HIF-3α在骨肉瘤组织中的表达及低氧状态对MG-63细胞侵袭能力的影响

目的 探讨HIF-3α在骨肉瘤侵袭转移中的作用,观察低氧对骨肉瘤MG-63细胞侵袭能力的影响。方法 收集15例骨肉瘤组织和15例骨软骨瘤组织,用免疫组织化学染色方法检测骨肉瘤组织和骨软骨瘤组织中HIF-3α的表达情况;MG-63细胞低氧刺激,用定量RT-PCR和Western Blot方法检测MG-63细胞中HIF-3α的表达情况;用细胞黏附实验、细胞迁移实验及细胞侵袭实验检测MG-63细胞的黏附、迁移及侵袭能力。在MG-63细胞中,敲降HIF-3α或过表达HIF-3α后,检测低氧对细胞的黏附、迁移及侵袭能力的影响。结果 免疫组化结果显示骨肉瘤组织中HIF-3α高表达而骨软骨瘤组织中HIF-3α低表达。与常氧条件相比,低氧促进MG-63细胞中HIF-3α mRNA和HIF-3α蛋白的表达,低氧增强MG-63细胞的黏附、迁移及侵袭能力。MG-63细胞中HIF-3α的敲降减弱了MG-63细胞的黏附、迁移及侵袭能力而HIF-3α的过表达增强了MG-63细胞的黏附、迁移及侵袭能力。结论 低氧促进了MG-63细胞中的HIF-3α的表达,增强了MG-63细胞的侵袭转移能力,HIF-3α在低氧诱导的MG-63细胞侵袭转移中具有重要作用。     

FoxM1通过促进肿瘤干细胞化参与骨肉瘤细胞对顺铂的耐药

目的探讨FoxM1是否通过促进肿瘤干细胞化参与骨肉瘤细胞对顺铂的耐药。方法利用骨肉瘤亲本细胞MG-63,采用递增药物浓度筛选建立顺铂耐药细胞MG-63R;运用慢病毒转染FoxM1建立稳定过表达MG-63F细胞及空载体对照MG-63V细胞。MTT法检测细胞对顺铂药物的敏感性。Western blot法检测FoxM1及肿瘤干细胞相关标志物Sox-2、Oct-4、Nanog蛋白水平表达。无血清培养悬浮克隆球实验检测微球形成能力。检测FoxM1抑制剂Thiostrepton处理后对肿瘤干细胞相关标志物表达水平、微球形成能力和对顺铂药物敏感性的影响。结果在2μg/mL顺铂浓度下稳定生长和传代的耐药细胞MG-63R的半数有效抑制浓度IC_(50)由亲本细胞中1.27上升为7.36,FoxM1蛋白水平在MG-63R中表达较MG-63明显增高;MG-63R中肿瘤干细胞相关标志物Sox-2、Oct-4、Nanog蛋白水平表达明显升高,同时平均悬浮克隆球数量明显增多。成功构建FoxM1过表达细胞MG-63F,其FoxM1蛋白表达水平较空载体对照MG-63V明显增高,肿瘤干细胞相关标志物也明显升高,平均悬浮克隆球数量由14增加至25,差异有统计学意义。MG-63F细胞对顺铂耐药性明显升高,IC_(50)由对照组0.96升高为31.23;MG-63F细胞经4μmol/L Thiostrepton处理后,FoxM1蛋白表达明显降低,对顺铂的敏感性明显增加,同时肿瘤干细胞相关标志物表达明显降低,平均悬浮克隆球数目也明显减少。结论 FoxM1过表达可能通过促进肿瘤干细胞化参与骨肉瘤细胞对顺铂的耐药,FoxM1抑制剂可能通过逆转肿瘤干细胞化而增强骨肉瘤耐药细胞对顺铂的敏感性。     

