十精丸对UVA致ESF-1细胞光老化保护作用的研究

目的:研究十精丸抗紫外线致ESF-1细胞光老化作用,并初步探讨其作用机制。方法:用40J/cm2的UVA照射人皮肤成纤维细胞建立光老化细胞模型,以不同浓度十精丸提取物处理光老化细胞,MTT法检测细胞活力,羟胺法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性,比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,TBA法检测丙二醛(MDA)含量。结果:UVA照射成纤维细胞后,细胞活力下降,SOD、GSH-Px活性降低,MDA含量升高(P<0.01),十精丸水提液中(100μg/ml)、高(200μg/ml)剂量组能显著提高成纤维细胞细胞活力、SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量(P<0.05或P<0.01)。结论:十精丸水提液可抑制UVA引起的成纤维细胞活性下降,推测其机制为通过提高SOD活力、加速氧自由基的清除和减少氧自由基的产生,使细胞的脂质过氧化损伤程度降低有关。     

五味子乙素通过NOS/NO系统预防BaP所致HTR8-SVneo细胞氧化损伤

目的研究五味子乙素(Sch B)预防环境污染物苯并(a)芘(BaP)致人绒毛膜滋养层细胞HTR8-SVneo氧化损伤的机制。方法以HTR8-SVneo细胞为载体,构建BaP氧化应激模型。实验分为3组,BaP组、Sch B组和空白对照组。MTS法检测细胞存活率,还原酶法检测细胞培养液中一氧化氮(NO)及总一氧化氮合酶(TNOS)含量,用RT-PCR法检测细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA水平。结果 BaP组细胞存活率(72.2±0.9)%较对照组显著下降(P0.05);而0.1、0.5或2μmol/L Sch B+20μmol/L BaP各组的细胞存活率分别为(78.2±1.5)%、(86.5±0.6)%、(93.4±1.0)%,显著高于BaP组(P0.05)。BaP组细胞培养液中NO、TNOS含量、iNOS、eNOS mRNA表达量和eNOS蛋白表达量均显著高于对照组(P0.05);而与BaP组相比,Sch B组中NO、TNOS含量,iNOS、eNOS mRNA表达量和eNOS蛋白表达量均随着Sch B剂量的增加逐渐下降(P0.05)。结论 Sch B可有效预防BaP所致的HTR8-SVneo细胞氧化损伤,其机制可能与NOS/NO系统的平衡有关。     

含左西孟旦的STH-2心脏停搏液对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响

目的 评价含左西孟旦的STH-2心脏停搏液对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性Wistar大鼠32只,制备离体Langendorff灌注模型,随机分为4组(n=8),采用K-H液平衡灌注30 min时,C组采用STH-2心脏停搏液进行灌注,L1组、L2组和L2+G分别用含0.03μmol/L左西孟旦、0.3 μmol/L左西孟旦和0.3 μmol/L左西孟旦+10μmol/L格列苯脲(ATP敏感性钾通道阻断剂)的STH-2心脏停搏液进行灌注,灌注2 h时采用K-H液再灌注30 min.分别于灌注心脏停搏液前即刻(基础状态)、再灌注10 min、20 min、30 min时收集冠脉流出液,测定乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的活性.再灌注30 min时,取心肌组织,测定ATP、MDA、SOD水平及含水量.结果 与C组比较,L1组CK、LDH的活性和MDA含量降低,SOD活性升高,L2组CK、LDH的活性和MDA含量降低,ATP含量和SOD活性升高(P＜0.05或0.01);与L1组比较,L2组CK和IDH的活性和MDA含量降低,SOD活性升高(P＜0.05或0.01);与L2组比较,L2+G组MDA含量、CK和LDH的活性升高,ATP含量和SOD活性降低(P＜0.05或0.01).结论 含左西孟旦的STH-2心脏停搏液可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,且与浓度有关,其机制与开放ATP敏感性K+通道有关.     

