miR-33b表达载体构建及表达活性检测

目的:构建miR-33b真核表达载体及其表达活性检测。方法:人工合成miR-33b成熟cDNA序列,以GV251为载体,构建miR-33b真核表达载体,并对重组克隆进行测序确保载体构建成功;采用脂质体转染法将miR-33b表达载体导入人胃癌细胞MKN-28中,通过倒置荧光显微镜观察转染效率,再利用实时定量RT-PCR检测miR-33b的表达,以检测外源基因的表达活性。结果:成功构建了miR-33b真核表达载体;转染细胞后采用倒置荧光显微镜观察表明载体中GFP的表达活性较好;实时定量RT-PCR结果表明,相较于对照组细胞,miR-33b转染组中miR-33b表达显著增加,且具有显著性差异(P0.05)。结论:成功构建miR-33b真核表达载体,并为进一步研究miR-33b参与胃癌发生发展机制奠定基础。     

孟鲁司特佐治儿童过敏性紫癜的疗效及对血清中IL-13和IL-15的影响

目的 观察孟鲁司特治疗儿童过敏性紫癜的疗效,探讨其对患儿血清白细胞介素-13(IL-13)和白细胞介素-15(IL-15)的影响.方法 将本院98例过敏性紫癜患儿按随机数字表法分为两组,每组49例,对照组采用常规方法治疗,观察组在常规治疗基础上加用孟鲁司特治疗,比较两组治疗效果及血清中IL-13及IL-15水平变化.结果 观察组治疗后有效率明显高于对照组(x2 =6.56,P＜0.01),两组患儿治疗后血清中IL-13及IL-15水平显著下降,与治疗前比较差异均有统计学意义(t=4.63,P＜0.01),观察组治疗后血清中IL-13及IL-15水平明显低于对照组(t =9.75,12.08,P＜0.01),观察组患儿血清中IL-13及IL-15含量下降值明显高于对照组(t=8.97,11.86,P＜0.01).结论 孟鲁司特治疗过敏性紫癜优于常规治疗方法,可降低患儿血清中IL-13和IL-15水平,减少由IL-13和IL-15引起的炎症级联反应.     

硅纳米载体携带RNA干扰质粒逆转人结肠癌细胞多药耐药的实验研究

目的 探讨硅纳米颗粒作为基因转染载体携带干扰质粒MRP2siRNA逆转人结肠癌耐药细胞株HT29/L-OHP的多药耐药,为硅纳米作为靶向基因治疗和化疗药物的有效性打下基础. 方法 制备硅纳米载体,用硅纳米载体和脂质体分别将多药耐药基因MRP2的干扰重组质粒pGensil-MRP2siRNA,转染人结肠癌耐药细胞株HT29/L-OHP,观察两种载体转染人结肠癌耐药细胞株HT29/L-OHP后绿色荧光的表达,利用RT-PCR和Western-blot检测MRP2的表达,CCK-8实验测定转染干扰质粒后顺铂对人结肠癌耐药细胞株HT29/L-OHP细胞增殖抑制作用,并比较两种载体的逆转效率. 结果 在人结肠癌耐药细胞株HT29/L-OHP中,两种载体携带的siRNA都明显抑制了MRP2 mRNA及蛋白的表达,两种载体逆转效果差异无统计学意义（P＞0.05）.在相同浓度化疗药物的作用下,两种载体的RNA干扰组细胞凋亡比例显著高于对照组（P＜0.01）,表明细胞耐药性显著下降,两种载体细胞凋亡差异无统计学意义（P＞0.05）. 结论 硅纳米能有效的携带pGensil-MRP2siRNA质粒转染人结肠癌细胞人结肠癌耐药细胞株HT29/L-OHP,并且对结肠癌耐药细胞的MRP2的表达有明显抑制作用,取得良好的逆转耐药效果.     

