CD14/TLR-4-NF-κB信号通路参与骨关节炎发病机制的研究

目的观察膝骨关节CD14、toll样受体（toll-like receptor,TLR）-4、NF-κBp65、基质金属蛋白酶（matrix metallo-proteinases,MMPs）-13蛋白及其mRNA表达,探讨膝骨关节炎发病机制。方法 40只清洁级雄性SD大鼠,按体重随机分为两组。正常组同步饲养,模型组采用改良Hulth法建立膝骨关节炎模型。第4周末处死全部大鼠,摘取膝关节滑膜组织,应用HE染色观察膝骨关节组织形态学变化;分别应用Real-time PCR、Western-blot技术检测CD14、TLR-4、NF-κBp65、MMPs-13mRNA及其蛋白表达。结果模型组CD14、TLR-4、NF-κBp65、MMPs-13mRNA及其蛋白表达呈高表达特点,与正常组比较有统计学意义（P〈0.05）。结论 CD14/TLR-4-NF-κB信号通路过度活化,下游NF-κBp65及MMPs-13的表达升高可能是导致关节软骨破坏,降解加速,诱发骨关节炎发展的重要因素之一。     

核因子-κBp65特异性小干涉核糖核酸重组腺病毒的抑制作用

目的 在大鼠关节内观察核因子-κB(NF-κB)p65特异性小干涉核糖核酸(siRNA)重组腺病毒对靶基因的抑制作用.方法 在SD大鼠膝关节内,筛选合适的病毒剂量.利用β-gal染色鉴定重组腺病毒感染组织的特异性,应用凝胶电泳迁移率分析(EMSA)测定重组腺病毒对NF-κB转录活性的影响,应用Western blot测定重组腺病毒对软骨和滑膜细胞内NF-κB65的抑制作用.结果 重组腺病毒在大鼠膝关节内的最佳剂量为1.6×108 pfu/ml,可以感染关节内软骨和滑膜组织,并在软骨和滑膜细胞内减低NF-κB转录活性,抑制目的 基因的表达.结论 特异性NF-κBp65siRNA的重组腺病毒载体可以在关节软骨和滑膜细胞内抑制目的 基因的表达.     

NF-κBp65蛋白和自噬相关因子Beclin1及p62在甲状腺癌中的表达及临床意义

目的分析核因子NF-κB(NF-κB)p65和自噬相关蛋白Beclin1及p62在甲腺乳头状癌(PTC)中的表达及其临床意义。方法收集2013年3月至2015年2月期间笔者所在医院收治的160例经病理学检查证实为PTC患者的肿瘤组织标本及其癌旁组织标本,同时收集上述患者中伴有颈部淋巴结转移组织标本90例。采用免疫组化方法检测PTC组织、癌旁组织和转移淋巴结组织中NF-κBp65、Beclin1及p62的表达情况,分析上述指标与PTC患者临床病理特征及预后的关系。结果 NF-κBp65和p62在PTC组织和转移淋巴结组织中的表达阳性率均高于癌旁组织(P0.05),而Beclin1在PTC组织和转移淋巴结组织中的表达阳性率均低于癌旁组织(P0.05)。PTC组织中NF-κBp65的表达与患者的临床病理特征均无关(P0.05);p62的表达随肿瘤分化程度升高而降低(P0.05);Ⅲ+Ⅳ期和有淋巴结转移患者中的Beclin1表达分别低于Ⅰ+Ⅱ期和无淋巴转移者(P0.05),而p62的表达与之相反。Spearman相关分析显示,PTC组织中,Beclin1和p62的表达呈负相关关系(r=–0.656,P0.01),在转移淋巴结组织中,Beclin1和p62的表达也呈负相关关系(r=–0.562,P0.01)。PTC组织中p62及NF-κBp65表达阳性者3年生存率均低于表达阴性者(P0.05),Beclin1表达阳性者3年生存率则高于表达阴性者(P0.05)。TNM分期、淋巴结转移、NF-κBp65及p62为PTC预后的独立危险因素,而Beclin1为保护因素。结论NF-κBp65和p62在PTC组织及淋巴结转移组织中呈高表达,而Beclin1呈低表达,三者可作为PTC患者预后独立预测因素;Beclin1及p62与PTC生物学行为有关,可能成为PTC诊断的潜在指标。     