反义c-myc对增强顺铂引起骨肉瘤细胞凋亡作用的实验研究

目的：通过反义基因治疗降低人骨肉瘤MG-63细胞c-myc的表达，并探讨顺铂对c-myc低表达的人骨肉瘤MG-63细胞凋亡作用的影响。 方法： 以腺病毒为载体，构建表达反义c-myc的重组腺病毒（Ad-Asc-myc），并在体外转染骨肉瘤MG-63细胞，降低MG-63细胞c-myc的表达，与不同浓度的顺铂作用后，采用MTT、蛋白免疫印迹（Western blot）、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、流式细胞仪（FCM）、透射电镜等检测顺铂对骨肉瘤MG-63细胞体外增殖抑制、凋亡相关基因的表达和凋亡作用。 结果： 构建的Ad-Asc-myc体外转染MG-63细胞48 h后，可明显降低c-Myc蛋白表达，并与浓度为2.0 mg/L的顺铂作用2 h后 ，对MG-63细胞的体外增殖抑制率可达38.0%；转染的细胞Bcl-2表达降低，Bax表达增加，而E2F-1的表达无变化；FCM、电镜等显示Ad-Asc-myc转染后可诱导骨肉瘤细胞凋亡，并增加顺铂对骨肉瘤细胞的凋亡作用。 结论： 降低c-myc表达能诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡并增加顺铂对MG-63细胞的促凋亡作用。     

miR-124靶向调节STAT3基因对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-124及STAT3在骨肉瘤组织中的表达,以及miR-124对骨肉瘤MG-63细胞增殖和侵袭的影响。方法 Real-time PCR法检测67例患者骨肉瘤组织及对应的癌旁组织中miR-124的表达,免疫组织化学方法检测STAT3蛋白的表达。使用脂质体将miR-124抑制剂及miR-124模拟物转染至骨肉瘤MG-63细胞株,以无关序列作为阴性对照。Western blot方法检测转染后STAT3蛋白的表达变化,采用MTT方法与Transwell实验检测转染后MG-63细胞的增殖侵袭能力变化。结果 miR-124在骨肉瘤组织中的表达明显低于癌旁组织(P0.01);STAT3蛋白在骨肉瘤组织中的表达明显高于癌旁组织(P0.01);转染miR-124抑制剂的MG-63细胞增殖侵袭能力与对照组相比显著升高,细胞内STAT3蛋白表达亦明显升高;转染miR-124模拟物后则得到相反的结果(P0.01)。结论 miR-124抑制骨肉瘤MG-63细胞的增殖和侵袭可能与下调STAT3的表达相关。     

miRNA-10b靶向调控Twist促进骨肉瘤细胞增殖与侵袭的研究

目的探讨microRNA-10b对骨肉瘤细胞MG-63增殖与侵袭能力的影响及潜在作用机制。方法应用实时荧光定量PCR检测人骨肉瘤组织和癌旁正常骨组织中miR-10b的表达差异。将miR-10b mimic和Twist特异性的siRNA (Twist siRNA)分别通过脂质体转染法转染入骨肉瘤细胞系MG-63,应用RT-PCR检测细胞中miR-10b和Twist mRNA的表达,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测Twist及内参β-actin蛋白表达水平,采用MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium]法检测miR-10b mimic及Twist siRNA对人骨肉瘤细胞系MG-63增殖能力的影响;采用Transwell侵袭实验检测miR-10b mimic及Twist siRNA对人骨肉瘤细胞系MG-63侵袭能力的影响。结果与正常癌旁骨组织相比,miR-10b在骨肉瘤组织中呈现明显高表达,差异具有极显著性统计学意义(P0.01); miR-10b mimic可使Twist mRNA和蛋白表达水平升高,差异具有统计学意义(P0.05),同时可显著增强MG-63细胞的增殖与侵袭能力(P0.05),而转染miR-10b mimic和Twist siRNA的MG-63细胞的增殖与侵袭能力较仅转染miR-10b mimic的MG-63细胞显著减弱(P0.05)。结论人骨肉瘤细胞系MG-63中miR-10b的表达上调,可能通过靶向激活Twist信号通路促进骨肉瘤细胞的异常增殖与远处侵袭。     

