凝血酶促进肺癌Glc-82移植瘤的发展及其机制探讨

目的探讨凝血酶在体内促进肺癌Glc-82移植瘤的发展及其作用机制。方法细胞黏附试验和细胞迁移试验观察凝血酶对Glc-82细胞黏附特性和转移特性的影响,裸鼠移植瘤实验观察凝血酶对Glc-82移植瘤荷瘤小鼠体质量、瘤质量、肺结节及生存期的影响,Western印迹法观察凝血酶对移植瘤组织细胞外信号调节激酶（ERK）、黏着斑激酶（FAK）和抑癌蛋白PTEN（10号染色体上检出的磷酸酶和张力蛋白同源蛋白）的影响。结果凝血酶在体外显著促进Glc-82细胞的黏附和迁移;在体内,凝血酶可降低荷瘤小鼠的体质量、增加瘤质量占体质量比、部分凝血酶组小鼠肺转移增多、荷瘤小鼠的生存时间缩短;Western印迹结果显示,凝血酶可促进肿瘤组织ERK的激活,促进FAK的表达,并且抑制抑癌基因PTEN的表达。结论凝血酶促进肺癌Glc-82移植瘤的恶性进展,可能与促进肿瘤细胞的黏附和迁移特性,促进肿瘤组织ERK、FAK的激活及表达有关,并可能通过抑制抑癌蛋白PTEN的表达而发挥作用。     

siRNA干扰明胶酶对人肾小管细胞ICAM-1表达的影响

目的 利用小干扰RNA(siRNA)抑制人肾小管上皮细胞(HKC)的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9,即明胶酶A和B的表达,观察其对胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响.方法 培养人肾小管上皮细胞,以100nmol/L佛波醇酯(PMA)刺激18h,脂质体转染抑制MMP-2或MMP-9表达的siRNA或无关siRNA.提取细胞总RNA或胞浆蛋白,利用Real-Time PCR、Western blot或免疫荧光结合激光共聚焦显微镜技术检测MMP-2、MMP-9或ICAM-1的表达情况.结果 特异性的siRNA能有效抑制HKC中MMP-2、MMP-9的mRNA和蛋白表达;免疫荧光结果显示经PMA刺激后HKC的ICAM-1表达上调,同时MMP-9-siRNA转染组人肾小管细胞的ICAM-1蛋白表达水比其他实验组高(P＜0.05).结论 抑制肾小管上皮细胞MMP-9的表达可使ICAM-1表达上调,提示除了细胞外基质降解途径外,MMP-9还可通过炎症途径影响肾脏纤维化进程.     

人参皂甙20(R)-Rg3对人胶质瘤U87侵袭的影响

目的探讨人参皂甙20(R)-Rg3体外对人胶质瘤系U87细胞侵袭的影响及可能机制。方法采用MTT法检测Rg3对U87细胞黏附纤维连接蛋白能力的影响。采用Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭实验检测Rg3对U87细胞侵袭能力的影响。采用明胶酶活性方法检测Rg3对U87细胞MMP-9和MMP-2蛋白表达的影响。结果 Rg3(12.5、25、50 ng/L)作用24 h后,U87细胞黏附纤维连接蛋白能力逐渐降低,呈显著的浓度依赖性(P<0.05)。体外侵袭实验显示不同浓度Rg3作用24 h后,U87细胞侵袭能力逐渐降低。明胶酶活性检测表明增殖,不同浓度Rg3作用24 h后,U87细胞中基质金属蛋白酶MMP-2蛋白酶原及其活性片段的表达逐渐减少,呈显著的浓度依赖性。结论 Rg3能显著抑制U87细胞的黏附和侵袭能力,可能与Rg3降低MMP-2蛋白酶原及其活性片段表达减少有关。     

芍药苷对辐射内皮细胞起保护作用的机制

目的观察芍药苷对辐射损伤内皮细胞保护作用的分子机制。方法 10Gy60Coγ照射前1h给予内皮细胞芍药苷,采用逆转录聚合酶链反应、免疫组化以及免疫印迹等方法检测细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子1的表达。结果人脐静脉内皮细胞经10Gy60Coγ照射后与正常组细胞相比,活性氧,丙二醛水平明显上升,谷胱甘肽,超氧化物歧化酶水平明显降低,黏附分子mRNA与蛋白的表达明显升高;随着芍药苷给药浓度的变化,加药组细胞中活性氧,丙二醛水平逐渐降低,谷胱甘肽,超氧化物歧化酶水平逐渐升高;免疫组化的结果显示芍药苷可降低辐射引起的黏附分子的表达,逆转录聚合酶链式反应检测显示芍药苷可降低辐射引起的黏附分子的mRNA的表达,Westernblot检测显示芍药苷可降低辐射引起的黏附分子的蛋白表达水平。分子信号通路的研究表明,芍药苷通过影响JNK通路进一步抑制激活物蛋白1与目的基因的结合。结论芍药苷通过抑制JNK细胞核激酶-激活物蛋白通路进而抑制黏附分子表达,这可能是芍药苷对辐射损伤内皮细胞保护作用的分子机制。     