NF-κBp65、VEGF在肝癌血管生成中的作用与相关性研究

目的 通过对肝细胞癌(HCC)组织、癌旁组织、肝硬化组织及正常肝组织中核转录因子-κBp65(NF-κBp65)、血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达和微血管密度(MVD)的检测,探讨NF-κBp65、VEGF的蛋白表达与HCC新生血管生成的关系及相关性,阐述二者在HCC血管生成中的机制.方法 选用45例HCC组织和32例癌旁肝组织、15例肝硬化组织、10例正常肝组织标本作对照,采用免疫组化法(SABC)检测其NF-κBp65、VEGF的表达和计数MVD值,并结合患者的临床病理指标进行统计学分析.结果 HCC中NF-κBp65、VEGF的表达和MVD值显著高于癌旁肝组织、肝硬化组织和正常肝组织(P＜0.05);HCC组织中NF-κBp65、VEGF阳性表达组显著高于阴性表达组(P＜0.05);NF-κBp65、VEGF的表达在有血管侵犯组显著高于无血管侵犯组(P＜0.05);Spearman等级相关分析NF-κBp65与VEGF表达之间存在正相关性(r=0.72,P＜0.05).结论 HCC中NF-κBp65、VEGF的表达与肝癌血管生成有关;HCC组织中NF-κBp65的表达与VEGF存在相关性,它们之间在肝癌血管生成中可能存在调节关系.     

麻黄碱调控AMPK/NF-κB信号通路改善大鼠膝骨关节炎的实验研究

目的 探讨麻黄碱(Ephedrine)调控腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对大鼠膝骨关节炎(KOA)的影响。方法 建立KOA大鼠模型，将大鼠分为Sham组、KOA组、Ephedrine组(40.0 mg/kg)、Ephedrine(40.0 mg/kg)+Compound C组(0.2 mg/kg),药物分组干预后，分别检测大鼠膝关节宽度与疼痛阈值，番红O-固绿染色观察软骨组织病理变化并进行Mankin评分，ELISA法检测关节液TNF-α、IL-1β、COX-2水平，免疫组化检测软骨组织IL-1β、MMP-13蛋白表达，Western blot检测AMPK/NF-κB通路相关蛋白水平。结果 与Sham组比较，KOA组软骨组织损伤严重，膝关节宽度、Mankin评分、关节液TNF-α、IL-1β、COX-2水平及软骨组织IL-1β、MMP-13、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平显著升高，疼痛阈值及软骨组织p-AMPK/AMPK水平显著降低(P<0.05);与KOA组比较，Ephedrine组软骨组织病理损伤减轻，膝关节宽度、Man...     

