磷酸丝氨酸磷酸化酶在肝细胞癌中的表达及其促进增殖和转移的作用机制

背景与目的 磷酸丝氨酸磷酸化酶（PSPH）在多种肿瘤中表达上调，发挥促进肿瘤生长和转移的作用，但其在肝细胞癌（HCC）中的作用尚未完全清楚。因此，本研究旨在探讨PSPH在HCC中的表达与作用及其作用机制。方法 分别用Western blot和qRT-PCR检测PSPH在HCC组织和癌旁组织中以及不同HCC细胞株（HepG2、Huh-7、HCCLM3）与正常肝细胞株（HL-7702）中的表达。HepG2细胞过表达或敲低PSPH后，分别用CCK-8、EdU染色、Transwell侵袭实验及Western blot法检测PSPH对HepG2细胞增殖、侵袭以及细胞增殖标记蛋白CCND1和Ki-67表达的变化；同时，用Western blot法检测自噬相关蛋白LC3-II/LC3-I、p62以及侵袭相关蛋白MMP-9的表达，用免疫荧光法检测p65蛋白入核情况。结果 与癌旁组织比较，HCC组织中PSPH蛋白的表达明显上调；与正常肝细胞比较，各HCC细胞株中的PSPH基因的表达明显升高（均P<0.05）。过表达PSPH后，HepG2细胞的增殖和侵袭能力明显增强，CCND1和Ki-67的表达明显上调，LC3-II/LC3-I表达上调而p62表达下调，p65蛋白核转位明显增加，MMP-9表达明显上调（均P<0.05）；敲低PSPH后，HepG2细胞的上述指标均呈相反变化（均P<0.05）。NF-κB通路抑制剂能抑制过表达PSPH对p65入核的促进作用和对MMP-9的上调作用，而NF-κB通路激动剂能逆转敲低shikonin对p65入核的抑制作用和对MMP-9的下调作用（均P<0.05）。结论 TNF-α在HCC中表达上调，PSPH高表达能增强HCC细胞增殖与转移能力，其作用机制可能涉及对自噬的抑制作用以及对NF-κB/MMP-9信号通路的活化作用。     

NF-κB信号通路的激活与椎间盘退变的关系

[目的]探讨NF-κB信号通路在椎间盘退变中的激活机制及其作用。[方法]按照Pfirrmann椎间盘退变分级系统对患者进行分级,分别收集2012~2013年上海市第一人民医院手术患者的正常和退变椎间盘组织(退变102例,正常9例),生化检测试剂盒测定椎间盘组织中丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)含量;凝胶迁移试验(EMSA)检测细胞核内NF-κB蛋白结合活性;RT-PCR和Western blotting检测凋亡相关分子CHOP和Caspase-3表达。[结果]椎间盘退变组织中MDA、MPO水平较正常对照组明显增加;EMSA显示髓核细胞核中NF-κB活性增高;RT-PCR和Western blotting结果显示椎间盘退变组织中凋亡相关分子CHOP和Caspase-3水平明显增高。[结论]髓核细胞受氧化应激作用后可通过激活NF-κB通路导致细胞凋亡从而在椎间盘退变中发挥作用。     

miR-143调控基质金属蛋白酶-13表达对骨肉瘤细胞迁移及侵袭的影响

目的:探究miR-143对基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase,MMP-13)表达的调节作用及其对骨肉瘤细胞迁移及侵袭能力的影响。方法:采用96孔板培养小鼠骨肉瘤细胞系143B细胞,设立空白组、阴性组、阳性组、干预组。空白组不做特殊处理,阳性组加入50 μg miR-143 mimic,阴性组加入等量mimic NC(miR-143 mimic的对照序列),干预组加入50 μg miR-143 mimic及10 μg MMP-13蛋白,继续培养3~6 h,最后吸出血清处理0.5 h。分别采用荧光定量PCR和Western-blot测定各组miR-143和MMP-13蛋白表达,采用Transwell、划痕实验测定细胞的侵袭与迁移能力。结果:阳性组及干预组MMP-13蛋白表达量明显低于空白组,阳性组低于干预组(P<0.05);空白组、阴性组、阳性组及干预组每个视野的侵袭细胞数均值分别为(1 000.01±44.77)、(959.25±46.32)、(245.04±4.33)、(634.06±33.78)个;阳性组及干预组划痕愈合率均明显低于空白组,阳性组低于干预组(P<0.05)。结论:MMP-13是miR-143作用的一个靶点,可以通过抑制MMP-13表达降低骨肉瘤细胞的迁移及侵袭能力。     

