人骨肉瘤原代细胞条件培养基中骨形态蛋白(BMP)的实验研究

目的：探索从人骨肉瘤细胞条件培养基中提取骨形态蛋白(BMP)的方法，并测定其生物学活性。方法：收集人骨肉瘤细胞条件培养基，通过浓缩、透析，SephcryIS-100凝胶层析纯化，BMP单克隆抗体鉴定所需洗脱峰，SDS-PAGE测定分子量，小鼠肌袋实验检测其骨诱导活性。结果：BMP单抗鉴定所提蛋白为BMP，SDS—PAGE显示分子量约为21kD，能够在小鼠肌肉内产生异位骨化。结论：人骨肉瘤细胞条件培养基中含有BMP，分离后具有良好的生物学活性，而骨肉瘤细胞可以在体外长期培养生长，为BMP的大量提取、临床应用提供一个有益的方法。     

以纤维蛋白胶为载体复合BMP和bFGF的射型骨修复材料诱导异位成骨的实验研究

目的 :了解以纤维蛋白胶 (Fibrinsealant,FS )为载体的注射型骨修复材料异位诱导成骨的作用 ,为其临床的应用提供实验依据。方法 :实验分组为 :实验组b (FS bFGF bBMP)、对照组b1(FS bBMP)、对照组b2 (bBMP)、实验组r (FS bFGF rhBMP 2 )、对照组r1(FS rhBMP)、对照组r2 (rhBMP)、对照组FS及空白对照组。将各组材料注射或植入小鼠肌袋内 ,采用放射学、形态学、碱性磷酸酶 (ALP)检测等方法对其成骨效应进行研究。结果 :在以bBMP为成骨因子的实验区中 ,实验组b具有高效的骨诱导活性 ,其成骨量显著高于对照组b1、对照组b2、对照组FS及空白对照组(P <0 .0 1) ;在以rhBMP 2为成骨因子的实验区中 ,实验组r同样具有高效的骨诱导活性 ,其成骨量也显著高于对照组r1、对照组r2、对照组FS及空白对照组 (P <0 .0 1)。结论 :以FS为载体复合BMP和bFGF的注射型骨修复材料具有高效的骨诱导活性 ,bFGF可明显增强BMP的骨诱导活性。     

人骨肉瘤原代细胞条件培养基中骨形态蛋白(BMP)的实验研究

目的:探索从人骨肉瘤细胞条件培养基中提取骨形态蛋白(BMP)的方法,并测定其生物学活性.方法:收集人骨肉瘤细胞条件培养基,通过浓缩、透析,SephcrylS-100凝胶层析纯化,BMP单克隆抗体鉴定所需洗脱峰,SDS-PAGE测定分子量,小鼠肌袋实验检测其骨诱导活性.结果:BMP单抗鉴定所提蛋白为BMP,SDS-PAGE显示分子量约为21kD,能够在小鼠肌肉内产生异位骨化.结论:人骨肉瘤细胞条件培养基中含有BMP,分离后具有良好的生物学活性,而骨肉瘤细胞可以在体外长期培养生长,为BMP的大量提取、临床应用提供一个有益的方法.     

纳米羟基磷灰石和重组胶原及聚乳酸复合材料作为骨形态发生蛋白2活性多肽缓释载体的实验研究

目的探讨纳米羟基磷灰石／重组胶膨聚乳酸（nano-hydroxyapatite／recombinanthuman-like collagen／polylactic acid，nHA／RHLC／PLA）复合多孔支架材料作为骨形态发生蛋白2（Bonemorphogenetic protein2，BMP2）活性多肽载体的可行性。方法制备nHA／RHLC／PLA复合多孔支架材料，扫描电镜观察支架材料表面微观形貌；通过真空吸附法将BMP2活性多肽与支架材料复合，采用高效液相色谱仪检测不同时问点BMP2活性多肽的释放量，观察BMP2活性多肽的体外释放规律；将复合了BMP2活性多肽的支架材料作为实验组，未复合BMP2活性多肽的支架材料作为对照组，分别植入大鼠背部肌肉内，于4周和8周两个时间点将大鼠分批处死，进行CT扫描、三维重建和组织学观察。结果扫描电镜结果显示：支架材料表面呈多孔状；体外BMP2活性多肽释放规律为：第1d表现为爆发性释放释放量为35．5％，以后缓慢持续释放，至1个月左右释放量达89．6％；CT扫描、三维重建和组织学观察结果均表明复合了BMP2活性多肽的多孔支架材料有较多新生骨组织形成，对照组未见成骨现象。结论nHA／RHLC／PLA复合多孔支架材料可以作为BMP2活性多肽的缓释载体，负载BMP2活性多肽的nHA／RHLC／PLA是一种理想的骨组织工程支架材料。     

