慢性铅暴露对小鼠CaMKII蛋白表达的影响

目的观察和探讨铅对小鼠海马钙/钙调素依赖性蛋白激酶II(CaMKII)蛋白表达的影响。方法小鼠出生第1 d起,染铅组母鼠开始通过饮水饲以不同浓度醋酸铅2.4,4.8,9.6 mmol/L。幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与母鼠饮用浓度相同的含铅水。分别在14,28,42,56 d处死小鼠,用蛋白免疫印记法观察各组小鼠海马区CaMKII蛋白表达状况。结果慢性铅暴露对小鼠脑海马CaMK II蛋白表达总体上呈现下降趋势,2.4 mmol/L染铅组中,14 d CaMKII蛋白表达呈现上升趋势,与相应天数对照组相比差异无统计学意义;4.8,9.6 mmol/L染铅组中,CaMKII蛋白表达与相应期对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论铅扰乱CaMKII蛋白正常表达。     

慢性铅暴露对小鼠pCREB蛋白表达影响

目的探讨铅对小鼠海马磷酸化环磷酯腺苷（cAMP）反应成分结合蛋白（pCREB）表达的影响。方法小鼠出生第1 d起染铅组母鼠开始通过饮水饲以2.4,4.8,9.6mmol/L浓度醋酸铅。幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与母鼠饮用浓度相同的含铅水。分别在14,28,42,56 d处死小鼠,用蛋白免疫印记法观察各组小鼠海马区pCREB蛋白表达状况。结果慢性铅暴露小鼠脑海马pCREB蛋白的表达总体上呈现下降趋势,与对照组比较,2.4mmol/L铅暴露使14 d小鼠pCREB蛋白表达升高,但差异无统计学意义（P〉0.05）;而4.8,9.6mmol/L铅暴露组pCREB蛋白表达一直维持在较低的水平,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论铅扰乱pCREB蛋白正常表达。     

慢性铅暴露对小鼠CaMK Ⅱ蛋白表达的影响

目的观察和探讨铅对小鼠海马钙／钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）蛋白表达的影响。方法小鼠出生第1d起，染铅组母鼠开始通过饮水饲以不同浓度醋酸铅2．4，4．8，9．6mmol/L。幼鼠出生后，先通过哺乳接触铅，断乳后则自行饮用与母鼠饮用浓度相同的含铅水。分别在14，28，42，56d处死小鼠，用蛋白免疫印记法观察各组小鼠海马区CaMKⅡ蛋白表达状况。结果慢性铅暴露对小鼠脑海马CaMKⅡ蛋白表达总体上呈现下降趋势，2．4mmol/L染铅组中．14dCaMKⅡ蛋白表达呈现上升趋势，与相应天数对照组相比差异无统计学意义；4．8，9．6mmol/L染铅组中，CaMKⅡ蛋白表达与相应期对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论铅扰乱CaMKⅡ蛋白正常表达。     

铅对仔鼠海马酸敏感离子通道表达的影响

目的 研究慢性铅染毒对仔鼠海马酸敏感离子通道(ASm)la、2a、2b mRNA和蛋白表达的影响.方法 孕鼠随机分为蒸馏水对照组及0.2%、1.0%醋酸铅组,每组5只,从妊娠第0天起开始通过自由饮水染铅.幼鼠出生后,先经哺乳染铅,断乳后则自由饮用与其母鼠浓度相同的含铅水.分别于出生后第8、50天处死仔鼠,测定其脑铅含量,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blotting)法分别观察各组仔鼠海马ASIC1a、ASIC2a、ASIC2bmRNA及蛋白的表达情况.结果 同一发育时期的染铅组仔鼠脑铅含量高于对照组,同一剂量染铅组出生后50 d仔鼠脑铅含量高于生后8 d的仔鼠,差异均有统计学意义(P＜0.01).与相应的对照组相比.1.0%醋酸铅组不同发育时期仔鼠海马ASIC1a mRNA表达升高,差异有统计学意义(P＜0.01).染铅组不同发育时期仔鼠海马ASIC1a蛋白表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05).染铅组ASIC2a、ASIC2b的mRNA和蛋白表达与对照组的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 慢性铅染毒可对仔鼠海马ASIC1a mRNA和蛋白表达产生影响.     