杜仲多糖通过抑制NF-κB通路减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤

目的:探讨杜仲多糖对白细胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）诱导的软骨细胞损伤的影响及可能机制。方法：体外培养小鼠软骨细胞ATDC5，用含10μg/ml IL-1β处理ATDC5制作骨关节炎软骨细胞炎症模型，随机分为空白组、模型组、模型+杜仲多糖低浓度组、模型+杜仲多糖中浓度组和模型+杜仲多糖高浓度组。其中空白组细胞用常规培养基培养，模型组细胞用含10μg/ml IL-1β的培养基培养，模型+杜仲多糖低浓度组、模型+杜仲多糖中浓度组和模型+杜仲多糖高浓度组细胞分别用含100、200、400 μg/ml杜仲多糖与10μg/ml IL-1β的培养基共同培养。分别培养24、48、72 h后，CCK-8法检测细胞活力。培养48 h后，流式细胞术和DAPI染色检测细胞凋亡，ELISA法检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α），一氧化氮（netric oxide，NO），γ干扰素（interfero-γ，IFN-γ）和白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）的表达，DCFH-DA法检测细胞中活性氧含量，Western-blot法检测金属蛋白酶组织抑制因子1（tissue inhibrtor of metalloproteinase，TIMP-1），基质金属蛋白酶13（mitochondrial membrane protential，MMP-13）及NF-κB信号通路相关P65，磷酸化P65（p-P65）的蛋白表达，免疫荧光染色观察NF-κB P65细胞定位。结果：与空白组比较，模型组ATDC5细胞活力及TIMP-1蛋白表达降低（P<0.05），细胞凋亡率，TNF-α、NO、IFN-γ和IL-6水平，活性氧（reactive oxygen species，ROS）含量，MMP-13和p-P65的蛋白表达及细胞核内P65⁺数量均升高（P<0.05）。与模型组比较，模型+杜仲多糖低浓度组、模型+杜仲多糖中浓度组和模型+杜仲多糖高浓度组ATDC5细胞活力及TIMP-1蛋白表达升高（P<0.05），而细胞凋亡率、TNF-α、NO、IFN-γ和IL-6水平、ROS含量、MMP-13和p-P65的蛋白表达及细胞核内P65⁺数量均降低（P<0.05）。结论：杜仲多糖可促进白细胞介素1β诱导的软骨细胞ATDC5增殖，并抑制其凋亡、炎症反应和基质降解，其作用机制可能与抑制NF-κB通路的激活有关。     

Ghrelin通过调控NF-κB/NLRP3焦亡信号通路抑制前交叉韧带成纤维细胞焦亡的机制研究

目的 探究胃饥饿素（Ghrelin）调控核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3，NLRP3）信号通路在前交叉韧带成纤维细胞焦亡中的作用。方法 前交叉韧带成纤维细胞分为对照组、肿瘤坏死因子α（tumor necrotic factor-α，TNF-α）炎症模型组、TNF-α+Ghrelin干预组，通过CCK-8确定TNF-α和Ghrelin干预的剂量和时间，Transwell法检测细胞迁移能力，Western Blot检测细胞焦亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1（cysteinyl aspartate specific proteinase，Caspase-1）、白细胞介素18（Interleukin-18，IL-18）、白细胞介素1β（Interleukin-1β，IL-1β）、消皮素D（gasdermin D，GSDMD）的表达，q-PCR检测Caspase-1、IL-18、IL-1β、GSDMD mRNA表达水平，Western Blot检测磷酸化P65（p-P65）和NLRP3的表达。结果 绘制CCK-8结果曲线，确定Ghrelin的干预浓度为20 ng/mL，TNF-α干预浓度为20 ng/mL，干预时间都为48 h；与对照组相比，TNF-α炎症模型组的细胞迁移能力明显降低（P＜0.001），细胞焦亡相关蛋白表达显著增高（P＜0.05），p-P65和NLRP3的表达显著增高（P＜0.05），Ghrelin干预后细胞迁移能力明显提高（P＜0.001），细胞焦亡相关蛋白显著降低（P＜0.05），p-P65和NLRP3的表达显著降低（P＜0.05）。结论 Ghrelin能够显著抑制前交叉韧带成纤维细胞焦亡，改善其迁移能力，这可能是通过调控NF-κB/NLRP3实现的。     

