氟铃脲对小鼠骨髓细胞和生殖细胞染色体畸变作用分析

[目的]了解氟铃脲的遗传毒性作用.[方法]选取55只小鼠,随机分成实验组、阴性对照组和阳性对照组.实验组以不同LD50剂量氟铃脲对小鼠经口灌胃染毒,阴性对照组以5g/L羧甲基纤维素钠溶液经口灌胃,阳性对照组以40 mg/kg剂量磷酰胺腹腔注射.末次染毒6 h后颈椎脱臼处死动物,按常规制片制备骨髓细胞和睾丸初级精母细胞染色体,分析小鼠骨髓细胞和睾丸初级精母细胞染色体畸变率.[结果]氟铃脲各剂量染毒组雄性小鼠骨髓细胞和初级精母细胞染色体畸变率与阴性对照组比较差异均无统计学意义(X2=2.285,0.502,0.144,0.198,0.159,0.471,1.003,P＞0 05),各剂量染毒组初级精母细胞常染色体及性染色体早熟分离发生率与阴性对照组比较差异也均无统计学意义(X2=1.672,0.714,2.274,P＞0 05).[结论]在本实验剂量下未观察到氟铃脲对骨髓细胞和生殖细胞染色体结构畸变的诱发作用.     

DHPO生殖毒性的毒理学评价

目的研究1，2-二甲基-3-羟基-4-吡啶酮（DHPO）的急性毒性及不同剂量、不同时间的生殖毒性。方法以昆明种近交小鼠为实验对象．首先进行半数致死量（LD50）实验，然后对DHPO低（1／8LD50）、中（1／4LD50）、高（1／2LD50）剂量组染毒小鼠进行精子畸变率观察。结果DHPO染毒小鼠经口LD50为562．34mg／kg.精子畸变实验显示，1／8LD50组、1／4LD50组与阴性对照组比较，在第14．28，35，42，70d观察，差异均无统计学意义（P〉0．05）；1／2LD50组与阴性对照组比较，在第14，28，35d观察．差异均有统计学意义（P〈0．05），而在第42，70d观察，差异无统计学意义（P〉O．05）。结论DHPO的低（1／8LD50）、中（1／4LD50）剂量未显示有生殖毒性，高剂量（1／2LD50）具有一定生殖毒性。但可在42d后恢复。     

苯与甲醛对小鼠睾丸细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨苯和甲醛联合染毒对小鼠睾丸细胞凋亡的影响及其相关作用的机制。方法按3×3析因设计方法，108只昆明种雄性小鼠随机等分为9个组，每组12只，甲醛和苯染毒剂量分别为0、5、10mg／kg和0、100、400mg／kg，连续灌胃染毒5d，35d后处死，每组6只鼠睾丸做常规病理学切片观察睾丸的形态学变化，并采用免疫组织化学法检测bcl-2、bax的表达。另6只鼠睾丸匀浆离心，取沉渣观察睾丸细胞的凋亡率。结果甲醛和苯各染毒组小鼠睾丸组织结构损伤，染毒浓度越高，病理损害越明显；睾丸细胞bcl-2下调，bax表达上调，并有量-效关系，甲醛和苯染毒各组bcl-2和bax表达的相对灰度值较对照组均有差异（P〈0．01），甲醛和苯的联合效应为协同作用（P〈0．05）；各染毒组睾丸细胞凋亡率高于对照组（P〈0．01），并有量-效关系，二者合用的效应为相加作用（P〉0．05）。结论甲醛和苯可损伤小鼠睾丸的结构，使睾丸细胞凋亡增加、bcl-2表达下调、bax表达上调，bcl-2和bax表达的变化可能是诱导凋亡的机制。     

铅对小鼠睾丸TGFβ1及Caspase-3表达的影响

目的 探讨不同浓度和时间醋酸铅染毒对小鼠睾丸转化生长因子β1（Transforming growth factor β1，TGFβ1）、半胱天冬酶3（Caspase-3）表达的影响，进一步阐明醋酸铅所致睾丸毒性的作用机制。方法 45只雄性小鼠分为空白对照组和0．2％，0．4％醋酸铅染毒组，每组15只。并在第2，4，6周分别处死每组小鼠各5只，取其睾丸组织，免疫组化检测TGFβ1、Caspase-3表达的差异。结果 染铅后不同周TGFβ1、Caspase-3的表达较空白对照组增强，差异有统计学意义（P〈0．05）。且随着染毒时间的延长，表达越强（P〈0．05）。但在0．2％与0．4％不同周染铅组之间TGFβ1、Caspase-3的表达差异并无统计学意义（P〉0．05）。结论 醋酸铅使睾丸TGFβ1 Caspse-3的表达增强，从而促使生殖细胞发生凋亡。     

