金铁锁种质资源的遗传多样性分析

目的研究中国西南特有濒危药用植物金铁锁的遗传多样性。方法应用AFLP分子标记技术对具有代表性的7个金铁锁居群,共137个个体进行分析。结果在金铁锁的物种水平上,Nei’s基因多样性指数(He)、Shan-non’s信息指数(I)、多态位点百分率(PPB)分别为0.2434±0.1791、0.3735±0.2485、82.30%;在其居群水平上分别为0.0918±0.1610、0.1402±0.2362、30.48%。居群间Nei遗传分化指数(Gst):0.6244;Shannon’s多样性基因遗传分化系数(Ist):0.6246。聚类表明:地理距离相对远的丽江居群与个旧居群遗传距离最近;昆明居群与其他居群遗传距离较远。统计获得9条可区分各地方居群的特征指纹带。结论金铁锁种内的遗传多样性水平丰富,而居群内遗传多样性水平较低,居群间遗传分化显著;各居群间亲缘关系与地理距离无明显相关性;其种内特征带与各居群特征带结合,可以为AFLP分子标记技术用于其种质资源的鉴定、遗传育种提供重要的依据。     

云南常见药用红景天的分子鉴定研究

目的:分析大花红景天Rhodiolacrenulata与长鞭红景天R.fastigiata、云南红景天R.yunnanensis等云南常见药用红景天及景天属的长丝景天Sedumbergeri的核糖体内转录间隔区(ITS)基因序列,为药用红景天分子鉴定提供依据。方法:用PCR产物直接测序法测定其核糖体内转录间隔区序列并作同源性分析。结果:构建了大花红景天11个地方居群、长鞭红景天9个地方居群、云南红景天1个地方居群及长丝景天1个地方居群的ITS基因片段序列数据库。序列比较的结果表明红景天属样品的ITS序列与长丝景天有显著差别;红景天属内各种序列差异虽小,却存在显著而稳定的差别,能准确鉴定出各种药用红景天植物。结论:根据rRNAITS区碱基序列差异,能准确鉴别大花红景天及其近源植物及药材。     

丽江山慈菇RAPD遗传变异初探

目的研究丽江山慈菇Iphigenia indica遗传变异及遗传结构。方法采用RAPD技术，对产自云南的3个居群进行DNA指纹检测。结果筛选出20个随机引物，对3居群扩增共产生120条DNA片段，在0．2～3kb，其中71条谱带具有遗传多态性，约占59．17％，平均每个引物扩增的DNA带数是3．55。Shannon index在丽江玉龙雪山居群(Ca)为0.1994，大理宾川鸡足山居群(Cb)为0．2007，丽江永胜片角镇居群(Cc)为0.2548；居群平均水平为0．2183，物种水平为0．2886。Nei’sgeneticidentity在Ca和Cb居群间为0．9309；在Ca和Cc居群间为0．9327；在Cb和Cc居群间为0，9466。居群间基因分化系数Gst为0．2044。结论RAPD分析可为丽江山慈菇保护对策和措施的制定，遗传育种和GAP种植方法及标准的制定，提供理论依据和基础资料。     

浙江主产区栽培玄参群体遗传结构分析

目的 观察浙江主产区栽培玄参的群体遗传结构。方法 应用荧光AFLP标记对具有代表性的6个玄参居群群体遗传结构进行分析。结果 采用7对AFLP引物组合扩增共得到12 552条扩增带,其中多态性谱带8 808条,多态性比率70.17%;各居群间的PPB变化范围在41.67%～55.56%,平均为47.30%; I在0.190 8～0.238 3,平均为0.221 8;Ne在1.201 4～1.280 6,平均为1.236 9;Gst为0.127 1,Nm为3.432 4;UPGMA聚类显示6个居群可以聚为2类,其中天台、缙云和景宁种群遗传距离较近聚为一个亚类,东阳、磐安和仙居聚为一个亚类。结论 浙江主产区栽培玄参种质资源在物种水平上具有较高的遗传多样性,居群间有一定的遗传分化,但大部分存在于居群内部,居群间有较高的基因交流,居群间遗传距离与地理环境无相关性。     