载脂蛋白A5基因多态性对代谢综合征及其心血管事件发生的影响

目的 探讨载脂蛋白A5(ApoA5)基因多态性对代谢综合征及其心血管事件发生的影响.方法 选择代谢综合征患者200例[其中未合并心血管事件患者100例(MS-1组),合并心血管事件100例(MS-2组)]和健康人100例(对照组).用ELISA法检测各组的载脂蛋白A5血清浓度,采用PCR-RFLP法测定三组的ApoA5-1131T＞C基因多态性.结果 MS-1组ApoA5血清浓度明显低于对照组[(96.68±18.09) ng/ml vs(128.32 ±23.78) ng/ml,t=10.59,P＜0.01];MS-2组ApoA5血清浓度亦低于MS-1组[(87.67±17.09) ng/ml vs(96.68±18.09) ng/ml,t=3.62,P＜0.01];而且MS-2组、MS-1组的ApoA5-1131C基因型频率明显高于对照组(39.4％＞30％＞16.5％,P＜0.05).结论 代谢综合征及其心血管事件患者的ApoA5血清浓度明显降低,ApoA5-1131C与代谢综合征及其心血管事件相关.     

阿德福韦酯联合干扰素α-1b治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎疗效研究

目的 探讨阿德福韦酯(ADV)联合IFN α-1b治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎(CHB)患者临床疗效.方法 将120例患者分成3组:单用IFN α-1b组(A组)40例,单用ADV组(B组)40例,ADV和IFN α-1b联合治疗组(C组)40例,疗程48周,分别于治疗12周、24周和48周时查ALT复常率、HBeAg血清转换率、HBV DNA阴转率.其中各组中10人于治疗前及治疗48周行肝穿刺活检术,观察病理改变,根据炎症活动度(G)和纤维化程度(S)进行计分,同时采用纤维化半定量计分系统(SSS)评分.结果 C组24周和48周后的ALT复常率分别为65.0％和87.5％,HBeAg转换率为35.0％和45.0％,HBV DNA阴转率为75.5％和92.5％,均显著高于A组和B组(ALT复常率,24周:x2=7.93、4.81,48周:x2=6.52、3.98,P均＜0.05；HBeAg转换率,24周:x2=4.18、12.26,48周:x2 =4.95、14.58,P均＜0.01；HBV DNA转阴率,24周:x2=9.78、3.75,48周:x2=11.96、6.99,P均＜0.05).组织学肝纤维化各项评分结果联合治疗组均优于单药组,差异有统计学意义(SSS:t=23.27、48.99;G:t=53.89、94.31；S:t =60.01、82.06,P均＜0.01).结论 IFN联合ADV治疗CHB患者可协同抑制HBV复制,明显提高抗HBV疗效,且无明显不良反应,是一种有效的治疗方法.     

氯沙坦联合阿托伐他汀治疗糖尿病肾病的疗效观察

目的 探讨氯沙坦联合阿托伐他汀治疗糖尿病肾病(DN)的临床效果.方法 将122例DN患者随机分为两组,对照组61例给予常规治疗加氯沙坦,观察组61例在对照组的基础上加用阿托伐他汀治疗,两组疗程均为12周,治疗12周后检测两组患者的收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、空腹血糖(FBG)、尿微量白蛋白排泄率(UAER)、血肌酐(Scr)、糖化血红蛋白(HbAIc).结果 观察组总有效率为93.44％,对照组为75.41％,两组相比较差异有统计学意义(x2=7.54,P＜0.01);两组患者治疗12周后的SBP、DBP与治疗前比较均有所下降,差异有统计学意义(SBP:t=16.25,17.34,P＜0.01;DBP:t=18.10,17.04,P＜0.01);对照组FBG、UAER、HbAlc均较治疗前明显降低(P＜0.05),观察组的TG、TC、LDL-C、HDL-C、FBG、UAER、Scr、HbAlc均较治疗前显著降低(P＜0.05),观察组的TG、TC、UAER、Scr明显低于对照组(P＜0.05).结论 氯沙坦联合阿托伐他汀治疗DN较常规治疗加氯沙坦在减少尿微量白蛋白作用方面更具优势,且能加强保护肾功能的作用.     