二硫化碳对大鼠视网膜组织诱导型一氧化氮合酶及细胞凋亡的影响

目的探讨二硫化碳（CS2）对大鼠视网膜组织诱导型一氧化氮合酶（iNOS）及细胞凋亡的影响。方法将24只SD雄性大鼠随机分为对照组、低剂量CS2染毒组和高剂量CS2染毒组，染毒结束后取视网膜组织制成切片，测量内视网膜厚度比率，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶染色（NADPH-NDP）法检测iNOS活力，原位缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡。结果（1）染毒组的内视网膜（包括内核层、内丛状层、节细胞层、神经纤维层和内界膜）厚度减小，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）；高剂量染毒组与低剂量染毒组之间差异亦有统计学意义（P〈0．05）。（2）染毒组视网膜iNOS表达增加，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；高剂量染毒组与低剂量染毒组之间差异亦有统计学意义（P〈0．05）。（3）染毒组视网膜出现细胞凋亡，凋亡指数与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；高剂量染毒组与低剂量染毒组之间差异亦有统计学意义（P〈0．05）。结论CS2能激活视网膜组织iNOS表达，由此产生的过量的NO可损伤视网膜细胞。同时，视网膜细胞凋亡也是CS2所致视网膜损害的机制之一。     

双酚A对雄性小鼠生殖细胞凋亡作用

目的研究双酚A（BPA）对雄性小鼠生殖细胞的凋亡作用.方法选择雄性昆明种小鼠,连续5d双酚A腹腔注射,剂量为0,250,500,1000μmol/kg.分别于首次染毒后的第7和14d每组随机处死7只小鼠.用流式细胞仪测定其睾丸细胞周期,称睾丸重量及计算小鼠脏器系数,测定睾丸组织中一氧化氮（NO）含量和一氧化氮合酶（NOS）的活性.结果不同剂量组睾丸细胞各时相的细胞百分数发生变化,G0/G1和S期细胞百分数明显减少,G2＋M期时相的细胞百分数逐渐增加,Ap峰所占比例增加,染毒组睾丸脏器系数低于对照组,NO含量和NOS的活性均高于对照组,染毒组与对照组比较差异有统计学意义.结论双酚A可使雄性小鼠睾丸细胞的DNA合成受抑制,使睾丸细胞出现G2期阻滞,有丝分裂延迟,使进入M期的细胞百分数减少,表明双酚A对小鼠生殖细胞有凋亡作用.同时,NO、NOS指标的升高也反映了小鼠生殖细胞受损与脂质过氧化有关.     

三氯化铝暴露致雄性小鼠生殖细胞的遗传毒性

目的研究三氯化铝(AlCl3)对雄性小鼠生殖细胞的遗传毒性。方法将20只清洁级健康昆明种雄性小鼠按体重随机分为4组,分别为低、中、高剂量AlCl3染毒组(染毒剂量分别为50、75、100mg/kg)和阴性对照组(0.9%生理盐水),每组5只。采用腹腔注射方式进行染毒,连续染毒2d,间隔1天,持续2周。观察染毒前后体重变化,并计算睾丸系数。采用彗星试验测定Olive尾矩,采用精子核荧光染色试验测定未成熟精子率。结果染毒前后高、中、低剂量AlCl3染毒组体重与阴性对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。高、中、低剂量AlCl3染毒组睾丸系数均小于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05);且体重增长值和睾丸系数随着AlCl3染毒剂量的升高而减少。彗星试验中,高、中、低剂量AlCl3染毒组Olive尾矩均长于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01);且Olive尾矩随着AlCl3染毒剂量的升高而增加。精子核荧光染色试验中,高、中、低剂量AlCl3染毒组未成熟精子率均高于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01);且未成熟精子率随着AlCl3染毒剂量的升高而增加。结论AlCl3暴露可对雄性小鼠生殖细胞...     

