ELISA法筛选乙肝特异免疫血浆抗-HBs

我国是乙型肝炎高流行区[1],母婴传播是乙肝病毒的重要传播途径之一.有报道[2,3],HBsAg、HBeAg双阳性母亲的新生儿,乙肝病毒感染率为80%～95%.采用乙肝免疫球蛋白和乙肝疫苗分别作被动、主动免疫,在阻断母婴传播中有明显的效果.过去采集制备乙肝免疫球蛋白的高效价乙肝特异免疫血浆(以下简称乙免血浆)时,均用间接血凝法(PHA)和放射免疫法(RIA)检测抗-HBs,作者比较了ELISA法与PHA法和KRA法定量测定血浆中抗-HBs效价,ELISA法更适用于筛检高效价乙肝免疫血浆. 1 材料与方法 1.1 试剂抗-HBs ELISA试剂盒:科华公司出品;抗-HBs RIA试剂盒:北京生物制品研究所产品;PHA诊断试剂:国内A(武汉生物制研究所)、B(成都生物制品研究所)两厂家生产. 1.2 仪器设备 FAME全自动酶免分析系统、Atplus-2自动加样系统均系瑞士哈美顿(Hamilton BonaduaAG)科学仪器设备公司.     

青岛地区291782例无偿献血者艾滋病检测结果分析

目前,国家规定采供血机构对采集的所有血液,使用两种不同厂家ELISA试剂,进行艾滋病抗体初筛检测,以阻断艾滋病的输血传播。笔者对青岛地区2004~2007年的291782份无偿献血者血液的HIV检测结果进行了分析,ELISA实验结果阳性141例,上报确认实验室用确认实验方法确认,8例为阳性,抗体不确定19例,其余114例均为阴性。现分析报告如下:1材料与方法1.1标本来源2004年1月1日~2007年8月30日初复检291782份无偿献血者的标本。1.2检测仪器和试剂Freedom evo200和RSP150全自动加样仪(德国帝肯),FAME2430酶免系统(瑞士)。国产酶免抗-HIV试剂(珠海丽珠)、第四代进口酶免HIV检测试剂(生物梅里埃),WB确认试剂(美国MP生物医学),2NCU抗-HIV室内质控血清购自卫生部临床检验中心。1.3 HIV初筛检测严格按照各厂家提供的试剂说明书进行操作,试剂均经国家生物制品检定所批检合格,并且在试剂的有效期内使用。使用全自动加样仪和全自动酶免系统,用国产酶免抗-HIV试剂(珠海丽珠)和第四代进口酶免HIV检测试剂(生物梅里埃),同时对无偿献血者标本进行两遍抗-HIV检测...     

全自动酶免疫分析系统加样容量的双波长比色校正

实验室徽容量器具的校正大多采用经典的水银重量法,其结果准确可靠但操作繁琐[1,2]．千分尺校正法又只能校正刻度吸管[3],且需要特定仪器。对于微量加样器的校正则采用22℃蒸馏水称重法（国际标准ISO／DIS865－1）,该法对环境条件和称星条件要求极高。这些方法均不适合校正全自动酶免疫分析系统的加样针及试剂加注部分。本文在参考文献[4,5]的基础上,在微孔板上加注液体,应用酶标仪双波长比色进行间接校正,经在全自动加样仅加样针、酶免疫仪的试剂加注部件上应用,获得良好结果,现报道如下。1材料1．1试验仪器瑞士Megalkx－ID智…     

BEPⅢ处理样品出现结果与加样不符问题的分析

目前,全自动酶标分析系统被越来越多地使用于血站血液标本检测中,我们把在使用过程中曾经遇到过的,因手工进板方向错误,造成比色结果与试验不符的这一问题与大家交流,希望能在以后的工作中得以借鉴。1材料与方法1.1试剂与仪器RSP全自动加样器(瑞士Tecan公司),BEPⅢ全自动酶标分     