紫衫醇注射液及其脂质体在大鼠体内的相关药动学参数比较

目的 比较紫杉醇脂质体与紫杉醇注射液在大鼠体内的血药浓度及相关药动学参数.方法 大鼠经尾静脉注射紫杉醇注射液或紫杉醇脂质体注射液12 mg/kg后,采用HPLC法测定大鼠体内的血药浓度,得出药-时曲线图及相关药动学参数,并采用SPSS 13.0统计软件将血药浓度进行配对t检验.结果 在大鼠体内,紫杉醇及其脂质体在血浆样品中的浓度分别为(0.18±0.07)C/(mg·L)、(50 ±9.2)C/(mg·L),差异有统计学意义(t=5.879,P＜0.01);紫杉醇脂质体药时曲线下面积(AUC)较紫杉醇注射液大(17.693±2.657 vs 10.812±2.846,t=4.892,P＜0.01),表观分布容积(Vc)较紫杉醇注射液小[(1.629±4.91)×10-3 L vs (5.268±1.121)×10-3 L,t =3.75,P＜0.01],清除率Cl(s)较紫杉醇注射液慢[(7.2±1.0)×10-4Lvs(1.2±2.7) ×10-4L,t=4.25,P＜0.01].结论 紫杉醇脂质体与紫杉醇注射液在大鼠体内药动学有显著不同,脂质体制剂具有长效和缓释的特点,在维持较长的体内循环时间的同时,能够更好地浓聚于靶组织,减少药物对其他组织的毒副作用并增加疗效.     

ICU机械通气患者支气管镜肺泡灌洗疗效分析

目的:探究支气管镜肺泡灌洗在机械通气患者中的临床治疗优越性.方法:将60例患者分为常规灌洗吸痰组(对照组)和支气管肺泡灌洗组(BAL-观察组)2组,观察2组灌洗前后血气参数PaO2、SaO2％、PaCO2的变化.结果:对照组治疗前后参数分别为PaO2,t=1.79,P＞0.05;PaCO2,t=3.51,P＜0.05;SaO2％,t=2.29,P＜0.05.观察组治疗前后参数为PaO2,t=6.39,P＜0.01;PaCO2,t=10.38,P＜0.01;SaO2％,t=4.88,P＜0.01.观察组与对照组相比较,PaO2,t=2.94,P＞0.01;PaCO2,t=9.26,P＜0.01;SaO2％,t=2.64,P＜0.05.观察组和对照组肺泡灌洗后血气参数的SaO2％比灌洗前显著升高(P＜0.01),且观察组PaO2和SaO2％比对照组在接受积极治疗后显著升高(P＜0.01).对照组和观察组肺泡灌洗后PaCO2较灌洗前有明显下降(P＜0.01),且观察组PaCO2下降较对照组显著(P＜0.01).对照组治疗前后对比中,PaO2虽有回升,但P＞O.05,差异无统计学意义.可以看出,经支气管镜肺泡灌洗治疗后,患者的血气均有不同程度好转,治愈率均明显优于对照组,且在治疗中无严重并发症发生,可明显缩短治疗疗程.结论:在ICU机械通气急、危重患者中及时给予支气管镜肺泡灌洗,可较大程度地改善通气,并有效控制肺部感染,减低死亡率,提高预后满意度,缩短治疗疗程.     

miR-125b-1基因与人肺癌临床病理特征及其预后的关系

目的研究miR-125b-1基因突变与人肺癌临床病理特征和预后的关系，探讨miR-125b-1基因在人肺癌发生、发展过程中的可能作用。方法采用聚合酶链反应．单链构象多态性分析（PCR—SSCP）检测肺癌原发灶癌组织miR-125b-1基因突变情况。结果miR-125b-1在癌旁正常肺组织中未发现异常，在肺癌组织中存在基因突变，突变率33．1％（40／121例），miR-125b-1基因突变与癌的淋巴结转移及临床分期呈正相关（r=0．29，0．24，P〈0．01），与其他临床病理特征无关。miR-125b-1基因突变组肺癌患者的术后长期生存率显著低于高表达组（P〈0．05）。结论肺癌组织中存在着miR-125b-1基因突变，miR-125b-1基因突变在肺癌的发生发展中可能起着重要作用。     