hBMP7基因修饰的髓核细胞与同种异体椎间盘复合后体内原位移植的实验研究

目的 探讨用人骨形态发生蛋白7（human bone morphogenetic protein 7, hBMP7）基因修饰的犬髓核细胞与同种异体椎间盘复合后体内原位移植的方法阻止或延缓同种异体椎间盘移植后退变的能力。方法 将18个比格犬椎间盘（L4-5）置于-196 ℃冻存液中保存2个月,随机分为A、B、C三组,A组以rAAV2-hBMP7转染犬髓核细胞,将能够表达hBMP7蛋白的髓核细胞悬液（5×10⁶ 个/ml,20 μl）注射入复温后的椎间盘中体外培养,B组以相同数量未转染的hBMP7的髓核细胞注入椎间盘后体外培养,C组以20 μl DMEM/F12细胞培养液生理盐水注射后体外培养。将培养7 d的3组椎间盘分别移植至15只比格犬的L4-5,在术前、术后即刻及术后1、3、6个月通过X线检测移植椎间盘的愈合情况及其高度变化;通过MRI T2像分析椎间盘的退变情况;术后6个月时处死动物取材,分析腰椎屈伸、侧弯及扭转的生物力学变化;组织学染色检测椎间盘的结构及退变情况;PCR法检测3组髓核组织中hBMP7 mRNA的表达。结果 X线检测显示3组移植椎间盘高度变化指数（DHVI）差异无统计学意义（P＞0.05）;MRI检测结果显示：在术后12、24周时,B、C两组移植椎间盘的MRI T2像信号灰度比明显低于A组（P＜0.05）;生物力学检测结果显示：C组的左右扭转度明显大于A、B组（P＜0.05）,而A、B两组间的差异无统计学意义（P＞0.05）,而对屈伸及侧弯活动度检测发现3组间差异无统计学意义;PCR检测结果显示：6个月时A组仍可检测到hBMP mRNA的高表达;组织学检测结果显示：移植后6个月时仍有外源性髓核细胞存活,A组相对于B、C两组髓核结构更加完整,所含细胞外基质更多。结论 表达hBMP7的髓核细胞能阻止同种异体椎间盘移植后的退变性。     

兔椎间盘器官与脊柱运动节段离体培养条件下髓核组织的变化

目的:比较离体培养的兔椎间盘器官及脊柱运动节段两种模型椎间盘髓核组织的变化.方法:将21只新西兰白兔随机分为器官组8只,节段组13只,处死后在无菌条件下分别取出椎间盘器官和脊柱运动节段各50个,在高渗培养基中进行整体培养(410 mOsm/kg),于培养前及培养后第3、7、14、21天,两组各取10个椎间盘分别进行HE染色、II型胶原免疫组化、蛋白多糖含量和髓核细胞活力测定.结果:培养21 d器官组与培养14 d节段组HE染色示椎间盘组织结构基本保持完整,21 d节段组椎间盘组织形态学破坏;21 d器官组与14 d节段组Ⅱ型胶原免疫组化染色强度差异无统计学意义(P>0.05),21 d节段组染色变浅,与之前各时间点及器官组相比差异有统计学意义(P<0.05);蛋白多糖PAS/AB染色7 d内两组强度无降低,14 d两组强度均有所减弱,21 d节段组染色强度进一步减弱,改变比器官组更为明显;髓核细胞荧光检测两组7 d时强度较培养前变化不明显(P>0.05),21 d器官组与14 d节段组强度略有降低,但与之前时间点比较差异无统计学意义(P>0.05),21 d节段组髓核细胞荧光强度减弱,细胞活性降低,与之前各时间点及器官组比较差异明显(P<0.05).结论:14d内脊柱运动节段可作为研究生物力学对椎间盘影响的离体实验模型.     