香鳞毛蕨种质资源遗传多样性的AFLP分析

目的 利用AFLP技术分析香鳞毛蕨种质资源多样性。 方法 对46个香鳞毛蕨个体进行AFLP分析,利用NTSYS-PC 2.10、PopGene32软件分析各居群的遗传多样性。 结果香鳞毛蕨居群多态位点百分率(PPB)为7667%;观测等位基因数(Na)为1.766 7,有效等位基因数(Ne)为1.504 6, Nei′s基因多样性指数(H)为0.292 1,Shannon信息指数(I)为0.431 6;遗传分化指数(Gst)为0.412 5。结论 香鳞毛蕨遗传多样性较高。群体内的基因多样性(Hs)为0.170 5,群体间的基因多样性(Dst)为0.119 8,且由于生境特殊性,对香鳞毛蕨资源应采取就地保护策略。     

红景天属4种植物RAPD分析与分类鉴定

目的 用RAPD技术对红景天属(Rhodiola L．)的大花红景天R．crenulata、长鞭红景天R．fastigiata、狭叶红景天R．kirilowii和高山红景天R．sachalinensis 4种药用植物进行分子水平鉴定。方法 CATB法提取红景天属原植物总DNA，以200条随机引物进行随机扩增。结果 用OPA4(AATCGGGCTG)、OPB7(GGTGACGCAG)、OPB18(CCACAGCAGT)、OPX14(ACAGGTGCTG)和OPZ13(GACTAAGCCC)作随机扩增引物进行随机扩增时，可得到识别这些物种基因组DNA的多态片段。结论 RAPD法能有效地鉴别红景天类药材，把大花红景天、长鞭红景天、狭叶红景天和高山红景天区分开。     

铁皮石斛人工栽培居群的遗传多样性研究

目的 了解铁皮石斛人工栽培居群的遗传多样性,为种质资源的保护与新品种的选育提供基础。方法 利用RAPD分子标记对浙江义乌、天台、建德、武义,云南麻栗坡、勐海的14个居群的铁皮石斛和1个居群的紫皮石斛进行遗传多样性分析。结果 从225个RAPD引物中筛选出15个引物,对105个铁皮石斛和3个紫皮石斛样本进行PCR扩增,共扩增出138条带,其中133条为多态性条带,多态性条带比率（PPB）为96.38%;14个铁皮石斛居群的多态位点（PPL）在10.79%～76.26%,平均为45.32%。结论 全国主产区人工栽培的铁皮石斛遗传多样性丰富,铁皮石斛种质的亲缘关系远近与其地理种源具有显著的相关性,与栽培地点无关。     

浙江主产区栽培浙贝母种质遗传多样性的AFLP分析

目的 研究中国浙江省道地药材浙贝母的遗传多样性。方法 应用扩增片段长度多态性技术(AFLP)对具有代表性的6个浙贝母居群,共32份个体进行分析。结果 在浙贝母的物种水平上,Nei′s基因多样性指数(He)为0.169 0±0.175 7,Shannon′s信息指数(I)为0.269 8±0.245 3,多态位点百分率(PPB)76.85%;总遗传多样性(Ht)0.169 0±0.030 9,其居群水平上遗传多样性(Hs)0.150 8±0.024 0,Shannon′s信息指数(I)0.233 3±0.261 9,多态位点百分率(PPB)50.38%,Nei′s遗传分化指数(Gst)为0.107 6,基因流(Nm)为4.147 0。东阳和永康种群之间的遗传距离最小(0.015 0),而象山与缙云最远(0.032 4)。结论 浙江省主产区栽培浙贝母物种的遗传多样性水平丰富,高的遗传多样性能够维持浙贝母的长期生存,居群间的多样性水平明显低于居群内的多样性水平,居群间遗传分化不明显,种植资源相对比较稳定,这些居群适宜作为浙贝母优良品种的选育基地。     

