Smad4基因条件性敲除对T细胞发育的影响

目的:探讨特异性地在T细胞中敲除Smad4基因后,对T细胞发育的影响。方法:制备小鼠胸腺单细胞悬液,通过流式细胞术检测表面标记分子CD4、CD8、TCRβ、NK1.1、γδT CR和核因子Foxp3的表达情况。结果:Smad4在T细胞中的缺失不影响CD4~-CD8~-、CD4~+CD~8+、CD4~+SP、CD8~+SP、TCRβ~(hi)、NK1.1~+TCRβ~-、NK1.1~+TCRβ~+、CD8~-γδT~+、CD8~+γδT~+、CD4~+Foxp3~+ nTreg等细胞亚群在胸腺细胞中的比例与绝对数。结论:Smad4基因在T细胞中的条件性敲除不影响T细胞的发育。     

IL-7对胸腺T细胞及树突状细胞体外分化发育的影响

目的:探讨IL-7对胸腺T细胞及胸腺树突状细胞分化的影响。方法:摘取15～16日龄胎鼠胸腺进行体外器官培养(胚胎胸腺器官培养-FTOC),分别将细胞因子IL-7和培养基滴加在胸腺小叶上,12天后收集不同条件下经FTOC培养获得的胸腺细胞,流式细胞仪检测细胞表面分子CD4、CD8、CD11c、B220、Ia等的表达,通过光学显微镜观察细胞形态,通过细胞计数检测细胞数目的变化。再将经FTOC培养获得的胸腺细胞和异源的T细胞进行混合淋巴细胞反应,通过MTT法检测T细胞的增殖情况。结果:细胞计数结果表明添加外源性IL-7组的胸腺细胞数目明显减少,流式细胞仪检测结果显示其中胸腺CD4-CD8-双阴性细胞及CD8+单阳性细胞比例有所增加,而CD4+CD8+双阳性细胞比例显著下降,CD4+单阳性细胞比例没有明显变化;此外,B细胞和树突状细胞、NK细胞数量均有不同程度的增加。结论:IL-7在胸腺T细胞及胸腺树突状细胞的分化发育中发挥重要的调节作用。     

NKT细胞研究进展

<正>1 NKT细胞的分化发育NKT细胞的发育来源目前仍在探求阶段,大部分研究显示NKT细胞是胸腺依赖的。在小鼠体内,大多数NKT细胞产生于围产期的胸腺,由CD4+CD8+双阳性T细胞(DP)偏离于主流T细胞的发育、分化途径而产生[1]。小鼠成熟NKT细胞多表现为CD4+CD8-和CD4-CD8-,NKT细胞在裸鼠、胸腺切除的新生小鼠及照射后的成年小鼠体内无法正     

α-Dystroglycan在胸腺T细胞的表达及其对胸腺发育的作用

目的：研究α-DG在胸腺T细胞中的表达及其对胸腺T细胞发育的作用。方法：摘取1513龄胚胎鼠胸腺进行体外器官培养。FACS检查不同发育时期胸腺T细胞上α-DG的表达水平；于胸腺小叶上滴加α-DG抗体、对照抗体或培养液。FACS分析胸腺T细胞表面CD4、CD8等的表达。结果：15～19天胸腺CD4^- CD8^-、CD4^ CD8^ 、CD^- CD8^ 、CD4^ CD8^-等细胞上均有不同水平的α-DG表达；α-DG抗体的干扰使胸腺T细胞发育明显受阻，表现为：双阴性细胞比例极显著的增高从对照组的26．53％到干扰组的71．60％、双阳性细胞和CD8单阳性细胞比例显著下降，从39．8l％、20．66％分别下降到7．50％、6．85％、CD4单阳性细胞比例无明显变化；同时胸腺细胞数目明显减少；随胸腺发育时间的延长和α-DG抗体的持续存在，上述现象明显加剧。结论：α-DG广泛表达在胸腺细胞上，并参与胸腺T细胞的发育和分化。     