甘西鼠尾草总酚酸提取物对电离辐射血管内皮细胞损伤的保护作用及机制研究

目的 研究甘西鼠尾草总酚酸提取物(SPE)对电离辐射血管内皮细胞损伤的保护作用,探讨其抗电离辐射作用机制.方法 人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分别给予10000、1000、500、250、125、62.5、30、15、5、1μg/ml SPE溶液处理24 h;HUVEC细胞暴露于10 Gy60Co γ射线照射后培养30 h,分别给予125、250、500 μg/ml SPE溶液处理24 h;HUVEC暴露于10 Gy 60Coγ射线照射后培养1h,加入100 μl组织细胞淋巴瘤细胞(U937细胞)溶液,1h后除去未黏附的细胞,分别给予125、250、500 μg/ml SPE溶液处理3h.采用MTS法检测以上溶液细胞活力变化.HUVEC暴露于10 Gy60Coγ射线照射后培养6h,分别给予125、250、500 μg/ml SPE溶液处理3h后,测定活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)含量,继续培养6h后,采用Western印迹检测Bcl-2、Bax、THBD、γH2AX、ICAM-1、VCAM-1等蛋白表达.结果 HUVEC可耐受1000 μg/ml以下的SPE溶液.对10000 μg/ml SPE溶液,其细胞活力下降极显著(P＜0.0001).与辐射模型组相比,250和500 μg/ml SPE剂量组的辐射HUVEC活力显著升高(P＜0.01)、与U937细胞间黏附比例显著降低(P＜0.01);SPE各组的ROS、MDA水平显著降低(P＜0.01),SOD、GSH水平显著升高(P＜0.01),且效应强度与剂量均呈正相关.SPE各组Bcl-2、THBD蛋白表达显著升高,Bax、γH2AX、ICAM-1及VCAM-1蛋白表达显著降低.结论 SPE可通过调节凋亡及细胞周期相关蛋白,增强血管内皮细胞抗凋亡能力和细胞活力,通过抑制单核细胞黏附、降低脂质过氧化、减轻血管内皮细胞氧化应激及炎症损伤等机制,对电离辐射血管内皮细胞损伤具有保护作用.     

CP节律性化疗对人脐静脉内皮细胞及其中自噬相关蛋白Beclin1、LC3的影响

 目的 研究持续低剂量磷酰胺氮芥(phosphoamide, PM)联合泼尼松龙(CP节律性化疗方案)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)自噬相关蛋白Beclin1和LC3表达水平的影响,探讨节律性化疗增加HUVEC对化疗药物敏感性的机制。方法 实验分DMSO对照组、磷酰胺氮芥(PM)组、泼尼松龙组、磷酰胺氮芥+泼尼松龙组(CP组),每组重复3次。采用不同的药物处理HUVEC,用CCK8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹法和反转录PCR检测自噬相关蛋白的表达水平。结果 (1)与DMSO对照组相比,随着时间的延长,PM、泼尼松龙及CP组均使HUVEC的增殖抑制率明显升高(P均<0.001),并且在相同作用时间,不同组的药物对细胞的增殖抑制率也明显不同,泼尼松龙组对细胞的抑制率最低,而CP组对细胞的增殖抑制率(72 h,25.1%±0. 7%)最高,PM组(72 h,20.4%±0.7%)次之(P均<0.01);(2)用药处理48 h后,与DMSO对照组相比,泼尼松龙组、PM组、CP组使HUVEC细胞的凋亡率依次增高(P均<0.001);(3)用药处理48 h后,与DMSO对照组相比,泼尼松龙组、PM组、CP组的Beclin1、LC3的蛋白表达和mRNA表达水平均依次下降(P均<0.001)。结论 人脐静脉内皮细胞HUVEC经CP节律性化疗方案处理后,可以显著降低HUVEC细胞的增殖水平,促进HUVEC细胞的凋亡,并显著降低自噬相关蛋白Beclin1和LC3的表达水平。     

