共刺激分子4-1BBL高表达与肿瘤免疫逃逸关系的研究

目的:观察高表达4-1BBL的HL-60细胞培养上清液对人淋巴细胞活化、增殖、IL-2分泌及凋亡诱导作用的影响;分析阻断4-1BB/4-1BBL信号对肿瘤细胞增殖、细胞因子分泌的影响,揭示肿瘤的免疫逃逸机制.方法:将不同浓度的HL-60肿瘤细胞培养上清液与体外分离的人淋巴细胞共培养,MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测免疫表型、细胞因子分泌及细胞凋亡;ELISA法检测IL-2分泌水平;用抗4-1BBL单抗作用后,观察对HL-60细胞增殖及细胞因子分泌的影响.结果:不同的肿瘤细胞株表面均有4-1BBL表达,但表达水平不同;HL-60细胞培养上清液对淋巴细胞活化没有明显影响(P＞0.05),但能明显抑制淋巴细胞增殖(P＜0.01)和IL-2分泌(P＜0.05),诱导淋巴细胞凋亡(P＜0.05).抗4-1BBL单抗能抑制HL-60细胞增殖和TGF-β的分泌(P＜0.05).结论:HL-60细胞高表达4-1BBL具有反向调节作用,可通过促进肿瘤细胞增殖及TGF-β分泌等抑制淋巴细胞功能,从而使之逃避宿主的免疫监视.     

ICOS共刺激途径中MAPK家族信号分子对活动期SLE患者T细胞增殖及细胞因子分泌的作用

目的研究可诱导共刺激分子（ICOS）共刺激途径中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）家族信号分子对活动期系统性红斑狼疮（SLE）患者T细胞增殖及细胞因子分泌的作用。方法体外分离纯化活动期SLE患者和正常人外周总T细胞、CD4^＋和CD8^＋T细胞，予以抗CD3／抗ICOS刺激，通过Western blot检测信号分子的活化水平，ELISA检测培养上清细胞因子表达，^3H—TdR法测定细胞的增殖水平。结果活动期SLE病人CD4^＋或CD8^＋T细胞经ICOS共刺激后，胞外信号调节激酶（ERK）的活化水平明显低于正常人，CD4^＋或总T细胞分泌IL-2明显低于正常人，PD98059抑制ERK活化可致细胞增殖水平下降与IL-2分泌减少，SB-203580抑制p38MAPK活化可致IL-10分泌减少，细胞因子IL-2能明显促进T细胞的增殖水平。结论活动期SLE患者ICOS共刺激T细胞增殖功能降低与其ERK信号活化障碍所致的IL-2分泌减少密切相关，MAPK家族信号分子在ICOS共刺激不同T细胞亚群增殖与细胞因子分泌中具有不同的作用。     

4-1BB在人外周血γδT细胞活化中的协同刺激作用

采用结核杆菌(Mtb)低分子多肽刺激人外周血单个核细胞,流式细胞术(FCM)检测不同活化时相γδT细胞膜表面4-1BB分子的表达;用阻断型4-1BB配体(4-1BBL)单抗阻断4-1BB/4-1BBL信号,FCM检测γδT细胞的增殖比率和细胞内产生IFN-γ的情况,同时与阻断CD28/B7-1信号相比较。结果显示,静止的γδT细胞膜表面不表达4-1BB分子,Mtb抗原刺激后6 h,4-1BB即有明显表达(29.71%),48 h达到高峰(49.79%);与未阻断组相比,阻断4-1BB/4-1BBL信号,γδT细胞的增殖效应和细胞内IFN-γ的产生均明显下降(P<0.01),与CD28/B7-1信号阻断组相比,差异无显著性(P>0.05)。提示4-1BB/4-1BBL信号同CD28/B7-1信号一样,可为γδT细胞活化提供协同刺激作用。     

一株鼠抗人4-1BBL功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的研究

目的：鼠抗人4—1BBL功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定。方法：以高表达人4—1BBL分子的基因转染细胞L929／4—1BBL为免疫原，常规免疫BALB／c小鼠，采用B淋巴瘤杂交瘤技术进行细胞融合，经流式细胞术分析和多次克隆化培养，筛选特异性杂交瘤细胞株；采用Ig亚型快速定性试纸法、染色体核型分析、竞争结合抑制试验、间接免疫荧光法对单抗的生物学特性进行鉴定，并采用体外细胞计数和ELISA检测分析单抗对单核细胞的作用。结果：获得1株持续、稳定分泌鼠抗人4-1BBL单抗的杂交瘤细胞株，命名为3E7。该单抗能识别人白血病细胞株和单核细胞表面的4-1BBL分子。对单抗生物学功能的研究结果表明，该单抗能有效地促进外周血单核细胞体外生长，并促进IL-6和TNF-α的分泌。结论：成功地获得了一株鼠抗人4-1BBL功能性单克隆抗体3E7，该单抗能特异地识别人4-1BBL分子，并有效地通过激发4-1BBL逆向信号通路促进单核细胞的体外生长及细胞因子的分泌。     