miR-491对肾上腺皮质癌细胞增殖迁移能力影响

目的微小RNA结合mRNA的3′非翻译区(3′-UTR),在转录后调节基因表达并在癌症发展中起重要作用。本研究探讨miR-491在肾上腺皮质癌(adreenocortical,ACC)中作用。方法 CCK-8实验评估miR-491对ACC细胞增殖影响,细胞划痕和Transwell实验检测ACC细胞迁移和侵袭能力;流式细胞仪检测miR-491对ACC细胞周期影响。结果转染72h后,H295R细胞中miR-NC mimic组和转染miR-491mimic组A值分别为0.73±0.06和0.95±0.04,t=5.356,P=0.001;SW13细胞中miR-NC mimic组和转染miR-491mimic组A值分别为0.78±0.05和0.97±0.04,t=3.274,P=0.031。H295R细胞中miR-NC mimic组和转染miR-491mimic组侵袭数分别为33.24±2.02和70.56±2.63,t=19.543,P=0.004;miR-NC mimic组和转染miR-491mimic组细胞迁移距离分别为0.74±0.03和1.26±0.07,t=11.832,P=0.002。SW13细胞中miR-NC mimic组和转染miR-491mimic组侵袭数分别为42.25±3.21和78.56±2.93,t=14.943,P=0.001;miR-NC mimic组和转染miR-491mimic组细胞迁移距离分别为0.85±0.04和1.46±0.08,t=11.812,P=0.003。H295R细胞中miR-NC mimic组G1/G0期和S期细胞占细胞总数比例分别为(81.17±3.63)%和(9.86±2.13)%,miR-491mimic组分别为(56.60±1.63)%和(29.91±1.83)%,t值分别为12.482和10.463,均P0.001。结论 miR-491上调促进了ACC细胞增殖、侵袭和迁移能力,miR-491可能在ACC中充当致癌基因。     

miR-181a对耳蜗毛细胞c-fos表达调控的研究

目的 探讨在耳蜗毛细胞氧化损伤中表达异常的miR-181a对原癌基因c-fos的生物学调控作用.方法 采用叔丁基过氧化氢(t-BHP)染毒,设50、100、200μmol/L 3个浓度组和未染毒对照组对HEI-CO1细胞染毒12h,提取细胞总RNA及细胞总蛋白,采用荧光定量PCR(qPCR)检测miR-181a/-181d表达;选择表达异常的miR-181a为研究对象,检索生物信息学网站,对c-fos 3'端非翻译区域(3'-UTR)上miR-181a可能的作用靶序列进行预测分析;用脂质体转染入miR-181a的mimics,qPCR检测转染效率;qPCR观察c-fos mRNA水平表达量的改变;免疫印迹(Western blotting)法观察毛细胞中c-fos蛋白表达量的改变;构建野生型的融合c-fos-3' UTR的重组pGL3质粒(pGL3-c-fos-3' UTR-WT),利用双荧光素酶报告基因检测系统检测在高表达miR-181a后荧光素酶活力的改变情况.结果 qPCR结果显示,miR-181a在100、200 μmol/L染毒浓度组表达下调,低表达倍数分别为0.744和0.766,差异均有统计学意义(P＜0.01);而miR-181d在50 μmol/L浓度组表达升高,高表达倍数为1.29,差异亦有统计学意义(P＜0.01),在100、200 μmol/L 2个染毒浓度组中的表达变化的差异无统计学意义(P＞0.05);通过预测显示,在人类和小鼠中,c-fos均受miR-181a的调控,在种子区域完全互补,靶序列在物种之间也十分保守;脂质体转染入miR-181a mimics 24h后,qPCR结果显示,在miR-181a mimics转染组中miR-181a升高892.979倍;与对照组相比,在miR-181a mimics转染组的耳蜗毛细胞中c-fos mRNA的表达增高,差异有统计学意义(P＜0.05);Western blotting观察结果显示,与对照组相比,c-fos蛋白在miR-181a mimics转染组中表达升高,差异有统计学意义(P＜0.01);成功构建pGL3-c-fos-3' UTR-WT的重组质粒,双荧光素报告基因检测系统结果显示,在高表达miR-181a时,野生型pGL3-c-fos-3' UTR-WT报告载体的荧光素酶活力并未受到抑制,反而增强.结论 miR-181a对c-fos mRNA和蛋白的表达无直接抑制作用.c-fos可能不是miR-181a的靶基因,生物信息学预测结果可能是假阳性的.     