慢性肾衰竭兔血清对主动脉平滑肌细胞增殖及核因子κB活化的作用

目的 研究慢性肾衰竭兔血清对其主动脉平滑肌细胞增殖和核因子κB （NF-κB）活化的影响,并探讨其作用的可能机制。 方法 建立慢性肾衰竭兔模型,采集血清。采用原代培养的兔主动脉平滑肌细胞,用不同浓度的慢性肾衰竭兔血清刺激不同时间,四甲基偶氮噻唑盐（MTT）法检测细胞增殖;Hoechst33342染色观察细胞凋亡;Western印迹检测慢性肾衰竭血清对主动脉平滑肌细胞增殖细胞核抗原（PCNA）、NF-κB p65蛋白表达的影响;免疫荧光观察NF-κB p65核转位。 结果 （1）在较低浓度（≤10%）时,慢性肾衰竭兔血清对平滑肌细胞的增殖有明显的促进作用,且呈浓度、时间依赖性;但血清浓度继续增加后,对平滑肌细胞的促增殖作用却明显减弱,与正常血清组差异有统计学意义（P < 0.05）。（2）Hoechst33342染色表明,慢性肾衰竭血清在低浓度时（≤10%）细胞凋亡率和正常血清组差异无统计学意义（P > 0.05）,但高浓度（>10%）时,平滑肌细胞凋亡率增加,与正常血清组差异有统计学意义（P < 0.01）。（3）慢性肾衰竭血清刺激24 h后,低浓度促进PCNA、NF-κB p65蛋白表达,高浓度抑制PCNA、NF-κB p65表达,与正常血清组差异有统计学意义（P < 0.01）。（4）10%慢性肾衰竭血清与平滑肌细胞孵育24 h后免疫荧光显示,NF-κB p65发生了核转位。 结论 不同浓度的慢性肾衰竭兔血清可导致平滑肌细胞增殖或凋亡,其促增殖作用可能与其活化了NF-κB有关。本研究为防治慢性肾衰竭加速性动脉粥样硬化提供理论依据。     

低氧对炎性环境下髓核细胞凋亡的作用及机制

目的 探讨低氧对炎性环境下髓核细胞凋亡的影响及作用机制。方法 体外培养大鼠原代髓核细胞，采用低氧小室进行低氧干预，采用促炎因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）刺激髓核细胞模拟炎性环境。通过流式细胞术及TUNEL染色检测髓核细胞凋亡情况，通过蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白表达水平，明确低氧对髓核细胞凋亡的影响；随后通过荧光定量PCR及酶联免疫吸附试验评估炎性环境下髓核细胞内炎性反应情况，并通过蛋白质印迹法分析髓核细胞内NLRP3炎性小体激活水平；最后采用NLRP3炎性小体激动剂QS-21，通过回复实验明确NLRP3炎性小体在低氧调控髓核细胞凋亡中的作用。结果 低氧对正常环境下髓核细胞凋亡无明显影响，但能抑制炎性环境下髓核细胞凋亡。在炎性环境下，髓核细胞炎性细胞因子白细胞介素（IL）-1β、IL-8、IL-18的表达及分泌增加，细胞内NLRP3炎性小体激活，而低氧干预能缓解上述改变。回复实验表明，NLRP3炎性小体激动剂QS-21可削弱低氧对炎性环境下髓核细胞凋亡的抑制作用。结论 低氧通过抑制NLRP3炎性小体激活缓解炎性环境下髓核细胞凋亡。     

RNA干扰下调NF-κB p65基因表达诱导胰腺癌细胞株PANC-1的凋亡

目的运用RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术下调胰腺癌细胞株PANC-1中NF-κB p65基因表达，并评价其对肿瘤细胞凋亡的影响。方法利用阳离子脂质体Lipofectamine^TM 2000将化学合成的人NF-κB p65的小干扰RNA（small interference RNA，siRNA）转染入胰腺癌细胞株PANC-1中。采用RT-PCR法测定细胞内NF-κB p65mRNA的表达，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测NF-κB亚单位p65的DNA结合活性的改变，运用Hoechst33258核染色、流式细胞仪和透射电子显微镜检测p65基因表达下调对PANC-1细胞凋亡的影响。结果化学合成的人NF-κB p65 siRNA能有效地抑制PANC-1细胞中NF-κB p65mRNA的表达（P〈0．01），同时ELISA结果显示，RelA siRNA组的p65亚单位与DNA结合活性明显低于对照组（P〈0．05）。Hoechst33258核染色、流式细胞仪和透射电子显微镜检测发现下调p65基因表达能够诱导PANC-1细胞的凋亡。结论体外实验初步证明了NF-κB p65基因在胰腺癌细胞凋亡调控方面扮演重要角色．通过沉默其表达可诱导胰腺癌细胞的凋亡．     