PKC在缺氧预处理和去甲肾上腺素预处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的 评价蛋白激酶C(PKC)在缺氧预处理和去甲肾上腺素预处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用.方法 原代培养乳鼠心肌细胞,随机分为6组(n=25):对照组(Ⅰ组)常规培养;缺氧复氧组(Ⅱ组)细胞缺氧3 h,复氧1 h;缺氧预处理组(Ⅲ组)缺氧20 min,复氧20 min后制备缺氧复氧模型;去甲肾上腺素预处理组(Ⅳ组)细胞经终浓度为10-7 mol/L去甲肾上腺素孵育30 min后,去除去甲肾上腺素,再行缺氧复氧;H7+缺氧预处理组(Ⅴ组)细胞经终浓度为5×10-5 mol/L的H7孵育10 min后,去除H7,其余操作同Ⅲ组;H7+去甲肾上腺素预处理组(Ⅵ组)细胞经终浓度为5×10-5 mol/L的H7(PKC活性抑制剂)孵育10 min后,去除H7,其余操作同Ⅳ组.复氧结束后,测定心肌细胞存活率、培养液乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性和心肌细胞MDA含量和SOD活性.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组细胞存活率和SOD活性降低,LDH、CK的活性及MDA含量升高(P＜0.01).与Ⅱ组比较,Ⅲ组和Ⅳ组细胞存活率和SOD活性升高,LDH、CK活性及MDA含量降低(P＜0.01).与Ⅲ组比较,Ⅴ组细胞存活率和SOD活性降低,LDH、CK活性及MDA含量升高(P＜0.01).与Ⅳ组比较,Ⅵ组细胞存活率和SOD活性降低,LDH、CK活性及MDA含量升高(P＜0.05).结论 PKC激活参与了缺氧预处理与去甲肾上腺素预处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤.     

血液稀释和川芎嗪对兔缺血-再灌注损伤心肌内酶及超微结构的影响

目的 观察6%羟乙基淀粉130/0.4(HES 130/0.4)等容血液稀释和川芎嗪对兔心肌缺血-再灌注损伤中心肌磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及超微结构的影响.方法 32只家兔随机均分为四组:血液稀释组(H组)、川芎嗪组(L组)、血液稀释+川芎嗪组(HL组)及对照组(C组).观察在急性心肌缺血45 min、再灌注180min后心肌组织中CPK、LDH、SOD活性及MDA含量,并以透射电镜观察心肌超微结构的改变.结果 与同组非缺血区相比,四组缺血区心肌组织CPK、LDH、SoD活性均明显降低,MDA含量明显升高(P<0.05或P<0.01).与C组缺血区比较,H组缺血区心肌组织CPK、LDH、SOD活性均升高(P<0.05);L组缺血区心肌组织CPK、SOD活性升高,MDA含量降低(P<0.05);HL组缺血区心肌组织CPK、LDH、SOD活性均明显升高(P<0.01),MDA含量降低(P<0.05),且CPK活性高于L组缺血区(P<0.05).心肌细胞超微结构可见C组细胞结构破坏严重,H、L组细胞结构破坏均较C组轻,HL组细胞结构基本接近正常.结论 6%HES 130/0.4等容血液稀释和川芎嗪对心肌缺血-再灌注损伤均有保护作用,二者合用保护作用更为显著.     

异丙酚对乳鼠心肌细胞氧化损伤时线粒体功能的影响

目的 评价异丙酚对乳鼠心肌细胞氧化损伤时线粒体功能的影响.方法 SD乳鼠20只,分离乳鼠心肌细胞,接种于96孔培养板原代培养48 h,随机分为5组,每组32孔,对照组(C组):继续培养4 h;氧化损伤组(OI组):加入叔丁基过氧化氢,终浓度为100 μmol/L,孵育4 h;异丙酚1 μmol/L组、10 μmol/L组和30 μmol/L组(P1-3组):加入叔丁基过氧化氢,终浓度为100 μmol/L,同时加入异丙酚,终浓度分别为1、10、30,μmol/L,孵育4 h.于细胞培养或孵育4 h时,测定上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性,细胞谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物岐化酶(SOD)活性、心肌细胞线粒体活力、线粒体膜电位和心肌细胞凋亡率.结果 与C组比较,其余4组上清液LDH活性、心肌细胞MDA含量、凋亡率升高,心肌细胞线粒体活力、膜电位降低、心肌细胞GSH含量、SOD活性降低(P<0.05);与OI组比较,P2,3组上清液LDH活性、心肌细胞MDA含量、凋亡率降低,心肌细胞线粒体活力、膜电位升高,P3组心肌细胞GSH含量、SOD活性升高(P<0.05),P1组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);P2组与P3组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 异丙酚减轻心肌细胞氧化损伤的机制与改善线粒体功能、抑制细胞凋亡有关.     