重症肌无力患者CD4、CD8细胞表面Fas分子的变化

为探讨Fas分子、CD4、CD8分子在重症肌无力发生中的作用 ,从胸腺及外周血分离单个核细胞 ,用荧光标记的单克隆抗体 (Fas FITC、CD4 PE、CD8 Cy )和流式细胞仪检测细胞表面Fas、CD4、CD8表达情况。结果发现 ,(1)MG患者外周血单个核细胞 (PBMC )CD4 + CD8 细胞明显低于对照组 (P <0 0 2 ) ;(2 )MG患者Fas分子在PBMC的表达率明显低于对照组 (P<0 0 2 ) ,Fas+ CD4 + 细胞也低于对照组 (P <0 0 5 ) ;(3)在Fas+ 的胸腺细胞中 ,MG患者的双阳性细胞显著低于对照组 (P <0 0 1) ,而CD4 CD8+ 细胞则高于对照组 (P <0 0 5 )。说明重症肌无力患者淋巴细胞存在Fas表达异常 ,表现为外周CD4 + 细胞活化后的凋亡障碍和胸腺CD4 + CD8+ 细胞凋亡障碍 ,可能与重症肌无力患者自身反应性T细胞的形成及疾病的发生有关     

内毒素耐受状态下胸腺CD4~+ SP细胞比例变化及意义

初步探讨内毒素耐受状态下胸腺CD4~+ SP细胞的比例变化及意义。以5mg/kg LPS腹腔注射C57BL/6小鼠,建立内毒素耐受模型。注射72h、8d后检测胸腺大小、重量及细胞总数;HE染色检测胸腺组织结构病理变化;FACS检测胸腺CD4~+单阳性(single positive,SP)细胞比例并计算总数变化,同时检测CD4~+SP细胞功能相关分子CD62L表达变化;PI染色法检测CD4~+SP细胞的凋亡情况。结果显示,与对照组相比,LPS注射72h后胸腺大小、重量及细胞总数均明显降低(P0.05),且发生病理形态学异常;胸腺中CD4~+SP细胞比例显著增加,但数量减少(P0.05);此外,CD4~+SP细胞的CD62L表达水平及凋亡比例明显增加(P0.05)。LPS注射8d后胸腺大小、重量及细胞总数均与对照组相比差异不明显(P0.05),且胸腺组织结构未见明显改变;然而,胸腺中CD4~+SP细胞比例及数量仍减少(P0.05);且CD4~+SP细胞中CD62L表达水平降低。结果表明,在内毒素耐受状态下,胸腺CD4~+SP细胞比例发生显著改变,可能与细胞活化和凋亡变化有关。     

Ⅰ型干扰素参与调节SLE外周T细胞活化和TLR表达谱的研究

血清高水平Ⅰ型干扰素(typeⅠinterferon)是系统性红斑狼疮(SLE)患者重要的病理特征之一,外周高水平IFN-α对T细胞的免疫调节作用值得深入探讨。本研究首先比较分析了SLE患者外周血T细胞活化和TLR分子表达格局,结果显示SLE患者外周血CD4~+或CD8~+T细胞和正常人相比呈现出更加活化的表型变化,其表面活化标志CD69和HLA-DR表达阳性率均高于正常人;分析T细胞表达TLR分子格局发现,SLE患者较正常人T细胞中TLR分子的表达有明显升高,其中CD4~+T细胞中TLR8和TLR9的升高明显,而在CD8~+T细胞中明显升高的TLR分子有TLR3和TLR8;结合SLE病理状态下外周高水平IFN-α的持续存在,我们进一步分析了IFN-α对正常T细胞活化和TLR分子表达谱的影响,结果显示IFN-α协同TCR信号可以促进T细胞的活化,并上调T细胞中部分TLR分子的表达,其中CD4~+和CD8~+T细胞中TLR8的表达均明显上升。综合分析SLE患者和经IFN-α活化的正常T细胞的活化和TLR分子表达谱的变化格局,提示SLE病理状态下高水平的Ⅰ型干扰素可以与T细胞的持续活化有关,其对T细胞表达TLR分子格局的影响,特别是与核酸类分子配体相关的TLR分子的表达增高为内源性核酸类配体参与T细胞的活化提供了分子基础。     

天然CD4~+CD25~+调节性T细胞在胸腺中发育的研究进展

天然CD4+CD25+调节性T细胞是CD4+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的重要功能亚群,其主要在胸腺中发育成熟,对维持自身免疫耐受具有重要意义。新近研究显示,胸腺微环境中多种分子和相关信号途径在天然CD4+CD25+调节性T细胞的发育中具有重要作用,这不仅促进了人们对天然CD4+CD25+调节性T细胞的认识,而且对于机体免疫耐受机制的探讨均具有重要意义。本文就其相关研究进展做一综述。     