骨形成蛋白的研究现况

1965年Urist[1]发现一种从骨基质中提取的物质能在啮齿类动物异位区诱导新骨形成,即骨形成蛋白(Bone Morphogenetic Proteins BMP).以后的研究表明:BMP主要分布在骨组织中,且其含量及活性随年龄增加而下降.其提取主要是从兔、鼠、牛、猪、人类的骨基质和鼠、人类骨肉瘤中获得,但含量很少约0.001%且提取过程繁琐.1987年Urist及W u ZY详细报道了BMP的分离、纯化及活性测定的方法[2,3].Wozney于1988年运用BM P基因序列知识,利用人类互补DNA成功地克隆出3种BMP[4],给BMP的提取及性质研究带来了全新的概念.目前利用基因重组可以大量获得BMP,这为其在临床上广泛应用提供了可能.现将骨形成蛋白的现状综述如下.     

从活性干酵母中提取海藻糖的工艺

提出了一条活性干酵母中提取海藻糖的工艺路线。通过控制抽提温度、乙醇浓度以及抽提时间，得出较佳的提取工艺条件。用阴阳离子交换柱去除杂质，同时起到一定的脱色作用，进而运用超滤进行澄清。最后经浓缩、结晶以及干燥，制成海藻糖产品。其得率可达：每１００ｇ活性干酵母产１４．５ｇ海藻糖。     

脱钙骨基质复合牛骨形态发生蛋白与单纯脱钙骨基质修复兔桡骨缺损比较

目的比较脱钙骨基质(DBM)复合牛骨形态发生蛋白(bBMP)和单纯DBM修复节段性骨缺损的能力.方法32只新西兰大白兔采用桡骨15 mm节段性骨缺损模型,随机分为2组:A组植入异体DBM与bBMP(10 mg)复合材料;B组植入异体DBM.术后4、8、12、16周,进行放射学检查、病理组织学检查和计算机图象分析新生骨面积.结果X线和组织学检查显示异体DBM与bBMP复合材料组的新骨生成、修复骨缺损能力优于异体DBM组,组织切片的计算机图象分析提示DBM bBMP组修复新骨面积大于DBM组,两者之间差异有显著性(4、8、12周P＜0.05,16周P＜0.01).结论异体DBM复合bBMP材料通过骨诱导和骨传导两种方式修复骨缺损,其修复骨缺损的能力要优于单纯DBM材料,是一种较为理想,具有高效成骨活性的植骨材料.     

关于鞣酸软膏制剂的改进意见

目的:改进鞣酸软膏制备工艺,提高生产效率和鞣酸软膏的质量.方法:按改进工艺配制鞣酸软膏,并进行质量控制.把甘油的投药量增加一倍,控制好水浴的时间.结果:改进工艺使鞣酸软膏制备方便快捷,软膏细腻,均匀度好,符合质量要求.结论:改进工艺提高生产效率,能提高软膏质量.     

骨肉瘤细胞条件培养基中骨形态蛋白的研究

骨形态蛋白(BMP)属于转化生长因子-α(TGF-α)超家族成员,由Urist于1986年应用于临床。我们从骨肉瘤细胞(MG-63)条件培养基中提取BMP,探索一种新的提取途径,并对提取出的BMP作了鉴定和生物学活性测定。 一、材料和方法 1.主要材料:骨肉瘤细胞MG-63(武汉大学培养物保藏中心);小牛血清;DMEM(Hyclone公司);聚乙二醇(PEG)8000(Amresco公司);Sephecryl-S-100-HR(Pharmacia公司);BMP单抗(第四军医大学口腔医学院病理科);SP试剂盒     

