GSK3β抑制非小细胞肺癌细胞自噬增强放疗敏感性

目的探讨糖原合成酶激酶-3β(GSK3β)在非小细胞肺癌中对自噬的调节及调节自噬对放疗敏感性的影响。方法通过Western blot检测正常支气管上皮细胞HBE和肺癌细胞A549,H460,H292,H1299,Calu1和SK-MES-1中GSK3β的表达情况。转染或抑制GSK3β的表达并经X射线照射后,通过Western blot检测磷酸腺苷蛋白激酶(AMPK),自噬标记物微管相关蛋白轻链-3(LC3)和自噬降解底物p62的蛋白表达水平。应用集落形成实验检测转染或抑制GSK3β的表达并经X射线照射后的细胞增殖能力,促进或抑制自噬并经X射线照射后的细胞增殖能力。结果在H460细胞中分别转染野生型GSK3β-WT,激酶激活型GSK3β-S9A,激酶失活型GSK3β-K85R并经X射线照射,下调AMPK和LC3表达水平,上调P62表达水平,抑制肺癌细胞的增殖能力,其中转染激活型GSK3β-S9A的作用最显著。在A549细胞中抑制GSK3β并X射线照射,上调AMPK和LC3表达水平,促进肺癌细胞的增殖能力。在H460细胞中施加自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)或自噬诱导剂雷帕霉素(Rapamycin)并经X射线照射,3-MA抑制细胞自噬水平,抑制细胞增殖能力,细胞存活能力下降更显著。结论GSK3β抑制细胞自噬,抑制细胞自噬水平可以增强非小细胞肺癌的放射敏感性。     

双氢青蒿素对肺癌细胞株H1299增殖与放疗增敏的影响

目的:研究双氢青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)对非小细胞肺癌H1299放疗增敏的影响。方法:通过CCK-8法测定双氢青蒿素的IC10,选择低毒剂量IC10作为实验浓度,采用CCK-8法测定DHA对H1299细胞增殖的影响;流式细胞术、Hoechest33258染色分别检测DHA对细胞周期和凋亡的影响;软琼脂集落形成实验检测DHA对放疗敏感性的影响。结果:双氢青蒿素的IC10为14.87μmol/L,双氢青蒿素以剂量依赖性的方式抑制H1299细胞增殖,并使细胞阻滞在S期,增加放疗敏感性。结论:青蒿素能明显抑制细胞增殖,增加放疗敏感性。     

小泛素样修饰蛋白1假基因3通过蛋白激酶B信号通路影响非小细胞肺癌细胞系H1299增殖和凋亡

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA) 小泛素样修饰蛋白1假基因3(SUMO1P3)对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响。 方法 用Real-time PCR方法测定非小细胞肺癌细胞系H1299中SUMO1P3表达变化。在H1299细胞中转染SUMO1P3小干扰RNA（siRNA）,Real-time PCR方法测定下调效果, MTT法和5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)法检测细胞增殖, PI单染法测定细胞周期,膜联蛋白 V-FITC（annexin V-FITC）/PI法检测细胞凋亡,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blotting方法检测剪切的Caspase-3（c-Caspase-3）、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、P27、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）蛋白表达。Akt信号激活剂处理转染SUMO1P3 siRNA后的H1299细胞,同样利用上述方法测定细胞增殖、凋亡和周期变化。样本数均为9。 结果 SUMO1P3在非小细胞肺癌细胞中表达上调。转染SUMO1P3 siRNA后的H1299细胞中SUMO1P3表达水平降低,细胞增殖能力下降,细胞G0/G1期比例升高,细胞凋亡率升高,细胞中c-Caspase-3和P27蛋白水平升高,cyclin D1、p-PI3K和p-Akt蛋白水平下降。Akt信号激活剂可以逆转SUMO1P3 siRNA对H1299细胞增殖抑制、周期阻滞和凋亡促进作用。 结论 下调SUMO1P3抑制非小细胞肺癌H1299细胞增殖并诱导细胞凋亡,作用机制与降低Akt信号通路激活水平有关。     

