基于ERK信号通路探讨电针对神经根型颈椎病模型大鼠镇痛机制的研究

目的观察神经根型颈椎病(cervical spondylotic radiculopathy,CSR)模型大鼠脊髓及神经根组织神经细胞自噬小体的变化及p-ERK的表达情况,探讨基于ERK信号通路介导电针颈夹脊穴对CSR大鼠的镇痛作用机制。方法将30只SPF级SD大鼠,随机分为模型组、针刺组及电针组,每组10只。采用颈椎插线法构建CSR模型大鼠,并于造模后第3天进行干预,模型组予每日抓取1次,针刺组取双侧颈2/3(C2/3)、颈6/7(C6/7)节段颈夹脊穴进行普通针刺,电针组在此基础上以一侧穴位为一组进行电针干预,每日1次,每次20 min,连续干预7 d后处死。干预后检测各组大鼠外周神经机械性痛阈,取压线处脊髓及神经根组织,通过透射电镜观察其神经细胞自噬小体的变化,并采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测p-ERK蛋白含量。结果与模型组比较,针刺组及电针组外周神经机械性痛阈、p-ERK蛋白表达明显升高(P<0.05),自噬小体数量明显增加;与针刺组对比,电针组外周神经机械性痛阈、p-ERK蛋白表达升高(P<0.05),自噬小体数量增多。结论电针颈夹脊穴对CSR大鼠具有明显的镇痛作用,通过ERK信号通路调节神经细胞自噬,抑制神经细胞凋亡以修复损伤神经根可能是实现其镇痛作用的重要机制之一。     

电针对功能性消化不良大鼠MEK-ERK1/2信号通路的影响

目的观察电针对功能性消化不良(FD)大鼠胃组织MEK-ERK1/2信号通路的影响。方法将40只大鼠随机分为空白组及造模组,其中空白组10只。对除空白组外的30只大鼠进行造模,将造模成功的20只大鼠再随机分为模型组及电针组各10只。造模方法均采用夹尾刺激配合不规则饮食的复合造模方法制备FD大鼠模型。造模后,电针组进行电针足三里干预10 d,干预结束后用WB对大鼠胃组织丝裂原活化蛋白激酶(MEK)、细胞信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-MEK)、磷酸化细胞信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白水平进行检测。结果与空白组比较,模型组大鼠胃组织MEK、ERK1/2、p MEK、pERK1/2蛋白表达水平升高(P 0.05);与模型组相比,电针组MEK、ERK1/2、p-MEK、p-ERK1/2蛋白表达水平下降(P 0.05)。结论电针干预可下调FD模型大鼠MEK、ERK1/2、pMEK、p ERK1/2蛋白表达水平。     

两种电针对脊髓损伤14天后大鼠运动功能、神经元及MEK2、p-ERK1表达的影响

目的基于Raf/Ras/ERK信号通路,探讨两种电针对大鼠脊髓损伤后14天丝裂原激活/细胞外信号调节激酶2(mitogen-activated/extracellular signal-regulated kinase 2,MEK2)、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1(phosphorylation-extracellular signal-regulated kinase 1,p-ERK1)表达的影响以及对大鼠后肢运功功能和神经元的影响。方法雄性清洁级SD大鼠(60只),随机分为五组,空白组(12只)、假手术组(12只)、模型组(12只)、脉冲电针组(12只)、音乐电针组(12只)。采用改良式的Allen’s打击法复制模型。两组电针组选取"大椎""命门"进行不同电针针刺干预,每天1次,每次20分钟,空白组、假手术组及模型组在治疗组治疗时进行抓取束缚,保证处理条件的相同。脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后14天,采用神经功能评定法——BBB评分对大鼠脊髓损伤进行评估,综合评定大鼠SCI后的运动功能。采用HE染色、尼氏染色方法观察脊髓损伤大鼠损伤脊髓前角组织病理改变。运用免疫组化技术和Western blot技术观察损伤脊髓前角MEK2、p-ERK1含量的变化。结果 BBB评分结果显示,经脉冲电针与音乐电针治疗后,脊髓损伤大鼠后肢活动功能较模型组均有改善(P0.01),且音乐电针评分高于脉冲电针,但两组比较无统计学差异;HE染色与尼氏染色结果说明脉冲电针与音乐电针组均可修复脊髓前角神经元细胞,增加神经元细胞中尼氏体含量,且音乐电针优于脉冲电针;免疫组化及Western Blot结果说明脉冲电针与音乐电针均可提高脊髓前角神经元中MEK2、p-ERK1的含量,但两者无统计学差异。结论脉冲电针与音乐电针均能诱导SCI大鼠脊髓内MEK2、p-ERK1的表达,促进脊髓损伤后神经修复再生功能,音乐电针作用较脉冲电针略有优势。     