CD40配基化调节小鼠树突状细胞上B7-H3分子表达的研究

目的 探讨CD40配基化对小鼠骨髓来源树突状细胞上B7-H3分子表达的调节作用及其生物学意义。方法 采用GM-CSF和IL-4联合方案体外诱导小鼠髓系DC，并利用mCD40-CHO和TNF-α分别刺激凋亡肿瘤细胞负载的Dc制备成熟DC；采用间接免疫荧光标记法检测成熟Dc上B7-H3分子的表达；RT-PCR检测B7-H3 mRNA转录水平；混合淋巴细胞反应（MLR）和B7-H3单抗阻断实验分析CD40配基化的DC表面B7-H3分子在T细胞活化中的作用；^3H-TdR掺入试验检测DC对T淋巴细胞的促增殖效应；ELISA测定各组MLR反应和DC培养上清中IFN-γ分泌水平。结果 B7-H3分子在DC不同分化发育阶段均有表达，CD40配基化能显著上调凋亡肿瘤细胞负载的DC中B7-H3表达，TNF-α激发的DC弱表达（P〈0．05）；阻断CD40配基化的DC上B7-H3分子能抑制T细胞增殖和IFN-γ分泌；CD40配基化促进凋亡肿瘤细胞负载的DC分泌IFN-γ量也明显高于TNF-α组（P〈0．05）。结论 体外CD0配基化DC的B7-H3分子上调性表达有助于其刺激T细胞增殖和IFN-γ的产生。     

一氧化氮抑制T细胞产生细胞因子但促进单核细胞细胞因子的分泌

目的研究一氧化氮(nitric oxide,NO)对T细胞和单核细胞分泌细胞因子的作用及机制。方法用抗人CD3抗体或抗人CD3抗体联合抗人CD28抗体或LPS刺激培养外周血单个核细胞(PBMCs)、纯化T细胞或纯化单核细胞,加或不加一氧化氮培养,ELISA检测培养细胞上清液中细胞因子的含量;流式细胞术检测T细胞表面活化分子CD69和CD25的表达、T-box转录因子(T-bet)的表达,STAT1和STAT4的磷酸化程度以及T细胞的分裂情况。结果一氧化氮呈时间和剂量依赖方式抑制T细胞产生IFN-γ、TNF-α和IL-2,但促进单核细胞IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌,且不诱导细胞的凋亡。进一步研究发现其抑制细胞晚期活化分子的表达和细胞的分裂,以及抑制T细胞相关转录因子T-bet的表达,但不抑制STAT1和STAT4的磷酸化程度。结论一氧化氮通过非细胞毒性作用抑制活化的T细胞产生细胞因子,但促进活化的单核细胞的细胞因子的分泌,其机制是通过抑制转录因子T-bet信号通路而抑制T细胞细胞因子的分泌,该研究将为临床应用提供理论依据。     

TPA和IFN-γ活化角朊细胞对T淋巴细胞增殖和细胞因子分泌的作用

角朊细胞激活对T淋巴细胞增殖和细胞因子分泌的作用。TPA和IFN γ联合作用 ,激活角朊细胞表达表面分子 ,FACS检测MHCI、II类分子和CD80、CD86分子水平 ,RT PCR检测B7 H1共刺激分子表达。由激活角朊细胞提供T淋巴细胞激活的第二信号 ;绵羊红细胞花环沉淀分离纯化T细胞 ,抗CD3单抗提供第一信号 ,建立体外混合培养系统 ,3 H TdR渗入法检测T细胞增殖 ,ELISA检测培养上清细胞因子浓度。结果显示 ,TPA和IFN γ联合作用可诱导角朊细胞表达B7 H1共刺激分子 ,并上调其MHCII类分子。以B7 H1为第二信号 ,可以协同抗CD3单抗对T细胞的增殖作用 ,并呈现独特的细胞因子分泌格局。因此角朊细胞激活后表达B7 H1共刺激分子 ,此第二信号可刺激T淋巴细胞增殖 ,对其功能分化具有调节作用     