全自动加样仪引起抗-HIV拖带阳性分析

目前 ,全国许多血站都使用微机控制的全自动加样器ML/AT进行血液标本加样 ,大大减少了劳动强度 ,避免了手工加样的人为误差 ,提高了血液检测的质量和水平。但偶尔在检测到HIV抗体强阳性标本时 ,可能会在加样、洗涤时污染到邻近标本。笔者在使用该仪器的过程中也遇到 2起共 4例标本 ,因ML/AT加样拖带而引起的抗 HIV阳性 ,现报道如下。1　材料与方法1 1　仪器、软件　ML/AT plus2全自动加样仪和用户软件(瑞士 ) ;AWI自动洗板机 (奥地利 )。1.2　试剂　抗 HIV试剂 (北京金豪 ,批号 :2 0 0 1112 9;厦门新创 ,批号 :2 0 0 110 0 6 0 …     

对STAR在血样本分配过程中针尖挂液现象的解决办法

由于STAR加样钢针的针管和针头都比RSP加样钢针粗大,因此在加血样本或粘稠液体时,STAR针头比较容易挂液体(特别是在加样量<20μl时)[1]。为此,笔者对常规的血样本分配模式进行了优化,选出新的血样本分配液体参数,以期解决其针尖挂液现象,报告如下。1材料与方法1.1检测对象郑州地区无偿献血者血液标本(以下简称血样本),由本中心体采科于2005年6月采集。1.2仪器与试剂STAR全自动加样器、FAME全自动酶免分析仪及校验工具包(瑞士HAMILTON);HBsAg、抗-HCV、抗-HIV诊断试剂盒(北京万泰);ALT速率法试剂盒(北京澳斯邦)。1.3建立血样…     

不同洗板次数对检测抗—HCV的影响

抗 - HCV检测的原理是酶联免疫吸附试验 (EL ISA)中的间接方法 ,其中试验过程中要经过 2次洗板。有时试验过程中个别批号连续出现花板 ,怀疑是洗板的问题 ,为排除此原因 ,作者采用不同样品探讨洗板次数对检测抗 - HCV的 OD值的影响 ,现报告如下。1　材料和方法1.1　材料　抗 - HCV EIA试剂盒 (国内某著名试剂厂家 ) ;RSP2 0 0全自动加样器 (瑞士 Tecan公司 ) ;BEP (德国 Behring公司 )。1.2　方法　取有代表性的 6个样品 ,除每次洗板次数不同外 ,其余按抗 - HCV试剂盒说明书操作。2　结果不同的洗板次数对检测抗 - HCV的 OD值…     

添加样品和试剂后放置时间对酶免法检测HBsAg弱阳性标本结果的影响

影响酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测乙型肝炎病毒标志物 (HBV M )的因素比较多[1] ,特别是药物治疗患者和献血员的低浓度HBV M。本研究对加样时间和试剂平衡进行实验分析 ,以进一步探讨ELISA检测弱阳性HB sAg的影响因素。一、材料和方法1.试剂　HBsAg检测试剂盒 (上海实业科华生     

用圆形分布法分析献血者ALT阳性率的季节规律

对无偿献血 AL T阳性血液进行统计分析 ,探讨 AL T的阳性率季节分布规律 ,以便使医务人员和无偿献血者都能及时采取措施进行预防 ,以降低 AL T的阳性率 ,现报告如下。1　对象和方法1.1　对象　 1999- 0 1～ 2 0 0 2 - 12无偿献血者每个月 AL T阳性数及其阳性率。1.2　方法　 1AL T赖氏法试剂 (上海生物制品研究所 ) ;AL T速率法试剂 (北京澳斯邦公司 ) ;TECAN 2 0 0全自动加样器 (瑞士 Tecan公司 ) ;BEP (德国 Behring公司 ) ;96孔微孔平底板(丹麦 Nucun) ;AT样本处理机 (瑞士 Hamilton公司 ) ;HT 恒温酶标仪 (奥地利 Anthos…     