腺病毒介导反义c-myc联合咖啡因在骨肉瘤化疗中增效作用的实验研究

目的： 构建重组反义c-myc腺病毒并探讨其与咖啡因对人骨肉瘤MG-63细胞顺铂化疗的影响。方法: 应用基因重组技术，将约750 bp的人c-myc cDNA反向克隆到腺病毒载体，构建表达反义c-myc的重组腺病毒（Ad-Asc-myc），与咖啡因、顺铂单独或联合体外作用于人骨肉瘤MG-63细胞，采用蛋白免疫印迹（Western blotting）、MTT、流式细胞仪（FCM）、透射电镜等检测c-Myc蛋白、bcl-2、bax、E₂F-1等基因表达、瘤细胞体外增殖抑制、凋亡及细胞周期，分析Ad-Asc-Myc、咖啡因对人骨肉瘤MG-63细胞顺铂化疗的影响。结果: 成功构建Ad-Asc-myc，滴度可达2×10¹²pfu/L，体外转染MG-63细胞48 h后，可降低c-Myc蛋白表达，并抑制其体外增殖；Ad-Asc-myc、2.0 mol/L咖啡因分别与浓度为2.0、5.0 mg/L顺铂共同作用后 ，可增加顺铂对MG-63细胞的体外增殖抑制率；Ad-Asc-myc联合2.0 mol/L咖啡因能明显加强顺铂的体外抗肿瘤作用，凋亡相关基因bcl-2基因表达下降，bax表达上升，而E2F-1表达无明显变化；FCM检测显示Ad-Asc-myc的转染可诱导骨肉瘤细胞凋亡，并增加顺铂诱导瘤细胞凋亡作用；单独咖啡因不能诱导瘤细胞凋亡，但能增加顺铂诱导瘤细胞凋亡作用；Ad-Asc-myc联合2.0 mol/L咖啡因能明显加强顺铂诱导瘤细胞凋亡作用。细胞周期分析显示顺铂作用后瘤细胞出现S期阻滞，而咖啡因则能逆转这种阻滞；Ad-Asc-myc转染的骨肉瘤细胞出现G₂/M期阻滞。结论: 腺病毒介导反义c-myc联合咖啡因能明显增强顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞的诱导凋亡及化疗作用。     

沉默基因CD147对骨肉瘤细胞生物学行为的影响

目的观察RNA干扰技术沉默CD147基因对骨肉瘤MG-63细胞生物学行为的影响。方法实验分为正常细胞组(mock)、阴性对照组(Ad-si Control)及RNA干扰组(Ad-CD147-si RNA)。应用MTT法实验检测骨肉瘤MG-63细胞的增殖率变化,应用Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力变化,应用ELISA方法检测MMP-2、MMP-9、VEGF蛋白变化。结果 Ad-CD147-si RNA抑制MG-63细胞增殖;RNA干扰CD147基因表达后MG-63细胞的运动侵袭能力下降,穿过人工基底膜细胞数量明显减少,MG-63细胞分泌VEGF、MMP-2、MMP-9能力显著降低,结论 AdCD147-si RNA抑制骨肉瘤MG-63细胞的增殖和侵袭可能与下调MMP-2、MMP-9、VEGF表达相关。     

LncRNA MEG3在骨肉瘤组织中的表达及对MG-63细胞增殖、凋亡与侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA母系印记基因3(lncRNA MEG3)在骨肉瘤组织中的表达及对人骨肉瘤细胞MG-63增殖、凋亡与侵袭的影响。方法实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测5例骨肉瘤组织及癌旁对应正常组织中lncRNA MEG3的表达水平。构建pcDNA3.1-MEG3重组质粒,MEG3过表达后,MTT方法检测MG63细胞增殖能力的变化;流式细胞术检测MG63细胞的凋亡率;Transwell实验检测MG63细胞侵袭能力的变化;Western blot方法检测MG63细胞增殖细胞核抗原(PCNA)与Racl蛋白的表达变化。结果 lncRNA MEG3在骨肉瘤组织中的表达显著低于癌旁正常组织(P0.01)。lncRNA MEG3过表达后,MG63细胞的增殖与侵袭能力显著降低,凋亡率显著上升,PCNA与Racl蛋白的表达显著降低(P0.01)。结论 lncRNA MEG3在骨肉瘤组织中低表达,过表达lncRNA MEG3能够抑制人骨肉瘤细胞MG-63的增殖与侵袭,并促进凋亡。     