集缩素NCAPG对非小细胞肺癌增殖和凋亡的影响及其可能机制

目的 探讨非小细胞肺癌细胞中集缩素NCAPG表达对A549与H1299细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 构建shRNA-NCAPG慢病毒载体转染A549及NCI-H1299细胞,实时定量PCR法(qRT-PCR)及免疫印迹法(Western blot)验证两种细胞中NCAPG表达情况.应用CCK-8方法检测对照组及下调组的细胞增殖差异,明确NCAPG表达对细胞增殖的抑制作用.Annexin V/PI双染法流式细胞术检测两组细胞中早期凋亡及晚期凋亡细胞比例.Western blot法比较两组细胞中Caspase-3、Bax及Bcl-2的表达水平.结果 shRNA-NCAPG转染组细胞的NCAPG表达量低于对照组.下调NCAPG表达抑制A549及NCI-H1299细胞增殖,增加早期凋亡及晚期细胞凋亡比例,增加肺癌细胞促凋亡相关蛋白Caspase-3及Bax的表达、抑制Bcl-2蛋白表达.结论 下调NCAPG表达诱导非小细胞肺癌A549及H1299细胞增殖,通过线粒体通路抑制其细胞凋亡.     

miR-520c-3p靶向MEX3A调控肺癌细胞增殖、凋亡的分子机制

为研究miR-520c-3p对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其潜在的作用机制,用实时定量RT-PCR检测肺癌细胞H1299、NCI-H460、A549和正常肺上皮细胞BEAS-2B中miR-520c-3p和MEX3同源物A(MEX3 homolog A,MEX3A)的表达水平。将miR-NC、miR-520c-3p、si-NC、si-MEX3A、anti-miR-NC、anti-miR-520c-3p转染至H1299细胞后,用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测蛋白表达,双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果显示,与正常肺上皮细胞BEAS-2B比较,肺癌细胞H1299、NCI-H460、A549中miR-520c-3p的表达水平均显著降低(P0.05),MEX3A mRNA和蛋白的表达水平显著升高(P0.05)。miR-520c-3p过表达、MEX3A抑制表达均可抑制H1299细胞的增殖活力,促进细胞凋亡;miR-520c-3p过表达抑制CyclinD1、Bcl-2蛋白的表达,促进p21、Cleaved Caspase-3、Bax蛋白的表达;MEX3A抑制表达抑制CyclinD1、Bcl-2蛋白的表达,促进p21、Bax蛋白的表达。miR-520c-3p可靶向调控MEX3A的表达;MEX3A过表达逆转了miR-520c-3p过表达对肺癌细胞H1299的增殖抑制和凋亡促进作用。提示miR-520c-3p可抑制肺癌细胞H1299的增殖,促进其凋亡,其机制可能与靶向MEX3A有关,这将为肺癌的预防和治疗提供新靶点。     

牡荆葡基黄酮调节TAK1 / AMPK 通路增强人肝癌细胞的放射敏感性

目的:探究牡荆葡基黄酮(VG)对人肝癌细胞放疗敏感性的作用及作用机制。方法:用不同浓度VG 和放疗处理细胞,CCK8 检测细胞活性,流式检测细胞凋亡,Western blot 检测凋亡标记蛋白和TAK1/ AMPK 通路蛋白表达。TAK1siRNA(si-TAK1)转染细胞,Western blot 检测TAK1 的表达,CCK8 检测细胞活性,流式检测细胞凋亡。结果:VG 和放疗均能明显抑制Huh7 细胞的活性,且VG 浓度为20 μmol/ L 和40 μmol/ L 时,其抑制作用优于放疗。VG 可显著增强放疗对肝癌细胞凋亡的促进作用,并升高Bax/ Bcl-2 的比值。同时,VG 还能增强放疗对TAK1/ AMPK 通路蛋白(TAK1、AMPKα1 和PPARγ)表达的促进作用,下调TAK1 表达能明显反转VG 增强放疗促细胞凋亡活性及抑制细胞增殖活性的作用。结论:VG 可通过TAK1/ AMPK 通路增强肝癌细胞的放疗敏感性。     