近交系小耳猪骨形态发生蛋白的骨诱导活性研究

目的 :探讨近交系西双版纳小耳猪骨形态发生蛋白骨诱导活性。方法 :用改良的Urist提取法从近交系小耳猪四肢皮质骨中提取纯化BMP ,行SDS PAGE蛋白电泳检测其分子量。将BMP 2mg、5mg 2种剂量分别植入 2组小鼠右侧股部肌袋中 ,于术后 7、14和 2 8d取材 ,X线摄片后行组织学观察、碱性磷酸酶检测。结果 :( 1)SDS PAGE显示小耳猪BMP相对分子量主要集中于 66KD、48KD、3 6KD、2 7KD、2 2KD及 14KD附近 ;( 2 )X线检测实验组BMP植入区及阴性对照组均未发现有明显的高密度影 ;( 3 )ALP活性检测显示 5mg组、2mg组及阴性对照组之间有显著性差异 (P <0 .0 1) ,5mg组ALP活性高于 2mg组及阴性对照组 (P <0 .0 1)。 ( 4 )组织学观察BMP 5mg组于术后 7d有大量间充质细胞增生聚集 ,第 14d有大量软骨细胞、类骨组织及少量新骨形成 ,第 2 8d可见板层骨及骨髓。结论 :研究结果显示小耳猪骨形态发生蛋白具有肯定的骨诱导活性。     

骨形态形成蛋白在脊柱外科的应用进展

骨形态形成蛋白(bonemorphogeneticprotein,BMP)是由Urist在1965年对脱钙骨基质的成骨研究中发现的一种小分子量可溶性透膜糖蛋白,属于轻型生长因子β(TGF-β)超家族成员。研究证实,BMP对骨骼发育具有重要的调节作用,其在不同种属动物体内都有骨诱导活性,重组的BMP亦可在原位和异位诱导骨、软骨、肌腱和韧带的形成等。BMP的生物活性已得到各研究领域的关注,本文着重BMP在脊柱外科的应用作一综述。1BMP与脊柱融合许多动物实验证实BMP可促进脊柱融合。BMP首先和Ⅱ型受体结合并使其活化,然后再结合并激活Ⅰ型受体,激活的Ⅰ型受体迅…     

人胎盘提取液促成纤维细胞生长的研究

目的：从人胎盘中提取一种促成纤维细胞生长的美容产品。方法：通过对健康的新鲜胎盘的粗选、匀浆、酶消化、离心、DE-52阴离子交换柱层析，获得提取物，MTT法检测各抽提成分及不同成分混合的生物学活性。结果：柱层析后可获得三个不同成分：P1、P2、P3，P3活性明显，经混合活性不明显的P2后活性明显增强。结论：建立了从胎盘中提取活性成分的方法，以混合成分的形式作为一种美容产品，不仅可增强效果，还充分利用了资源，提高了单位产量。     

猪骨形态形成蛋白(BMP)的实验研究

本文报告从猪骨基质中提取BMP的方法及其生物活性测定结果。在猪骨BMP提取过程中,每100g湿骨可得到24g脱钙骨,经进一步处理得到17g骨基质明胶,利用氯化钙、尿素作为提取剂,每100g可提取到0.24gBMP。所得BMP经SDS—PAGE测定,其分子量范围≤20KD。研究表明,猪BMP能在异种动物体内诱导间充质细胞向成软骨、成骨细胞分化,并产生新骨。     

重组合异种骨的研究——牛骨松质与牛BMP的再结合

作者将小牛骨松质化学处理以消除其抗原性,后作为载体结合牛BMP复合移植入小鼠股部肌袋内.结果表明:重组合过程使BMP的诱导活性大大提高,仅含0.5mgBMp的重组合异种骨即能在小鼠肌肉内诱导骨软骨组织发生,而单独植入相同剂量的BMP或松质骨载体均无此活性.认为异种骨松质用做BMP的结合载体是最佳选择,二者复合移植不仅避免了异种骨移植强烈的免疫排斥反应,而且浓缩了植骨的成骨活性.     