对早期凋亡细胞的吞噬抑制T淋巴细胞活化的实验研究

目的:研究早期凋亡细胞及吞噬早期凋亡细胞的巨噬细胞对T淋巴细胞活化的影响。方法:体外以紫外线照射,诱导出早期凋亡的Jurkat细胞;建立早期凋亡细胞的吞噬模型;ELISA法分析早期凋亡细胞对LPS刺激下巨噬细胞分泌细胞因子的影响及在早期凋亡细胞和吞噬了早期凋亡细胞的巨噬细胞干预下,ConA刺激T淋巴细胞活化后CD69、CD25、CD71表达的变化。结果:巨噬细胞吞噬了早期凋亡细胞后,抑制性细胞因子(TGF_β1)的分泌明显上调,并且在一定程度上抑制了ConA刺激下的T淋巴细胞活化;具体表现为CD69、CD25、CD71等T淋巴细胞活化标志的表达受到明显抑制。当加入TGF_β1中和抗体后,这种抑制作用消失。结论:巨噬细胞吞噬了早期凋亡细胞后抑制ConA刺激下的T淋巴细胞CD69、CD25、CD71的表达,这种抑制作用依赖于的TGF_β1分泌增强。     

5株鼠抗人CD28单克隆抗体的研制及生物学特性的研究

目的：制备鼠抗人CD28分子功能性单克隆抗体，研究其对T细胞活化、增殖及信号转导等方面的生物学效应。方法：以天然高表达CD28分子的人多发性骨髓瘤细胞株U266和小鼠淋巴瘤细胞转人CD28基因细胞株CD28-T分别作为免疫原和检测细胞株，采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行单抗的研制；以快速定性试纸法鉴定单抗亚类；腹水诱生法和免疫亲和层析法进行单抗的制备和纯化；经间接免疫荧光法分析单抗对不同细胞膜表面CD28分子的识别；采用竞争抑制法分析单抗识别的抗原位点；利用^3H-TdR掺入法分析单抗对PBTC的刺激效应和免疫荧光法分析PBTC活化前后的表型变化。结果：成功获得5株鼠抗人CD28功能性单克隆抗体，分别命名为2D5、2F5、3136、3F8和8G8，其中2D5为IgG2a亚类，其余均为IgG1亚类；流式细胞仪分析结果显示，5株单抗均能良好识别CD28-T、U266、XGI和Jurkat细胞表面的CD28分子；竞争抑制试验表明，2D5和8G8能完全阻断标准抗人CD28单抗与U266膜CD28分子的结合，其余3株为部分阻断；^3H-TdR掺入法实验结果表明，单抗8G8联合激发型CD3单抗能明显促进PBTC的增殖，刺激指数为7．4，活化细胞CD4、CD25、ICOS、4IBB及OX40分子的表达上调。结论：5株单抗均为抗人CD28单克隆抗体，具有重要的基础研究及潜在的临床应用价值。     

共刺激分子4-1BBL和B7-1对人T淋巴细胞的协同激发作用

目的 :探讨 4 1BBL和B7 1这 2种共刺激分子在人外周血T淋巴细胞活化、增殖中的作用和机制。方法 :采用免疫磁珠阴性选择方法分离纯化人外周血T淋巴细胞 ;单向混合淋巴细胞反应 (MLR)分析共刺激分子对T细胞的激发作用 ;3H TdR掺入法测定细胞增殖 ;免疫荧光标记和流式细胞仪表型分析 ;ELISA检测细胞因子。结果 :经免疫磁珠阴性选择分离获外周血单个核细胞中的T细胞纯度 >90 %;人多发性骨髓瘤细胞株 (XG细胞 )转染 4 1BBL和B7 1cDNA后 ,细胞膜表面能稳定高表达这 2个分子 ,4 1BBL和B7 1转基因细胞也均能使同种异体T细胞发生活化、增殖、存活时间延长和介导细胞因子IL 2的分泌 ,且 2种共刺激分子具有一定的协同效应。结论 :4 1BBL和B7 1分子具有赋予XG细胞对T细胞的体外激发、促增殖和分泌IL 2的作用 ,4 1BBL和B7 1分子能产生协同效应。     