人T细胞抗原受体基因的命名

<正>人T细胞抗原受体(TCR)是由二硫键连接的二条多肽链(αβ或γδ)经组成的异二聚体,属lg基因超家族,每条链具有与lg分子相似的V区、D区(仅对β和δ链)J区和C区.根据TCR的不同,可将T细胞分为αβ~+T细胞和γδ~+T细胞.人外周血中95%的T细胞为αβ~+TCR,其配体是MHC-抗原肽复合物;而γδ~+TCR一般仅表达于CD4~-CD8T细胞,这些γδ~+T细胞识别的抗原结构目前尚不清楚,但在机体抗感染免疫和抗肿瘤免疫中发挥着重要的作用.从胸腺内的发育过程来看,αβ~+T细胞和γδ~+T细胞可能来源于同一祖先,而且γδTCR的表达要早于αβTCR,分别相当于妊娠第九周和第十周.     

体外诱导小鼠胚胎干细胞分化为T淋巴细胞

目的 体外诱导小鼠胚胎干细胞(ESC)分化为T淋巴细胞. 方法 借助小鼠胚胎干细胞体外自然分化形成的类胚体(EB)中含有=三胚层细胞的独特细胞环境,加入多种细胞因子和胸腺肽α1,体外诱导小鼠ESC向T淋巴细胞分化.利用流式细胞仪在不同时间点检测诱导细胞表面T淋巴细胞发育相关的表面标志CD25、CD44、CD3、CD4、CD8以及T细胞受体(TCR)αβ和TCRγδ分子的表达水平. 结果 诱导3 d后,出现CD44+细胞;第6天出现CD44+、CD44+CD25+和CD25+细胞群;第15天开始表达CD3分子;1周后开始出现CD4+CD8+双阳性细胞.随着诱导时间的延长,CD3+细胞和CD4+CD8+细胞的百分比不断升高.培养1个月后,出现少量的CD4+和CD8+的单阳性细胞.诱导细胞早期表达TCRαβ和TCRγδ.随着诱导时间的延长,T细胞进一步成熟,诱导细胞以TCRαβT细胞为主. 结论 细胞因子和胸腺肽α1的共同作用可以在体外诱导小鼠胚胎干细胞分化成具有T淋巴细胞表型的细胞,且细胞的表型变化与T细胞体内正常的胸腺发育过程中的表型变化一致.     

重组白细胞介素2促进小鼠胸腺细胞发育及辐射损伤小鼠免疫功能的恢复

经亚致死量照射的BALB/c小鼠胸腺内残留的胸腺干细胞经历与胚胎胸腺发育十分相似的过程,体内给予IL-2(6×10~5u/kg)可明显促进胸腺细胞由CD4~-CD8~-向CD4~+CD8~+再向CD4~+CD8~-/CD4~-CD8~-分化并明显促进胸腺细胞增殖和亚致死量照射小鼠脾细胞对ConA、LPS 的增殖能力,促进同种异型细胞的混合淋巴细胞反应(MLR)和绵羊红细胞(SRBC)的抗体形成细胞数(PFC)等多项免疫功能的恢复。     

慢性肾炎患者外周血T细胞亚群和共刺激分子的表达及其意义

为研究慢性肾炎患者外周血T细胞亚群和共刺激分子的表达特点及其在慢性肾炎免疫病理机制中的作用 ,本文采用免疫荧光标记和流式细胞仪分析 ,对 35例慢性肾炎患者外周血T淋巴细胞亚群和共刺激分子CD2 8、 4 1BB等的表达进行研究。结果表明 :(1)慢性肾炎患者T细胞亚群明显失衡 ,表现为CD4减少 ,CD8增加 ,CD4/CD8比值显著降低 ;(2 )共刺激分子CD2 8表达显著低于正常对照组 (CD2 8表达百分率分别为 45 95± 5 6 7和 6 6 42± 4 5 8,P <0 0 0 1) ,且CD4+ CD2 8+ T细胞和CD8+ CD2 8+ T细胞均显著减少。治疗后缓解期患者T细胞亚群失衡明显纠正 ,CD2 8+ T细胞 ,尤其是CD4+ CD2 8+ T细胞显著增多 ,而且CD4+ CD2 8+ T细胞数与患者的 2 4h尿蛋白定量呈负相关 (r= 0 47,P <0 0 1) ;(3)慢性肾炎患者共刺激分子 4 1BB在T细胞中的表达显著高于正常对照组 (表达百分率分别为 30 5 7± 8 12和 0 74± 0 2 8,P <0 0 0 1) ,治疗后的 4 1BB表达水平显著降低 ,而且 4 1BB异常高表达与CD8+ T细胞数呈正相关 (r=0 6 3,P <0 0 5 )。从而表明慢性肾炎外周血T细胞亚群失衡和T细胞活化所必需的共刺激分子CD2 8、 4 1BB异常表达 ,可能在慢性肾炎发生和病变进展中起着重要作用。     