NF-κB p65在人难愈合创面肉芽组织及增生性瘢痕中的表达和意义

目的：本研究拟观察NF-κB信号传导通路关键基因p65在人难愈合创面肉芽组织、不同时间阶段的增生性瘢痕以及正常皮肤标本的表达水平是否存在差异及关系。方法：收集临床标本40例为实验组,其中难愈合创面肉芽组织（A组）、半年内增生性瘢痕（B组）、半年至1年增生性瘢痕（C组）、一年以上增生性瘢痕（D组）组织各10例,收集正常皮肤组织标本8例为对照组（E组）。采用组织免疫化学方法、实时荧光定量RT-PCR和Westernblot技术分析检测各标本中NF-κBp65表达。结果：免疫组化SP法染色B、C、D组中表达阳性,尤其是在B组中皮肤基底细胞层细胞阳性表达尤为明显。RT-PCR检测中,各组间均无显著的统计学意义（P〉0.05）。但从各组均数来看,B、C、D组处于较高水平（B组为0.44,C组为0.46,D组为0.47）,数值相近,并且有高于E组和A组的趋势（A组为0.38,E组为0.30）。Western blot检测中B、C、D组的蛋白表达水平明显要高于A组和E组（P〈0.05）。结论：①在难愈合创面肉芽组织中NF-кBp65表达水平较低,表明难愈合创面肉芽组织中细胞凋亡增强,抗凋亡水平受到抑制,组织难以愈合;②在增生性瘢痕早期（半年内）中,NF-кBp65的表达明显增强,表明在增生性瘢痕早期瘢痕组织凋亡作用降低,抗凋亡作用明显增强,瘢痕组织表现出明显的增生作用;NF-κBp65皮肤基底细胞层细胞阳性表达尤为明显,表明NF-кBp65可能在增生性瘢痕增生中发挥着重要作用,对增生性瘢痕凋亡有着强有力的抑制作用,促进了增生性瘢痕增生;③在增生性瘢痕后期（半年至1年）,NF-кBp65的表达仍高于正常皮肤,表明在增生性瘢痕后期细胞凋亡水平较低,抗凋亡水平较高,仍有组织增生;④在增生性瘢痕成熟期（1年后）,NF-кBp65表达水平接近正常皮肤。瘢痕组织凋亡作用增强,增生减弱,变得平坦和消退。     

转录因子核因子-κB p65通过miR-17调控血管平滑肌细胞增殖的机制研究

目的研究miR-17在血管平滑肌细胞(VSCM)增殖中的作用,以及转录因子核因子(NF)-κB调控miR-17的作用机制。方法将miR-17mimics转染人VSCM,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期。生物信息学预测NF-κB p65与miR-17启动子区存在结合位点,将pcDNA3.1-p65与报告基因载体p GL3-miR-17启动子区共转染至293T细胞中,通过检测荧光素酶报告基因Luc活性分析NF-κB p65对miR-17启动子区的影响。脂多糖(LPS)刺激细胞后,检测NF-κB p65、miR-17的表达水平。结果与miR-NC组相比,转染miR-17 mimics后,VSMC增殖能力增强,差异具有统计学意义(P0.05),细胞周期G0/G1期明显减少,S与G2/M明显增加,差异具有统计学意义(P0.05)。与miR-17启动子区结合位点突变型(Mutant)组相比,转染miR-17启动子区野生型(Wild)组荧光素酶Luc活性增高,差异具有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,LPS刺激细胞后,NF-κB p65、miR-17表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 NF-κB通过直接结合miR-17启动子区,促进miR-17的表达从而促进VSMC的增殖。     

NF-κBp65蛋白与p62蛋白在胃癌组织中的表达及意义

目的:研究NF-κ Bp65蛋白与p62蛋白在胃癌中的表达及临床意义。方法 :采用免疫组化检测72例胃癌组织及癌旁正常粘膜组织中NF-κ Bp65蛋白与p62蛋白的表达,并分析两者在胃癌发生、发展机制中的相互关系。结果:胃癌组织中NF-κ Bp65的阳性表达率(65.3%)显著高于癌旁正常组织(27.8%,P0.05);胃癌组织中p62阳性表达率(66.7%)显著高于癌旁正常组织(30.6%,P0.05);NF-κ Bp65、p62与胃癌组织分化程度、肿瘤的浸润深度以及淋巴结转移有关(P0.05);NF-κ Bp65、p62在胃癌中的表达呈正相关(P0.05)。结论 :p62、NF-κ Bp65可能通过调节细胞凋亡及细胞增殖参与胃癌的发生、发展,且p62可激活NF-κ Bp65的表达,监测p62、NF-κ Bp65的表达可在一定程度上有助于胃癌的病情评估及预后判断。     