铅对仔鼠海马蛋白激酶C和钙调蛋白表达的影响

目的 研究慢性铅染毒对不同发育时期仔鼠海马蛋白激酶C(PKC)、钙调蛋白(CaM)表达的影响.方法 孕鼠随机分为蒸馏水对照组、0.2%醋酸铅和1.0%醋酸铅组,从怀孕第0灭起开始通过自由饮水染毒.幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与其母鼠浓度相同的含铅水.分别于出生后8、50 d处死仔鼠,原子吸收光谱法测定脑铅含量,Western-blotting法观察各组仔鼠海马PKC、CaM的蛋白表达情况.结果 同一发育时期的染铅组仔鼠脑铅含量明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).同一剂量染铅组出生后50 d仔鼠脑铅含最明显高于出生后8 d,差异有统计学意义(P＜0.01).不同发育时期的染铅组仔鼠海马的PKC、CaM的蛋白表达均相应地下降,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 仔鼠海马PKC、CaM的蛋白表达降低可能是铅致仔鼠学习记忆功能损害的分子机制之一.     

铅对小鼠海马c-jun表达及学习记忆功能影响

目的　观察铅对小鼠学习记忆功能及海马区c jun表达的影响。 方法　 5～ 6周龄小白鼠交配后 ,通过饮水饲以不同浓度醋酸铅 2 4,4 8,9 6mmol/L。小鼠子代自胚胎期始即暴露于醋酸铅。幼鼠出生后 ,先通过哺乳接触铅 ,断乳后则自行饮用与母鼠饮用浓度相同的含铅水。 6周后用跳台学习试验测试小鼠学习记忆能力 ;最后处死小鼠 ,用RT PCR法观察各组小鼠海马区c junmRNA的表达状况。 结果　 3个染铅组小鼠跳台学习成绩显著低于对照组 (P <0 0 1 ) ;3个染铅组小鼠c junmRNA水平均明显降低 ,并具有剂量效应关系。 结论　c jun基因表达水平的下降可能是铅致小鼠学习记忆功能损害的分子机制之一。     

铅暴露对不同发育阶段仔鼠海马中谷氨酰胺合成酶活力及蛋白表达的影响

目的探讨铅暴露对不同发育阶段仔鼠海马中谷氨酰胺合成酶(GS)活力及蛋白表达的影响。方法将24只孕鼠随机分为4组,分别为对照(蒸馏水)组及0.5、1.0、2.0 g/L铅暴露组,每组6只。采用自由饮水方式进行染毒,母鼠从妊娠第1天至仔鼠断乳(出生后21 d左右);仔鼠从断乳后至出生后(PND)40 d。分别在PND10、20和40 d,测定仔鼠脑组织中铅含量、海马组织中GS活力及其蛋白表达。结果随着铅暴露浓度的升高,仔鼠脑组织中的铅含量呈上升趋势,海马组织中GS活力及其蛋白表达呈下降趋势。结论饮水铅暴露可通过抑制不同发育阶段仔鼠海马中GS蛋白的表达,导致海马中GS活力下降。     