siRNA下调NF-κB p65 基因表达影响人胆管癌QBC939细胞凋亡

目的运用RNA干扰技术下调胆管癌细胞株QBC939中核转录因子κB(NF-κB)p65基因表达对其肿瘤细胞生长的抑制作用。方法以阳离子脂质体Lipofectamine TM 2000作为转染试剂,将体外合成的人NF-κB p65的siRNA转染入胆管癌细胞QBC939。RT-PCR测定细胞内NF-κB p65 mRNA的表达。用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测NF-κB亚单位p65的DNA结合活性的改变。运用免疫组化、流式细胞仪、激光共聚焦法检测p65基因表达下调对QBC939细胞凋亡的影响。结果体外合成的人NF-κB p65 siRNA有效抑制了QBC939细胞中NF-κB p65 mRNA的表达(P0.01),同时ELISA结果显示,靶向NF-κB p65 siRNA组的p65亚单位与DNA结合活性明显低于对照组(P0.05),免疫组化DAPI核染色、流式细胞仪及激光共聚焦检测观察显示下调p65基因表达能够诱导QBC939细胞凋亡。结论 NF-κB p65的siRNA在胆管癌细胞QBC939调控方面起重要作用,通过沉默其表达可诱导胆管癌细胞凋亡抑制其生长增殖。     

NF-κB信号通路对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的作用

目的 研究高糖尤其是波动性高糖对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）凋亡的影响,以及NF-κB信号通路在高糖诱导HUVEC凋亡中的作用。 方法 构建针对NF-κBp65 mRNA序列1566位点的重组RNAi腺病毒表达载体,并利用RNAi腺病毒抑制HUVEC p65表达。应用流式细胞术及脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）研究NF-κB信号通路在高糖诱导HUVEC凋亡的作用。 结果 高糖（20.5 mmol/L或30.5 mmol/L）可以促进HUVEC凋亡。NF-κBp65 特异腺病毒感染HUVEC后,可以明显抑制高糖刺激的NF-κBp65核蛋白转录,使核内p65蛋白表达处于基础水平。TUNEL结果示高糖作用后5 d,高糖组细胞凋亡率显著高于正常葡萄糖组（25.81％±1.77％比8.20％±0.63％,P < 0.05）,Ad-DEST＋高糖组（26.10％±0.98％）与单独高糖组的细胞凋亡率差异无统计学意义（P > 0.05）。Ad-1566＋高糖组的细胞凋亡率（11.49％±0.92％）比Ad-DEST＋高糖组显著下降（P < 0.01）。TUNEL法及流式细胞术检测结果均显示NF-κBp65 特异腺病毒可以降低高糖诱导的HUVEC凋亡。结论 高糖可以促进HUVEC凋亡。腺病毒感染HUVEC可以明显抑制高糖刺激的NF-κBp65核转录,从而保护高糖作用的HUVEC凋亡。     