益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾脏组织SIRT6、NF-κBp65表达的影响

目的:探讨益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾脏组织SIRT6、乙酰化NF-κB p65表达的影响。方法:饲养SD大鼠,分为正常(N)组、糖尿病肾病(DN)组、益肾胶囊(YS)组、白藜芦醇(Re)组,干预8周后处死大鼠,留取24 h尿标本检测尿蛋白定量,留取肾脏组织进行HE染色,免疫组化、Western blot、RT-PCR检测SIRT6、乙酰化NF-κB p65表达情况。结果:(1)DN组大鼠尿蛋白定量较N组增加,差异有统计学意义(P0.05);Re组及YS组与DN组相比,尿蛋白定量下降,差异有统计学意义(P0.05)。(2)病理HE染色可见DN组大鼠肾小球体积增大,系膜细胞和基质轻度增生,肾小管上皮细胞肥大、空泡变性。而YS组及Re组与DN组相比,病理损害减轻。(3)免疫组化、Western blot、RT-PCR结果显示,DN组SIRT6蛋白及mRNA表达较N组下降(P0.05),乙酰化NF-κB p65蛋白及mRNA表达较N组升高(P0.05)。YS组及Re组的SIRT6蛋白及mRNA表达较DN组升高(P0.05),乙酰化NF-κB p65蛋白及mRNA表达较DN组下降(P0.05)。结论:益肾胶囊可通过调控SIRT6、乙酰化NF-κB p65的表达,减轻尿蛋白水平,改善糖尿病肾病大鼠肾脏损伤。     

蛋白酶体抑制剂对骨关节炎大鼠NF-κB信号通路的影响

目的 观察蛋白酶体抑制剂MG-132对骨关节炎软骨及滑膜组织NF-κB信号通路的影响.方法 SD大鼠144只,离断前十字韧带及内侧半月板建立膝关节骨关节炎模型,随机分为四组:MG-132组,造模术后24h于膝关节腔内注射100 μl质量浓度为0.007 g/L的MG-132溶液;DMSO(二甲基亚砜,Dimethyl sulfoxide)组,造模术后24h于膝关节腔内注射100μl体积分数为0.1％的DMSO溶液;假手术组,仅行关节囊切开;正常对照组,仅于膝关节腔内注射100μl质量浓度为0.007 g/L的MG-132溶液.术后2、4和12周处死动物,于膝关节软骨组织及滑膜组织取材,行病理形态学观察,根据Mankin评分标准进行半定量评估;应用RT-PCR法检测NF-κB p65、I-κB、TNF-α、IL-1β等基因mRNA的表达水平;荧光分光光度法检测20S蛋白酶体活性,并行相关性分析.结果 MG-132组各时相的Mankin评分均比DMSO组低,假手术组与正常对照组相近且较前两组低,差异有统计学意义.MG-132组各时相的软骨及滑膜组织中NF-κB p65、IL-1β、TNF-α mRNA表达水平均低于DMSO组,除2周滑膜组织NF-κB p65和12周软骨组织IL-1β mRNA外差异均有统计学意义.MG-132组术后2周软骨组织及4周滑膜组织I-κB mRNA表达水平高于DMSO组,差异有统计学意义.结论 MG-132具有减轻滑膜炎症、保护关节软骨的作用,从而延缓骨关节炎进程.     

siRNA下调NF-κB p65 基因表达影响人胆管癌QBC939细胞凋亡

目的运用RNA干扰技术下调胆管癌细胞株QBC939中核转录因子κB(NF-κB)p65基因表达对其肿瘤细胞生长的抑制作用。方法以阳离子脂质体Lipofectamine TM 2000作为转染试剂,将体外合成的人NF-κB p65的siRNA转染入胆管癌细胞QBC939。RT-PCR测定细胞内NF-κB p65 mRNA的表达。用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测NF-κB亚单位p65的DNA结合活性的改变。运用免疫组化、流式细胞仪、激光共聚焦法检测p65基因表达下调对QBC939细胞凋亡的影响。结果体外合成的人NF-κB p65 siRNA有效抑制了QBC939细胞中NF-κB p65 mRNA的表达(P0.01),同时ELISA结果显示,靶向NF-κB p65 siRNA组的p65亚单位与DNA结合活性明显低于对照组(P0.05),免疫组化DAPI核染色、流式细胞仪及激光共聚焦检测观察显示下调p65基因表达能够诱导QBC939细胞凋亡。结论 NF-κB p65的siRNA在胆管癌细胞QBC939调控方面起重要作用,通过沉默其表达可诱导胆管癌细胞凋亡抑制其生长增殖。     