阿德福韦酯短程联合拉米夫定治疗慢性乙型肝炎疗效分析

目的:观察阿德福韦酯短程联合拉米夫定治疗HBeAg(+)慢性乙型肝炎的疗效、病毒变异率、耐药发生率、HBV-DNA转阴率(≤ 5× 102pies/ml)、HBeAg血清转换率等指标的观察,探讨更合理、有效、价廉的治疗慢性乙型肝炎的方案.方法:选择 2008-2010年我院门诊及住院的HBeAg(+)的慢性乙型肝炎病人,根据用药不同分为三组,进行为期24月的治疗观察,予观察其肝肾功能、HBV-DNA、病毒变异、耐药发生率等指标的变化情况,并进行比较.结果:治疗24个月时,三组患者显效率分别为90％(27/30)、46.88％(15/32)、44.82％(13/29),三组显效率比较,2=53.982,P＜0.05,显效率差异有统计学意义.总体有效率(显效+有效)A组96.67％、B组68.75％、C组72.41％.三组患者第3、6、12、24个月治疗效果均有差异(x=18.746,P＜0.05;x2=61.723,P＜0.05;x2=26.821,P＜0.05; x2=18.291,P＜0.05).三组患者第24个月ALT、AST、TSB、ALB和PT等肝肾功能指标比较,均有差异(t=2.107,P＜0.05;t=3.113,P＜0.01:t=2.764,P＜0.01;t=2.155,P＜0.01).治疗结束时,三组HBeAg血清转换例数比较,2=8.220,P＜0.05,三组HBeAg血清转换情况差异有统计学意义.采用t检验比较三组第3、6、12、24个月HBV-DNA中位值,均有差异(t=1.997,P＜0.05;t=2.982,P＜0.01;t=2.651,P＜0.01;t=3.113,P＜0.01).阿德福韦酯短程联合拉米夫定组共发生3例不良反应,单用拉米夫定组发生4例不良反应,单药使用阿德福韦酯发生不良反应为3例.结论:阿德福韦酯短程联合拉米夫定治疗慢性乙型肝炎疗效和安全性均较高,用药方案具有合理性、有效性,效价比高,适合临床应用.     

胰高糖素样肽-1受体激动剂通过JNK信号通路促进肝星形细胞凋亡的机制研究

目的 探讨胰高糖素样肽-1受体激动剂(GLP-1RA)通过JNK信号通路促进肝星形细胞(HSC)凋亡的机制.方法 体外培养人HSC并进行形态学鉴定,将HSC样本随机分成对照组(20份)、GLP-1RA组(20份)和JNK阻断组(20份).对照组HSC在常规培养基础上加入高糖(终浓度25 mmol/L),GLP-1RA组在对照组基础上加入GLP-1RA利拉鲁肽(终浓度10 mmol/L),JNK阻断组在GLP-1RA组基础上加入JNK信号通路阻断剂SP600125(终浓度20 μmol/L)进行培养;培养120 h后用流式细胞术检测各组的HSC凋亡情况.同时采用Western印迹法检测各组的p-JNK蛋白表达水平.结果 三组的平均凋亡率和平均p-JNK的表达水平差异均有统计学意义(F=19.412和66.451,P均＜0.01).GLP-1RA组的凋亡率和p-JNK蛋白表达水平分别为(30.61±4.07)％和(22.79±3.80)％,均高于对照组,差异均具有统计学意义(t=0.530和9.854,P均＜0.01);JNK阻断组的细胞凋亡率和p-JNK蛋白表达水平分别为(23.48±4.41)％和(10.66±4.15)％,均低于GLP-1RA组,差异有统计学意义(t=-5.428和-8.757,P均＜0.01).结论 JNK信号通路在GLP-1RA介导的HSC凋亡中起着关键作用,GLP-1RA可以通过JNK信号通路促成经高糖诱导活化的HSC发生凋亡.     