孕期低水平铅暴露对子代大鼠海马神经生长相关蛋白表达的影响

目的 观察孕鼠低水平铅暴露后子代大鼠海马组织神经生长相关蛋白(GAP-43)及其mRNA表达的变化,探讨铅对学习记忆影响的分子机制.方法 孕鼠随机分为对照组及低(125 mg/L)、中(250 mg/L)、高(500 mg/L)3个不同剂量染铅组,每组8只.各组母鼠自受孕1 d起分别给予蒸馏水、125、250、500 mg/L醋酸铅饮水,直到仔鼠出生.分别在仔鼠出生后1、21,60 d取大脑海马组织,氢化物-原子吸收光谱法测定仔鼠海马铅含量,免疫组化和原位杂交方法检测海马CA1区GAP-43蛋白及其mRNA表达的变化.结果 出生后1、21 d时低、中、高剂量染铅组海马铅含量分别为(1.64±0.32)、(2.33±0.42)、(3.28±0.58)μg/L和(0.94±0.18)、(1.27±0.26)、(1.79±0.42) μg/L,与对照组相比,铅含量明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).出生后1 d各剂量染铅组和出生后21 d中、高剂量染铅组CA1区GAP-43蛋白和mRNA表达的积分吸光度均明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),而在60 d时未见明显改变.结论 孕鼠低水平铅暴露后,可以降低子代海马GAP-43蛋白及其mRNA的表达,这可能是铅影响学习记忆的分子机制之一.     

铅对仔鼠海马蛋白激酶C和钙调蛋白基因表达与学习记忆的影响

目的 观察慢性铅染毒对仔鼠海马蛋白激酶C(PKC)、钙调蛋白(CaM)mRNA表达的影响,探讨铅神经毒性的分子机制.方法 孕鼠随机分为对照组、0.2%醋酸铅染毒组和1.0%醋酸铅染毒组,从妊娠第0天开始通过自由饮水染毒.幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与其母鼠相同的饮用水.出生后8 d内行悬崖回避试验,50 d行跳台试验,随后处死仔鼠,原子吸收光谱法测定脑铅含量,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法观察各组仔鼠海马PKC、CaM的mRNA表达情况.结果 同一发育时期的染铅组仔鼠脑铅含量明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);同一剂量染铅组出生后50 d仔鼠脑铅含量明显高于生后8 d,差异有统计学意义(P＜0.01).染铅组仔鼠悬崖回避试验完成率和跳台学习成绩明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).不同发育时期的1.0%醋酸铅染毒组仔鼠海马的PKC、CaM的mRNA表达下降(分别为0.53±0.04、0.59±0.02和0.65±0.01、0.62±0.01),与相应的对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 慢性铅染毒可使仔鼠海马PKC、CaM的mRNA表达降低,这可能是铅致仔鼠学习记忆功能损害的分子机制之一.     

孕哺期铅暴露对仔鼠海马中生长抑素及学习记忆能力的影响

目的:观察孕哺期铅暴露对仔鼠学习记忆能力及海马中生长抑素(SS)表达的影响。方法:母鼠从孕期第1 d至仔鼠出生第30 d分别饮用去离子水(对照组)、0.05%醋酸铅水(染铅1组)、0.1%醋酸铅水(染铅2组)。Y—迷宫试验用于检测仔鼠的学习记忆能力,应用免疫组织化学的方法测定仔鼠海马中SS阳性神经元数量的变化。结果:染铅组与对照组比较,Y—迷宫试验的错误次数明显增多,有统计学差异(P<0.05)。染铅2组与对照组CA1区(P<0.01)及CA3区(P<0.05)比较SS阳性神经元数目均明显减少,染色变浅,有统计学差异;染铅1组与对照组比较CA1区SS阳性神经元变化有统计学差异(P<0.05),CA3区则无此变化。结论:孕哺期母体铅暴露会损害仔鼠的学习记忆能力,可能与海马组织中SS表达的下降有关,而且海马CA1区对铅损害更敏感。     

