene）对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响. 方法 体外培养宫颈癌HeLa细胞,分别将奈达铂（浓度为7.5,15,30,45,60 μg/ml）,β-榄香烯（浓度为25,50,100,150,200 μg/ml）,单独作用于HeLa细胞后24h、48h用MTT比色法检测细胞的增殖情况,并选取合适的药物浓度（奈达铂15μg/ml,β-榄香烯150 μg/ml）,进行联合用药,加药24 h、48 h后用MTT法检测细胞的增殖情况,用流式细胞术检测24 h细胞的凋亡率.结果 ①MTT法显示不同浓度β-榄香烯作用HeLa细胞24 h、48 h后,其增殖抑制率均明显高于正常对照组（P＜0.05）.奈达铂组除24h时7.5 μg/ml和15 μg/ml无显著差异外,其余各组增殖抑制率均明显高于相应正常对照组（P＜0.05）.②联合用药（奈达铂15 μg/ml,β-榄香烯150 μg/ml）时,对HeLa细胞的抑制作用显著高于单独用药（P＜0.01）. 结论 奈达铂、β-榄香烯单独或二者联合作用均能抑制HeLa细胞的增殖,且联合应用的作用显著高于单独用药,可协同促进HeLa细胞的凋亡.     

人宫颈癌HeLa细胞核内M-CSF高表达对抗肿瘤药物的影响

目的探讨人宫颈癌HeLa细胞核内M-CSF高表达对抗肿瘤药物的影响。方法体外培养转染M-CSF人宫颈癌HeLa-M细胞、HeLa细胞、转染M-CSF空载体人宫颈癌HeLa-C细胞;分别以顺铂(0.2、2.0、20μg/mL)、紫杉醇(0.2、2.0、20μg/mL)作用于HeLa-M细胞、HeLa细胞、HeLa-C细胞48 h后,MTT法检测细胞相对活性;Western blot分析胞核内M-CSF对人宫颈癌HeLa细胞Bcl-2蛋白表达的影响。结果MTT比色法测定结果显示:在顺铂和紫杉醇单药药物浓度为20、2.0μg/mL时,HeLa-M细胞相对活性明显高于HeLa细胞、HeLa-C细胞(P<0.01),而在两药单药药物浓度为0.2μg/mL时三种细胞相对活性相比无明显差别(P>0.05)。HeLa细胞与HeLa-C细胞相比无明显统计学差异(P>0.05);Western blot法检测胞核内M-CSF明显上调人宫癌HeLa细胞Bcl-2蛋白的表达(P<0.01)。结论胞核内M-CSF能增加人宫颈癌HeLa细胞的药抗性并抑制HeLa细胞凋亡。     

大黄素对肺癌A-549细胞合成DNA的影响

用浓度为10μg/ml的大黄素处理肺癌A-549细胞,测定了氚标记胸腺嘧啶核苷的DNA参入量。处理后第2天,~3H-TdR的参入量即明显减少,到第3、4天更为明显,参抑率由第2天的49.8％上升到第4天的72.2％。结果表明,大黄素对肺癌A-549细胞DNA的生物合成有明显的抑制作用,它可能是一种直接作用于肺癌细胞的抗肿瘤药物。     

血卟啉衍生物(HPd)在激光作用下对HeLa细胞光动力学灭活作用

血卟啉衍生物(HPd)是一种光敏制剂,能在肿瘤细胞内贮存,在光的作用下,产生单态氧,能杀伤肿瘤细胞,本文报道使用本所研制的HPd在氦-氖激光(波长640nm,功率2mw/cm~2)照射15分钟,能使HeLa细胞产生损害。对不同的HPd浓度,其灭活率各有不同。HPd浓度为15μg/ml时,HeLa细胞灭活率最大。     