郑州市无偿献血者抗-HCV阳性率调查

为了解郑州市无偿献血者HCV感染现状,我们对2002/2007年度无偿献血者抗-HCV阳性率进行调查统计学分析,现报告如下。1对象和方法1.1调查对象2002/2007年来该站献血的无偿献血者445 370例,年龄18~55岁。1.2试剂与仪器抗-HCV检测试剂盒分别购自上海科华实业有限公司和北京万泰公司;RSP全自动加样器,瑞士TECAN公司产;BEPⅢ全自动酶免分析系统,德国B erh ing公司产;FAM E全自动酶免分析系统及STAR全自动加样器,均为瑞士H am ilton公司产;HT 3酶标仪,奥地利产。W e llw ash洗板机,芬兰产。1.3调查方法严格按照说明书操作,两种试剂都有反应性的样本判为阳性,一种试剂有反应性,另一种无反应性,则用有反应性的试剂做双孔复试,若有反应性,判为阳性,若无反应性,则判为阴性。1.4统计学处理使用SPSS 10.0统计学软件分析。2结果2002/2007年共检测无偿献血者445 370例,出现HCV阳性者2 610例,抗-HCV阳性率0.59%。见表1。表1 2002/2007年无偿献血者抗-HCV阳性率年份献血人数阳性人数阳性率(%)2002 55512 ...     

金标记免疫层析法联合ELISA法检测HBSAg在无偿献血者中的应用

我国人群的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)携带率接近10%,为了减少HBsAg阳性血液的无效采集,本站对初次献血者用金标记免疫层析法进行HBsAg筛选,阴性者采血,阳性者在其同意下再抽血标本用ELISA法复检,阴性者可采血。报告如下。1材料与方法1·1标本来源金标记法筛查阳性的献血者血清366份。1·2试剂与方法测定HBsAg的金标记免疫层析试条(厦门新创公司);ELISA检测HBsAg试剂(上海科华公司,厦门新创公司)。均在有效期内使用,严格按照试剂盒说明书操作。1·3仪器STAR全自动加样仪;FAME全自动酶联检测仪。1·4结果判断金标记试条在检测线…     

STAR全自动加样系统参数设置优化的探索

目的探索血站常用酶免设备STAR全自动加样仪加样参数的优化设置,提高加样准确率和工作效率。方法根据各试剂说明书要求的加样量,设定仪器加样的目标值(target in),仪器加样后,用质检合格的加样枪对比仪器实际加样量与目标值差距,不断修正,最终设定一个校正值(corrected in)。结果摸索出血站常用酶免试剂样本及样本稀释液的STAR加样曲线,设定了血站酶免检测各个常用目标值的校正值,并优化了本站8种试剂及留样板的加样顺序。结论采用厂家设定的通用参数或工程师专为用户设定的专用参数加样实际值可能与目标值存在一定偏差,需要用户根据常规实验的实际加样情况设定校正值、优化加样顺序,确保实验加样准确、高效。     

FAME全自动酶联免疫分析系统吐板原因分析

目的探讨FAME全自动酶联免疫分析系统吐板现象的原因及相应对策。方法先按设定程序在STAR全自动加样系统上加样,加样完毕后将微板移至FAME全自动酶联免疫分析系统,进行温育、洗板、显色和结果判读。结果 1年时间里,FAME共出现28次吐板现象。结论严格遵守操作规程,做好标本抗凝,试剂槽内加入足量试剂并避免气泡产生,实验编程时合理安排工作表,做好实验前的冷启动维护和实验后的日维护,留意洗液桶的清洁等环节,可减少吐板现象的发生。     

应用比色法检查自动加样仪的计量

为了提高实验结果的准确性和重复性、降低人为误差 ,越来越多的采供血单位在日常检测工作中使用自动加样仪。但是除了厂商提供的数据外 ,如何检查和确保自动加样仪加样的准确性始终是人们关注的焦点。有文献报道用比色法对酶标仪进行质控[1] ,是否可用此法对自动加样仪进行质控 ,我们对此作了初步的探讨。一、材料和方法1.仪器和试剂　 ( 1)Vivace自动加样仪 (德国Stratec公司 4针Teflon包被针头 ) ;( 2 ) 0 .0 16 6 7mol/LK2 Cr2 O7溶液 (自配 ) ;( 3) 96孔硬质U型板 (美国ABBOTT公司 ) ,孔间差 <0 .0 0 5A ;( 4 )移液器 (单头 ,5～ …     