舒洛地特对氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及其机制研究

目的 研究舒洛地特(SDX)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用及其机制.方法 CCK-8法确定ox-LDL干预HUVEC剂量及SDX药物浓度,活性氧(ROS)检测试剂盒验证SDX对HUVEC的保护作用.实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、小凹蛋白(caveolin)-1 mRNA表达,免疫印迹试验检测eNOS、caveolin-1蛋白表达.Transwell试验检测HUVEC迁移能力,免疫印迹试验检测抗磷酸化eNOS(p-eNOS)蛋白表达.结果 100 μg/ml ox-LDL刺激下,HUVEC细胞活力显著下降(P＜0.01),加入0.125 LRU/ml SDX后细胞活力明显改善(P＜0.01),ROS产生降低(P＜0.01).SDX可下调ox-LDL损伤HUVEC后caveolin-1 mRNA和蛋白表达(P＜0.05),上调eNOS mRNA和蛋白、p-eNOS蛋白表达(P＜0.05),明显改善受损HUVEC迁移能力(P＜0.01).结论 SDX通过调控caveolin-1/eNOS信号通路改善受损HUVEC细胞迁移能力,从而保护内皮细胞.     

14-3-3ζ抑制肺癌细胞转移的实验研究

目的:探讨14-3-3ζ与肺癌转移的关系。方法:以人肺巨细胞癌高低转移细胞株为模型,Western印迹验证14-3-3ζ在高低转移株中的差异表达;随后采用细胞转染技术将1433ζ基因导入人肺巨细胞癌高低转移株,通过研究转染后细胞增殖能力、黏附能力以及迁移能力的变化,探讨14-3-3ζ与肿瘤转移的相关性。结果:Western印迹检测发现14-3-3ζ在低转移株PLA801C中的表达水平显著高于高转移株PLA801D,在此基础上,构建成功正反义表达载体并转染细胞,转染正义载体后细胞的增殖减慢,黏附能力提高,体外迁移能力下降;而转染反义载体后细胞的增殖加快,体外迁移能力提高。结论:1433ζ可能抑制肺癌细胞的转移。     

白介素17A抑制博来霉素诱导的小鼠NIH/3T3细胞凋亡

目的探讨细胞因子白介素17A对于博来霉素诱导的小鼠成纤维细胞NIH/3T3凋亡的影响。方法使用博来霉素诱导细胞凋亡,使用TUNEL荧光染色试剂盒检测细胞凋亡情况,使用Western blot检测Caspase-3以及Bcl-2的蛋白表达情况。结果博来霉素可以促进NIH/3T3细胞DNA发生断裂,促进活性Caspase-3的蛋白表达,降低Bcl-2蛋白含量;白介素17A可以抑制NIH/3T3细胞DNA断裂,抑制活性Caspase-3的蛋白表达,促进Bcl-2的蛋白含量。结论博来霉素可以诱导小鼠NIH/3T3细胞发生凋亡,白介素17A可以抑制博来霉素诱导的细胞凋亡。     

人TIMP-1转基因小鼠肾组织内外源基因功能表型的鉴定

目的 对人基质金属蛋白酶组织抑制物-1（TIMP-1）转基因小鼠肾组织内外源人TIMP-1基因的功能表型进行鉴定，为深入研究TIMP-1在肾脏疾病进展过程中的病理生理作用奠定基础。方法 3月龄野生型小鼠（n=8，正常组）和hTIMP-1转基因小鼠（n=8）肾组织石蜡切片行PAS染色，观察肾脏组织结构变化。采用Northern杂交、Western印迹方法检测两组小鼠肾组织内h／mTIMP-1、mTIMP-1、TIMP-2、TIMP-3、MMP-9、MMP-2和COLⅣa5mRNA及蛋白质表达；明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9的活性。反向酶谱法检测TIMP-1的活性。结果 hTIMP-1转基因小鼠与正常组小鼠相比，肾组织结构未见显著变化。与正常组小鼠相比，hTIMP-1转基因小鼠肾组织内h／mTIMP-1mRNA、蛋白表达及活性显著升高（P＜0．05）；TIMP-2、MMP-2mRNA和蛋白表达降低（P＜0．05）；MMP-9的活性增高（P〈0．05），而MMP-2的活性则降低（P＜0．05）。两组小鼠mTIMP-1、TIMP-3、MMP-9和COLIVa5的mRNA表达没有显著性差异（P＞0．05）。结论 外源基因在人TIMP-1转基因小鼠肾组织内稳定表达并导致MMPs／TIMPs系统发生代偿性变化。     

