长效重组人干扰素的研究进展

干扰素(interferon,IFN)是机体在细菌或病毒刺激下产生的一类细胞因子,是由单核细胞、淋巴细胞以及体细胞所产生的一类糖蛋白,是机体防御体系重要的组成部分.根据细胞来源和受体的不同,干扰素可分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型.Ⅰ型包括IFN-α和IFN-β,其中IFN-α有二十余个亚型,IFN-β仅有一个亚型,Ⅰ型干扰素具有抗病毒,免疫调节和抗肿瘤等作用.Ⅱ型只有IFN-(γ),且只有一种亚型,除具有抗病毒作用,抗增殖活性外,其主要生物学活性为免疫调节作用.Ⅲ型包括IFN-λ1(IL-29)、IFN-λ2(IL-28A)和IFN-λ3(IL-28B).其中Ⅰ和Ⅱ型干扰素已被批准用于人类疾病的治疗,2003年发现的Ⅲ型干扰素,尚未被批准用于人类疾病的治疗[1].     

一起疑为杯状病毒腹泻暴发的流行病学调查

目的　调查四川省广安市感染性腹泻暴发的流行情况 ,分析发病原因。方法　采用随机抽样的方法对广安市经济技术开发区、广安区机关单位、居委会和农村进行感染性腹泻的流行病学调查。所采粪便标本进行常规检测和肠道致病菌培养 ,用PAGE、ELISA和RT PCR方法进行腹泻病毒病原检测。结果　在调查的 4 5 6 7人中 ,发病 94 2例 ,罹患率为 2 0 .6 3% ,无死亡病例。发病率农村高于城区 (χ2 =2 2 .2 9,P <0 .0 0 5 ) ,5月 10～ 2 5日为发病高峰。 2 6份标本中 ,ELISA方法检出 4份杯状病毒阳性 ,RT PCR方法确认 1例。结论　本次感染性腹泻暴发流行的病原可能为杯状病毒     

人博卡病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备

目的 表达纯化人博卡病毒( human Bocavirus,HBoV) VP2蛋白,采用杂交瘤方法制备抗HBoV VP2蛋白的单克隆抗体.方法 应用原核表达载体pET-30a和大肠埃希菌表达VP2蛋白,并用固定化金属亲和层析,纯化后的蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术和间接ELASA方法筛选阳性的杂交瘤细胞,并对单克隆抗体进行分型检测和滴度测定.结果 表达并纯化获得了重组HBoV VP2蛋白,利用杂交瘤技术得到单克隆IgG抗体,抗体效价达到1∶4×105.结论 利用HBoV VP2蛋白免疫制备了单克隆抗体,并具有较高的效价.本研究为快速诊断和研究HBoV打下基础.     

金振口服液抗甲型 H1N1 流感病毒作用实验研究

目的 观察金振口服液对甲型 H1N1 流感病毒抑制作用。方法 采用体外抗病毒实验,观察金振口服液对流感病毒的抑制作用;采用体内实验,以流感病毒感染小鼠,观察小鼠生存时间、死亡率及肺组织病变程度。结果金振口服液体外对甲型 H1N1 流感病毒有一定抑制作用,体内则能明显延长感染小鼠的生存时间,显著降低肺湿质量 (P＜0.05、0.01),减轻肺组织病变程度。结论金振口服液体内外均有一定的抗甲型 H1N1 流感病毒作用。     

尼帕病毒N基因核酸检测方法对假病毒阳性标准品的制备及鉴定

  目的  针对致死率极高的尼帕病毒,制备安全、稳定的含有尼帕病毒N基因片段的重组假病毒颗粒阳性标准品。  方法  人工合成含有尼帕病毒N基因片段的核苷酸序列并导入CD513B慢病毒载体,与包装质粒同时转染HEK293T细胞,超速离心浓缩纯化,电镜观察假病毒颗粒形态,感染实验验证假病毒功能,并进行线性、稳定性和均一性检测。  结果  包装并纯化后的假病毒颗粒浓度较高,直径在100～200 nm,可见明显的G蛋白刺突,感染实验绿色荧光蛋白信号强且不同温度下储存稳定性良好,均一性检测变异系数小于1%。   结论  成功构建含有尼帕病毒N基因片段的假病毒颗粒,可作为阳性对照品在尼帕病毒核酸提取和检测过程中实现全程质量控制。     