黄连遗传多样性的ISSR分析

目的 对野生黄连进行遗传多样性研究。方法 通过ISSR技术对7个野生黄连居群共78个个体进行遗传多样性分析。结果 用12个随机引物共扩增出106条清晰条带,其中72条具多态性,平均多态性位点比率为67.92%,Nei′s基因多样性指数H=0.180 3,Shannon多样性指数I=0.283 2,遗传分化指数Gst=0.681 5,遗传距离和遗传一致度分别为：0.089 4～0.184 6和0.832 1～0.912 7。结论 黄连种水平上具有较高的遗传多样性,遗传变异主要存在于居群间,遗传多样性与地理关系表现出明显的相关性,ISSR可以作为研究遗传多样性及遗传分化的有效标记。     

川产羌活种质遗传多样性的RAPD分析

目的考察羌活Notopterygium incisum的遗传特征,探讨不同产地且有形态变异的羌活种质资源的遗传多样性、遗传分化及与环境因子的相关性。方法用RAPD方法选择15个随机引物对四川西部4个居群33株个体叶片DNA进行扩增,从个体间遗传关系及居群间遗传分化方面对羌活的遗传结构进行分析。结果RAPD共检测到185条谱带,其中128个位点为多态位点,多态性百分率为69.19%,Nei's基因多样性为0.2237,Shannon's信息指数为0.3375;壤塘和九龙居群聚为一类,理县和泸定居群聚为一类;茎秆颜色花纹性状与遗传差异间未表现明显相关性,不同性状的羌活个体仍主要按居群,即产地来源聚类;羌活居群内和居群间的变异分别占总变异的74.67%和25.33%;羌活居群间的遗传距离与地理距离间没有明显相关性(r=-0.1105,P=0.5855);羌活4个居群遗传多样性大小与年均温负相关,未达到显著水平(r=-0.771,P=0.229);与年均降雨量正相关,但相关不显著(r=0.291,P=0.709)。结论本研究表明羌活遗传多样性水平较高;羌活的遗传变异主要分布在居群内,但居群间已形成一定的遗传分化;壤塘和九龙羌活个体间的遗传距离较小,各自遗传背景较为相似。产地差异对遗传变异的影响大于因其茎秆颜色花纹不同所造成的影响。     

大花红景天尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶基因组DNA的克隆及分析

目的 克隆大花红景天Rhodiola crenulata尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶基因组DNA,并利用生物信息学对其编码区与启动子进行分析。方法 以大花红景天为样品,采用优化的CTAB法提取大花红景天基因组DNA,并利用hiTAIR-PCR技术经过3次步移获得大花红景天UDPGT（RcUDPGT）基因DNA序列,并利用生物信息学对其进行分析。结果 克隆得到RcUDPGT基因的DNA序列2 977 bp,其中包含1 499 bp的编码区域（包括82 bp的内含子序列）和1 500 bp的编码区5’上游侧翼域序列（包括启动子区域）。生物信息学分析证明该序列为UDPGT基因且与其他植物UDPGT同源,具有亲水性且定位于细胞质中,三级结构预测表明该基因编码的蛋白具有UDPGT功能结合位点。启动子分析表明其存在光响应、厌氧响应、热响应、低温响应、压力与防御响应和花色素苷合成响应元件等。结论 克隆的RcUDPGT基因结构完整,具有典型的功能结合位点,为红景天分子生物学与代谢工程研究提供参考。     

长鞭红景天细胞悬浮培养体系优化研究

目的 优化长鞭红景天Rhodiola fastigiata细胞悬浮培养体系及生长条件。方法 研究基本培养基、激素、碳源、氮源等因素对长鞭红景天细胞生长和红景天苷产量的影响,建立高产红景天苷的细胞悬浮培养体系。结果 MS培养基＋BA 5.0 mg/L＋2, 4-D 0.1 mg/L＋蔗糖30 g/L为长鞭红景天细胞悬浮培养的最适培养条件。结论 对培养条件进行优化,为利用长鞭红景天细胞大规模生产天然活性成分奠定基础,为缓解野生长鞭红景天资源的匮乏提供可行途径。     