肺癌H460细胞与单个核细胞相互作用对MMP-1、-2、-9表达的影响

目的：研究单个核细胞和肺癌H460细胞三维立体混合培养对MMP-1、MMP-2和MMP-9表达的影响,并观察MMPs对胶原的降解作用。方法：活性胶原立体培养分为空白对照组（CG）、H460细胞组（HG）、单个核细胞组（MG）、混合组（HMG）共4组,观察癌细胞的生长状况。用明胶酶谱法测定不同时间点各组MMP-2和MMP-9表达,用Western blotting法测定MMP-1。结果：各组细胞在立体胶原内生长良好。MG未明显分泌MMP-1、MMP-2和MMP-9,HG和HMG均分泌MMP-1、MMP-2和MMP-9,但HMG分泌量明显多于HG。结论：炎症细胞和癌细胞混合培养后,细胞间相互作用促进MMPs分泌增多。基质金属蛋白酶可降解细胞外基质,进而促进肺癌的侵袭和转移。     

胚肺成纤维细胞对肺癌细胞增殖及MMP-2表达的影响

目的：研究体外胚肺成纤维细胞对肺癌H460细胞增殖及MMP-2的影响。方法：在单层平面培养条件下,H460细胞和与胚肺成纤维细胞条件培养基共同培养;单层平面及三维立体培养条件下,H460细胞和胚肺成纤维细胞共同培养,MTT或明胶酶谱法测定H460细胞的增殖活力及MMP-2的表达。结果：胚肺成纤维细胞条件培养基不能促进肺癌H460细胞的增殖和MMP-2的表达。胚肺成纤维细胞与肺癌H460细胞共同培养时出现了MMP-2的表达明显增强。结论：胚肺成纤维细胞能通过促进H460细胞MMP-2的表达影响肺癌的侵袭和转移。     

miR21抑制剂对肺腺癌细胞A-549的抑制效果

目的 探讨miR21抑制剂转染人肺腺癌细胞A-549对其体外侵袭及血管形成能力的影响.方法 miR21抑制剂转染A-549细胞,同时设置未转染的A-549细胞作为对照组,转染24、48、72及96 h后,四甲基偶唑氮法（MTT）法检测两组细胞增殖抑制率;Transwell方法检测miR21抑制剂对A-549细胞侵袭的影响;小管形成实验检测miR21抑制剂对血管形成的影响.结果转染24 h,两组抑制率比较,差别无统计学意义;转染48 h及以后,抑制剂组抑制率均高于对照组,差别有统计学意义（P＜0.05）.Transwell检测结果显示miR21抑制剂组每个视野细胞数（11.60 ±5.32）个远少于对照组（107.60±3.21）个,两组差别有统计学意义（P＜0.01）.抑制剂组每视野小管计数平均（159.30 ±0.51）个,远少于对照组（508.80±1.30）个,两组差别有统计学意义（P＜0.01）.结论 miR21抑制剂能够明显抑制A-549的侵袭能力.并能明显抑制血管内皮细胞血管生成,提示miR21抑制剂可以作为潜在的肺癌基因治疗的新方法.     