马立克病毒强毒株感染鸡T细胞表型动态变化的研究

为深人探讨马立克病(Marek’s disease,MD)免疫发病机理,本实验以马立克病强毒株(vMDV)人工感染1日龄无特殊病原体(SPF)雏鸡,在不同感染期,以流式细胞仪分析脾脏、胸腺、外周血单个核细胞中CD4~+、CD8~+及CD3~+T细胞的动态变化.结果表明.感染鸡CD3~+和CD4~+T细胞表现为短暂的升高,其后迅速下降,而CD8~+T细胞却异常增高.CD4~+T细胞与CD8~+T细胞表型特征的这种异常变化是vMDV感染的重要特征之一.     

人初始和记忆CD4+T细胞信使RNA基因芯片检测结果分析

目的探讨健康成人外周血初始和记忆CD4~+T细胞静息状态下表面分子、趋化因子受体、细胞因子和转录因子mRNA表达的差异。方法抽取健康成年人外周血,分离PBMC,染色后流式分选出CD45RO-的初始和CD45RO+的记忆CD4~+T细胞,裂解细胞,进行mRNA表达谱芯片检测。结果相比初始T细胞,静息状态下记忆CD4~+T细胞表达高水平的表面分子CTLA-4、PD-1、FAS、CD25,趋化因子受体CCR4、CCR6、CXCR3、CXCR5,细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-17和转录因子T-bet、EOMES、STAT4、GATA3和RORγt,并表达低水平的表面分子CD62L、CCR7、ICAM-I、CD40L,细胞因子IL-1β和转录因子NF-κB。结论静息状态下,与初始CD4~+T细胞相比,记忆CD4~+T细胞高表达某些活化分子、细胞因子、转录因子mRNA,可能是记忆CD4~+T细胞发生快速免疫应答的关键因素。     

自身耐受和克隆排除

免疫系统对自身抗原处于免疫耐受状态,自身耐受的形成主要原因是自身反应性T 细胞克隆在胸腺内被排除,克隆排除发生在胸腺细胞的CD4~+8~+双阳性发育阶段,主要机制在于双阳性胸腺细胞和骨髓衍生的树突状细胞等相互作用,MHC 抗原、TCR 和CD4分子是自身耐受形成的主要参与分子。     

miR-126基因敲减对小鼠胸腺淋巴细胞发育的影响

目的研究miR-126基因敲减对小鼠胸腺细胞发育的影响,并初步探讨其意义。方法观察miR-126基因敲减(KD)小鼠胸腺的体积、重量和细胞总数;Real-time PCR检测小鼠胸腺miR-126表达水平;HE染色观察小鼠胸腺形态学结构;FACS检测胸腺中淋巴细胞比例、核抗原Ki-67的表达以及细胞凋亡的变化;最后,Western blot检测胸腺中磷酸化AKT(p-AKT)和磷酸化ERK1/2(p-ERK)的表达。结果 WT和miR-126KD小鼠胸腺体积大小、重量以及细胞总数均无明显差异,但miR-126KD小鼠胸腺miRNA-126表达水平显著下调(P0.05)。miR-126KD小鼠胸腺组织结构出现形态学异常。与WT小鼠相比,miR-126KD小鼠胸腺CD4~+SP细胞比例及细胞绝对数明显增加(P0.05),而CD4~+CD8~+(DP)细胞比例及绝对数则显著减少(P0.05),miR-126KD小鼠胸腺CD4~+SP细胞核抗原Ki-67表达显著增加(P0.05),且细胞凋亡明显减少(P0.05),而DP细胞Ki-67表达则明显减少(P0.05)。最后,miR-126KD小鼠胸腺淋巴细胞中磷酸化AKT和磷酸化ERK1/2的表达水平明显下调(P0.05)。结论 miR-126基因敲减可显著影响胸腺细胞特别是CD4~+SP细胞的发育,为后续进一步深入探讨miR-126对T淋巴细胞发育以及功能的影响提供重要的实验基础。     