外源性BDE-209对小鼠精子DNA的损伤

目的采用碱性单细胞凝胶电泳技术检测BDE-209染毒小鼠精子DNA的损伤,探讨BDE-209影响受精卵发育的可能机制。方法附睾尾取精法体外获得昆明小鼠精子,分别置于HTF培养基中。按照培养基中BDE-209终浓度的不同将实验分为5组:A组:0μg/ml;B组:2.5μg/ml;C组:5μg/ml;D组:10μg/ml;E组:20μg/ml。精子培养后,做单细胞凝胶电泳,再用彗星分析软件对细胞进行分析(SCGE),比较各组精子损伤的差异。结果在SCGE试验图片中,A组平均尾长为(1.15±1.27)μm。随着BDE-209浓度的增加,D组和E组,可见到部分细胞拖尾,平均尾长分别为(2.13±1.29)μm和(2.83.±2.46)μm,明显长于A组(P<0.01)。细胞尾部DNA的含量比也明显增加(P<0.01)。D组及E组的Olive尾矩、尾长/头长比A组长(P<0.01),C组的尾长/头长比A组大(P<0.05)。小鼠精子DNA损伤中各指标变化与BDE-209浓度的相关系数均大于0.9。结论外源性的BDE-209可造成小鼠精子DNA的损伤,导致小鼠精子DNA链的断裂。外源性BDE-209对小鼠精子DNA的损伤作用呈明显的剂量-效应关系。     

维拉帕米抑制培养细胞DNA、RNA和蛋白质合成的作用

为探讨钙拮抗剂对细胞大分子物质的代谢影响,本文观察了维拉帕米对人成纤维细胞(2BS)和猴内皮细胞(RF/6A)DNA,RNA和蛋白质合成的作用.维拉帕米抑制2BS细胞DNA和RNA合成的作用为浓度依赖性,ID_(50)分别为12.3和22μg/ml.抑制RF细胞DNA和蛋白质合成的ID_(50)分别为34.4和49.6μg/ml.     

氮溴化丙锭与聚合酶链反应结合的细菌活细胞检测方法

目的:区分细菌PCR过程中的死活菌。方法:使用叠氮溴化丙锭(PMA)处理提取样品的基因,使样品中死细胞的DNA分子与PMA发生共价交联,使其DNA分子的PCR扩增被抑制。结果:当浊度<10 NTU时,对死细胞DNA的PCR扩增,PMA具备的抑制效用仍然有效;当浊度>100 NTU时,PMA的抑制效果就会失去。而当样品中的PMA质量浓度>3μg/ml时,曝光时间就会超过3 min,PMA可对死细胞DNA的PCR扩增进行抑制;PMA质量浓度>50μg/ml时,活细胞DNA的PCR扩增就会受到影响。结论:对异丙醇处理、热处理引起的细菌细胞膜破裂而产生的死细胞,可通过PMA与PCR结合的方法进行选择性地检测,能较好的区分死活菌。     

芍药苷诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡的相关性分析

目的 探讨芍药苷对人子宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响.方法 不同浓度芍药苷作用于人宫颈癌HeLa细胞后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同时间HeLa细胞的生长抑制效应,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染色流式细胞术检测HeLa细胞凋亡率及细胞周期变化,透射电镜观察HeLa细胞形态变化,免疫细胞化学法检测芍药苷作用后HeLa细胞Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的变化.结果 不同浓度的芍药苷作用不同时间后,对子宫颈癌HeLa细胞的生长抑制率呈明显的浓度-时间依赖关系,在24、48、72 h的IC50值分别为5054、2965、2459 μg/ml(P＜0.05);应用不同浓度芍药苷后HeLa细胞凋亡率逐渐增高,对照组及1000、2000μg/ml组凋亡率分别为0.94%、10.94%、13.95%(P＜0.05),细胞周期S期比例呈增多趋势;芍药苷作用48 h后透射电镜下可见HeLa细胞出现典型凋亡改变;芍药苷作用于HeLa细胞48 h后,与对照组相比Bcl-2表达减少、Bax及Caspase-3表达增多(P＜0.05).结论 芍药苷能够诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡,其作用机制可能与抗凋亡基因Bcl-2表达减弱及促凋亡基因Bax、Caspase-3表达增强有关.     