高糖诱导下肝星形细胞活化与p38MAPK信号通路的关系

目的 探讨高糖诱导下肝星形细胞(HSC)活化与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的相互关系.方法 体外培养人HSC并进行形态学鉴定,选取60份样本,分为对照组、高糖组和阻断组各20份;对照组常规培养,高糖组在常规培养基础上加入葡萄糖(终浓度25 mol/L),阻断组在高糖组基础上加入p38MAPK阻断剂SB203580(终浓度40 mol/L)进行培养,培养120 h后用链霉亲和素-生物素复合物法(SABC)及Western印迹法检测各样本的α-肌动蛋白(α-SMA)和p-p38MAPK蛋白表达情况.结果 经鉴定,培养后的HSC呈扁平状,胞体大,具有发育良好的应力纤维,胞浆内缺乏脂肪滴.SABC法原位检验结果显示:高糖组的α-SMA阳性信号强于对照组,而阻断组的α-SMA阳性信号则近似于对照组.3组HSC的α-SMA和p-p38MAPK蛋白的相对表达量差异均有统计学意义(F=31.36,78.49,P均＜0.01).其中,高糖组的α-SMA表达相对量为(34.61±4.07)％,高于对照组和阻断组的(23.90±6.02)％和(26.48±4.41)％,差异均有统计学意义(t=-7.20和-5.37,P均＜0.01);高糖组表达相对量高糖组为(22.79±3.80)％,对照组和阻断组分别为(8.13±4.95)％和(10.66±4.15)％,差异均有统计学意义(t=-11.01和-10.41,P均＜0.01).结论 活化程度较高的HSC具有较高的p38MAPK信号强度,而阻断p38MAPK信号通路能够降低HSC的活化程度.     

shSASH1基因对卵巢癌细胞SKOV3生物学功能的影响

目的 探讨SASH1对卵巢癌细胞SKOV3的增殖、凋亡与侵袭方面的影响.方法 标本组织来源于妇产科手术收集的50例卵巢癌组织.通过建立重组质粒pcDNA3.1-SASH1,并借助于脂质体2000转染到SKOV3,采用流式细胞计(FCM)分析实验和细胞侵袭实验,来探索SASH1对卵巢癌细胞SKOV3在细胞扩散、凋亡和侵袭中的影响.结果 pcDNA3.1-SASH1转染组中的s期细胞分值(％)低于正常(未转染的)对照组(x2=26.78,P＜0.01)或空载组(pcDNA3.1) (x2=25.12,P＜0.01).与空载组和正常(未转染的)对照组相比,pcDNA3.1-SASH1转染组中的SKOV3明显降低了癌细胞的生长、增殖和侵袭的能力(x2=31.25,P＜0.01),然而在空载组和正常(未转染的)对照组中没有明显的差异;pcDNA3.1-SASH1细胞组显示更多的凋亡细胞(x2=36.58,P＜0.01).结论 SASH1可抑制卵巢癌细胞SKOV3的生长、增殖和侵袭能力,并促进其凋亡.     

慢性乙型肝炎患者血清中miR-122和miR-22的表达水平与干扰素疗效的相关性研究

目的通过检测血清中的miR-122和miR-22,研究慢性乙型肝炎(慢乙肝)患者干扰素治疗前后血清中miR-122、miR-22水平的变化及意义。方法收集HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者43例作为研究对象。以慢乙肝患者用干扰素治疗48周后是否发生e抗原血清学转换为界分为e抗原血清学转换组和e抗原血清学未转换组。检测两组血清miR-122、miR-22在干扰素治疗前后的表达水平。结果在干扰素治疗24周和48周后,两组中的血清miR-122表达水平差异均有统计学意义(P均0.01);而在干扰素治疗48周时两组血清miRNA-22差异有统计学意义(P0.01)。在慢乙肝患者血清中:血清miR-122与ALT、HBsAg定量、HBeAg定量之间有较好的线性关系(r值分别为0.562、0.637、0.752;P值均0.01),血清miR-22和ALT之间无相关性(r=0.192,P=0.141),但与HBsAg定量、HBeAg定量之间有相关性(r值分别为0.291、0.345;P值分别为0.024、0.007)。e抗原血清学转换组中在干扰素治疗前后血清miR-122、miR-22的表达水平有下降,血清miR-122差异有统计学意义(P0.01),血清miR-22差异无统计学意义(P=0.316)。而在e抗原血清学未转换组干扰素治疗前后的血清中miR-122和miR-22的表达水平变化不大,差异无统计学意义(P=0.819,P=0.971)。结论血清miR-122和miR-22有可能为干扰素治疗慢性乙肝患者过程中预测疗效有价值的指标。     