姜黄素抗脑缺血再灌注损伤作用与MAPK信号通路的相关性分析

目的探讨姜黄素对大鼠脑缺血再灌注损伤中细胞外信号调节蛋白激酶（ERK1/2）、C-Jun氨基末端（JNK）/应激化蛋白激酶（SAPK）及p38MAPK信号转导通路的影响。方法采用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉（MCAO）建立局灶性脑缺血模型,观察不同浓度姜黄素（20 mg/kg、40 mg/kg、80 mg/kg）对脑缺血再灌注损伤后大鼠神经行为学评分的影响,并用Western blot法检测p38MAPK、p-p38MAPK、ERK1/2、p-ERK1/2及JNK的表达。结果假手术组无神经行为学改变;各用药组神经行为学评分明显低于缺血再灌注组（P〈0.05）。与缺血再灌注组相比各用药组p-p38MAPK及JNK表达明显降低（P〈0.05）,而p-ERK1/2表达显著增加（P〈0.05）,p38MAPK及ERK1/2表达各组间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论姜黄素对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其保护作用机制可能与抑制p38MAPK和JNK/SAPK信号转导通路以及增强ERK1/2信号转导通路有关。     

基于ERK/COX-2信号通路研究电针干预原发性痛经机制

目的 观察电针对原发性痛经（PDM）大鼠子宫组织ERK/COX-2信号通路相关蛋白及因子表达的影响，探讨电针治疗PDM的可能机制。方法 将40只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组和布洛芬组，每组10只。筛选处于动情间期的大鼠进行造模，除空白组外，其余组连续10 d于股部皮下注射苯甲酸雌二醇，第11日腹腔注射缩宫素诱发疼痛，空白组注射0.9%氯化钠溶液。电针组造模同时电针“关元”“三阴交”，20 min/d，布洛芬组造模同时予布洛芬灌胃，连续10 d。观察各组大鼠行为学变化，HE染色观察子宫组织病理变化，ELISA检测子宫组织前列腺素（PG）F2α和PGE2含量，Western blot检测子宫组织ERK1/2、p-ERK1/2和环氧化酶-2(COX-2)蛋白表达。结果 与空白组比较，模型组大鼠扭体次数、扭体评分显著增加（P<0.01）；子宫内膜大量空泡样变性、坏死，中性粒细胞浸润，病理评分显著升高（P<0.01）；子宫组织PGF2α含量显著增加，PGE2含量显著减少（P<0.01）,ERK1/2、p-ERK1/2、COX-2蛋白表达显著升高（P<0.01...     

电针对帕金森病模型大鼠黑质区细胞外信号调节激酶和肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β mRNA的影响

目的:观察电针对帕金森病模型大鼠黑质内细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK 1/2)信号通路及炎性反应因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的作用,探讨针刺治疗帕金森病的作用机制。方法:雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、电针组,各8只。模型组和电针组经颈背部注射鱼藤酮(1mg/kg,溶于一定比例二甲亚砜和生理盐水中,浓度0.25mg/mL)造模14d。电针组电针"风府"和"太冲",治疗14d。造模过程中观察各组大鼠的行为学变化,各组大鼠相应处理结束后的第2天行敞箱实验以测试大鼠的自主活动能力和运动的协调性,采用免疫蛋白印迹法检测大鼠黑质区酪氨酸羟化酶(TH)、磷酸化ERK 1/2(p-ERK 1/2)、TNF-α、IL-1β蛋白表达情况。结果:模型组大鼠表现出明显的帕金森病症候群特征,治疗后,大鼠的异常行为明显改善。敞箱实验结果显示,模型组大鼠水平运动、垂直运动能力较正常组和假手术组明显降低(P0.05);电针治疗后,大鼠运动能力较模型组明显增强(P0.05)。与正常组、假手术组相比,模型组大鼠黑质区TH蛋白表达明显减少(P0.05),p-ERK 1/2、TNF-α、IL-1β蛋白表达明显增加(P0.05);与模型组相比,电针组大鼠黑质区TH蛋白表达明显增加(P0.05),p-ERK 1/2、TNF-α、IL-1β蛋白表达明显减少(P0.05)。结论:电针可以通过调节帕金森病模型大鼠体内丝裂原活化蛋白激酶/ERK 1/2通路,降低p-ERK 1/2在帕金森病模型大鼠黑质区的表达,进而减少TNF-α、IL-1β的蛋白表达,对帕金森病的发生发展起到一定的调节作用。     