苯并(a)芘对小鼠肝细胞凋亡的影响

目的探讨苯并（a）芘（BaP）对小鼠肝细胞Fas／Fas—L凋亡信号通路的影响。方法ICR小鼠灌胃染毒，染毒剂量分别为0，5，10，20，40mg／kg，采用免疫组织化学法检测肝细胞Fas、Fas—L、caspase-3基因表达情况，应用吖啶橙／溴化乙啶（AO／EB）荧光双染法检测肝细胞凋亡情况。结果BaP各剂量染毒组肝细胞凋亡发生率及Fas、Fas—L、caspase-3基因表达阳性率与对照组比较差异均有统计学意义（P〈O．05）。结论BaP可诱发小鼠肝细胞发生凋亡。Fas／Fas—L信号通路改变是引起肝细胞凋亡发生的重要途径之一。     

丙烯腈对雄性小鼠性成熟的影响

目的探讨丙烯腈对未成年雄性小鼠性成熟过程的影响。方法以未成年雄性小鼠为研究对象,采用连续5 d腹腔注射染毒,观察35 d后剖杀,进行睾丸组织病理、精子形态观察以及睾丸生殖细胞流式细胞仪检测分析,综合判断丙烯腈对雄性性成熟的影响。结果丙烯腈对未成年雄性小鼠睾丸组织的影响,表现为曲细精管基膜断裂,曲细精管内生殖细胞的数量减少,管腔内成熟精子减少,中、高剂量组曲细精管管腔内成熟精子百分比仅为阴性对照组的1/3和1/6(P<0.01);精子形态结构异常增加,其中高剂量组精子畸形率为阴性对照组的2.6倍(P<0.05);睾丸组织中多种精子细胞成熟障碍,各染毒组精细胞凋亡增加,其中高剂量组精细胞凋亡率为阴性对照组的1.75倍(P<0.05)。结论丙烯腈影响雄性小鼠的性成熟过程,是雄性生殖毒性作用机制之一。     

邻苯二甲酸(2-乙基己基)酯低剂量暴露对雄性小鼠生殖发育的影响

目的观察邻苯二甲酸(2-乙基己基)酯(DEHP)低剂量暴露对雄性小鼠的生殖发育毒性作用。方法将清洁级ICR小鼠随机分为4个DEHP染毒组(1/120LD50,1/60LD50,1/30LD50,1/15LD50,即250、500、1000、2000mg/kg组),阳性对照组(环磷酰胺,40mg/kg)和阴性对照组(玉米油);DEHP染毒组和阴性对照组灌胃染毒30d,阳性对照组灌胃5d,每天1次。采用一般生殖毒性试验和显性致死突变试验的方法,研究DEHP低剂量暴露对雄性小鼠生殖细胞的损伤作用和生育能力的影响。结果一般生殖毒性试验结果显示,低剂量DEHP染毒雄性小鼠睾丸、附睾重量降低(r睾丸=-0.578,P<0.01;r附睾=-0.661,P<0.01),精子总数减少(r=-0.608,P<0.01),精子畸形率增高(r=0.836,P<0.01),精子活动度降低(P<0.05)。显性致死突变试验研究结果显示,250mg/kgDEHP染毒组小鼠受孕率降低,但与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);DEHP染毒组子代小鼠平均着床数减少(r=-0.892,P<0.01),与阴性对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01);平均早期死亡胚胎数随染毒剂量增加而增加(r=0.996,P<0.01),250mg/kg染毒组与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论DEHP低剂量暴露对雄性小鼠具有生殖毒性作用,可降低小鼠受孕率,使子代小鼠平均着床数减少,平均早期死亡胚胎数增加。     

低剂量甲基汞对小鼠胸腺和脾细胞周期进程的影响

雄性昆明小鼠连续饮用含甲基汞浓度为１／１０００ＬＤ５０,１／１００ＬＤ５０,１／５０ＬＤ５０和１／１０ＬＤ５０有自来水９０天,采用ＦＡＣＳｃａｎ流式细胞仪（ＦＣＭ）分析胸腺和脾细胞周期进程,发现除１／１０００ＬＤ５０剂量组外,其余各剂量组从Ｇ０／Ｇ１时相进入Ｓ时相的脾细胞百分数均明显高艰（Ｐ＜０．０５）,与染毒剂量呈明显天正相关,而胸腺细胞周期进程与对照组无明显差异。提示连续经口摄入低剂量甲基汞水     

氯化甲基汞对雄性小鼠的生殖毒作用

以１／５０００ＬＤ５０、１／１０００ＬＤ５０和１／１００ＬＤ５０的氯化甲基汞剂量分别给雄性小白鼠经口染毒７５天后，测定睾丸组织中的ＬＰＯ和ＬＤＨ－ｘ。结果表明，实验组的ＬＰＯ高于对照组；１／１０００ＬＤ５０和１／１００ＬＤ５０组的ＬＤＨ－Ｘ均低于对照组和１／５０００ＬＤ５０组；睾丸脏器系数各组间无差别。同时探讨了甲基汞造成雄性动物生殖能力下降的可能机制。     