骨癌痛大鼠脊髓NF-κB、IL-6和TNF-α表达的变化

目的 评价骨癌痛大鼠脊髓NF-κB、IL-6和TNF-α表达的变化.方法 雌性健康SD大鼠72只,体重150～180 g,随机分为3组(n=24):对照组(C组)、假手术组(S组)和骨癌痛组(BP组).BP组于大鼠左侧胫骨干骺端骨髓腔内注射5μl Walker 256(1×105)乳腺癌细胞制备骨癌痛模型,S组左胫骨上端注射Hank液5μl.分别于肿瘤细胞接种前、接种后2、4、6、9、12、14、16、18和21 d时测定机械阈值.分别于肿瘤细胞接种后6、12和18 d时,处死3只大鼠,取L4-6脊髓组织,采用RT-PCR法测定NF-κB p65 mRNA、IL-6 mRNA和TNF-α mRNA的表达;另处死3只大鼠,取L4-6脊髓组织,计数NF-κBp65阳性细胞,采用免疫组化法测定NF-κB p65表达.结果 与C组和S组比较,BP组机械痛阈降低,脊髓NF-κB p65及其mRNA、IL-6 mRNA和TNF-αmRNA的表达上调,NF-κB p65阳性细胞计数增加(P＜0.05或0.01);C组和S组间上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 大鼠胫骨骨髓腔内注射肿瘤细胞通过激活脊髓NF-κB,导致炎性细胞因子IL-6和TNF-α大量释放,从而诱发骨癌痛.     

Smad4和NF-κBp65蛋白在肝癌组织中的表达及意义

目的:探讨Smad4和NF-κBp65蛋白在肝癌组织中的表达及意义。方法:选取肝癌患者100例肝组织标本(观察组),同时选取正常肝组织标本42例作为对照组,采用免疫组化染色法检测Smad4和NF-κBp65蛋白表达。结果:观察组Smad4蛋白阳性表达率为21.00%,明显低于对照组的76.19%(P0.05);而NF-κBp65蛋白阳性表达率为73.00%,明显高于对照组21.43%(P0.05);有淋巴结转移者Smad4蛋白阳性表达率为5.88%,明显低于无淋巴结转移者的28.59%(P0.05);肿瘤直径5cm者NF-κBp65蛋白阳性表达率为88.71%,明显高于肿瘤直径≤5cm者的47.37%(P0.05);Smad4和NF-κBp65蛋白表达呈负相关(r=-0.350,P0.05)。结论:肝癌组织中Smad4表达降低,NF-κBp65蛋白表达升高,相关表达异常与淋巴结转移、肿瘤直径具有一定的相关性。     