miR-542-3p在反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘诱导致癌中的作用

目的 探讨反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘(anti-BPDE)诱导恶变的人支气管上皮细胞(16HBE-T)中miR-542-3p在细胞恶性转化中的作用.方法 运用实时荧光定量PCR法验证miR-542-3p成熟体在16HBE-T和非转化对照细胞(16HBE-N)中的表达水平.瞬时转染化学合成的miR-542-3p模拟物上调16HBE-T的miR-542-3p成熟体表达水平,检测miR-542-3p表达水平改变对16HBE-T细胞的增殖能力、细胞周期、细胞凋亡、软琼脂克隆形成率及细胞迁移能力的影响.结果 转染前16HBE-T中miR-542-3p成熟体表达水平是16HBE-N的(39.08±6.95)%(t=15.18,P＜0.05).瞬时转染化学合成的miR-542-3p模拟物上调16HBE-T的miR-542-3p成熟体表达水平后,16HBE-T中miR-542-3p成熟体表达水平是转染前的(5.23±0.55)倍(t=17.37,P＜0.05).miR-542-3p模拟物组(mimic组)与16HBE-T组(100%)相比,增殖率下降到(62.06±5.61)%(t=-17.28,P＜0.05),G0/G1期比例上升到(74.76±4.86)%(t=4.53,P＜0.05),克隆形成率降低为(5.87±0.67)%(t=-6.66,P＜0.05).mimic组生长细胞覆盖区面积比(0.31±0.08)明显降低(t=-6.78,P＜0.05),凋亡无改变.结论 miR-542-3p表达水平升高会降低anti-BPDE恶性转化细胞的增殖能力和恶性程度,推断miR-542-3p是类抑癌基因,在anti-BPDE诱导致癌过程中低表达的miR-542-3p可能是促成恶性转化的重要因素.

Abstract：

Objective To explore the effect of miR-542-3p in malignant transformation of human bronchial epithelial cells (16HBE) induced by anti-benzo(a) pyrene-7,8-diol-9, 10-epoxide (anti-BPDE).Methods The relative expression level of mature miR-542-3p in transformed cells (16HBE-T) and untransformed control cells (16HBE-N) was measured by real-time quantitative polymerase chain reaction (qRT-PCR). miRNA mimic was transiently transfected into 16HBE-T to change the expression level of miR-542-3p,and then the influenced changes of cell proliferation,cell cycle, apoptosis, and soft agar colony formation rate and the migration of transfected cells were analyzed. Results Before transfection, the expression level of mature miR-542-3p in 16HBE-T was lower (39. 08 ± 6. 95 ) % than it in 16HBE-N ( t =15. 18,P＜ 0.05). In comparison with the 16HBE-T group, the expression level of miR-542-3p in miR-542-3p mimic-transfected group was ( 5.23 ± 0. 55 ) fold ( t = 17. 37, P ＜ 0. 05 ) after transfection. Cell proliferation of mimic-transfected group was decreased to ( 62. 06 ± 5. 61 ) % ( t = - 17. 28, P ＜ 0. 05 ),percentage of cells in G0/G1 phase up to ( 74. 76 ± 4. 86 ) % ( t = 4. 53, P ＜ 0. 05 ), rate of colony formation degrade to(5.87 ± 0. 67 ) % ( t = - 6. 66, P ＜ 0. 05 ), coverage areas ratio decreased to (0. 31 ± 0. 08 ) ( t =-6. 78 ,P ＜0. 05 ). There was no change with apoptosis. Conclusion Our studies showed that miR-542-3p played the role as a tumor suppressor, which led to a significant decrease in the proliferation capacity and degree of malignancy. These findings suggest aberrantly down-regulated miR-542-3p may be one critical factor that contributes to malignant transformation of 16HBE induced by anti-BPDE.     