氨磷汀对谷氨酸所致N9小胶质细胞损伤的保护作用

目的 观察氨磷汀对谷氨酸( glutamate,Glu)所致N9小胶质细胞损伤的保护作用.方法 建立Glu损伤模型,探索最适氨磷汀浓度,实验分4组:空白对照组(Con组),正常培养小胶质细胞24 h;Glu损伤组(Glu组),含10 mmol/L Glu的培养基处理N9细胞24 h;氨磷汀组(Ami+Glu组),含1 mmol/L氨磷汀和10 mmol/L Glu的培养基处理N9细胞24 h;TBOA组(Ami+TBOA+Glu组),含100 μmol/L TBOA、1 mmol/L氨磷汀和10 mmol/L Glu的培养液培养N9小胶质细胞24h.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞代谢率,检测培养液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、一氧化氮(nitrogen monoxide,NO)的含量,收集贴壁细胞超声破碎,检测谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量.结果 与损伤组比较,1 mmol/L氨磷汀保护组细胞代谢率(88.9±1.7)％升高(P＜0.05),LDH释放量(141±40)％减少(P＜0.05),SOD含量(128±13)％增加(P＜0.01),GSH含量(88±8)％增加(P＜0.01),NO释放量(147±34)％下降(P＜0.01);该作用可被兴奋性氨基酸转运体(excitatory amino acid transporter,EAAT)拮抗剂TBOA逆转.结论氨磷汀通过抗氧化机制减轻Glu对N9小胶质细胞的损伤.     

缺血预处理对肝缺血再灌注后氧自由基损伤的保护作用

目的 探讨缺血预处理(PC)对肝缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法 将18只犬随机分为三组:非缺血对照组、缺血再灌注组和缺血预处理组。对各组肝上下腔静脉血进行谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)以及丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)活性及总抗氧化(TAX)能力测定。结果 全肝缺血再灌注后ALT、AST、LDH和MDA含量明显上升(P<0.01),SOD、CAT、GSH-PX活性及TAX能力明显下降(P<0.01,P<0.05);而缺血预处理组与缺血再灌注组比较,ALT、AST、LDH和MDA含量明显下降(P<0.01,P<0.05),SOD、CAT、GSH-PX活性及TAX能力明显上升(P<0.01,P<0.05)。结论 缺血预处理能增强肝组织自身抗氧化能力,减轻肝缺血灌注后氧自由基对肝脏的损伤。     

西罗莫司对异种动脉补片移植后的免疫调节作用研究

目的探讨西罗莫司在异种动脉补片移植中的免疫调节作用。方法选择野生型巴马猪至食蟹猴异种动脉补片移植手术后14 d受体猴的外周血单核细胞(POD14)为研究对象。设置二甲基亚砜(DMSO)对照组(体积比为1︰1 000)和西罗莫司实验组(终浓度为0.1μmol/L和0.5μmol/L),分别培养1.0 d和5.5 d,检测POD14细胞活性;设置DMSO对照组和西罗莫司实验组(终浓度为0.1μmol/L),培养5.5 d,检测POD14细胞中T、B细胞的数量并检测细胞因子含量和信使核糖核酸(mRNA)表达水平。结果与DMSO对照组比较,终浓度为0.1μmol/L和0.5μmol/L的西罗莫司处理1.0 d后,POD14细胞活性降低(P0.01～0.001);终浓度为0.1μmol/L和0.5μmol/L的西罗莫司处理POD14细胞5.5 d后,POD14细胞活性均明显降低(均为P0.001)。与DMSO对照组比较,西罗莫司(终浓度0.1μmol/L)降低POD14细胞中CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T细胞的数量(P0.05～0.01),而CD3-CD20+B细胞数量略有升高(P0.01)。与DMSO对照组比较,西罗莫司实验组的细胞因子干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-5和IL-6含量均明显降低(P0.05～0.001);西罗莫司降低细胞因子IFN-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-2、IL-4、IL-5和IL-6的mRNA表达水平(P0.05～0.001)。结论西罗莫司抑制异种动脉补片移植术后受体猴POD14细胞的增殖,主要机制是降低T细胞数量和抑制免疫排斥相关细胞因子的表达和分泌。     