芍药苷抗急性坏死性胰腺炎相关性肾损伤的作用与机制研究

背景与目的 芍药苷是传统中药抗炎的重要药物,其具有广谱抗炎作用,而在急性坏死性胰腺炎（ANP）相关肾损伤中其是否发挥抗炎作用从而保护肾功能尚不明确,因此,本研究探讨芍药苷对ANP相关肾损伤中的影响及作用机制。方法 将SD大鼠随机分为假手术组、ANP模型组（ANP组）、ANP模型+芍药苷处理组（芍药苷组）,ANP模型采用胆胰管逆行注射5%的牛磺胆酸钠诱导,芍药苷在造模后通过股静脉注射。首先观察不同剂量芍药苷（50、100、150 mg/kg）对ANP大鼠血清淀粉酶（AMY）、脂肪酶（LIPA）及肝功能指标的影响,分析芍药苷的最适剂量。随后采用最适剂量的芍药苷进行干预,检测造模后不同时间点（3、6、12 h）各组大鼠胰腺与肾脏组织病理变化、血清炎性指标水平、AMY与LIPA及尿素氮（BUN）与肌酐（Cr）水平。在各组造模后12 h肾脏组织中,用免疫组化检测NF-κB与caspase-3的表达、TUNEL法检测细胞凋亡、Western blot检测p38与磷酸化p38（p-p38）的表达。结果 量效关系分析结果,100 mg/kg为芍药苷的最适剂量。后续实验结果显示,与假手术组比较,ANP组与芍药苷组造模后均出现不同程度的ANP与肾损伤病理变化（病理评分增加）、炎性指标（TNF-α、IL-1β、IL-6）水平升高、血清酶学指标（AMY、LIPA）以及肾功能指标（BUN、Cr）升高,且均随着时间延长而加剧,但芍药苷组的各项指标在各时间点均明显低于ANP组（均P<0.05）。在造模后12 h肾脏组织中,ANP组与芍药苷组NF-κB与caspase-3表达、凋亡细胞数、p-p38/p38比例均明显升高,但芍药苷组的升高程度明显低于ANP组（均P<0.05）。结论 芍药苷有明显抗ANP相关肾损伤作用,其作用机制一方面在于抑制ANP本身的进展,另一方面可能通过降低p38通路活性抑制NF-κB相关炎症因子所致的级联瀑布反应从而减轻ANP相关肾损伤。     

SDF-1/CXCR4信号轴促进退变椎间盘胞外基质降解的研究

[目的]探讨SDF-1/CXCR4信号轴对于退变椎间盘胞外基质的影响及其潜在的作用机制。[方法]分别从年龄相匹配的椎间盘突出症和脊柱骨折手术患者中获取椎间盘组织,通过术前磁共振(MRI)采用Pfirrmann分级对椎间盘样本进行退变程度分组。免疫组化和western blot检测两个组椎间盘组织SDF-1、CXCR4、MMP-3,MMP9,Collagen Ⅱ和Aggrecan的表达。对取自椎间盘突出症患者的组织进行分离,细胞原代培养。取第3~6代细胞加入100ng/ml SDF-1或转染CXCR4小干扰RNA(siRNA)后共培养24 h,荧光定量PCR和western blot检测CXCR4、Collagen Ⅱ和Aggrecan的表达,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率。为进一步探讨其潜在的分子机制,NF-κB抑制剂PDTC(20μmol/L)或CXCR4-siRNA转染髓核细胞后,观察NF-κB的主要基团P65磷酸化水平(p-P65)及核转移情况,胞外基质的表达和细胞凋亡水平是否发生改变。[结果]通过MRI的Pfirrmann分级标准,椎间盘突出组的分级为Grade Ⅲ~Ⅴ级,而脊柱骨折组的分级为Grade Ⅰ、Ⅱ级,分别定义为退变组和正常组。通过检测两组未进行处理的椎间盘组织发现,SDF-1、CXCR4、MMP-3和MMP-9在退变组中表达增高,而胞外基质的主要成分Collagen Ⅱ和Aggrecan表达则在退变组织中明显降低。而体外细胞实验结果显示,SDF-1处理后CXCR4的表达明显增高,同时伴随细胞凋亡的增高,而Collagen Ⅱ、Aggrecan的表达则显著降低,但这一作用可以随着CXCR4被siRNA靶向沉默后受到明显抑制。作者进一步采用PDTC或CXCR4-siRNA处理细胞后发现,SDF-1可以明显提高p-P65表达水平,促进P65基团的核转移,而这些作用随着CXCR4表达降低而受到抑制。此外PDTC抑制NF-κB活性后,细胞凋亡水平明显下降,而Collagen Ⅱ和Aggrecan的表达则明显上升。[结论]SDF-1/CXCR4信号轴在退变椎间盘中表达增高,它可以促进胞外基质的降解,增加细胞的凋亡水平,其潜在的机制通过调控NF-κB的活性得以实现。SDF-1/CXCR4信号轴有望成为治疗椎间盘退变疾病的潜在靶点。     