铅对仔鼠学习记忆及其海马中突触体相关蛋白-25基因和蛋白表达的影响

目的 探讨母体铅染毒对仔鼠学习记忆及海马中突触体相关蛋白-25(SNAP-25)mRNA 表达的影响.方法 雌性小鼠自妊娠第1天开始经饮水染铅(0.3、1.0、3.0g/L),对照组饮蒸馏水,至仔鼠出生后21 d断乳为止.随机抽取各组仔鼠,在出生后第7、14、21天分别测其血液和海马组织中铅的含量;在出生后第21天时,进行水迷宫试验,分别采用反转录-聚合酶链反应和免疫组化方法测定各组海马组织中SNAP-25 mRNA和蛋白的表达.结果 与对照组比较,各剂量染铅组血液、海马组织中铅含量均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05).仔鼠错误次数有随母鼠染铅剂量增加而增加的趋势,1.0、3.0g/L组错误次数分别为5.89±0.54、9.53±1.03,与对照组(1.73±0.07)比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).与对照组相比,染铅组海马中SNAP-25 mRNA和蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 母体铅暴露可导致仔鼠学习记忆功能损害,铅下调SNAP-25 mRNA的表达,可能影响了突触前末梢神经递质的释放,造成神经系统的损害.     

铅对仔鼠学习记忆及其海马组织TNF-α表达影响

目的 探讨母体铅暴露对仔鼠海马CA 1区肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达影响.方法 小鼠自孕第1d开始经饮水染铅(0.3、1.0、3.0 g/L)至仔鼠出生后21 d断乳,对照组饮用不含铅的蒸馏水.每组随机取仔鼠10只于出生后第7、14、21 d检测血铅和海马铅;出生后第21 d,用Y型迷宫测定学习记忆能力,用免疫组化法测定海马CA 1区TNF-α蛋白表达.结果 铅暴露组生后7、14和21 d的仔鼠血铅、海马铅水平均明显高于对照组(P＜0.05).Y型迷宫显示,各染铅组出生后21 d的仔鼠,T1、T2和T3值均低于同期对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).免疫组化显示,与对照组(0.079±0.012)比较,低、中、高剂量染铅组仔鼠海马CA 1区TNF-α免疫组化阳性反应物面密度(0.154±0.013、0.197±0.018、0.201±0.015)明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.05);中、高剂量染铅组仔鼠海马CA 1区TNF-α阳性反应物平均灰度值(102.36±36.76、86.36±31.52)明显低于对照组(223.41±52.21),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 母体孕哺期铅暴露,引起仔鼠海马CA 1区TNF-α高表达,学习记忆能力下降.     

铅对幼鼠脑海马区Bcl-2、Fas蛋白表达的影响

目的：通过大鼠孕期及哺乳期不同剂量染铅所致幼鼠染铅模型，测定出生后7天、21天幼鼠血铅，脑铅含量，同时测定脑组织海马区细胞凋亡相关基因Bcl-2、Fas蛋白表达情况。方法：血铅、脑铅测定采用原子吸收石墨炉法；Bcl-2、Fas蛋白表达采用免疫组化法测定。结果：对于出生后7天幼鼠，染铅组与对照组相比，其脑组织Bcl-2蛋白表达降低，而Fas蛋白表达升高，但对于出生后21天幼鼠，则没有这种改变。结论：染铅可能通过改变发育期脑组织细胞凋亡相关基因Bcl-2、Fas蛋白表达使细胞凋亡数量改变，从而导致铅的发育神经毒性。     