miR-34b/c启动子区多态性与原发性肝细胞肝癌易感性的关联研究

目的探讨miR-34b/c rs4938723 T>C与中国人群原发性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)易感性的关系。方法采用病例对照研究设计,选取501例原发性肝细胞肝癌病例和548例正常对照。选取miR-34b/c rs4938723 T>C为研究位点,以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法进行多态性检测,应用Logistic回归计算OR值及95%CI,比较不同基因型与HCC发病风险的关系。结果在调整年龄、性别、吸烟、饮酒因素后,携带rs4938723 TC/CC基因型者与携带rs4938723 TT基因型个体相比,发生肝癌的风险增加了40%(调整OR=1.40,95%CI=1.10～1.80)。进一步分析显示在原发性肝细胞肝癌的发生中rs4938723基因型与饮酒存在交互作用(相乘交互作用P=0.049,相加交互作用P=0.012)。结论本研究表明位于miR-34b/c启动子区的rs4938723 T>C多态性可能影响中国人群原发性肝细胞肝癌发病风险。     

五味子酚对3T3-L1细胞氧化应激模型脂肪细胞因子表达的影响

目的 研究五味子酚（schisanhenol,SAL）对3T3-L1细胞脂肪因子表达的影响及其机制.方法 体外培养并诱导分化3T3-L1细胞,制作氧化应激模型,用不同浓度和作用时间的五味子酚干预,观察脂肪因子表达的变化.结果 （1）脂联素、瘦素、抵抗素和内脂素的表达随着氧化应激的程度增高递减,其中对瘦素的抑制效应最明显（25 mU/ml葡萄糖激酶组VS空白组,t=7.29,P＜0.01）;（2）4种脂肪因子的表达随着五味子酚干预浓度增加而增加（脂联素t=6.31,P＜0.01;瘦素t=5.92,P＜0.01;抵抗素t=3.77,P＜0.05;内脂素t=3.63,P＜0.05）;（3）随着五味子酚作用时间的延长,4种脂肪因子的表达均经历了先下降后上升的过程,且五味子酚对脂肪细胞因子表达的影响与氧化应激状态的改变平行.结论 五味子酚可通过抗氧化应激作用调节脂肪因子的表达,可能在五味子改善糖尿病症状过程中起到重要作用.     

脂质体转染大鼠肝星状细胞的实验研究

目的运用脂质体Lipofectamine 2000转染大鼠肝星状细胞（HSC-T6）,比较不同质粒与脂质体比例及不同时刻转染HSC后绿色荧光蛋白的表达,确定高表达阳性克隆G418筛选条件。方法将细胞按质粒与脂质体的不同比例分为四组：A组（2ug：3u L）,B组（2ug：4u L）,C组（2ug：5u L）,D组（2ug：6u L）混合后转染大鼠HSC,约24 h观察转染率,以最高转染率的质粒与脂质体混合,转染大鼠HSC,比较转染后24、48、72 h的转染率;用不同浓度G418进行筛选,确定筛选最佳浓度,通过G418筛选建立高表达EGFP的HSC-T6阳性克隆。结果转染24 h后,各组均有绿色荧光蛋白的表达,与A、B、D组比较,C组转染率明显增高（P〈0.05）,质粒与脂质体以2ug：5u L转染HSC后,随时间延长,转染后48 h转染率最高（P〈0.05）,72 h有所下降,G418筛选最佳浓度为400 ug/m L,经筛选约21d后可阳性克隆,更换为正常培养液可继续培养和传代。结论 Lipofectamine 2000可有效转染HSC,经G418筛选形成阳性克隆,为基因治疗肝纤维化的研究提供依据。