CISPLATIN-INDUCED GERM CELL APOPTOSIS IN MOUSE TESTES

The purpose of this study was to investigate whether exposure of male mice to cisplatin induces apoptosis in male germ cells and the possible role of apoptosis in cisplatin-induced testicular damage. Forty-eight male BALB/c mice were divided into cisplatin and control groups. The mice from the cisplatin group received a single intraperitoneal injection of cisplatin of either 1, 5, or 10 mg/kg. The control group received a single intraperitoneal injection of saline alone. The testes were removed on days 1, 3, and 7 after cisplatin administration, respectively. Following histological examination, apoptotic indices (AIs) were measured within seminiferous tubules of the mouse testes by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay. A low incidence of spontaneous apoptosis was observed in controls, particularly in spermatogonia and spermatocytes of the mouse testes. After cisplatin administration, both increased AIs and decreased spermatozoa and spermatids were found in the seminiferous tubules of the mouse testes. Cisplatin-induced apoptosis was found in spermatogonia, spermatocytes, and spermatids of the mouse testes. In comparison to the control values, AIs increased 2.6- to 6.8-fold in cisplatin-treated mouse testes. AIs reached the highest level on day 1 following 1 mg/kg, on day 3 following 5 mg/kg, and on day 7 following treatment of 10 mg/kg cisplatin. The study showed that cisplatin-induced germ cell apoptosis in the mouse testes was related to both the dose response and the time course of response. It is suggested that cisplatin-induced germ cell apoptosis may result in decreased spermatogenesis, and the higher dose of cisplatin may delay the occurrence of apoptosis in the mouse testes.     

桂花提取物Osthin的免疫功能研究

目的 通过对桂花提取物Osthin的免疫功能进行研究,促进其在食品、保健品等领域的开发。方法 将SPF级雌性昆明小鼠160只随机分为对照组和低、中、高剂量组（50、150、450 mg/kg bw）。灌胃Osthin 4周,分别进行脏器/体重比值测定、抗体生成细胞实验、脾淋巴细胞转化实验、迟发型变态反应实验、小鼠碳廓清实验、血清溶血素测定和脾细胞的Treg/Th17比值分析。结果 与植物油对照组相比,一定剂量的桂花提取物Osthin对小鼠的胸腺系数（F = 8.440,P＜0.01）和脾脏系数（F = 4.710,P＜0.01）有增强作用;对脾淋巴细胞增殖能力有促进作用（F = 5.991,P＜0.01）以及可增强迟发型变态反应（F = 4.213,P＜0.05）;提高小鼠的吞噬指数a（F = 3.901,P＜0.05）;使抗体生成细胞数增加（F = 5.192,P＜0.01）。同时,随着桂花提取物Osthin浓度的升高,小鼠脾细胞的Th17细胞比例下降（F = 5.203,P＜0.05）、Treg细胞比例上升（F = 7.369,P＜0.05）,Treg/Th17比值也随之增大（F = 8.377,P＜0.01）。结论 桂花提取物Osthin具有较好的免疫增强作用,可能通过影响Treg/Th17的平衡调节细胞免疫功能。     

苯妥英钠对妊娠小鼠的致畸作用及叶酸的干预影响分析

目的:观察苯妥英钠对妊娠小鼠的不良作用,探讨叶酸对其不良效应的干预效果。方法:将100只雌性和50只雄性小鼠随机分为5组(雌雄比例2:1),分别为:①空白对照组(灌胃蒸馏水,10 ml/kg);②苯妥英钠单次剂量组(50mg/kg);③苯妥英钠二次给药组(上、下午各为25 mg/kg);④苯妥英钠单次剂量与叶酸联合用药组(50 mg/kg+0.07 mg/kg);⑤苯妥英钠二次给药与叶酸联合用药组(25 mg/kg+0.035 mg/kg)。观察小鼠是否受孕、流产、畸形、死胎、每窝仔鼠的数目及孕期增重情况等指标。结果:与其他各组相比,单剂量组小鼠的受孕率下降,孕鼠的流产率、死胎率和畸胎率均上升,孕期增重和每窝正常仔鼠数目减少(P<0.05)。与二次给药组和二次给药与叶酸组相比,单次剂量组和单次剂量与叶酸组小鼠的受孕率下降、死胎率上升(P<0.05);单次剂量与叶酸组和二次给药与叶酸组相比,单次剂量组和二次给药组小鼠的受孕率下降、死胎率上升、孕期增重减少(P<0.05)。结论:苯妥英钠可导致妊娠小鼠妊娠意外的增多,小剂量多次给药以及补充叶酸可降低苯妥英钠的不良作用。     