黑木耳多糖对ICR小鼠皮肤光老化的保护作用

目的:探讨黑木耳多糖(Auricularia auricular polysaccharide,AAP)对ICR小鼠皮肤光老化的保护作用。方法:选取健康雌性ICR小鼠共50只,随机分成5组各10只:正常组(A)、模型对照组(B)、模型+AAP低剂量(50mg/kg.d)灌胃组(C)、模型+AAP中剂量(100mg/kg.d)灌胃组(D)、模型+AAP高剂量(200mg/kg.d)灌胃组(E)。长波紫外线(ultraviolet A,UVA)联合中波紫外线(ultravioletB,UVB)照射小鼠制备皮肤光老化模型。每周一、三、五照射,第1周每次照射时间1h,以后每周依次增加1h,自第5周起为5h,直至第14周照光结束。每次照光前各治疗组小鼠给予不同浓度的AAP灌胃。实验结束后取小鼠背部皮肤用测试盒测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)活力、丙二醛(malondial dehyde,MDA)含量;组织切片HE染色观察皮肤结构改变。结果:与正常组比较,模型对照组皮肤组织中SOD、GSH-PX活力显著降低(P<0.05),MDA含量显著增高(P<0.05);与模型组对照组比较,AAP各灌胃组SOD、GSH-PX活力显著升高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05)。模型对照组皮肤出现皮屑、褐黄、粗糙肥厚、深皱纹、缺乏弹性等光老化特征,组织切片呈现光老化改变。AAP各治疗组皮肤外观及组织学特点均较模型对照组明显改善。结论:AAP能有效提高小鼠抗氧化能力,对小鼠皮肤光老化有保护作用。     

PE P-1-血红素加氧酶-1融合蛋白预处理对L02肝细胞缺氧复氧损伤的影响

目的：评价细胞穿透肽PEP-1介导血红素加氧酶-1（HO-1）预处理对L02肝细胞缺氧复氧损伤的影响。方法利用基因工程手段表达和纯化融合蛋白PEP-1-HO-1（PEP-1-heme oxy-genase-1,PEP-1-HO-1）。使用人肝细胞株（HL-7702）建立培养人肝细胞缺氧复氧模型。按实验需要以10％新生牛血清的DMEM液静置培养L02肝细胞,将细胞进行随机分为7组：A组,正常对照组（常规培养）;B组,缺氧复氧组（缺氧复氧组细胞缺氧18 h,复氧6 h）;C组,PEP-1-HO-1预处理组,按PEP-1-HO-1浓度分为5亚组（C1,0．125μmol/L;C2,0．25μmol/L ;C3,0．5μmol/L;C4,1．0μmol/L;C5,2．0μmol/L,缺氧前以PEP-1-HO-1融合蛋白预处理2 h,缺氧18 h,复氧6 h）。复氧结束后,收集各组细胞及培养液上清,检测MDA、LDH、AST、ALT含量及SOD活性。结果缺氧复氧组较正常对照组相比,MDA、LDH、AST及ALT水平明显升高（P＜0．05）,而 SOD 水平下降（P＜0．05）;PEP-1-HO-1预处理组与缺氧复氧组相比,预处理组能明显降低MDA、LDH、AST及ALT水平（P＜0．05）,使得SOD水平上升（P＜0．05）,且在一定浓度下与剂量呈正相关。结论 PEP-1-HO-1融合蛋白预处理可减轻细胞缺氧复氧损伤。     