安罗替尼通过调控miR-16-5p/PD-1轴抑制人非小细胞肺癌细胞系增殖并促进凋亡

目的 探讨安罗替尼对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法 将非小细胞肺癌细胞系A549和H1299分别采用安罗替尼、miR-16-5p激动剂和/或PD-1过表达载体进行处理。CCK-8实验和EDU实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-16-5p相对表达量;Western blot检测程序性细胞死亡-1蛋白(PD-1)的表达。双荧光素酶报告实验确定miR-16-5p和PD-1的靶向关系。用A549细胞构建裸鼠成瘤模型,检测安罗替尼对体内肿瘤生长的影响。结果 安罗替尼在A549和H1299细胞中以剂量依赖的方式显著增加miR-16-5p表达,同时降低PD-1表达,并且抑制细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-16-5p过表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-16-5p能靶向PD-1,且负调控PD-1表达。siRNA下调PD-1表达后明显抑制细胞增殖,并促进细胞凋亡(P<0.05)。过表达PD-1则可逆转安罗替尼介导的miR-16-5p对A549和H1299细胞的促增殖和抗凋亡作用(P<0.05...     

下调Girdin基因表达对肺癌细胞增殖凋亡、免疫因子IL-8和TNF-α及顺铂化疗敏感性的研究

目的:探讨下调微丝附着梁蛋白(Girdin)基因表达对肺癌细胞增殖凋亡、免疫因子IL-8和TNF-α及顺铂化疗敏感性的影响。方法:以人胚肺成纤维细胞MRC5作为对照细胞,RT-PCR及Western blot分别检测Girdin在PC9、SPC-A-1、H322、H1299、A549肺癌细胞中的表达; SPC-A-1细胞分为空白对照组、阴性对照组、Girdin-siRNA组、顺铂组和Girdin-siRNA+顺铂组,各组细胞培养48 h,Western blot检测Girdin-siRNA转染SPC-A-1细胞的效果; MTT法检测各组细胞活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率; RT-PCR检测IL-8和TNF-α的mRNA表达; Western blot检测增殖相关蛋白细胞增殖核抗原(PCNA)、凋亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及PI3K/AKT信号通路磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶(p-AKT)的蛋白表达。结果:肺癌细胞中Girdin的mRNA及蛋白表达均明显高于在MRC5细胞表达(P0. 05); Girdin-siRNA转染SPC-A-1细胞后Girdin的表达显著降低(P0. 05);与空白对照组比较,Girdin-siRNA组和顺铂组OD值及IL-8、TNF-α、PCNA、PI3K、p-AKT的表达均显著降低,细胞凋亡率及Caspase-3和Bax表达均显著升高(P0. 05); Girdin-siRNA+顺铂组OD值及IL-8、TNF-α、PCNA、PI3K、p-AKT的表达均显著低于Girdin-siRNA组和顺铂组,细胞凋亡率及Caspase-3和Bax表达均显著高于Girdin-siRNA组和顺铂组(P0. 05)。结论:抑制肺癌细胞Girdin表达可通过降低癌细胞增殖、诱导细胞凋亡和提高免疫增强乳腺癌顺铂化疗敏感性,对细胞增殖凋亡的机制可能与下调PI3K/AKT信号通路有关。     