椎间盘造影中碘海醇剂量对大鼠椎间盘退行性变的影响

目的 探讨椎间盘造影中造影剂碘海醇剂量对椎间盘退行性变的影响。方法 以10只成年雄性SD大鼠的40个尾椎椎间盘（每只4个）为实验对象,分为空白组（Co₆/Co₇）、对照组（Co₇/Co₈）、常规剂量组（Co₈/Co₉,2 μL碘海醇）和高剂量组（Co₉/Co₁₀,3 μL碘海醇）。分别于椎间盘造影术后2周和4周使用X线检测椎间高度指数（DHI）,使用MRI评估椎间盘信号;术后4周检测椎间盘含水量,并采用HE染色检测组织学变化。结果 术后2周和4周时,与空白组相比,对照组DHI未见明显变化,常规剂量组和高剂量组DHI降低,且高剂量组比常规剂量组降低更为显著,差异均有统计学意义（P < 0.05）;对照组、常规剂量组和高剂量组椎间盘信号均降低,且剂量越大信号越低,差异均有统计学意义（P < 0.05）。与空白组相比,对照组椎间盘含水量未见明显变化,常规剂量组和高剂量组椎间盘含水量降低,且高剂量组降低更为显著,差异均有统计学意义（P < 0.05）。与空白组相比,对照组椎间盘组织学评分无明显变化,常规剂量组和高剂量组椎间盘组织学评分均增高,且剂量越大评分越高,差异均有统计学意义（P < 0.05）。结论 椎间盘造影时注入碘海醇可促进椎间盘退行性变,且呈剂量依赖性。在造影操作时应尽量减少造影剂的使用,以降低对椎间盘的影响。     

circZMYM2/miR-29a/PUMA轴对急性胰腺炎腺泡细胞凋亡的影响及作用机制

背景与目的 腺泡细胞凋亡在急性胰腺炎（AP）炎症反应和病情进展中发挥重要作用，进一步了解腺泡细胞的凋亡机制及相关通路有助于为AP特异性治疗提供新思路。本研究探讨锌指蛋白基因ZMYM2转录环状核糖核酸（circZMYM2）、微小RNA-29a（miR-29a）与p53上调凋亡调节因子（PUMA）在AP中的表达及其之间的潜在关系。方法 将大鼠胰腺腺泡细胞AR42J用雨蛙素诱导AP体外模型（AP组），或先通过pcDNA3.1-si-ZMYM2转染，敲低circZMYM2后再用雨蛙素诱导AP体外模型（si-circZMYM2组），以无处理的AR42J细胞作为对照组。3 h后分别用ELISA法检测细胞淀粉酶水平、CCK-8法检测细胞活力、流式细胞术与TUNEL法检测细胞凋亡情况、Western blot法检测细胞PUMA蛋白表达、qRT-PCR检测细胞circZMYM2与miR-29a表达。结果 与对照组比较，AP组与si-circZMYM2组淀粉酶水平均明显升高、细胞活力均明显降低、细胞凋亡率或凋亡细胞数均明显增加、PUMA蛋白表达水平均明显升高，但si-circZMYM2组以上指标的变化程度均明显低于AP组（均P<0.05）。与对照组比较，circZMYM2表达水平在AP组明显升高，在si-circZMYM2组明显降低，而miR-29a表达水平在AP组明显降低，在si-circZMYM2组明显升高（均P<0.05）。结论 circZMYM2在AP的腺泡细胞中表达升高，其可能通过与miR-29a内源性竞争作用，抑制miR-29a的表达，从而上调PUMA表达水平，促进腺泡细胞凋亡和AP进展。     

NF-κB、MMP-9与肝细胞肝癌浸润转移的实验研究

目的观察高转移性肝癌细胞系HCC9204细胞转染抑制性κB基因（IκB-α）后核因子κB（NF-κB）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的改变以及细胞浸润转移能力的改变。方法采用脂质体法将IκB-α基因转染HCC9204细胞，应用Western-blot及RT-PCR法检测MMP-9和NF-κB的表达；电泳迁移率分析（EMSA）测定NF-κB活性；免疫组化法检NF-κBp65、MMP-9的表达；激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察MMP-9细胞定位以及细胞形态；基底膜侵袭实验检测肿瘤细胞的浸润和转移。结果HCC9204细胞转染PCDNA3-IκB-α后，细胞内NF-κB和MMP-9 mRNA表达以及NF-κB活性下降；NF-κB、MMP-9表达具有明显的正相关；MMP-9蛋白表达位置和细胞形态改变；细胞侵袭转移能力明显下降。结论NF-κB表达水平与HCC9204的浸润转移能力有关；NF-κB活性抑制后细胞浸润转移能力下降，MMP-9表达下降可能起主要作用。     