双启动子杆状病毒介导131I肿瘤靶向治疗的实验研究

目的构建由人端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子调控的N1S基因以及由早期生长应答因子1（Egr1）启动子调控的人纤溶酶原Kringle5（K5）基因的双启动子重组杆状病毒载体,探讨同时靶向肿瘤细胞与血管内皮细胞的基因治疗模式的可行性。方法将hTERT启动子和N1S基因片段以及Egr1启动子和麟基因片段分别亚克隆至杆状病毒载体,经草地贪夜蛾卵巢细胞（Sf9）包装并扩增得到重组杆状病毒（Bac—hTERT-N1S—Egr1-K5）,同时将CMV启动子调控的重组杆状病毒（Bac—CMV-NIS—Egr1-K5）以及不含NIS基因或不含硒基因的重组杆状病毒（Bac—hTERT-O—Egrl-K5、Bac-hTERT-NIS—Egr1-0）作为对照组。采用荧光定量PCR及Westernblot分析NISmRNA和蛋白在人宫颈癌细胞HeLa中的靶向表达,以及131I辐射对K5mRNA和蛋白的表达调控。通过摄碘实验、NaClO4抑制实验以及细胞增殖抑制实验验证NIS蛋白的功能及由其介导的131I抑瘤作用。通过细胞凋亡实验评估K5蛋白对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的促凋亡作用。统计学检验采用方差分析。结果成功构建重组杆状病毒Bac—hTERT-NIS—Egr1-K5。荧光定量PCR及Westernblot显示肿瘤特异性启动子hTERT介导的NIS基因仅在HeLa细胞中有表达,而在正常肺纤维细胞MRC5中无表达。131I可以调控辐射敏感启动子Egr1下游您基因的转录和翻译。细胞摄碘实验显示Bac-hTERT-NIS—Egr1-K5感染的HeLa细胞摄碘增加了5．6倍,与未加NaClO4组比,其摄碘能被NaClO4显著抑制（F=199．296,P〈0．05）。131I对Bac—hTERT-NIS—Egr1-K5感染的HeLa细胞的抑制效果明显,细胞存活率仅为38．3％。Bac—hTERT-NIS—Egrl一K5感染的HUVEC细胞在131I照射下的凋亡率（30．8％）显著高于Bac．hTERT-NIS—Egr1-0组和未加病毒组（11．2％和10．9％,F=19．926、45．409,均P〈0．05）。结论重组杆状病毒Bac-hTERT-NIS—Egrl．K5可使NIS基因在肿瘤细胞?     

重组人血管能抑制素分泌型表达载体的构建及其生物学效应研究

目的　构建表达分泌型人血管能抑制素 (canstatin)蛋白的真核表达载体 ,观察其生物学效应。方法　以SOEPCR法将canstatin及癌胚抗原 (CEA)引导肽cDNA体外连接 ,并定向克隆到真核蛋白表达载体pCMV Script上 ,脂质体介导转染HUVEC及A5 4 9细胞 ,荧光定量PCR法检测转染细胞canstatin基因表达量 ,并采用多种方法检测该重组载体的生物学活性。结果　成功构建canstatin分泌型载体 ,在其转染的肿瘤细胞和人脐静脉内皮细胞中均检测到不同拷贝数的表达。转染后HUVEC生长增殖缓慢 ,出现G0 ～G1期阻滞并伴有大量凋亡 ,与空载体转染组相比差异有统计学意义 (P <0 0 5 ) ;而A5 4 9细胞转染后与空载体转染组在以上几个方面差异均无统计学意义 (P >0 0 5 )。重组载体转染A5 4 9细胞上清液干预的鸡胚绒毛尿囊膜血管生成明显减少 ,且颜色苍白、轮廓模糊 ,空载体转染组和未干预组血管生长旺盛、脉络清晰。结论　SOE法构建的含有CEA引导肽的canstatin分泌型表达载体能在转染的内皮细胞及肺癌细胞中稳定表达 ,可有效抑制内皮细胞生长增殖并诱导凋亡。重组载体转染的细胞可分泌有生物学活性的canstatin。     

肺癌MMP-9和VEGF的表达及意义

目的探讨肺癌组织中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达及其意义。方法采用免疫组化S-P法检测20例癌旁正常肺组织、84例肺癌组织中MMP-9和VEGF的表达。结果肺癌组织MMP-9和VEGF表达显著高于癌旁正常肺组织（P〈0.01）。小细胞肺癌和腺癌MMP-9表达高于鳞癌（P〈0.01）。肺癌MMP-9表达有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者（P〈0.01）,Ⅲ期和Ⅳ期高于Ⅰ期和Ⅱ期（P〈0.05）。肺癌VEGF表达有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者（P〈0.05）,Ⅲ期和Ⅳ期高于Ⅰ期和Ⅱ期（P〈0.05）。肺癌MMP-9和VEGF的表达呈正相关（P〈0.05）。结论MMP-9和VEGF表达与肺癌侵袭转移密切相关。     

人参皂苷Re对肿瘤坏死因子-α诱导的白细胞活化的抑制作用及机制

目的研究人参皂苷Re对肿瘤坏死因子-α诱导的白细胞活化的作用及其机制。方法提取并培养人外周血中性白细胞,用酶标仪和流式细胞仪体外观察肿瘤坏死因子-α(20 ng/ml)对中性白细胞黏附相关指标MPO的分泌以及白细胞表面黏附分子CD11b和CD18的表达的诱导作用,同时观察肿瘤坏死因子-α(20 ng/ml)对中性白细胞跨内皮细胞迁移的诱导作用,并测定不同浓度人参皂苷Re对以上变化的影响。结果人参皂苷Re可以剂量依赖性地明显抑制肿瘤坏死因子-α诱导的黏附于内皮细胞表面白细胞MPO的分泌和黏附分子CD11b、CD18的表达,明显抑制肿瘤坏死因子-α诱导的中性白细胞跨内皮细胞的迁移。结论人参皂苷Re可以抑制由肿瘤坏死因子-α诱导的白细胞的活化,包括白细胞与内皮细胞的黏附和游出,该作用与抑制白细胞表面黏附分子CD11b和CD18的表达相关。     