淀粉样肽前体蛋白17肽对紫外线照射后皮肤成纤维细胞内活性氧簇和基质金属蛋白酶-1 mRNA表达的作用

目的 通过建立体外培养人皮肤成纤维细胞的紫外线损伤模型,探讨淀粉样肽前体蛋白319～335肽段(APP17肽)对紫外线(ultraviolet, UV)照射后人皮肤成纤维细胞的保护作用及其可能的机制.方法 从健康青年男性的包皮组织原代培养成纤维细胞.UV照射培养的成纤维细胞,并给予不同浓度的APP17肽保护.MTT法检测细胞活性,激光共聚焦显微镜检测活性氧(ROS)的水平,实时定量RT-PCR方法检测基质金属蛋白酶-1(MMP-1)mRNA的表达.结果 成功培养原代人皮肤成纤维细胞.并建立体外UV损伤模型.UV照射后细胞活性下降(P<0.05),细胞内ROS产生增多(P<0.05),MMP-1 mRNA表达增加1.78倍(P<0.01).APP17肽可增加UV照射后细胞活性(P<0.05),降低细胞内ROS水平(P<0.05).抑制MMP-1 mRNA表达(P<0.05).结论 APP17肽对成纤维细胞的UV损伤有保护作用,APP17肽的光保护作用可能与其抑制ROS产生有关.     

虾青素对成骨细胞羟自由基氧化损伤的影响

目的：在H2O2胁迫下，研究虾青素增强成骨细胞抗自由基损伤的作用。方法：用H2O2作用MC3T3-E1成骨细胞，建立自由基损伤细胞模型。培养的成骨细胞分为对照组、模型组、虾青素低剂量组（1×10^-7mol／L）、虾青素中剂量组（1×10^-6mol／L）和虾青素高剂量组（1×10^-5mol／L）。测定不同处理组细胞活力、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性、活性自由氧（reactive oxygen species，ROS）含量、脂质过氧化物（lipid oxygen，IJP0）含量，同时利用荧光偏振法测定细胞膜流动性。结果：模型组细胞活力、SOD活性、细胞膜流动性均比各剂量虾青素组显著降低（P〈0．01），而ROS、LPO含量均比各剂量虾青素组显著升高（P〈0．01）。结论：H2O2摄入会导致大鼠成骨细胞的氧化损伤，而虾青素可以预防或降低此类损伤对细胞的影响。     

还原型谷胱甘肽对维持性血液透析患者抗氧化能力的影响

目的通过观察静脉注射还原型谷胱甘肽对维持性血液透析（MHD）患者氧化应激状态的影响,探讨还原型谷胱甘肽对MHD患者抗氧化能力的作用。方法选择透析龄≥3个月的MHD患者68例,已排除急性感染及其他活动性疾病,按照血液透析治疗的时间分为两组：患者治疗组（38例）,每次透析结束后,静脉注射还原型谷胱甘肽1．2g,3次／周,连续用药8周;患者对照组（30例）,不用还原型谷胱甘肽。分别检测患者治疗前后的血清谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、总同型半胱氨酸（tHcy）等。另选健康对照组30例。结果治疗前,患者治疗组和患者对照组的GSHPx、SOD水平[（583．74±217．05）、（578．82±311．94）μmol／L与（349．23±80．12）、（349．56±75．22）kU／L]显著低于健康对照组[（769．06±302．46）μmol／L与（428．34±15．23）kU／L]（P〈0．01）,MDA、tHcy水平[（4．88±1．13）、（4．79±1．42）nmol／L与（29．65±9．24）、（28．76±9．45）μmol／L]显著高于健康对照组[（3．56±0．46）nmol／L与（24．11±4．45）μmol／L]（P〈0．01或〈0．05）;治疗8周后与治疗前比较,患者治疗组的GSHPx、SOD水平均明显升高（P〈0．05或〈0．01）;MDA水平明显下降（P〈0．01）,tHcy水平也下降,但差异无统计学意义;患者对照组以上各项指标治疗前后均无明显变化,治疗8周后患者治疗组与患者对照组GSHPx、SOD、MDA水平比较差异有统计学意义（P〈0．01或〈0．05）。治疗8周后患者治疗组与健康对照组GSHPx、SOD、MDA、tHcy水平比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论MHD患者普遍存在氧化应激状态,静脉注射还原型谷胱甘肽可明显改善患者的抗氧化能力,从而提高机体对氧化应激的防御功能。     