孕期低水平铅暴露对子代大鼠海马肾母细胞瘤过度表达基因的影响

目的 观察孕鼠低水平铅暴露对子代大鼠海马组织肾母细胞瘤过度表达基因(NOV)蛋白及mRNA表达的影响,探讨铅影响学习记忆的分子机制.方法 孕鼠随机分为对照组及低剂量(125 mg/L)、中剂量(250 mg/L)、高剂量(500 mg/L)3个染铅组,每组8只.母鼠自受孕1d起分别给予蒸馏水和不同剂量的醋酸铅饮水,直到仔鼠出生.分别在胚胎18 d及仔鼠出生后1、21、60 d时,采用氢化物-原子吸收光谱法测定仔鼠血铅、海马铅含量,免疫组化和原位杂交方法 检测海马NOV蛋白及mRNA的变化.结果 低、中、高剂量染铅组胚胎18d及仔鼠出生后1、21 d时,血铅[(312.46±43.55)、(419.35±62.25)、(541.45±47.90)μg/L、海马铅[(2.10±0.18)、(2.58±0.12)、(3.41±0.23)μg/L]明显高于对照组[分别为(214.31±40.77)、(0.76±0.13)μg/L伽,差异有统计学意义(P<0.05),至60 d龄时,染铅组仔鼠血铅、海马铅含量与对照组无明显差异.免疫组化结果 显示,中、高剂量染铅组在仔鼠出生后1、21 d时,NOV蛋白表达量明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),60 d龄时无明显差异.原位杂交结果 显示,各染铅组在胚胎18 d及仔鼠出生后1、21 d时,NOV mRNA表达量明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),60d龄时,仅高剂量组NOV mRNA表达量(0.0355±0.0100)与对照组(0.0900±0.0200)的差异有统计学意义(P<0.01).结论 孕期低水平铅暴露可使子代海马组织中NOV蛋白及其mRNA表达降低,这可能是铅影响学习记忆能力的分子机制之一.     

铅致新生大鼠脑氧化损伤及细胞凋亡的某些改变

目的探讨发育期铅暴露所致神经毒性机制.方法母鼠从怀孕始至仔鼠出生后7 d染铅致新生大鼠染铅模型,测定新生大鼠血、脑铅含量;同时测定脑组织脂质过氧化物(LPO)水平、谷胱甘肽(GSH)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;另外应用原位末端标记TUNEL法测定脑组织海马区及其附近皮质细胞凋亡数量.结果染铅使出生后7 d幼鼠脑LPO水平升高,GSH含量下降,SOD活性降低,且海马区附近皮质细胞凋亡数量增加(高剂量染铅组每计数100个细胞中凋亡细胞数为22.67±4.03,而对照组为17.44±3.32,P＜0.05.) 结论铅所致发育神经毒性可能与活性氧自由基(ROS)增加和细胞凋亡数量升高有关.     

孕哺期铅暴露对仔鼠学习记忆能力及海马中精氨酸加压素的影响

目的 观察孕哺期铅暴露对仔鼠学习记忆能力及海马中精氨酸加压素(AVP)表达的影响.方法 母鼠从孕期第1天至仔鼠出生第30天分别饮用去离子水(对照组)、0.05%醋酸铅水(染铅1组)、0.10%醋酸铅水(染铅2组).Y-迷宫试验用于检测仔鼠的学习记忆能力,应用免疫组织化学的方法测定仔鼠海马中AVP阳性神经元数量的变化.结果 染铅组与对照组比较,Y-迷宫试验的错误次数明显增多,差异有统计学意义(P＜0.05).染铅2组与对照组比较,CA1区及CA3区AVP阳性神经元数目均明显减少,染色变浅,差异有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05);染铅1组与对照组比较,CA1区AVP阳性神经元变化的差异有统计学意义(P＜0.05),CA3区则无此变化.结论 孕哺期母体铅暴露会损害仔鼠的学习记忆能力,可能与海马组织中AVP表达的下降有关,而且海马CA1区对铅损害更敏感.     

铅对原代培养海马神经细胞DNA损伤作用

目的 通过检测细胞生长抑制和凋亡相关的DNA损伤蛋白在大鼠原代培养海马细胞中的表达与原代培养海马细胞DNA损伤的相关性,探讨铅的神经毒理作用机制.方法 原代培养的海马神经细胞,于培养7 d全量更换培养液后加入不同浓度醋酸铅0.2、1.0、10 μmol/L,置于37℃、5%CO2培养箱继续培养24 h;蛋白免疫印迹(western blot)方法检测生长抑制DNA损伤诱导因子(GADD 153)表达;彗星实验检测大鼠海马原代培养神经细胞DNA损伤程度.结果 与对照组比较,随着染铅浓度增高,原代培养的海马神经细胞中的DNA的尾距(OTM)和彗尾值增大,0.2、1.0μmol/L染铅组GADD 153蛋白表达较弱,染铅浓度为10 μmol/L时,表达明显增加.结论 细胞DNA损伤与GADD 153蛋白表达呈一定相关性.     