CD4~+T细胞功能的双重性

<正> T细胞受体由 CD3分子与α、β两条异质性的肽链共同组成。已知T细胞分为OD4~+和CD8~+两个亚群。CD4~+细胞亚群并非都是T辅助细胞,因为①CD4~+细胞具有多种功能,只有一部分细胞能够活化抗原特异性B细胞;②CD4分子与识别连结在MHC分子的外来多肽抗原密切相关,它决定着MHCII     

HBD1对新生儿脐带血CD4~+T淋巴细胞活化和增殖的研究

本文探讨了HBD1对脐血CD4~+T细胞的增殖、细胞表面分子CD69、CD25、CD40L和CD45RO的表达及B细胞CD80、CD86分子表达的影响,并以成人外周血CD4~+T细胞作对照。采用CCK-8增殖实验检测CD4~+T细胞的增殖情况,采用流式细胞术检测CD80、CD86、CD69、CD25、CD45RO和CD40L的表达情况。结果表明:HBD1促进了脐血CD4~+T细胞的增殖,CD69、CD25、CD40L表达上调;B细胞CD80、CD86的表达也上调,但并未促进CD45RO表达的上调。而相同处理条件下,HBD1对成人外周血CD4~+T细胞作用不明显,提示HBD1对脐血来源CD4~+T细胞具有一定的免疫调节作用。     

结核病患者外周血中CD4~+ CD25~+调节性T细胞水平的检测

探讨CD4~+CD25~+调节性T细胞及其转录因子Foxp3在结核病发病机制中的作用。研究对象为肺结核患者22例(病例组)以及健康对照者23例(对照组)。采用FACS检测外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的百分率,采用real-time PCR检测外周血单个核细胞Foxp3mRNA的表达以及CD4~+CD25~+调节性T细胞与CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、IFN-γ和IL-4的相关性。结核病患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞占CD4~+T细胞的百分率,病例组(3.38±1.23)%高于对照组(1.97±0.62)%,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。血清单个核细胞Foxp3 mRNA相对表达水平为134.54±6.76,高于对照组(40.98±2.34,P0.05)。CD4~+CD25~+调节性T细胞与CD4~+T细胞、CD8~+T细胞以及与IFN-γ和IL-4的表达呈负相关。结核病CD4~+CD25~+调节性T细胞数量增加、特异性转录因子Foxp3 mRNA表达上升,由此引发的免疫抑制效应可能是结核病发生发展的重要原因之一。     

人角质形成细胞外泌体辅助超抗原SEB诱导淋巴细胞增殖

目的分离人角质形成细胞外泌体,探究负载细菌超抗原后人角质形成细胞分泌的外泌体诱导静息CD4~+、CD8~+T淋巴细胞增殖的作用。方法多步超速离心法分离体外培养的人永生化角质形成细胞外泌体(HaCaT cell exosomes,HaCaT-Exo),透射电子显微镜观察HaCaT-Exo的形态结构,Western blot检测HaCaT-Exo的标志蛋白CD63以及免疫相关分子MHCⅡ的表达,流式细胞术检测负载细菌超抗原后HaCaT分泌的外泌体诱导静息CD4~+、CD8~+T淋巴细胞增殖情况。结果提取的HaCaT-Exo符合外泌体特性并表达标志蛋白CD63;经IFN-γ刺激后HaCaT-Exo可以表达MHCⅡ分子,负载细菌超抗原SEB的HaCaT-Exo以及单独HaCaT-Exo均不能诱导淋巴细胞增殖,但经IFN-γ刺激后负载SEB的HaCaT-Exo可以诱导静息CD4~+、CD8~+T淋巴细胞增殖(P0.05)。结论经IFN-γ刺激后人角质形成细胞外泌体可表达MHCⅡ分子,并且负载细菌超抗原SEB后其分泌的外泌体具有诱导静息CD4~+、CD8~+T淋巴细胞增殖能力,这提示外泌体可能是角质形成细胞参与细菌超抗原相关免疫反应的新机制。