miR-195靶向调控CHEK1对非小细胞肺癌细胞增殖、转移及侵袭的作用

目的研究miR-195靶向调控细胞周期检测点激酶1(CHEK1)对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、侵袭和转移能力的影响。方法选取非小细胞肺癌A549、H1299、H197细胞株为研究对象,分别转染miR-195及RNA阴性对照序列。采用实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-195的表达水平; MTT检测转染miR-195对肿瘤细胞分裂增殖能力的影响; Transwell侵袭实验分析miR-195对细胞侵袭能力的作用;细胞划痕实验检测miR-195对细胞迁移能力的作用;流式细胞仪检测并评价转染miR-195对肿瘤细胞分裂周期的影响; Western blot探究miR-195对肿瘤细胞CHEK1表达的调节;采用Spearman相关分析法分析miR-195及CHEK1表达的相关性。结果 MTT实验表明高表达miR-195可明显抑制肺癌A549、H1299、H1975细胞的体外增殖能力; Transwell侵袭实验结果提示转染miR-195可导致肺癌A549、H1299、H1975细胞侵袭能力明显降低;流式细胞术结果表明,转染miR-195后A549、H1299、H1975细胞系的G1和G2期细胞增加,S期细胞减少;划痕实验结果表明,转染miR-195可以抑制细胞的迁移能力;Western blot结果显示,转染miR-195后A549、H1299、H1975细胞中CHEK1蛋白水平显著降低,上述差异均具有统计学意义(P 0. 05)。Spearman相关分析显示细胞miR-195 mRNA水平与CHEK1蛋白含量呈负相关(r=-0. 464 8,P=0. 00)。结论miR-195可靶向调控CHEK1抑制非小细胞肺癌细胞增殖、转移及侵袭。     

华蟾素对肝癌Bel-7402细胞放疗敏感性的影响及其作用机制的研究

目的 探讨华蟾素对肝癌Bel-7402细胞放疗敏感性的影响及其作用机制。方法 分别使用浓度为0.125、 0.250、 0.500、1.000 μg/mL华蟾素处理肝癌Bel-7402细胞24 h、48 h、72 h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖的影响,根据半数抑制浓度(IC₅₀)选择华蟾素浓度及作用时间。用0 μg/mL(对照组)和0.4 μg/mL华蟾素处理肝癌Bel-7402细胞,同时用剂量为0、2、4、6、8 Gy的6 MV X线进行照射,克隆形成实验检测细胞放疗敏感性。用IC₅₀为0.4 μg/mL华蟾素、6 Gy的X线分别单独或联合处理肝癌Bel-7402细胞,48 h后流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率;Western blot检测细胞中p50、p65、Bcl-2、cyclin D1蛋白表达情况。结果 华蟾素能够显著抑制肝癌Bel-7402细胞增殖,随着作用浓度的增加及作用时间的延长,细胞抑制率逐渐升高。华蟾素能够抑制经照射后的肝癌Bel-7402细胞克隆形成能力,细胞存活率显著低于对照组(P<0.05)。与对照组相比,华蟾素组、放疗组及联合组肝癌Bel-7402细胞G0/G1期细胞比例增多,S期细胞减少,细胞凋亡率升高,p50、p65、Bcl-2和cyclin D1蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P值均＜0.05);联合组与华蟾素组和放疗组相比,细胞周期、细胞凋亡率及蛋白表达差异均有统计学意义(P值均<0.01)。结论 华蟾素能够增强肝癌Bel-7402细胞的放疗敏感性;其作用机制可能与华蟾素能够通过抑制核因子-κB信号通路及下调Bcl-2和cyclin D1蛋白表达,进而抑制细胞增殖、诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡相关。     

下调TCF3抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和迁移能力

目的:探索下调T细胞因子3(TCF3)抑制非小细胞肺癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法:运用Lipofectamine 2000转染法将siTCF3和阴性对照siRNA(NCsiRNA)转染非小细胞肺癌A549和H1299细胞;运用real-time PCR和Western blot分别测定TCF3的mRNA和蛋白水平;运用萤光素酶报告基因实验测定TCF3的转录活性;MTT、克隆形成实验、Transwell实验和Annexin V-FITC/PI染色联合流式细胞术分别测定细胞的活力、克隆形成能力、转移能力及细胞凋亡率;Western blot检测Wnt、c-Myc、基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-13、金属蛋白酶组织抑制物(TIMP)-1的蛋白表达水平。结果:与NCsiRNA转染组的细胞比较,siTCF3显著抑制A549细胞和H1299细胞中TCF3的mRNA和蛋白水平(P0.01)。TCF3转录活性和c-Myc蛋白表达水平明显低于NCsiRNA细胞(P0.05)。MTT实验结果显示,培养24 h、48 h、72 h和96 h的A549-siTCF3和H1299-siTCF3细胞活力均显著低于NCsiRNA细胞(P0.05)。与NCsiRNA细胞相比,siTCF3显著抑制A549细胞和H1299细胞的克隆形成能力(P0.01)。Transwell实验结果显示A549-siTCF3和H1299-siTCF3细胞迁移数显著低于A549-NCsiRNA和H1299-NCsiRNA组细胞(P0.05)。流式细胞术分析结果显示A549-siTCF3细胞和H1299-siTCF3细胞的凋亡率显著高于A549-NCsiRNA和H1299-NCsiRNA细胞(P0.01)。Western blot实验结果显示,下调TCF3表达能抑制Wnt蛋白的表达,MMP-9和MMP-13的蛋白表达明显降低,TIMP-1的蛋白表达增高。结论:siTCF3显著抑制A549细胞和H1299细胞的增殖和迁移能力,并诱导细胞凋亡,其分子机制可能通过下调Wnt通路活性以及调控MMP家族关键成员的表达而实现。     