低剂量长波紫外线反复照射诱导培养成纤维细胞表达基质金属蛋白酶实验研究

目的：探讨长波紫外线引起皮肤光老化、皱纹形成的机制。方法：以7.2J/cm2长波紫外线单次或多次照射培养真皮成纤维细胞,光镜、电镜观察细胞的形态学变化,原位杂交和免疫组化的方法检测基质金属蛋白酶中的间质胶原酶（MMP-1）、间质溶解素-1（MMP-3）mRNA及其共同的组织抑制因子（TIMP-1）蛋白在各实验组成纤维细胞的表达并进行定量分析。结果：在长波紫外线累积剂量达57.6J/cm2后,培养真皮成纤维细胞开始出现具有细胞衰老特征性的形态改变,但仅经两次7.2J/cm2 UVA照射,培养成纤维细胞就出现MMP-1、MMP-3 mRNA的表达并随累积照射剂量增加逐渐增强,但各照射组的TIMP-1蛋白均仅在照射后48h内呈一过性轻度表达。结论：皮肤光老化皱纹形成可能与长波紫外线照射引起真皮成纤维细胞基质金属蛋白酶及其组织抑制剂表达失衡密切相关。     

体外L02肝细胞氧化损伤模型的构建

目的探讨L02肝细胞氧化损伤模型的构建方法。方法将L02肝细胞培养后分为损伤3 h组、6 h组和12 h组,每组再根据加入不同浓度的过氧化氢(H2O2)分为100、200、300、500、750、1 000μmol/L 6个亚组,对照组不加入H2O2,分别在培养箱中继续孵育3 h、6 h或12 h后进行细胞计数试剂盒(CCK)-8检测。另1组L02肝细胞培养后分为损伤3 h组、6 h组和12 h组,损伤3 h组再根据加入H2O2浓度不同分为100、200、300、500、750μmol/L 5个亚组,损伤6 h组分为100、200、300、500μmol/L 4个亚组,损伤12 h组分为100、200、300μmol/L 3个亚组,对照组不加入H2O2,分别在培养箱中继续孵育3 h、6 h或12 h后进行Annexin V-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染流式细胞检测。损伤模型的建立及鉴定:L02肝细胞培养后损伤组加入200μmol/L H2O2,对照组不加入H2O2。在培养箱中继续孵育6 h后检测细胞线粒体膜电位、丙二醛(MDA)、活性氧自由基(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)等指标。结果损伤3 h组中,200、300、500、750、1 000μmol/L等各亚组的细胞存活率与对照组比较,差异有统计学意义(均为P0.01);损伤6 h组中,各亚组细胞存活率与对照组比较差异均有统计学意义(均为P0.01);损伤12 h组中,各亚组存活率与对照组比较差异均有统计学意义(均为P0.01)。3 h H2O2浓度与细胞存活率的相关系数为-0.993,6 h组为-0.955,12 h组为-0.819。Annexin V-FITC/PI双染检测不同浓度、不同作用时间的H2O2损伤情况下细胞凋亡/坏死率:损伤3、6、12 h组中,损伤各亚组与对照组比较,差异均有统计学意义(均为P0.01)。3 h组H2O2浓度与细胞凋亡或坏死率的相关系数为0.971,6 h组为0.992,12 h组为0.986。与对照组比较,200μmol/L H2O2作用6 h处理L02肝细胞损伤组的线粒体膜电位、MDA、ROS、SOD、ALT、AST差异均有统计学意义(均为P0.01)。结论 200μmol/L H2O2作用6 h处理L02肝细胞是体外模拟缺血-再灌注或氧化损伤的良好模型。     