浙江产香茶菜属植物8个居群的RAPD分析

目的 从DNA分子水平上探讨香茶菜属植物种群变异特点。方法 从70个随机引物中筛选出10个具有较高多态性检测能力的引物。用这10个随机引物对浙江境内3种香茶菜的8个居群进行了RAPD分析，对得出的RAPD结果应用SPSSl0．0进行的聚类分析和应用CANOC03．10进行的除趋势对应分析。结果 共检测出144个位点，其中单态位点11个，占7．64％，多态位点133个，占92．36％。分析结果表明，浙江产香茶菜不同种、同一种的不同居群间存在明显的遗传分化，其中种间的差异要大于种内，大萼香茶菜Isodon macrocalyx居群间的差异要比香茶菜I.amethystoides居群的小。结论 香茶菜形态与化学成分的变异有一定的遗传学基础。     

岩白菜中岩白菜素的纯化及提取工艺研究

目的：优选岩白菜中岩白菜素最佳提取工艺并考察其纯化方法。方法：用紫外-可见分光光度计测定岩白菜素的含量为指标,考察了影响大孔吸附树脂纯化及醇提工艺的主要因素。结果：确定岩白菜的最佳提取工艺条件为10倍量50%的乙醇,回流提取3次,每次0.5h,最佳的纯化条件为每克D-101树脂（干重）最大上样量2.5g原生药材,上样静置吸附30m in后用6倍柱床体积20%的乙醇洗脱。结论：在该提取及纯化的最佳参数组合下,岩白菜素的含量达14.023%,结果可靠。     

红景天根中氨基酸含量测定

目的：结合医疗、药用研究,旨为更好挖掘药源。方法：采用岛津Ｌｃ－６Ａ高效液相色谱仪,测定了红景天根中的水解氨基酸。结果：所测１８种氨基酸含量各异,且因产地、年度、野生、园栽不同而异;氨基酸总量（ｇ／ｋｇ）,通化野生（５３１）＞临江野生（５０１）＞抚松野生（４６８）＞通化多年生园栽（３７９）＞通化二年生园栽（３６２）＞临江园栽（３５９）,野生皆高于园栽红景天根;其中１０种药效、１２种必需、半必需和１３种香甜味氨基酸分别占总量的３６０％６４９％、５０６％７０４％和６９８％ ７７９％。结论：红景天根中氨基酸种类齐全、含量丰富,值得开发利用     

RAPD法鉴定射干类中药

目的：用RAPD技术对射干类药材射干Belamcanda chinensis及混淆品鸢尾属鸢尾Iris tectorum、野鸢尾I．dichotoma、蝴蝶花I．japonica、德国鸢尾I．germanica等5种药用植物进行分子水平的鉴定。方法：CTAB法和DNeasy^TM Plant Mini Kit法提取射干类药材5种原植物总DNA,以随机引物进行随机扩增。结果：用OPD－08（5’-gtgtgcccca-3‘）等作随机扩增引物进行随机扩增时,可得到识别这些物种基因组DNA的多态片段。结论：RAPD法能有效的鉴别射干类药材,把射干和鸢尾、野鸢尾、蝴蝶花、德国鸢尾等药用植物区分开。     

RAPD在山麦冬属四种植物分类中的应用

采用随机扩增多态DNA（RAPD）技术对山麦冬属的4种植物进行研究，并以沿阶草OphiopogonbodlinienLevl．为组外比较，用SPSS3．1＋软件对实验数据进行统计分析，得到聚类图。观察所得结果，发现这5种植物被分为两大类群，短葶山麦冬、阔叶山麦冬、山麦冬、湖北山麦冬为一类，沿阶草为另一类，这与经典分类相一致，前4种隶属于山麦冬属，后一种属于沿阶草属；同时，我们发现短葶山麦冬和阔叶山麦冬相对遗传距离较近，结果为阔叶山麦冬是短葶山麦冬的阔叶变种提供分子遗传方面的佐证。