芒针对促进大鼠急性脊髓损伤功能修复的机制研究

目的观察芒针对急性脊髓损伤炎症反应和神经细胞凋亡的影响,研究PI3K/Akt和MAPK/ERK信号转导途径是否参与芒针的神经保护作用,探讨芒针促脊髓损伤修复的具体作用机制。方法将150只成年雄性SD大鼠随机分为A组、B组、C组、D组和E组,每组30只。采用改良Allen’s法制作大鼠脊髓中度损伤模型,A组为假手术组,不予以损伤脊髓及芒针治疗;B组造模后不予以芒针治疗;C组造模后采用芒针治疗;D组造模前0.5 h鞘内注射LY294002,造模后采用芒针治疗;E组造模前0.5 h鞘内注射PD98059,造模后采用芒针治疗。分别采用BBB评分检测大鼠的自发活动;ELISA检测炎性因子TNF-?、IL-6、IL-1?、NF-?B的含量;TUNEL检测细胞凋亡的程度;免疫组化检测Bcl-2和Bax阳性细胞水平;Western印迹分析p-Akt和p-ERK在脊髓组织的表达,RT-PCR分析Cyt-C和Caspase-3在体内的表达。相对的下行Akt和ERK信号通路通过LY294002和PD98059特异性抑制剂处理分析在体内的抑制作用。结果炎症反应和PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制的神经元凋亡参与了脊髓损伤大鼠模型的损害,芒针介导的神经保护作用与Bax蛋白阳性神经元数目的减少及Bcl-2蛋白阳性神经元数量的增加有关。芒针治疗能改善大鼠的运动功能,PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路中p-Akt和p-ERK的激活,通过下调Bax蛋白和Bcl-2表达上调,抑制了线粒体凋亡途径关键因子Cyt-C的表达。TUNEL法检测并抑制激活神经元凋亡的Caspase-3的级联。PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路特异性抑制剂LY294002和PD98059的应用抑制了p-Akt和p-ERK的表达。结论芒针促脊髓损伤修复的神经保护作用可能与炎症反应和PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路的激活、通过下调Bax蛋白和Bcl-2表达上调以及抑制线粒体途径诱导的凋亡有关。     

电针即刻镇痛效应及其对脊髓p-ERK1/2的调控

目的:观察电针对完全弗氏佐剂(CFA)致炎性痛大鼠急性期脊髓背角细胞外信号转导激酶1/2(ERK1/2)磷酸化水平的影响,探讨电针即刻镇痛效应的部分细胞信号转导机制.方法:雄性健康SD大鼠53只,分两批进行实验.第1批实验大鼠23只,全部采用CFA造模,观察CFA致炎对大鼠痛阈的影响,并用免疫组化法检测大鼠患侧脊髓背角p-ERK1/2阳性细胞的表达情况.第2批实验大鼠30只,随机分为空白对照组(N组)、模型对照组(CFA组)和电针治疗组(EA组),每组各10只.CFA组和EA组大鼠采用CFA造模,EA组大鼠造模后5.5h予电针治疗1次.观察电针对CFA大鼠的即刻镇痛效应及其对大鼠脊髓背角p-ERK1/2阳性细胞表达的干预作用.结果:第1批实验大鼠:造模后5h,CFA大鼠痛阈显著降低(P＜0.01),造模后3d、7d、14d 3个时点,CFA大鼠痛阈均显著低于造模前(均P＜0.01);但p-ERK1/2阳性细胞主要集中在造模后5h表达,并于造模后3d恢复正常.第2批实验大鼠:CFA造模成功诱导CFA组和EA组大鼠痛阈降低,与同期N组大鼠相比差异有统计学意义(均P＜0.01).接受1次电针治疗后,EA组大鼠痛阈明显提高(P＜0.01),并显著高于同期CFA组(P＜0.01).造模后6h,CFA组大鼠腰段脊髓背角p-ERK1/2阳性细胞表达增多(P＜0.01),而EA组则明显减少(P＜0.01).结论:抑制炎性痛大鼠腰段脊髓背角ERK1/2活化,可能是电针发挥即刻镇痛效应的关键细胞信号转导机制之一.     