辣椒素诱导人骨肉瘤细胞MG-63发生免疫原性细胞死亡

目的探讨辣椒素与顺铂能否抑制人骨肉瘤细胞MG-63增殖并诱导其免疫原性死亡(ICD)。方法 MTT检测细胞的增殖;线粒体膜电位分析细胞凋亡;流式细胞计量术检测细胞膜上钙网蛋白(CRT)表达量;荧光素酶法检测细胞外ATP的释放;ELISA检测细胞上清中高迁移率族蛋白1(HMGB1)的分泌。结果辣椒素及顺铂作用均能抑制细胞MG-63增殖(P0.01),且呈剂量依赖性;辣椒素和顺铂均可诱导MG-63细胞凋亡(P0.01),但只有辣椒素能诱导MG-63细胞内质网中CRT转移到细胞膜表面,且促进ATP及HMGB1的释放(P0.01)。结论辣椒素可诱导人骨肉瘤细胞凋亡及免疫原性死亡。     

BMP4沉默对骨肉瘤细胞系MG-63上皮间质转换及侵袭转移能力的影响

目的探讨沉默骨形成蛋白-4(BMP4)对骨肉瘤细胞系MG-63上皮间质转换(EMT)和侵袭迁移能力的影响。方法脂质体法转染MG-63细胞BMP4 shRNA表达质粒,将MG-63细胞分为MG-63对照组(正常培养对照)、空白对照组(转染空白质粒)和BMP4沉默组(转染BMP4 shRNA质粒)。反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western blot检测细胞E-cadherin、vimentin、twist和snail的mRNA及蛋白水平。Transwell侵袭实验和伤口愈合实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果沉默BMP4后MG-63细胞的间质细胞标志物vimentin、twist1和snail水平降低,上皮细胞标志物E-cadherin表达增高(P0.05)。BMP4沉默组细胞穿膜细胞数和迁移距离显著少于MG-63对照组和空白对照组(P0.05)。结论沉默BMP4基因可以使间质型MG-63骨肉瘤细胞向上皮细胞表型转变,从而有效地降低肿瘤细胞的侵袭迁移能力。     

异甘草素对人骨肉瘤细胞MG-63增殖及侵袭的影响

目的探讨异甘草素(ISL)对人骨肉瘤细胞MG-63增殖及侵袭的影响及可能机制。方法采用不同浓度异甘草素(0,5,10,20μg/ml)作用于MG-63细胞后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察ISL对MG-63细胞生长的抑制作用。单一浓度的异甘草素(20μg/ml)处理MG-63细胞48h后,Transwell实验检测MG-63细胞侵袭能力变化,Western blot方法检测Bcl-2、Bax及自噬相关蛋白Beclin1、LC3的表达,实时PCR方法检测Bcl-2mRNA与Bax mRNA的表达水平。结果 ISL以浓度依赖性抑制MG-63细胞增殖。经20μg/ml异甘草素处理后,MG-63细胞侵袭能力显著降低,Bcl-2蛋白的表达下调,Bax及自噬相关蛋白Beclin1、LC3蛋白的表达上调,Bcl-2 mRNA的表达水平下调,Bax mRNA的表达水平上调。结论异甘草素在体外能够抑制MG-63细胞增殖与侵袭,与激活线粒体凋亡通路及自噬通路相关。     