c-IAP1蛋白与肺癌细胞辐射敏感性关系研究

目的 探讨细胞凋亡抑制蛋白1(c-IAP1)水平与肺癌细胞辐射敏感性间的关系.方法 采用噻唑蓝(MTT)和细胞克隆形成实验检测6种人肺癌细胞系(A549、H460、H1299、H358、HCC827、H1650)的存活率和增殖水平;彗星实验检测辐射对肺癌细胞的DNA损伤效应;Western Blot和实时定量PCR分别测定c-IAP1蛋白水平及其mRNA表达.结果 MTT和克隆形成实验结果表明,不同肺癌细胞的辐射敏感性亦不同,其中H358和H460细胞的辐射敏感性最强,H1650和HCC827细胞次之,而H1299和A549细胞最弱.彗星实验结果显示,经辐射处理后,6种肺癌细胞均受到不同程度的DNA损伤,且H358细胞受损最明显.Western Blot和实时定量PCR结果证明,c-IAP1蛋白水平与肺癌细胞的辐射敏感性呈负相关,c-IAP1蛋白水平越高,细胞的辐射敏感性越弱,且敏感性亦受线粒体促凋亡蛋白(Smac)蛋白水平的影响.结论 c-IAP1是肺癌细胞保持高辐射抗性的原因之一,此结论对于肿瘤细胞的耐辐射机制和肿瘤辐射增敏研究具有重要的现实意义.     

贝伐珠单抗通过调控PI3K/AKT信号通路下调肺腺癌H1299细胞PD-L1表达北大核心CSCD

目的:探讨贝伐珠单抗(Beva)对人肺腺癌H1299细胞程序性细胞死亡配体1(PD-L1)表达的影响及其可能机制。方法:使用不同浓度Beva(0、5、10、20、40、80μg/ml)作用于H1299细胞36 h、48 h、72 h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞PD-L1表达;实验分为:对照组(等量培养液)、Beva组、740-YP(PI3K激活剂)组、LY294002(PI3K抑制剂)组、Beva+740-YP组,流式细胞术检测细胞PD-L1表达,Western blot法检测细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达。结果:(1)Beva能抑制H1299细胞增殖,其作用与剂量有关(P<0.05);(2)随着Beva浓度升高、作用时间延长,H1299细胞PD-L1表达量逐渐减少(P<0.05);(3)PI3K通路抑制剂LY294002处理H1299细胞后PD-L1的表达量显著减少(P<0.01),PI3K通路激活剂740-YP处理H1299细胞后PD-L1的表达量显著增加(P<0.01);(4)Beva处理H1299细胞后PD-L1、p-PI3K、p-AKT的表达显著减少(P<0.05),加入740-YP后可减弱Beva对PD-L1、p-PI3K、p-AKT的抑制作用(P<0.01)。结论:Beva在一定范围内以剂量依赖方式抑制H1299细胞增殖,以时间-剂量依赖方式下调H1299细胞中PD-L1的表达,其机制与抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