枸杞多糖对染铅小鼠学习记忆及海马区PKC影响

目的探讨枸杞多糖对染铅小鼠学习记忆功能和海马区蛋白激酶C(Protein kinase C,PKC)的影响。方法将实验小鼠随机分为5组,即空白对照组、染铅模型组、枸杞多糖高、中、低3个剂量组,枸杞多糖各剂量组于染铅后第2d灌胃给药,每天1次,于第2,4周测小鼠到达迷宫避难台所需要的时间,第4周测血铅浓度和海马区PKC含量。结果枸杞多糖各剂量组与染铅模型组比较,血铅浓度[枸杞多糖各剂量组(0.65±0.28)～(0.11±0.13)mg/L,模型组(1.68±0.19)mg/L]明显降低,到达避难台的时间也明显减少;而海马区PKC含量[枸杞多糖各剂量组(73.23±6.52)～(96.33±8.03)mmol/L,模型组(62.26±7.21)mmol/L]明显升高,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论枸杞多糖可促进小鼠体内铅的排出,改善染铅小鼠的学习记忆功能,抑制海马区PKC含量降低。     

钙对染铅大鼠海马NMDAR和mGluR5受体介导相关基因mRNA及CaMKⅡ蛋白表达的影响

目的通过研究钙对染铅大鼠海马NMDAR和m Glu R5受体介导相关基因mRNA及CaMKII蛋白表达的影响,为进一步以补钙预防铅的危害提供理论依据。方法选择体质量(50±2)g的清洁级雄性SD大鼠60只,共分五组,每组12只,分别为对照组(基础饲料,蒸馏水)、染铅组(基础饲料,0.2%醋酸铅饮水)、试验Ⅰ组(基础饲料添加0.5%碳酸钙,0.2%醋酸铅饮水)、试验Ⅱ组(基础饲料添加1%碳酸钙,0.2%醋酸铅饮水)和试验Ⅲ组(基础饲料添加2%碳酸钙,0.2%醋酸铅饮水)。连续饲养60 d后,取海马,用荧光定量RT-PCR法测定海马中Grm5、Camk2a、Grin1、Homer1、Prkca和ERK2的mRNA表达量,Western-blotting测定大鼠海马中CaMKII的蛋白表达量。结果与对照组相比,染铅组海马中Grm5、Camk2a、Grin1、Homer1、Prkca、ERK2的mRNA表达量及CaMKII的蛋白表达量均极显著降低(P0.01)。与染铅组相比,试验组钙浓度在一定范围内越高,目的基因表达量相对升高越多,试验Ⅱ组CaMKII的蛋白表达量极显著上升(P0.01)。结论一定浓度的钙可干预铅致大鼠海马组织的损伤。     

铅对小鼠大脑皮层神经元磷脂酰肌醇3激酶影响

目的 观察慢性铅暴露对小鼠大脑皮层神经元磷脂酰肌醇3激酶(PI3Ks)表达的影响.方法 昆明系小鼠出生第1 d通过饮水饲以不同浓度醋酸铅(1.2,2.4,4.8,7.2,9.6 mmoL/L)制备染铅模型,对照组饲以等量自来水;6周后用石墨炉原子吸收光谱法测血铅脑铅浓度;用蛋白印迹(Western blot)法观察各组小鼠大脑皮层神经元PI3Ks的表达状况.结果 慢性染铅组小鼠大脑皮层神经元PI3Ks表达水平呈下降趋势,各染铅组PI3Ks表达与对照组比较,差异有统计学意义,并具有浓度效应关系(P<0.05);PI3Ks表达与血铅浓度呈负相关(r=-0.82,P<0.01).结论 慢性染铅可使大脑皮层神经元细胞PI3Ks表达水平下降;这可能是铅导致学习记忆功能损伤的原因之一.