长链非编码RNA TTTY15在骨肉瘤组织中的表达及其对骨肉瘤细胞活力和侵袭的影响

目的:观察长链非编码RNA TTTY15在骨肉瘤组织及细胞株中的表达,并探讨其对骨肉瘤细胞活力和侵袭的影响。方法:应用qPCR法检测11例骨肉瘤组织及其瘤旁组织中TTTY15的水平,同时检测TTTY15在骨肉瘤细胞株(143B、Saos2、MG-63、U2OS和HOS)和人成骨细胞株hFOB1.19中的表达。在表达量最高的细胞株(MG-63)中通过转染小干扰RNA敲减TTTY15的表达,CCK-8法检测TTTY15低表达对细胞活力的影响,流式细胞术检测其对细胞周期的影响,Transwell检测其对细胞侵袭能力的影响,qPCR检测miR-216b-5p和FOXM1 mRNA的表达,Western blot法检测相关蛋白的变化。结果 :与瘤旁正常组织相比,TTTY15在骨肉瘤组织中表达升高(P0.01);与人成骨细胞相比,TTTY15在骨肉瘤细胞株中表达升高(P0.05),其中在MG-63细胞中表达水平最高(P0.01)。敲减TTTY15在MG-63细胞的表达后,细胞活力降低(P0.05),细胞周期被抑制在G_0/G_1期(P0.01),细胞的侵袭能力降低(P0.01),miR-216b-5p mRNA表达水平升高(P0.01),FOXM1的mRNA表达降低(P0.01),同时FOXM1、CDK4、cyclin D1、MMP-2和N-cadherin的蛋白表达降低,而E-cadherin的蛋白表达升高(P0.05)。结论:TTTY15在骨肉瘤组织和细胞株中表达增高,敲减TTTY15的表达可抑制骨肉瘤细胞的活力和侵袭能力,其机制可能与TTTY15低表达导致miR-216b-5p的表达升高,引起FOXM1基因表达下调有关。     

PI3K-AKT-mTOR通路对骨肉瘤细胞顺铂耐药性的影响及其机制

目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B(AKT)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路对骨肉瘤细胞顺铂耐药性的影响及其机制,为骨肉瘤的靶向治疗提供新的思路。方法体外培养MG-63细胞,予2μg/mL顺铂重复给药建立MG-63耐药细胞株,向MG-63耐药细胞株中转染miRNA-22高表达质粒建立miRNA-22高表达的MG-63耐药细胞株。以MG-63细胞为对照组,MG-63耐药细胞为耐药组,用2μg/mL顺铂处理后的MG-63耐药细胞和转染miRNA-22的MG-63耐药细胞分别为耐药DDP组、耐药miRNA-22+DDP组。采用噻唑兰(MTT)法检测细胞增殖能力。采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞内PI3K、AKT以及mTOR mRNA的表达。采用Western blot检测细胞内PI3K、AKT以及mTOR蛋白的表达。结果(1)MTT法检测结果显示,对照组、耐药组、耐药DDP组和耐药miRNA-22+DDP组的吸光度分别为1.097±0.039、1.157±0.065、0.870±0.014和0.737±0.029,差异有统计学意义(F=67.731,P<0.01):与对照组比较,耐药DDP组、耐药miRNA-22+DDP组吸光度均明显下降,差异均有统计学意义(P值均<0.01);耐药组、耐药DDP组、耐药miRNA-22+DDP组3组间比较,吸光度呈下降趋势,差异均有统计学意义(P值均<0.01)。(2)荧光定量RT-PCR结果显示,与对照组比较,耐药组、耐药DDP组PI3K、AKT的相对表达量均增多,尤其以耐药组增多明显(P值均<0.01),耐药miRNA-22+DDP组与对照组差异均无统计学意义(P值均>0.01);而mTOR相对表达量耐药组增高,耐药DDP组、耐药miRNA-22+DDP组均降低,差异均有统计学意义(P值均<0.01)。耐药DDP组、耐药miRNA-22+DDP组PI3K、AKT、mTOR的相对表达量均低于耐药组,差异均有统计学意义(P值均<0.01);而耐药miRNA-22+DDP组仅PI3K、mTOR的相对表达量低于耐药DDP组,差异均有统计学意义(P值均<0.01)。(3)Western blot检测结果显示,与对照组比较,耐药组PI3K、AKT、mTOR蛋白的相对表达量均明显增加,耐药DDP组、耐药miRNA-22+DDP组PI3K、AKT蛋白的相对表达量均明显降低,差异均有统计学意义(P值均<0.01)。耐药组、耐药DDP组、耐药miRNA-22+DDP组3组间两两比较,耐药DDP组、耐药miRNA-22+DDP组PI3K、AKT、mTOR蛋白的相对表达量均明显低于耐药组,耐药miRNA-22+DDP组PI3K、AKT蛋白的相对表达量均明显低于耐药DDP组,差异均有统计学意义(P值均<0.01)。结论PI3K-AKT-mTOR通路参与了骨肉瘤细胞对顺铂耐药性的产生,miRNA-22通过下调PI3K-AKT-mTOR通路中PI3K、AKT以及mTOR的表达降低骨肉瘤细胞对顺铂的耐药性。     