中国湖南地区人偏肺病毒的基因分型及其膜蛋白G基因特征的分析

目的 研究中国湖南地区人偏肺病毒(hMPV)的基因分型及其膜蛋白G序列的遗传学特征,比较分析其区域性流行特点.方法收集2005年中国湖南地区232份住院儿童鼻咽抽吸物(NPA)样本进行常见呼吸道病毒筛查,并扩增hMPV阳性样本的膜蛋白G全序列,与GenBank中已知hMPV参考株及其他地区公布的相关资料进行比对、进化等分子遗传学特征分析.结果从232份临床样本中共检测得到17份(7.3%)hMPV阳性样本,与其他病毒混合感染率达35%.扩增出其中13份hMPV样本的G蛋白全序列,分属于4种亚型(A1、A2、B1、B2).核酸长度类型有4种(711,675,660,696nt),N-连接糖基化位点数目和位置、半胱氨酸残基数目等特征与已报道的同期北京地区、日本、北美等地区hMPV调查分析结果不尽一致.结论中国湖南地区与其他地区同期hMPV调查分析结果各有特点,反映出hMPV变异显著,具有明显的地区流行特征.     

轮状病毒疫苗发展及现状

人轮状病毒（HRV）是引起全世界婴幼儿严重胃肠炎和脱水的最主要病因，几乎所有儿童在出生后3-5年都感染过HRV。在发展中国家和发达国家中HRV感染情况相似，公共卫生条件的改善不能够减少轮状病毒腹泻的发病率。另外，流行病学的研究表明自然感染HRV后，可降低随后感染的发病率和严重程度。因此，疫苗对于预防HRV感染是一种有效可行的方法，本文对轮状病毒疫苗发展及现状作一综述。     

二氧化钛纳米颗粒和雌二醇对小鼠子宫脏器系数和过氧化物酶活性的影响

目的　探讨二氧化钛 (TiO2 )纳米颗粒对 1 7β 雌二醇 (1 7β E2 )生物活性的影响。方法　去卵巢小鼠连续 3天 ,每日 1次同时腹腔注射纳米TiO2 [1 0 ,50 ,2 50mg/ (kg·d) ]和 1 7β E2 [0 0 2 μmol/ (kg·d) ]后 ,测定子宫脏器系数和过氧化物酶 (POD)活性。结果　同时给予纳米材料TiO2 和 1 7β E2 使小鼠子宫脏器系数和POD活性均升高。其中同时给予 1 0mg/ (kg·d)纳米TiO2 组增加比较明显 ,而 2 50mg/ (kg·d)纳米TiO2 组增加最少。结论　纳米TiO2 具有增强 1 7β E2 生物活性的作用。     

干扰素λ1在CHO细胞中的表达

目的 构建干扰素λ1表达载体PCI-dhfr-λ1和连接增强子SP163的表达载体PCI-dhfr-SP163-λ1,并在CHO(dhfr-)细胞中表达.方法 在合成的干扰素λ1基因中引入相应酶切位点,并通过融合PCR获得连接增强子SP163-λ1基因,测序正确后将该基因插入表达载体PCI-dhfr,构建重组表达载体PCI-dhfr-λ1和PCI-dhfr-SP163-λ1.将所构建的重组表达载体用脂质体法转入CHO(dhfr-)细胞,通过间接免疫荧光法和Western Blot鉴定了λ1蛋白的表达,应用细胞病变抑制法初步鉴定了λ1蛋白的抗病毒活性.结果 成功构建了干扰素λ1真核表达载体PCI-dhff-λ1和PCI-dhfr-SP163-λ1.免疫荧光结果显示分别转染了两种表达载体的CHO(dhfr-)细胞均能表达干扰素λ1蛋白,SP163增强子明显增强了干扰素λ1蛋白的表达,Western Blot结果显示转染SP163的CHO(dhfr-)细胞表达干扰素λ1蛋白.通过细胞病变抑制实验,在转染细胞48h后的细胞培养液中检测到了干扰素λ1的抗病毒活性.结论 本研究成功的在CHO(dhfr-)细胞中表达了干扰素λ1,表达的蛋白具有抗病毒活性,为进一步建立稳定表达干扰素λ1的细胞系提供了条件.     

金振口服液抗甲型H1N1流感病毒作用实验研究

目的 观察金振口服液对甲型H1N1流感病毒抑制作用.方法 采用体外抗病毒实验,观察金振口服液对流感病毒的抑制作用;采用体内实验,以流感病毒感染小鼠,观察小鼠生存时间、死亡率及肺组织病变程度.结果 金振口服液体外对甲型H1N1流感病毒有一定抑制作用,体内则能明显延长感染小鼠的生存时间,显著降低肺湿质量(P＜0.05、0.01),减轻肺组织病变程度.结论 金振口服液体内外均有一定的抗甲型H1N1流感病毒作用.