单端羧基聚乙二醇／鱼精蛋白系统介导HSV-TK基因在官颈癌细胞中的体外研究

目的研究非病毒载体MPEG-C-鱼精蛋白系统的制备方法、其对不同剂量鱼精蛋白与单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV．TK）的结合能力以及对HeLa细胞的影响。方法将一定量的MPEG-C-和不同量的鱼精蛋白混合后与DNA室温孵育,得到MPEG-C-鱼精蛋白／DNA复合物;用琼脂糖电泳实验测定不同N／P比形成复合物时对HSV-TK的阻滞情况;用结合沉淀试验比较不同量鱼精蛋白对包裹HSV-TK的能力的影响;MTF法检测MPEG-C-鱼精蛋白对HeLa宫颈癌细胞的毒性作用及其复合物对HeLa细胞的转染率。结果MPEG-C-鱼精蛋白复合物包裹HSV-TK的能力随N／P比增大而增强：粒径随N／P比增大而减小,可达200nm左右;复合物的Zeta电位随N／P比增大而增强;与单独鱼精蛋白复合物相比．细胞转染率有所降低。结论MPEG-C-鱼精蛋白是一种制备工艺简单、对HSV．TK包裹能力高、细胞毒性小、具有一定价值的非病毒载体。     

新光敏剂(PSD—007)-激光所致小鼠白血病细胞DNA链断裂损伤

新光敏剂(PSD-007)合并激光可导致小鼠白血病细胞DNA产生链断裂损伤,且这些损伤在照射后保温过程中不能被修复。DNA链断裂量随着激光能量或光敏剂浓度增加而增加。但在1μg/ml PSD-007时,未测得DNA发生链断裂。当光敏剂达50μg/ml时,DNA链断裂不再随浓度增加而增加。与激光作用比较,~(60)Co γ线合并光敏剂照射后DNA链断裂产量未见明显增加,且在照射后可以得到重接修复。本文对以上结果进行了讨论。     

血卟啉衍生物—光辐射对L_(1210)白血病细胞核酸生物合成的影响

在一定波长光照下,扬州血卟啉(激光3号)、HA-308、LP019及美国Photofrin Ⅱ对小鼠白血病L_(1210)细胞DNA、RNA的合成代谢有不同程度抑制作用。在5μg/ml时,HA308对~3H-TdR参入DNA抑     

薤白总皂苷对人宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡作用的影响

目的观察薤白总皂苷对宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡作用的影响,并探讨其可能的作用机制。方法用不同浓度的薤白总皂苷(25、50、100、250、500、1000μg/ml)于不同作用时间(24、48、72 h)处理宫颈癌HeLa细胞后,采用MTT法检测不同浓度的薤白总皂苷在不同作用时间下对HeLa细胞增殖率的影响;用100和200μg/ml的薤白总皂苷处理宫颈癌HeLa细胞48 h后,Annexin V-FITC/PI染色测定细胞凋亡率,JC-1染色法测定细胞线粒体跨膜电位水平,Caspase试剂盒检测HeLa细胞中Caspase-9和Caspase-3的活性,荧光定量PCR测定Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值。结果薤白总皂苷对HeLa细胞的生长抑制作用呈明显的时间一剂量依赖性;薤白总皂苷(100和200μ/ml)处理能显著降低HeLa细胞线粒体膜电位,抑制HeILa细胞增殖,促进其凋亡(P<0.05,P<0.01);上调Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2与Bax的比值以及增强Caspase-9和Caspase-3的活性(P<0.05,P<0.01)。结论薤白总皂苷有显著的抑制HeLa细胞增殖和诱导凋亡作用,其作用机制可能与其降低HeLa细胞线粒体膜电位,上调Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2与Bax的比值以及增强Caspase-9和Caspase-3的活性有关。