艾灸“肾俞”“足三里”穴对类风湿关节炎大鼠滑膜组织中Ras-MAPK信号通路的影响(英文)

目的:观察艾灸对类风湿关节炎(RA)模型大鼠滑膜组织中Ras、细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2,ERK1/2)和Raf蛋白表达的影响,探讨艾灸治疗类风湿性关节炎的分子作用机制。方法:选取30只Wistar大鼠,随机分为正常组、模型组、艾灸组,每组10只。采用风、寒、湿环境因素+生物因子(弗氏完全佐剂)复合造模。造模后第3天进行治疗,艾灸组取双侧 "肾俞""足三里"穴悬灸,20 min/次,1次/d,连续治疗15 d。于造模前、造模后及治疗第15天分别测量各组大鼠右后足趾容积。Western blot法检测滑膜组织中Ras蛋白、ERK1/2、磷酸化ERK1/2(phosphor-ERK1/2,p-ERK1/2)及Raf蛋白的相对表达量。结果:造模后大鼠右后足趾容积较正常组明显增大(P<0.01);经过15 d治疗,艾灸组大鼠的跖围小于模型组(P<0.01)。模型组Ras、Raf、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达较其他各组增加(均P<0.01);艾灸组Ras、Raf、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达明显低于模型组(均P<0.01)。结论:艾灸能降低类风湿性关节炎模型大鼠滑膜组织中Ras、Raf及ERK1/2的过度表达,进而抑制Ras-MAPK信号通路的异常活化,推断这可能是艾灸减轻滑膜炎性反应的分子机制之一。     

电针联合有氧运动对脑梗死后缺血半暗带cAMP/PKA通路的影响

目的:观察电针联合有氧运动对脑梗死大鼠运动功能的影响,并探讨其对cAMP/PKA信号通路的影响。方法:将SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组、有氧运动组、电针+有氧运动组,各18只,电针组于造模24 h后对大鼠进行电针曲池、足三里穴干预; 有氧运动组造模24 h后予匀速跑台训练; 电针+有氧运动组在电针曲池、足三里穴后再予跑台训练,各组均干预7 d。观察各组大鼠神经行为学、脑梗死体积、神经元细胞超微结构变化,同时检测脑组织cAMP、PKA蛋白表达变化。结果:神经行为学显示电针+有氧运动组可明显下调脑梗死大鼠的神经缺损评分、缩小脑梗死体积、改善缺血半暗带内神经元细胞超微结构损伤、上调cAMP、PKA蛋白水平,与模型组、电针组、有氧运动组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:电针联合有氧运动可促进脑梗死大鼠运动功能恢复,其作用机制可能与激活cAMP/PKA信号通路有关。     