长链非编码RNA MEG3靶向下调miR-21对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及炎症反应的影响

目的探究长链非编码RNA母系表达基因3(MEG3)靶向miR-21的作用对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的软骨细胞凋亡及炎症反应的影响及其作用机制。方法将细胞分为cTRL组、IL-1β组、LV-MEG3组、miR-21 mimic组和LV-MEG3+mimic组,用IL-1β处理软骨细胞后,加入对应的慢病毒或miRNA mimic处理细胞。RT-PCR检测MEG3、miR-21、基质金属蛋白酶13(MMP-13)、II型胶原蛋白(Collagen II)、聚蛋白聚糖(Aggrecan)基因表达水平,Hoechst检测细胞凋亡,Western blot检测活化半胱天冬酶3(cl-Caspase-3)、cl-Caspase-9、MMP-13、Collagen II、Aggrecan蛋白表达水平和p65、信号传导及转录激活因子3(STAT3)磷酸化比率,试剂盒检测丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6、IL-10水平,免疫荧光检测p65的核定位情况。结果与cTRL组比较,IL-1β组miR-21表达,细胞凋亡率,MMP-13基因表达,cl-Caspase-3、cl-Caspase-9、MMP-13蛋白表达,MDA、LDH、TNF-α、IL-6水平,p65和STAT3磷酸化比率,p65核内信号水平升高,MEG3表达,Collagen II、Aggrecan基因和蛋白表达,SOD、GSH、IL-10水平降低;与IL-1β组比较,LV-MEG3组miR-21表达,细胞凋亡率,MMP-13基因表达,cl-Caspase-3、cl-Caspase-9、MMP-13蛋白表达,MDA、LDH、TNF-α、IL-6水平,p65和STAT3磷酸化比率,p65核内信号水平降低,MEG3表达水平,Collagen II、Aggrecan基因和蛋白表达水平,SOD、GSH、IL-10水平升高;miR-21 mimic组各项检测指标的变化与LV-MEG3组相反;与miR-21 mimic组比较,LV-MEG3+mimic组miR-21表达,细胞凋亡率,MMP-13基因表达,MMP-13、cl-Caspase-3、cl-Caspase-9蛋白表达,MDA、LDH、TNF-α、IL-6水平,p65和STAT3磷酸化比率,p65核内信号水平降低,MEG3表达水平,Collagen II、Aggrecan基因和蛋白表达,SOD、GSH、IL-10水平升高。结论MEG3可下调miR-21表达,从而抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,缓解炎症反应,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。     

NF-κB在永生化神经前体细胞凋亡中的作用

目的 探讨NF-κB在永生化神经前体细胞凋亡中的作用.方法 永生化神经前体细胞接种于6孔板,随机分为5组,每组6孔,INPC组不进行基因转染,INPC/CMV组转染表达质粒ReCMV;INPC/p50组、INPC/p65组分别转染含p50基因和p65基因的表达质粒RcCMV,转染后2 d,加入200 μg/ml G418筛选12～14 d,进行阳性克隆扩大培养3～4周,检测p50 mRNA、p65 mRNA表达、NF-κB活性和细胞凋亡情况.INPC/p50p65组转染含p65基因的表达质粒ReCMV,加入200 μg/ml G418筛选12～14 d,进行阳性克隆扩大培养3～4周,转染含p50基因的表达质粒ReCMV,2 d后进行上述指标的检测.结果 INPC/p50组和INPC/p50p65组p50 mRNA表达高于其他组(P<0.05),INPC/p65组和INPC/p50p65组p65 mRNA表达、NF-κB活性及细胞凋亡率高于其他组(P<0.05).结论 NF-κB活性升高可促进永生化神经前体细胞的凋亡.