全自动加样仪混匀参数对质控品检测结果的影响

目的 探讨在酶联免疫吸附试验(ELISA)加样过程中，全自动加样仪对室内质控品进行混匀处理的实验意义。方法 质控品在加样前均进行漩涡震荡混匀，后在相同的检测条件下经STAR全自动加样仪加至同1块酶免板中进行检测，比较质控品在加样针混匀与不混匀情况下S/CO值的差异以及2种情况下质控品检测值的频数分布，受混匀参数影响较大的质控品用同厂家不同批号试剂进行同样的试验并分析结果是否一致。结果 全自动加样仪不对质控品进行混匀处理时，抗-HCV质控品S/CO值明显低于混匀质控品的检测值(P<0.000 1)。部分检测系统所测不混匀抗-TP质控品以及抗-HIV质控品的S/CO值与该项目混匀质控品检测值也有差异(P<0.05)。未经加样针混匀的抗-HCV质控品有部分S/CO值分布在<2的区间。同厂家不同批号试剂分别检测抗-HCV质控品，混匀与不混匀处理的质控品检测值之间均存在差异(部分P<0.05)。结论 尽管加样前质控品均进行漩涡震荡混匀，如果STAR全自动加样仪不设置质控品混匀参数，部分质控品的检测结果依然会受到影响。     

全自动酶免分析系统在血站筛选试验中应用的优越性

本中心自 2 0 0 0年起 ,采用全自动酶免分析系统对献血者进行 HBs Ag、抗 - HCV、抗 - HIV检测 ,笔者将全自动酶免分析系统在实验过程中的稳定性、灵敏度、可靠性等与手工操作的方法做了分析和比较 ,结果报告如下。1　材料和方法1.1　标本　河南省红十字血液中心 2 0 0 1- 0 6 - 0 8献血者标本712 0份。1.2　仪器　 ML/ AT- plus2自动加样器 ,ML/ FAME全自动酶免分析仪 (瑞士 HAMIL TON)。芬兰 NL EY- MK- 2酶标仪、洗板机及国产恒温水浴箱。1.3　试剂　抗 - HCV、HBs Ag购自上海科华实业有限公司 ,抗 -HIV采用美中强生公…     

梅毒微板法测定的实验条件的比较与分析

梅毒血清学试验作为献血者血液检测的一项重要指标,其试验操作的标准化,自动化日益受到重视,用微板法取代手工操作势在必行。近几年,全国各大中型血站对微板法试验条件有过摸索,笔者利用新的澳之风判读软件及自身实验室条件对其进行比较与分析,并做7920份标本对照,现报告如下。 1 材料与方法 1.1 材料①样品：天津市无偿献血者标本;②试剂:厦门新创TRUST试剂（批号9102001,9102002）;③仪器：AT PLUS-2全自动加样系统（HAMIL-TON公司,瑞士）,T.S温控孵育振荡仪、HTⅡ自动扫描酶标仪（Anthos公司,奥地利）医用离心机CDZ5-2（北京）,澳之风判读软件;④微板：96孔硬质V型板（丹麦）。 1.2 方法①A法［1］：用自动加样系统按照试剂盒要求加样品及加TRUST试剂于V型微板孔中,在T.S温控孵育振荡仪中以16min,500r／min,3level的条件孵育振荡后静置8min,以400r/min的离心速度进行离心3min,再置于HTⅡ自动扫描酶标仪上,在澳之风判读软件支持下,采用弱度振板1s 后,以620nm波长,对微板各孔进行19点扫描判读;②参考方法-B法［2］为对照试验方法:自动加样后,以8min、800 r/min,2level的条件孵育振荡,以800r/min 的速度离心2min后进行判读结果;③手工纸片法对照试验组：手工加样及试剂于纸片上,按试剂盒要求操作步骤,肉眼判读结果;④ TPHA确证试验。     