黄芩素对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的抑制作用及机制

目的探讨黄芩素对骨肉瘤细胞增殖、侵袭的影响及其相关机制。方法以骨肉瘤MG-63细胞为研究对象,分别加入20μL的培养液(对照组)或(0、100、200)μmol/L黄芩素溶液处理细胞48h,应用MTT法分析细胞增殖情况,通过TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭能力,荧光实时定量PCR测定ezrin mRNA表达,采用Western blot法检测ezrin蛋白及磷酸化ezrin(p-ezrin)蛋白表达,利用原位末端标记法(TUNEL)测定肿瘤细胞凋亡指数(AI)。结果 (100、200)μmol/L黄芩素组细胞增殖抑制率较0μmol/L黄芩素组升高,且200μmol/L黄芩素组细胞增殖抑制率明显高于100μmol/L黄芩素组。随着黄芩素浓度的增加,平均穿膜细胞数以及ezrin mRNA、ezrin蛋白、p-ezrin蛋白表达水平逐渐降低,而AI逐渐增加,与对照组和0μmol/L黄芩素组比较,差异均有显著降低,而0μmol/L黄芩素组与对照组相比无明显变化。结论黄芩素能够抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖、侵袭,其机制可能与抑制ezrin蛋白表达和活性及促进肿瘤细胞凋亡有关。     

白藜芦醇调控miR-34a表达对骨肉瘤MG-63细胞生长、侵袭和自噬的影响

目的:探讨白藜芦醇通过调控微小RNA-34a(miR-34a)表达对骨肉瘤MG-63细胞生长、侵袭和自噬的影响。方法:将骨肉瘤MG-63细胞分为对照组及10、20、40、60和80μmol/L白藜芦醇处理组。采用MTT法、Transwell小室和Western blot实验检测各组骨肉瘤细胞的活力、侵袭能力及自噬蛋白表达;RT-q PCR检测各组骨肉瘤细胞中miR-34a的表达。转染miR-34a模拟物(miR-34a mimic)及阴性对照(miR-34a NC)至骨肉瘤细胞,检测miR-34a mimic和miR-34a NC在白藜芦醇处理后对骨肉瘤细胞活力和侵袭能力的影响,Western blot检测自噬标志蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ和beclin-1的蛋白表达。结果:与对照组相比,不同浓度的白藜芦醇可抑制肿瘤细胞的活力和侵袭能力,促进自噬(P0.05)。白藜芦醇可上调肿瘤细胞中miR-34a的表达,并具有剂量依赖性(P0.05),同时促使LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,beclin-1蛋白表达量上调(P0.05)。miR-34a mimic可增加白藜芦醇对骨肉瘤细胞活力和侵袭能力的抑制,并进一步促进自噬。结论:白藜芦醇可能通过上调miR-34a表达抑制骨肉瘤MG-63细胞生长并促进其自噬。     

二膦酸盐与顺铂对体外MG-63细胞株生长影响的比较

背景：有研究表明二膦酸盐可以作用于骨肉瘤细胞,但是其作用效果与传统的一线化疗药物顺铂的效果对比分析目前报道较少。目的：分析二膦酸盐对体外人骨肉瘤细胞产生抑制增殖、诱导凋亡的作用与顺铂的差异。方法：对MG-63细胞株培养传代后,分别以不同质量浓度二膦酸盐、顺铂干预细胞,并设未干预组为阴性对照组,通过MTT法测定二膦酸盐及顺铂作用后人骨肉瘤细胞的抑制率,并通过荧光染色观察细胞形态。结果与结论：不同质量浓度的二膦酸盐及顺铂处理MG-63细胞不同时间后,细胞生长抑制率与空白组(无药物干预)对照明显升高(P < 0.05)。分析发现两者在24,48,72 h率的差异无显著性意义(P > 0.05)。认为二膦酸盐对体外骨肉瘤细胞的生长有明显的抑制作用,其抑制作用与顺铂相似。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