长双歧杆菌NCC2705纯化蛋白烯醇化酶、Tuf蛋白的黏附作用研究

目的：验证功能蛋白烯醇化酶（enolase）和Tuf蛋白是否为长双歧杆菌（Bifidobacterium longum）NCC2705的黏附因子。方法将长双歧杆菌NCC2705与Caco-2细胞共培养,显微镜观察加入纯化蛋白烯醇化酶、Tuf蛋白前后细胞黏附细菌数的变化并进行统计学分析。将Caco-2细胞、长双歧杆菌NCC2705、致病菌（弗氏志贺菌或伤寒沙门菌）共培养,检测加入纯化蛋白烯醇化酶、Tuf蛋白前后上清液中乳酸脱氢酶（ LDH）和肿瘤坏死因子-α（ TNF-α）的水平。结果加入纯化蛋白烯醇化酶、Tuf蛋白之后,Caco-2细胞黏附细菌数显著降低（P＜0．05）。 Caco-2细胞与致病菌共培养时,LDH和TNF-α的水平显著增高（P＜0．05）;Caco-2细胞与长双歧杆菌NCC2705和致病菌共培养时,LDH和TNF-α的水平显著降低（P＜0．05）,然而加入纯化蛋白烯醇化酶和Tuf蛋白后,LDH和TNF-α的水平又出现显著增高（P＜0．05）。结论长双歧杆菌NCC2705可竞争性抑制致病菌对肠上皮细胞的黏附,而烯醇化酶和Tuf蛋白可竞争性抑制长双歧杆菌对肠上皮细胞黏附作用,是双歧杆菌的黏附因子。     

骨髓基质抗原蛋白2靶向微泡的制备及小鼠肿瘤新生血管超声分子成像研究

目的 研究制备针对骨髓基质抗原蛋白2(BST2)的TMBs造影剂(BST2-TMBs),通过超声分子成像技术对小鼠肿瘤血管内皮细胞进行检测,为肿瘤的发生、发展及早期诊断提供实验依据.方法 将抗BST2的抗体通过生物素-亲和素桥接的方式连接于微泡(MBs)表面,获得BST2-TMBs,在光学显微镜下观察TMBs的形态,用粒径分析仪测定其粒径及其分布;通过体外细胞黏附实验研究TMBs与血管内皮细胞的结合性能,并对小鼠前列腺癌肿瘤血管内皮细胞行超声分子成像,用免疫组织化学染色分析BST2在肿瘤血管内皮细胞的表达.采用SPSS 19.0软件行统计学分析,对独立样本行t检验.结果 制备的BST2-TMBs的平均粒径为1.61μm,其中95％的微泡在1～5 μm之间.BST2 -TMBs能够与血管内皮细胞结合,平均每个视野有(165±25)个TMBs结合在内皮细胞表面,远高于非靶向微泡(IgG-MBs)对照组的(10±3)个微泡(t=10.662,P＜0.01).黏附的TMBs能够明显增强内皮细胞的超声信号强度,TMBs为27.93±5.14(灰度值),非靶向微泡为3.61±1.67(灰度值)(t=7.239,P＜0.01).小鼠在体肿瘤超声分子成像表明:BST2-TMBs处理组在微泡注射7min时信号强度(扣除微泡击碎后的信号强度)为38.79±0.29(灰度值),能保持47.65％的微泡注射30 s时的信号强度(灰度值81.40±0.37),而IgG-MBs处理组在微泡注射7 min时的信号强度(扣除微泡击碎后的信号强度)是9.46 ±0.17(灰度值),仅能保持11.39％的微泡注射30 s时的信号强度(灰度值83.01±0.60).相比之下,TMBs在肿瘤部位的超声信号强度较非靶向微泡提高4.27倍(t=65.587,P＜0.01).免疫组织化学证实BST2蛋白在小鼠前列腺癌肿瘤血管内皮细胞上有表达.结论BST2 -TMBs可以用于小鼠前列腺癌血管内皮细胞的超声分子成像,这为肿瘤的发生发展以及早期诊断提供了实验依据.