肺组织NF-κB和PUMA与SAP-ALI的关系及PDTC的干扰作用

目的探讨NF-κB(核因子-κB)和PUMA(p53正向凋亡调节因子)在大鼠重症急性胰腺炎致急性肺损伤(SAP-ALI)发病中的作用及脯氨酸二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对此过程的影响。方法 SD大鼠随机分为假手术组(A组),SAP-ALI组(B组),SAP+PDTC干预组(C组),每组24只。各组再按6,12,24 h时点分为3个亚组,每亚组8只。A组开腹后翻动胰腺数次;B组采用胰胆管逆行注入5%牛磺胆酸钠(1 mL/kg)诱导SAP-ALI模型;C组在B组的基础上于术前1 h给予PDTC(15 mg/kg),各组按各时点处死大鼠。观察胰腺和肺脏病理变化。检测不同组肺脏组织中NF-κBp65,PUMA和Caspase-3的表达及Caspase-3活性;检测组织TNF-α,MIP-2和ICAM-1 mRNA的表达、髓过氧化物酶(MPO)的活性和肺泡上皮细胞凋亡指数。结果成功建立大鼠SAP-ALI模型。Western-blotting和RT-PCR结果显示,B组肺上皮细胞NF-κB p65,PUMA和Caspase-3蛋白表达在12 h后显著增加(P0.05),NF-κB p65与PUMA呈高度正相关(r=0.987,P0.01)。TNF-α,MIP-2,ICAM-1mRNA表达及MPO和Caspase-3活性明显增加(P0.01)。C组肺损伤病理组织学评分在术后各时点较B组显著下降(P0.05),C组12 h后的肺组织NF-κB p65,PUMA和Caspase-3蛋白表达及MPO和Caspase-3活性明显降低(P0.05);TNF-α,MIP-2,ICAM-1 mRNA表达明显下降(P0.05),C组细胞凋亡指数较B组明显降低(P0.01)。结论大鼠SAP-ALI既与NF-κB活化引起的炎症因子释放有关又与NF-κB活化引起的PUMA上调促进细胞凋亡有关。PDTC通过抑制NF-κB活化,下调炎症因子释放及NF-κB活化引起的PUMA表达可抑制肺组织的细胞凋亡,从而减轻SAP-ALI的程度。     

聚丙烯酰胺水凝胶注射隆乳术后乳腺组织中NF-κ Bp65和TNF-α的表达及意义

目的:通过检测聚丙烯酰胺水凝胶(PAHG)置入人体后乳房病变组织内NF-κBp65、TNF-α表达,探讨二者与PAHG注射隆乳术后乳腺病理改变的关系。方法:采用免疫组化染色法检测20例正常乳腺组织,40例PAHG注射隆乳术后乳房病变组织中NF-κBp65、TNF-α阳性表达细胞,比较分析两组之间的差异。结果:①HE染色结果:光镜下见切片中含大量均质无定形凝胶样注射物,PAHG周围有不同程度纤维组织增生,伴或不伴纤维组织玻璃样变性,并见炎性细胞浸润;或局部呈异物巨细胞反应,部分乳腺导管扩张;②免疫组化结果:NF-κBp65、TNF-α阳性细胞少见于正常乳腺组织中,而在实验组近注射物周围NF-KBp65、TNF-α阳性细胞数目增多,具有显著统计学意义。但是NF-KBp65、TNF-α阳性细胞率与PAHG体内存留的时间长短无明显相关性。结论:NF-κBp65与TNF-α在PAHG注射隆乳术后病变组织中的表达存在正性相关关系。NF-κBp65、TNF-α参与了聚丙烯酰胺水凝胶注射隆乳者乳房病变组织的免疫反应过程,可能通过相互影响而共同诱导病变部位无菌性炎症、纤维组织增生等反应的发生。     

As2O3对人乳腺癌中NF-κB p65、survivin和caspase-3的作用及相关性研究

目的探讨As2O3对人乳腺浸润性导管癌裸鼠移植瘤组织中NF-κB p65、survivin及caspase-3表达的影响.方法复制人乳腺浸润性导管癌裸鼠移植瘤模型,共22只,随机分为3组:对照组、顺铂组及不同浓度(1.5、3.0 mg/kg)的As2O3组(简称As2O3组).用原位杂交法检测survivin mRNA的表达;用免疫组化法检测肿瘤组织NF-κB p65、survivin及caspase-3蛋白的表达.结果人乳腺浸润性导管癌裸鼠移植瘤中NF-κB p65蛋白及survivin mRNA和蛋白表达的阳性细胞密度As2O3组明显低于顺铂组和对照组(P＜0.01),顺铂组也低于对照组(P＜0.01);而caspase-3蛋白表达结果则相反(P＜0.01).NF-κB p65蛋白、survivin蛋白及survivin mRNA阳性表达间相互呈正相关,而三者的表达均与caspase-3蛋白表达呈负相关.结论 As2O3可能通过抑制NF-κB p65的活性抑制survivin,从而激活caspase-3,诱导人乳腺浸润性导管癌细胞的凋亡,且呈剂量依赖性.     