酶结合物效价下降引起抗-HCV检测失控原因分析

20 0 2年 6月 ,笔者检测抗 -HCV时 ,先后出现 3次失控现象 ,均为阳性对照和质控物 OD值低于要求 ,经过对仪器、人员、试剂、质控物的排查 ,发现是由于试剂盒保存不当引起酶结合物失效 ,为引起同行和试剂厂家重视 ,报告如下。材料与方法1　检测对象　绍兴市无偿献血者。2　试剂与仪器　抗 -HCV检测试剂为国内某厂家生产 ,经中国药品生物检定所批批检定 ,批号 2 0 0 2 0 0 2 2 0 ,HCV 2NCU质控物由卫生部临检中心提供 ,批号 0 2 0 2 ,以上各种试剂均在有效期内使用 ;TECANRSP-1 5 0全自动加样器(瑞士 TECAN公司 ) ,TECAN全自动洗…     

微板法血型自动检测几个影响因素的探讨

笔者采用微板法血型自动检测方法［1］，对自配红细胞的保存时间、加样顺序、血型板的洁净程度，作了较详细的探讨。并通过19223例的血型检测，正反定型相符达到99.99%，准确率达到100%。从而完善微板法血型自动检测，节约了耗材和开支。 1 材料与方法 1.1 仪器与试剂 AT-PLUS2全自动加样系统(HAMILTON公司瑞士),HT-Ⅲ酶标仪和T.S温控孵育振荡仪(Anthos 公司奥地利),ModelTJ-6平板式离心机(BECKMAN公司美国)，96孔U型板(购自上海血液中心参比实验室)。抗-A、抗-B单克隆抗血清（购自长春生物制品研究所），标准4%A、B红细胞（购自澳斯邦公司）自配试剂红细胞（A型和B型红细胞分别取自筛选后的3人份新鲜ACD抗凝血，洗涤混合后配成4%的红细胞）。96孔洗板机（TECAN，A-5082购自奥地利） 1.2 实验操作程序①利用自动加样仪加样，正定：25μl标准血清+25μl样品细胞（4%），反定：25μl样品血浆+25μl试剂细胞（4%）；②振荡孵育28℃、400r/min、8min、3accel；③平板离心400r/min、1min；④振荡悬浮28℃、1000 r/min、2min、2 accel；⑤静置5～10min；⑥判读：扫描点数15、测定波长620nm。（借助于AUSFINE判读软件） 1.3 实验例数：19223例；实验组：微板法；对照组：纸片法。     

EASYCUTA全自动荧光免疫分析系统稳定性评价

目的对EASYCUTA全自动荧光免疫分析系统稳定性进行评价,以保证其满足临床需求。方法分别对该系统样本加样准确度与重复性、试剂加样准确度与重复性、洗液残留量、增强液加注准确度、荧光仪性能准确度与重复性进行检测及分析。结果样本在加注量为10、50、100μL加样时,相对偏倚分别为-3.80%、-1.22%、-0.47%;试剂在加注量为50、100μL加样时,相对偏倚分别为-1.14%、0.09%。二者在加注量为100μL时,CV%分别为1.19%、1.46%。对该系统A路与B路进行洗液残留量测试,每个微孔反应杯平均残留体积分别为1.09、1.20μL。对A路与B路在加注量为100μL时进行增强液加注测试,相对偏倚分别为0.39%、0.29%,CV%分别为0.99%、0.93%。选择定标液B(荧光值4 000),定标液D(荧光值1 200 000)进行荧光仪性能测试,相对偏倚分别为-2.16%、-4.58%,CV%分别为2.27%、1.47%。上述各项实验结果均在厂家要求的可允许范围内。结论 EASYCUTA全自动荧光免疫分析系统具有良好的稳定性,其能够为检验结果可靠提供硬件保障。