鸦胆子素A诱导非小细胞肺癌细胞株H460凋亡及机制的初步研究

目的考察鸦胆子素A(BA)对人非小细胞肺癌细胞系H460细胞凋亡的影响和作用机制。方法用BA对H460细胞进行处理,采用MTT法检测细胞增殖情况,并利用Annexin V-FITC/PI双染法检测BA对H460细胞凋亡的影响。Hoechst 33342染色和免疫荧光染色观察细胞凋亡时染色质的凝集以及DNA损伤标志蛋白γ-H2AX表达情况。Western blot和RT-PCR检测H460细胞内凋亡相关蛋白表达水平。结果 MTT结果表明,与对照组相比,BA能显著抑制H460细胞增殖。对A549、H1299、H1355三株非小细胞肺癌细胞系进行抑制增殖作用检测,结果显示BA对三株细胞系均有不同程度抑制作用。BA作用48 h后,各浓度BA处理H460细胞凋亡率均高于对照组,具有时间依赖性,差异具有统计学意义。BA处理组可见明显的染色质凝集,细胞核碎片化,DNA损伤标志蛋白γ-H2AX表达明显增加。Westernblot结果显示,BA作用48h后,促凋亡蛋白Bax表达升高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,与对照组相比,Bax/Bcl-2比值显著升高。同时与对照组相比,凋亡通路中的cleaved caspase-9、cleaved caspase-3表达明显增加,并引起凋亡标志蛋白PARP切割。RT-PCR结果显示,BA处理H460细胞后,与对照组相比,Bcl-2基因表达显著降低。结论 BA能抑制人非小细胞肺癌细胞株H460细胞增殖,显著诱导其凋亡,该作用与BA引起DNA损伤并激活线粒体凋亡通路有关。     

芹菜素对人肺癌A549细胞凋亡及相关蛋白Bax、Bcl-2表达的影响

目的研究芹菜素对人肺癌 A549细胞增殖抑制和凋亡诱导作用与 Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。方法10~80μmol/L 不同浓度芹菜素作用 A549细胞,采用 MTT 法检测芹菜素对 A549细胞增殖抑制作用;Hoechst 33258细胞核染色法观察芹菜素诱导细胞凋亡形态学的变化;流式细胞仪 AnnexinV- FITC/PI 双染色法检测细胞凋亡率;Western blot 法检测凋亡相关蛋白 Bax 和 Bcl-2表达的变化。结果 MTT 法显示,芹菜素对 A549细胞有显著的增殖抑制作用（P <0.01）,且具浓度和时间依赖性;荧光显微镜下观察到芹菜素处理组细胞出现典型的凋亡形态学改变：细胞核固缩、染色质凝集和核碎片化等;流式细胞仪分析结果显示,芹菜素呈浓度依赖性诱导 A549细胞凋亡;Western blot结果显示,促凋亡蛋白 Bax 随着芹菜素浓度升高表达增加,抗凋亡蛋白 Bcl-2随着芹菜素浓度升高表达减少。结论芹菜素具有抑制人肺癌 A549细胞增殖,诱导其凋亡的作用,其机制可能与上调 Bax 蛋白表达和下调 Bcl-2蛋白表达有关。     

尼古丁抑制穿孔素/颗粒酶B诱导的A549肺癌细胞凋亡

目的: 首次探讨尼古丁对穿孔素/颗粒酶B(perforin/granzyme B)诱导的A549肺癌细胞凋亡的抑制作用及其机制。 方法: 以人肺癌细胞株A549为研究对象,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染荧光显微镜下观察细胞凋亡形态学变化,异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)染色后流式细胞术定量检测细胞凋亡率,RT-PCR法检测X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)及存活素(survivin)mRNA的表达量。结果: (1)不同浓度尼古丁单独作用A549细胞时未见明显诱导凋亡现象,可显著抑制细胞生长(P< 0.01),其抑制率与作用时间和剂量呈正相关。(2)0.125 mg/L perforin作用于A549细胞(1×10⁶个)时,PI染核率可达到90%以上。而当加入1 μL granzyme B(1 mg/L)孵育6 h时,perforin/granzyme B组细胞可呈现90%以上的凋亡现象。(3)6 μmol/L尼古丁作用于perforin/granzyme B预处理的细胞6 h时可见明显凋亡抑制现象,当检测其凋亡抑制蛋白XIAP和survivin mRNA的含量时,发现尼古丁组表达量较高,perforin/granzyme B组表达量明显降低,而当尼古丁联合perforin/granzyme B时表达量最高。结论: 尼古丁可明显抑制perforin/granzyme B诱导的A549肺癌细胞凋亡现象,这种作用可能与凋亡抑制蛋白XIAP和survivin的表达上调有关。     