耳甲电针对抑郁模型大鼠海马Raf/ERK/RSK/CREB信号通路的影响

目的:观察耳甲电针对慢性不可预知性温和刺激(CUMS)诱导的抑郁大鼠海马细胞外信号调节激酶(ERK)信号转导通路的影响,探讨耳甲电针抗抑郁效应的机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、耳甲电针组、PD98059抑制剂(PD)组、二甲基亚砜(DMSO)组、PD+耳甲电针组,每组10只。采用孤养结合连续21 d CUMS方法制备抑郁大鼠模型。耳甲电针组、PD+耳甲电针组于耳甲区的"心"和"神门"耳穴给予连续28 d电针刺激,每天30 min;PD组、DMSO组、PD+耳甲电针组分别给予连续28 d侧脑室注射PD98059、DMSO、PD98059,每只5μL/d。记录造模前后、干预后各组大鼠糖水消耗量。采用Western blot法检测干预后各组大鼠海马Raf、p-Raf、ERK、p-ERK、RSK、CREB、p-CREB蛋白的相对表达量。结果:与空白组比较,模型组大鼠糖水消耗量及海马Raf、p-Raf、ERK、p-ERK、RSK、CREB、p-CREB均显著降低(P<0. 01)。与模型组比较,耳甲电针组大鼠糖水消耗量及海马Raf、p-Raf、ERK、p-ERK、RSK、CREB、pCREB均显著升高(P<0. 05,P<0. 01),PD+耳甲电针组p-Raf、ERK、CREB明显升高(P<0. 01,P<0. 05),PD组p-ERK明显下降(P<0. 05)。与耳甲电针组比较,PD+耳甲电针组p-ERK、RSK和pCREB明显下降(P<0. 05,P<0. 01)。结论:海马内Raf/ERK/RSK/CREB信号通路可能参与了耳甲电针的抗抑郁效应,且该效应在一定程度上可被ERK阻断剂所抑制。     

解郁止痛方对偏头痛抑郁共病模型大鼠行为学及BDNF/ERK1/2/CREB通路的影响

目的观察解郁止痛方对偏头痛抑郁共病模型大鼠行为学的影响, 从调控脑源性神经营养因子(BDNF)/ERK1/2/环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)信号通路探讨其作用机制。方法将36只SD雄性大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、尼莫地平组和中药低、中、高剂量组。采用间歇皮下注射硝酸甘油(10 mg/kg)与慢性不可预知性温和刺激复制偏头痛抑郁共病模型。各组大鼠分别予相应药物干预21 d, 1次/d。记录造模前及造模后第10、21天大鼠体重, 检测机械痛阈值, 采用旷场实验、强迫游泳实验、新奇抑制摄食实验评价大鼠行为学, 采用Western blot法检测大鼠海马组织中BDNF、酪氨酸激酶受体B(TrkB)、p-ERK1/2、p-CREB蛋白表达。结果造模第10、21天, 与模型组同时点比较, 中药各剂量组大鼠体重、旷场实验水平及垂直运动得分升高(P<0.05), 新奇抑制摄食潜伏时间、强迫游泳不动时间缩短(P<0.05);第7、14、21天, 与模型组同时点比较, 中药各剂量组大鼠机械痛阈值升高(P<0.05);中药各剂量组海马组织中p-ERK1/2蛋白表达升高(P&...     

电针神庭、百会穴对大脑中动脉闭塞型大鼠认知功能的影响

目的探讨电针神庭、百会穴对大脑中动脉闭塞模型(MCAO)大鼠认知功能的影响。方法将18只SD大鼠按随机数字表法分为电针组、模型组和假手术组。其中电针组和模型组采用Longa改良线栓法制备MCAO模型,假手术组仅分离左侧颈动脉后缝合。电针组于造模后24 h取神庭、百会穴进行电针干预,20 min/次,1次/d,连续7 d;模型组、假手术组不做任何干预。于干预第1天、第7天对3组大鼠进行神经行为学评分;于干预第1天、第3天、第7天对3组大鼠进行平衡木实验评分;于干预第3天、第4天、第5天、第6天进行定位航行实验,比较3组大鼠的逃避潜伏期;于干预第7天进行空间探索实验,比较3组大鼠穿越平台的次数。结果电针组第7天神经行为学评分高于假手术组,低于模型组(P均0.05);第3天和第7天电针组平衡木实验评分均高于假手术组,低于模型组(P均0.05);逃避潜伏期比较,第3天电针组长于假手术组(P0.05),与模型组无差异(P0.05),第4～6天电针组均长于假手术组,短于模型组(P均0.05);第7天电针组穿越平台次数多于模型组,少于假手术组(P均0.05)。结论电针神庭、百会穴能明显减轻MCAO大鼠的神经功能缺损情况,提高平衡能力,增强方向定位和学习记忆能力。     