白杨素对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响

目的探讨白杨素对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响及可能机制。方法采用不同浓度白杨素(0,2.5,5,10,20,40 mg/L)作用于MG-63细胞后,MTT法和流式细胞仪分别检测白杨素对细胞增殖与凋亡的影响。蛋白免疫印迹检测白杨素(20 mg/L)对骨肉瘤细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3、Survivin蛋白表达的影响。Real-time PCR方法检测白杨素(20 mg/L)对骨肉瘤细胞Bax mRNA、Bcl-2 mRNA、Caspase-3 mRNA、Survivin mRNA表达水平的影响。结果白杨素抑制MG-63细胞增殖、促进MG-63细胞凋亡,并呈浓度依赖性。经20 mg/L白杨素处理后,MG-63细胞Bax与Caspase-3蛋白与mRNA表达水平显著升高,而Bcl-2与Survivin蛋白与mRNA表达水平显著降低。结论白杨素在体外抑制MG-63细胞增殖,促进MG-63细胞凋亡,与调控凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达相关。     

人骨肉瘤细胞系MG-63细胞球形成细胞干性特征

目的从人骨肉瘤细胞系MG-63中分离细胞球,鉴定其干性特征并探讨其与侵袭、转移的相关性及可能机制。方法无血清悬浮培养富集MG-63细胞球,PKH26染色确定细胞球中存在干细胞,Western blot检测细胞球干性相关蛋白表达。甲基纤维素半固体培养及Transwell小室检测细胞球自我更新及侵袭能力,并对上皮间质转化和侵袭、转移相关蛋白进行检测。结果 MG-63细胞无血清悬浮培养11 d后形成的细胞球中存在单个PKH26阳性细胞。与MG-63单层细胞相比,干细胞相关蛋白OCT-4、SOX2和Nanog表达显著提高(P0. 05)。MG-63细胞球细胞成球数是单层细胞的1. 84倍(P0. 01),侵袭能力较单层细胞提高1. 45倍(P0. 01)。细胞球中E-cadherin低表达,snail及MMP2高表达(P0. 05)。结论骨肉瘤细胞系MG-63细胞球形成细胞具有干性特征,通过上皮间质转化促进了细胞的侵袭与转移。     

重组人IFN-α联合顺铂对MG-63细胞凋亡及侵袭转移潜能的影响

能力(P＜0.05).结论 rhIFN-α对MG-63细胞的增殖抑制效应具有剂量依赖性特点,且不同剂量rhIFN-α均能促进MG-63细胞对顺铂的敏感性并可抑制MG-63细胞的侵袭转移.     

白花蛇舌草上调miR-485-5p抑制人膀胱癌细胞系KU-19-19增殖、迁移和侵袭

目的探讨白花蛇舌草对膀胱癌细胞系KU-19-19增殖、迁移和侵袭的影响和可能的分子机制。方法将KU-19-19细胞分为对照组、白花蛇舌草组、miR-NC组、miR-485-5p组、anti-miR-NC组、anti-miR-485-5p组、白花蛇舌草+anti-miR-NC组、白花蛇舌草+anti-miR-485-5p组、白花蛇舌草+anti-miR-485-5p+LY294002组。细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell实验、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分别检测细胞增殖、迁移侵袭以及miR-485-5p的表达。蛋白质印迹(Western blot)检测磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。结果白花蛇舌草干预后KU-19-19细胞增殖率、迁移侵袭细胞数显著降低,miR-485-5p表达显著升高(P0.05);过表达miR-485-5p后,KU-19-19细胞增殖率、迁移侵袭细胞数显著降低(P0.05);抑制miR-485-5p表达后,KU-19-19细胞增殖率、迁移侵袭细胞数显著升高(P0.05)。抑制miR-485-5p可以逆转降低白花蛇舌草对KU-19-19细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P0.05);LY294002可以逆转降低抑制miR-485-5p对白花蛇舌草处理的KU-19-19细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用(P0.05)。结论白花蛇舌草通过上调miR-485-5p可抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。