局部注射辛伐他汀对骨质疏松大鼠股骨髁骨小梁的改建效应

背景：局部注射具有成骨作用的辛伐他汀,可显著增加骨质疏松大鼠股骨颈及股骨髁部的骨密度及力学强度,分析局部注射辛伐他汀对股骨髁骨小梁的影响。 目的：进一步研究骨质疏松大鼠股骨内局部注射辛伐他汀对股骨髁骨小梁的影响。为将辛伐他汀应用于临床骨质疏松局部治疗提供实验基础。 方法：18只雌性SD大鼠双侧卵巢切除后3个月,制备大鼠骨质疏松模型。实验大鼠随机数字表法均分为3组,分别在实验大鼠的右侧股骨髓腔内单次注射辛伐他汀溶液5 mg、10 mg,对照组单纯注射空白载体。分别在注射后1个月处死大鼠并取材。Micro-CT扫描并定量分析骨组织形态变化。 结果与结论：给药后1个月,Micro-CT扫描结果显示,辛伐他汀治疗组的骨微结构参数如骨皮质厚度、骨小梁密度及连接率明显优于对照组。说明疏松骨骼单次注射小剂量辛伐他汀可显著促进股骨髁部骨小梁改建,改善骨骼微结构,可为强化局部、防治骨质疏松骨折的新选择进一步提供实验基础。     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

石斛属民族药用植物的分类及生药学研究

中药石斛早在《神农本草经》中就被列为上品,其应用历史悠久,具有养阴生津、补肾益气、润喉护嗓、活血明目、抗癌防老等功效。本文对国内外石斛属民族药用植物的分类及生药学研究进行了综述。     

膝关节骨性关节炎的关节镜治疗体会

目的我科自2001～2005年4月对59例67膝的骨性关节炎（0A），进行关节镜检查及镜下清理术。方法镜检：膝关节骨性关节炎伴不同程度滑膜炎，滑膜皱壁粘连纤维片，关节软骨不同程度破坏。镜下清除增生滑膜，松解粘连，去除剥脱软骨、修复关节面。结果随访2月～4年，平均1.5年，术后综合评估2月～1年，优良率94％；1～2年，优良率79.2％；2年以上优良率54.8％。结论关节镜对膝关节骨性关节炎诊断能提供了比较全面的资料，并对骨性关节炎早期有良好疗效，具有创伤小、恢复快、并发症少和重复治疗等优点。     

Assessment of the efficacy of treatment of hemangiomas

Assessment of the aftereffects of cryoexposure and ultrahigh-frequency cryoexposure on hemangioma tissue of various types, cavernous and squamous, showed a higher cryogenic effect in hemangiomatous tissue preexposed to ultrahigh-frequency waves. A quantitative criterion is proposed for assessing the efficacy of the studied methods of exposure. Translated fromByulleten' Eksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 119, N ^o 6, pp. 669–672, June, 1995     

Effect of route of antitoxin administration on efficacy of treatment of experimental tetanus

The efficacy of treatment with Diaform-3 antitoxin, given by either intracisternal or intralumbar injection in a dose of 400 i.u./kg, was compared in experiments on 100 rabbits with ascending, hematogenous, and cerebral tetanus caused by injection of 1 c.l.d. of tetanus toxin. Intracisternal injection of the antitoxin was found to be three times more effective than intralumbar (the proportion of animals cured was 31.4 and 10.2% respectively). The latter was effective only in animals with ascending tetanus, evidently because the portal of entry of the toxin into the CNS was along the peripheral nerves of the hind limbs.Central Research Laboratory, L'vov Medical Institute. (Presented by Academician of the Academy of Medical Sciences of the USSR A. M. Chernukh.) Translated from Byulleten' Éksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 86, No. 8, pp. 212–213, August, 1978.     

Effect of ultralow doses of thyroliberin on microviscosity of lipid components of biological membranes

Effects of the regulatory peptide thyroliberin on microviscosity of lipid components of endoplasmic reticulum biological membranes in mouse hepatocytes were studied by electron paramagnetic resonance. Thyroliberin in a concentration of 10⁻³–10⁻¹⁸ M decreased microviscosity of surface layers of membrane lipids. This decrease was the most pronounced (30%) under effects of 10⁻¹⁰ and 10⁻¹⁶ M thyroliberin. Physiological effects of thyroliberin corresponded to its influence on the membrane structure. Translated fromByulleten' Eksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 129, No. 1, pp. 38–40, January, 2000     

Pathways of the realization of immunomodulating effects of neurotransmitters

Translated fromByulleten' Eksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 115, N ^o 4, pp. 401–404, April, 1993