对药酸枣仁-合欢花对抑郁模型大鼠行为学及皮质ERK-CREB细胞信号转导通路的影响

目的探讨对药酸枣仁-合欢花对抑郁模型大鼠行为学及皮质细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)-环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)细胞信号传导通路的影响。方法将雄性2月龄SD大鼠75只,按随机数字表法分为正常组、模型组、中药组、西药组、PD184161组,每组15只。采用孤养加慢性不可预知性温和应激(CUMS)复制大鼠抑郁模型,于实验前1d及实验第1、2、3周末用旷场实验、糖水消耗实验观察各组大鼠的行为学改变。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-Time PCR)法对皮质CREB、BDNF mRNA行定量分析。蛋白质免疫印迹(Western Blot)法测皮质ERK1/2、p-ERK1/2、p-RSK及p-CREB蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠旷场实验得分、糖水消耗度下降,从第2周末开始有统计学意义(P0.05,P0.01)、皮质CREB、BDNF mRNA水平下降(P 0.05,P 0.01)、ERK1/2、p-ERK1/2、p-RSK、p-CREB蛋白表达降低(P0.05,P0.01);与模型组比较,中药组、西药组、PD184161组大鼠旷场实验得分、糖水消耗度提高,从第2周末开始有统计学意义(P0.05,P0.01),皮质CREB、BDNF mRNA水平上调(P0.05),ERK、p-ERK、p-RSK、p-CREB蛋白表达增强(P0.05,P0.01);与中药组比较,PD184161组大鼠旷场实验得分、糖水消耗度下降,第3周末有统计学意义(P0.05),皮质CREB、BDNF mRNA水平下降(P0.05),ERK、p-ERK、p-RSK、p-CREB蛋白表达降低(P0.05)。结论对药酸枣仁-合欢花能够改善抑郁模型大鼠的抑郁症状,具有抗抑郁功效,其作用机制可能与激活ERK-CREB信号传导通路,增强通路中关键因子的表达有关。     

电针内关穴对心肌肥厚大鼠Raf、ERK1/2及p-ERK 1/2表达的影响

目的观察电针内关穴对心肌肥厚大鼠缺血心肌原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶-1(protooncogene serine/threonine-protein kinase-1,Raf-1)、细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal regulated kinase 1/2,ERK 1/2)和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(phospho-extracellular signal-regulated kinase 1/2,p-ERK 1/2)蛋白表达的影响。方法清洁级健康SD大鼠40只按随机数字表法分为正常组、模型组、对照组和电针组,每组10只,除正常组正常饲养外,其余三组采用颈背部皮下注射盐酸异丙肾上腺素[isoprinosine hydrochloride,ISO,3 mg/(kg·d)]制备大鼠左心室心肌肥厚模型,共14天。电针组每天注射ISO后取"内关"穴治疗,采用连续波,频率2 Hz,强度1 m A,通电20 min,1次/天,共14天。对照组选取非穴位,内关穴外侧旁开5 mm,干预方法与电针组相同。干预结束后观察大鼠心电图并称重,麻醉后开胸摘取心脏并称重,然后分离左心室称重,并计算左心室质量指数(left ventricular weight index,LVWI)和全心质量指数(heart weight index,HWI);免疫印迹法检测左心室心肌组织Raf-1、p-ERK 1/2及ERK 1/2蛋白含量。结果与正常组比较,模型组ST段抬高幅度、HWI、LVWI、心肌组织Raf-1及p-ERK 1/2蛋白表达升高(P0.01)。与模型组及对照组比较,电针组ST段抬高幅度、HWI、LVWI、Raf-1及p-ERK 1/2蛋白表达降低(P0.05)。结论电针能有效调节心肌肥厚大鼠心肌缺血状况,降低心肌肥厚大鼠心脏指数、Raf-1及p-ERK 1/2蛋白含量,可能是电针通过调节Raf/MEK/ERK改善心肌肥厚的信号调节机制之一。     