乙醇对胎鼠脑新皮质神经干细胞凋亡的影响

目的探讨乙醇对胎鼠神经干细胞凋亡的影响。方法将妊娠14 d胎鼠脑新皮质来源的神经干细胞暴露于终浓度分别为0(对照)、25、50、100 mmol/L的乙醇培养基溶液3 d。采用Annexin V/PI法检测细胞早期和晚期凋亡情况,采用JC-1探针法检测线粒体膜电位的改变,并检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果与对照组比较,50、100 mmol/L乙醇染毒组神经干细胞的早期凋亡细胞率明显升高,差异有统计学意义(P0.05);而各浓度乙醇染毒组神经干细胞的晚期凋亡率无明显改变。且随着乙醇染毒浓度的升高,神经干细胞的早期凋亡细胞率呈上升趋势。仅100 mmol/L乙醇染毒组神经干细胞线粒体膜电位低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,各浓度乙醇染毒组神经干细胞Bax mRNA的表达水平均上升,差异有统计学意义(P0.05);而Bcl-2和Caspase-3 mRNA的表达水平均无明显改变。且随着乙醇染毒浓度的升高,Bax mRNA表达量呈上升趋势。与对照组比较,50、100 mmol/L乙醇染毒组神经干细胞Bax蛋白的表达水平均升高,而Bcl-2/Bax蛋白的比值均降低,差异有统计学意义(P0.05);各浓度乙醇染毒组神经干细胞Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达水平均无明显改变。结论乙醇可引起神经干细胞早期凋亡,其机制可能与线粒体损伤和Bax表达上调有关。     

刺五加、葡萄籽提取物方剂对衰老模型小鼠肝脏细胞凋亡及氧化应激的影响

目的研究刺五加、葡萄籽提取物方剂对衰老模型小鼠肝脏细胞凋亡及氧化应激的影响。方法SPF级昆明种雄性小鼠50只,随机分1组阴性对照组(10只)和4组D-半乳糖模型组(每组各10只),模型组以1ml/(kg.bw)的剂量连续腹腔注射150mg/(kg.bw)的D-半乳糖2个月后,分为模型对照组和刺五加、葡萄籽提取物方剂低、中、高3个剂量组。各剂量组灌胃分别给予0.16、0.33、1.00g/(kg.bw)的刺五加、葡萄籽提取物方剂,模型对照组灌胃给予相应体积的纯净水,同时各组腹腔注射150mg/(kg.bw)的D-半乳糖,连续60d后取肝脏。通过AnnexinV/PI联合标记染色肝细胞,以流式细胞仪在Ex=488nm条件下,CellQuest软件分析肝细胞凋亡率;同时以分光光度法检测肝脏氧化应激状态。结果在Contourplot图上,根据肝细胞标记染料AnnexinV/PI的强度可见,中、高剂量组肝细胞凋亡百分率分别为(30.94±7.59)%、(29.35±5.58)%,均低于模型对照组[(47.99±11.95)%](P<0.01)。中、高剂量组MDA含量[(1.64±1.30)、(1.57±1.72)nmol/mg]均低于模型对照组[(3.92±0.73)nmol/mg](P<0.01);中、高剂量组SOD活性[(162.92±18.04)、(175.53±24.65)NU/mg]均高于模型对照组[(135.77±29.16)NU/mg](P<0.05);而各剂量组GSH-Px活性与模型对照组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论刺五加、葡萄籽提取物方剂可减少衰老模型小鼠肝细胞凋亡的发生,通过降低MDA含量和升高SOD活性增加机体对氧化应激反应的能力。     

甲基汞对小鼠睾丸功能的影响

The results showed that the amount of methylmercury (MeHg) in testis correlated positively with exposure doses (r = 0.99 P less than 0.01). MeHg affected the process of spermatogenesis, causing decrease of sperm count and increase of sperm abnormalities. Pathological and electron microscopic examinations indicated that spermatogenic cells were damaged by MeHg especially spermatogonium and spermatocyte. Changes of microstructure were mainly degeneration, fragmentation vacuolation and large lipid drop formation of spermatogenic cells. The acrosome of many spermatids showed obvious changes. Destruction of blood-testis barrier was observed in 1/10 LD50 group. Quantitative histological examination also confirmed that MeHg resulted in lessening of its area of seminiferous tubules and reduction of germ cells. The contents of testosterone were not decreased in the treated groups other than the 1/10 LD50 group.