一种新型生物活性人工骨的制备及成骨活性的研究

目的：研制CPC/BMP复合人工骨,检测其成骨活性。方法：制备CPC/BMP及CPC骨块,扫描电子显微镜观察表面结构。用小鼠肌袋植入实验观察材料的成骨活性。结果：BMP在CPC中呈微球状均匀分布。CPC植入小鼠肌袋内不能诱导,CPC/BMP植入后1周有软骨细胞出现,2周有编织骨,4周以后小梁骨生成,16周出现成熟的板层骨。同时材料出现降解迹象。有机质含量、碱性磷酸酶浓度在CPC/BMP组出现升高,扫描电镜结果同样证实有新骨形成。结论：CPC/BMP生物活性人工骨可异位诱导成骨,可望成为新型的骨缺损修复材料。     

bBMP复合纤维蛋白胶治疗绵羊脊柱骨质疏松的实验研究

目的探索能够在短期内有效提高骨质疏松椎体骨密度的局部治疗方法。方法采用卵巢切除法（OVX）对6只成年雌性绵羊去势,低钙饲养1年后建立骨质疏松模型。采用拉丁方设计方案,通过经椎弓根注射途径,分别在每只动物的L4、L5、L6注射3种药物：实验组A20mg bBMP/FS,对照组B20mg bBMP,对照组C单纯FS。术后3个月时采用双能X线吸收骨密度测量仪和Micro-CT进行测量分析。结果拉丁方分析BMD显示：实验组BMD（1.334g/cm^2）明显高于对照组BMD（1.139g/cm^2和1.163g/cm^2）。Micro-CT分析表明：实验组骨小梁的密度、连接率均显著高于对照组。结论bBMP复合纤维蛋白胶可以促进骨小梁的改建,改善骨小梁的三维结构,增加椎体的骨质密度,因此可以作为局部治疗脊柱骨质疏松的新型方法之一。     

一种高效制备工艺对脱钙骨基质性能的影响

目的 目前脱钙骨基质生产工艺耗时长效率低,浪费资源和成本.本研究在保存骨诱导活性的前提下,显著缩短了脱钙骨基质的工艺时间.方法 采用动态脱钙和二次换酸工艺制备脱钙骨基质,对pH值、钙含量进行评价.用裸鼠体内植入实验评价这种脱钙骨基质骨诱导活性.结果 材料的pH值为6.2±0.3,呈弱酸性.钙含量为(0.6±0.2)％,符合＜6％的标准.裸鼠体内植入后创面一期愈合,无不良反应发生.其骨诱导活性阳性,4周时可见大量的新生骨组织、骨髓样组织和软骨化成骨现象.结论 该工艺可以提高脱钙骨基质生产效率,不影响材料活性.     

BMP—2在成纤维细胞对BMP—3表达的调节作用

目的：观察在BMP－2作用下,成纤维细胞表达BMP－3的情况,探讨BMP－2促进成纤维细胞成骨表型表达的机制。方法：向培养的成纤维细胞内添加BMP－2,当细胞生长到60％时免疫组化观察正常与BMP－2作用下的成纤维细胞内表达BMP－3的情况。结果：下成纤维细胞内无BMP－3表达,在BMP－2作用下成纤维细胞出现BMP－3表达。结论：在成纤维细胞,BMP－2可促进BMP－3的表达。     

金银花中总黄酮的提取

目的：探索金银花中总黄酮最佳提取工艺。方法：采用正交试验考察乙醇浓度,超声时间,料液比,超声温度4个因素对金银花中总黄酮收率的影响。结果：金银花中总黄酮的最佳提取工艺为乙醇浓度70％,超声时间30min,料液比1：12,超声温度40℃。结论：以超声波法提取金银花药材中总黄酮,产率较高,时间较短,且设备简单,操作方便,可以作为提取金银花中总黄酮化合物的一种有效方法。     

骨形成蛋白7(BMP7)基因的克隆及序列分析

目的：克隆BMP7全长cDNA，构建BMP7克隆质粒.方法：通过反转录PCR技术和巢式PCR技术从人类胚胎肾293细胞中克隆BMP7基因，应用互补拼接的方法对其进行修复获得全长cDNA，将其与T载体进行连接得到BMF7克隆质粒。结果：琼脂糖电泳及测序结果显示经过修复后的BMP7基因与预期结果相一致，酶切鉴定及测序结果证明pT-BMP7克隆质粒结构正确。结论：BMP7基因的克隆为进一步研究BMP7基因和蛋白的成骨功能奠定了基础。