电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠受损神经元细胞外信号调节蛋白激酶的影响

目的:探索电针对脑缺血再灌注大鼠大脑受损神经元的保护作用及其细胞外信号转导机制。方法:随机将24只SD大鼠均分为假手术组、模型组、电针组和电针+PD98059组,采用改良Longa线栓法复制局灶性大脑中动脉缺血再灌注模型。电针组取"百会"大椎"穴,选用疏密波,频率80～100Hz,电流强度1～3mA,电压1～3V,持续电刺激60min。电针+PD98059组于腰椎间隙注入丝裂原活化蛋白激酶1的抑制剂PD980592.78mg/kg,并电针。依据Julio氏神经行为学评分法对各组大鼠进行评分,采用免疫组织化学染色法观察电针及PD98059阻滞状态下电针对模型大鼠右侧病灶处颞叶大脑皮层锥体细胞层细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)蛋白表达的影响。结果:电针能改善模型大鼠的神经行为学分值(P<0.01),上调脑缺血再灌注大鼠受损神经元ERK的蛋白表达(P<0.01),其作用可被PD98059阻断(P<0.01)。结论:电针可减轻脑缺血再灌注大鼠大脑神经元的损伤,促进损伤修复,这一作用可能与其影响缺血再灌注后ERK信号通路的变化有关。     

逍遥散对慢性应激大鼠海马组织DUSP14基因表达及对MAPK信号通路的影响

目的：探讨逍遥散对慢性应激大鼠海马组织双特异性磷酸酶 14 （DUSP14） mRNA 表达及对 p38 丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）、c-Jun 氨基末端蛋白激酶（JNK）、细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）、细胞外信号调节蛋白激酶 5（ERK5）等四类丝裂原活化蛋白激酶 （MAPKs） 信号通路活化状态的影响。方法：将 80 只大鼠分为空白组、模型组、氟西汀组及逍遥散组。空白组大鼠常规饲养，每天灌胃 2 mL 生理盐水；模型组大鼠每天灌胃 2 mL 生理盐水后进行慢性应激刺激；氟西汀组和逍遥散组分别灌胃氟西汀和逍遥散后进行慢性应激刺激；剂量均为 10 mL/（kg · d）。检测各组大鼠海马组织 DUSP14 mRNA 表达及p38、磷酸化 p38 （p-p38）、JNK、磷酸化 JNK （p-JNK）、ERK、磷酸化 ERK （p-ERK）、ERK5、磷酸化 ERK5 （p-ERK5） 的相对含量。结果：与空白组比较，模型组 DUSP14 mRNA 表达显著上调 （P＜0.01），p-p38/p38、p-JNK/JNK、p-ERK5/ERK5 均显著升高 （P＜0.01），p-ERK/ERK 显著降低 （P＜0.01）。与模型组比较，逍遥散组和氟西汀组 DUSP14 mRNA 表达均下调 （P＜ 0.01）；逍遥散组 p-p38/p38、p-JNK/JNK 显著降低（P＜0.01），p-ERK/ERK 显著升高（P＜0.01）；氟西汀组 p-p38/p38、p-JNK/JNK、p-ERK5/ERK5 均显著降低 （P＜0.01），p-ERK/ERK 显著升高 （P＜0.01）。与氟西汀组比较，逍遥散组 p-JNK/JNK、p-ERK5/ERK5 均较高（P＜0.05，P＜0.01）。结论：逍遥散和氟西汀对慢性应激引起的 DUSP14 mRNA 表达变化及 MAPK 各信号通路活性变化的调节作用趋势基本一致，对 p38 MAPK 信号通路的调节作用相当，但在 ERK5 MAPK 通路中逍遥散未表现出活性调节作用，在 ERK、JNK MAPK 通路活化状态调节过程中氟西汀更显优势。     

针刺足三里、曲池对MCAO模型大鼠梗死周围组织PI3K/AKT信号通路表达的影响

目的:评价针刺曲池穴及足三里穴对MCAO模型大鼠运动功能的影响及观察脑梗死灶周围组织PI3K/AKT信号通路表达的变化。方法:将45只SD大鼠随机分为假手术组、模型组及干预组,各15只。假手术组仅予切开皮肤分剥离神经血管后缝合,模型组及干预组大鼠予线栓法进行MCAO模型制备,造模成功后干预组大鼠予针刺曲池穴及足三里穴,1次/d,30 min/次,假手术组及模型组大鼠仅模仿捉拿、回笼,连续干预14 d,用Homecage Scan行为学评价大鼠不同时间段运动能力的变化,免疫组化检测PI3K、Bax的表达差异,免疫蛋白印迹(Western blotting)观察AKT、p-Akt的浓度变化。结果:1)Homecage Scan行为学检测显示:假手术组大鼠未见明显异常,造模大鼠出现明显偏瘫,随着时间的推移模型组及干预组大鼠花费在行走、后肢站立、舔毛3种行为的时间逐渐延长,其中干预组改善得更为明显(P0.05)。2)造模组大鼠脑组织TTC染色出现明显白色梗死区域,干预组大鼠梗死区域明显小于模型组。3)免疫组化显示造模后大鼠PI3K降低,Bax升高,针刺足三里穴及曲池穴可上调PI3K及AKT的磷酸化程度,抑制了Bax的表达;4)Western blotting显示针刺足三里、曲池穴可上调造模大鼠AKT的磷酸化程度。结论:针刺曲池穴、足三里穴可改善脑缺血大鼠的神经缺损症状,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路有关。     