Ad-apoptin通过AMPK/ACC信号通路抑制肺癌细胞脂代谢北大核心CSCD

目的:探讨溶瘤腺病毒Ad-apoptin对非小细胞肺癌细胞脂代谢的影响及分子机制。方法:CCK-8法检测细胞活性;JC-1染色和Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡;Western blot检测脂代谢和凋亡相关蛋白;siRNA干扰肺癌细胞AMPK的表达;Co-IP检测Ad-apoptin与AMPK蛋白相互间作用;建立移植瘤小鼠模型,检测肿瘤的生长,并通过免疫组化检测TUNEL、Ki-67、p-AMPK和FASN蛋白表达量。结果:Ad-apoptin对肺癌细胞抑制率具有浓度依赖性(P<0.05),显著诱导细胞凋亡(P<0.05),降低细胞脂质累积,下调三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)含量,上调p-AMPK和p-ACC;敲低AMPK可显著减弱Ad-apoptin诱导的凋亡,而抑制ACC可显著增强Ad-apoptin诱导的凋亡。在体内试验中,Ad-apoptin能抑制体内肿瘤生长,同时也能抑制细胞增殖,并促进细胞凋亡。结论:Ad-apoptin以AMPK为靶点,通过AMPK/ACC途径,抑制肿瘤增殖和脂代谢并促进细胞凋亡。     

二烯丙基二硫化物诱导人肺癌H1299细胞凋亡机理研究

目的:研究大蒜提取物二烯丙基二硫化物(DADS)诱导人非小细胞性肺癌细胞H1299凋亡及细胞周期阻滞对此过程的影响,探讨DADS抗肿瘤的可能机制。方法:MTT法检测细胞活性、Hoechst 33258染色法计数凋亡细胞、流式细胞术检测细胞凋亡率及周期分布。结果:与未处理的对照组相比,DADS可诱导H1299细胞产生典型的凋亡细胞形态学变化,并呈浓度依赖性诱导H1299细胞凋亡;较高浓度的DADS能诱导G2/M期细胞百分率显著升高。结论:DADS能诱导H1299细胞发生细胞凋亡,并诱导H1299细胞发生G2/M期阻滞。     

X射线诱导NSCLC组织Axin表达并通过p53或JNK途径促进细胞凋亡

目的研究X-射线对非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)组织中Axin表达的作用,以及X射线上调Axin表达的机制。方法应用Westernblot、RT-PCR方法检测15例经过X射线照射后NSCLC组织中Axin在蛋白水平及RNA水平的表达变化情况以及caspase-3活化情况。转染Axin及AxinΔp53ΔHIPK2至A549、BE1细胞中,并施加p53或JNK抑制剂,细胞经X线照射后用流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡,研究Axin上调细胞凋亡的机制。结果经X射线照射后,在15例NSCLC肺癌组织中,有8例Axin在RNA水平和蛋白水平上表达上调,与Axin未上调组相比,细胞凋亡显著增加(P<0.05)。转染Axin能使A549、BE1细胞凋亡明显增加,AxinΔp53ΔHIPK2不能上调A549细胞凋亡,p53抑制剂和JNK抑制剂分别抑制A549和BE1细胞凋亡。结论 X射线诱导部分NSCLC组织Axin表达增加并促进细胞凋亡,Axin通过p53或JNK途径促进X射线诱导的细胞凋亡。检测NSCLC组织中是否存在p53基因突变并不能作为判定是否对X射线敏感的指标。