含磷酸肌酸心脏停搏液对鼠供心的心肌保护作用

目的探讨含磷酸肌酸的心脏停搏液对离体心脏的保存效果，以延长供体心脏缺血的保存时间，提高心脏移植的效果。方法将20只Wistar大鼠随机分成两组，对照组（n=10）：使用冷晶体St．ThomasⅡ心脏停搏液灌注保护供心；实验组（n-10）：灌注含磷酸肌酸钠（2．5g／L）的冷晶体St．ThomasⅡ心脏停搏液保护供心。鼠心于低温保存4h后取心肌组织，测定心肌组织中三磷酸腺苷（ATP）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性。在光学显微镜和电子显微镜下观察心肌组织结构变化及线粒体水肿情况。结果供心冷藏保存4h后，实验组心肌组织中ATP含量明显高于对照组（2．75±0．99μmol／mg vs．1．77±0．86μmol／mg，P〈0．05）；SOD活性明显高于对照组（49．6±2．52U／mg vs．45．27±2．21U／mg，P〈0．05）。电子显微镜下观察：对照组心肌细胞核固缩，核膜内染色质凝聚、溶解，线粒体嵴间隙消失，间质血管内皮坏死；实验组心肌细胞核位于中心区，肌节各带结构清晰，肌质网扩张，闰盘各带连接结构清晰。结论含磷酸肌酸的心脏停搏液能明显增强供心的心肌保护作用。     

TGF-β1对UVA照射皮肤成纤维细胞Ⅰ型，Ⅲ型胶原合成和表达的影响

目的：探讨转化生长因子-β1（tansforming gowth factor—beta 1,TGF—β1）对长波紫外线（ultraviolet A,UVA）照射皮肤成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原合成和表达的影响。方法：通过MTT法检测TGF-β1干预后成纤维细胞增殖活性,选择UVA照射剂量为15J／cm^2,联免疫法（ELISA）测定不同剂量即TGF—β1小剂量组（UVA＋TGF—β1 0．1ng／ml）、中剂量组（UVA＋TGF—β1 1ng／ml）、大剂量组（UVA＋TGF—β1 10ng／ml）处理后成纤维细胞清夜中Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量,半定量RT—PCR检测成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA表达。结果：UVA照射体外培养的皮肤成纤维细胞,导致成纤维细胞增殖活性下降,给予不同剂量TGF-β1干预后,成纤维细胞增殖活性与UVA照射组比较,明显提高;成纤维细胞上清液中Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量增加,成纤维细胞内Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA表达增强。结论：TGF-β1可提高UVA照射体外培养成纤维细胞增殖活性;增加UVA照射体外培养的皮肤成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量,增强成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA表达,对皮肤成纤维细胞起保护作用。     

参芎注射液对肾缺血再灌注损伤大鼠的保护作用

目的观察参芎注射液对肾缺血再灌注损伤大鼠肾组织核因子-κB（NF-κB）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、丙二醛（MDA）水平和超氧化物歧化酶（SOD）活性的影响,探讨其肾保护作用机制。方法将24只SD大鼠随机分为假手术对照组、缺血再灌注组、参芎预处理组,每组8只。免疫组织化学法检测各组大鼠肾组织NF-κB蛋白表达,酶联免疫吸附法检测肾组织TNF-α含量,用MDA和SOD试剂盒分别检测肾组织MDA含量和SOD活性。结果①与假手术对照组相比,缺血再灌注组大鼠肾组织NF-κB蛋白表达、TNF-α和MDA含量明显升高,差异均有统计学意义（P〈0．01）;而SOD的活性明显降低,差异有统计学意义（P〈0．01）。②与缺血再灌注组相比,参芎预处理组大鼠肾组织NF-κB蛋白表达、TNF-α和MDA含量降低,差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）;而SOD的活性明显升高,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论参芎注射液对肾缺血再灌注损伤有一定的保护作用,其机制可能与抗自由基氧化损伤以及抑制炎性细胞因子NF-κB和TNF-α的表达有关。