电针对间质性膀胱炎大鼠脊髓背角p-ERK1/2和c-fos表达的影响

目的:观察电针"次髎""会阳"对间质性膀胱炎(IC)大鼠脊髓背角磷酸化的胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)及原癌基因(c-fos)表达的影响。方法:将雌性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组和电针组,每组各6只。采用环磷酰胺腹腔注射的方法建立IC大鼠模型。电针组于"次髎""会阳"给予电针干预,20 min/次,1次/d,连续3 d。造模后48 h及干预后24 h观察大鼠膀胱疼痛行为变化;Western blot法检测脊髓腰6至骶1节段p-ERK1/2和c-fos蛋白的相对表达量;免疫荧光染色法检测右侧脊髓背角p-ERK1/2和c-fos的表达。结果:与空白组比较,模型组膀胱机械疼痛阈值降低(P0.05),脊髓p-ERK1/2和c-fos的蛋白表达及脊髓背角p-ERK1/2和c-fos的免疫荧光面密度值均升高(P0.05)。与模型组比较,电针组治疗后膀胱机械疼痛阈值升高(P0.05),脊髓p-ERK1/2和c-fos的蛋白表达及脊髓背角p-ERK1/2和c-fos的免疫荧光面密度值均降低(P0.05)。结论:电针"次髎""会阳"可提高IC大鼠膀胱机械疼痛阈值,调节脊髓痛觉过敏,发挥镇痛作用,其机制可能与降低脊髓背角中p-ERK1/2和c-fos的表达有关。     

对药酸枣仁-合欢花对抑郁模型大鼠行为学及皮质ERK-CREB细胞信号转导通路的影响

目的探讨对药酸枣仁-合欢花对抑郁模型大鼠行为学及皮质细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)-环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)细胞信号传导通路的影响。方法将雄性2月龄SD大鼠75只,按随机数字表法分为正常组、模型组、中药组、西药组、PD184161组,每组15只。采用孤养加慢性不可预知性温和应激(CUMS)复制大鼠抑郁模型,于实验前1d及实验第1、2、3周末用旷场实验、糖水消耗实验观察各组大鼠的行为学改变。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-Time PCR)法对皮质CREB、BDNF mRNA行定量分析。蛋白质免疫印迹(Western Blot)法测皮质ERK1/2、p-ERK1/2、p-RSK及p-CREB蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠旷场实验得分、糖水消耗度下降,从第2周末开始有统计学意义(P<0.05,P<0.01)、皮质CREB、BDNF mRNA水平下降(P<0.05,P<0.01)、ERK1/2、p-ERK1/2、p-RSK、p-CREB蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,中药组、西药组、PD184161组大鼠旷场实验得分、糖水消耗度提高,从第2周末开始有统计学意义(P<0.05,P<0.01),皮质CREB、BDNF mRNA水平上调(P<0.05),ERK、p-ERK、p-RSK、p-CREB蛋白表达增强(P<0.05,P<0.01);与中药组比较,PD184161组大鼠旷场实验得分、糖水消耗度下降,第3周末有统计学意义(P<0.05),皮质CREB、BDNF mRNA水平下降(P<0.05),ERK、p-ERK、p-RSK、p-CREB蛋白表达降低(P<0.05)。结论对药酸枣仁-合欢花能够改善抑郁模型大鼠的抑郁症状,具有抗抑郁功效,其作用机制可能与激活ERK-CREB信号传导通路,增强通路中关键因子的表达有关。