肾炎防衰液通过SPHK1/S1P信号通路对糖尿病肾病大鼠肾脏炎症的干预作用

目的:探讨肾炎防衰液通过鞘氨醇激酶1-1磷酸鞘氨醇(SPHK1/S1P)信号通路对糖尿病肾病大鼠肾脏炎症的干预作用。方法:采用单侧肾切除+高脂饲养喂养+链脲佐菌素(STZ)"三联"造模方法构建糖尿病肾病大鼠模型,模型组分别予肾炎防衰液和厄贝沙坦治疗8周,测定24 h尿蛋白定量及血生化指标,检测肾脏Sph K1、S1p2、TNF-α、NF-κBp65表达水平的变化。结果:肾炎防衰液可以降低DKD大鼠24 h尿蛋白定量(P0.01),减少DKD肾组织Sph K1、S1p2、TNF-α、NF-κBp65mRNA表达(P0.05),降低Sph K1、p NF-κBp65的蛋白表达。结论:肾炎防衰液可通过抑制Sph K1/S1P信号通路的表达,减轻肾脏炎症反应,对糖尿病肾病大鼠肾脏起到一定的保护作用。     

LncRNA FGD5-AS1靶向miR-103a-3p对IL-1β诱导的关节软骨细胞凋亡的机制研究

目的探讨LncRNA FGD5-AS1靶向miR-103a-3p对IL-1β诱导的关节软骨细胞损伤及细胞凋亡的影响与分子机制。方法体外培养大鼠关节软骨细胞,分为NC组、IL-1β组(IL-1β浓度为10 ng/m L)。采用qRT-PCR检测细胞中FGD5-AS1、miR-103a-3p的表达水平。分别将pc DNA-FGD5-AS1、miR-103a-3p mimics转染至软骨细胞,随后使用IL-1β处理48 h。采用ELISA检测IL-6、TNF-α、IL-8水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证FGD5-AS1与miR-103a-3p的靶向关系; Western blot检测Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3、p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达量。结果与NC组相比,IL-1β组软骨细胞中FGD5-AS1的表达水平显著降低(P0.05),miR-103a-3p、Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3的表达水平显著升高(P0.05),IL-6、TNF-α、IL-8水平显著升高(P0.05),细胞凋亡率显著升高(P0.05); FGD5-AS1过表达后可明显降低IL-6、TNF-α、IL-8、p-NF-κB p65、p-IκBα水平(P0.05),降低细胞凋亡率(P0.05),抑制Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3表达(P0.05);双荧光素酶报告实验证实FGD5-AS1靶向结合miR-103a-3p并可负向调控miR-103a-3p的表达(P0.05); miR-103a-3p过表达可明显逆转FGD5-AS1过表达对细胞凋亡及炎症反应的抑制作用(P0.05)。结论 LncRNA FGD5-AS1可通过靶向负调控miR-103a-3p的表达从而抑制IL-1β诱导的关节软骨细胞炎症反应及细胞凋亡,其作用机制可能通过抑制NF-κB信号通路激活有关。     

核因子κB p65在肌肉萎缩中的表达与被动运动对其影响

目的 研究核因子κB(nuclearfactor kappa B,NF-κB)p65在失神经骨骼肌中的表达及被动运动对其影响作用,探讨失神经骨骼肌萎缩的分子机制及防治方法.方法 选Wistar大鼠42只,随机分成健康对照组(6只)、失神经对照组(18只)和被动运动组(18只).失神经对照组和被动运动组建立右下肢失神经腓肠肌动物模型.被动运动组大鼠采用右下肢被动运动300次/d.分别在术后2 d、14 d及28d取其双侧腓肠肌称重,计算肌湿重比,采用RT-PCR和Western Blot检测大鼠右侧失神经腓肠肌NF-κB p65的mRNA和蛋白表达水平,根据实验结果做统计处理数据得出结论.结果 大鼠腓肠肌失神经支配后肌肉湿重比持续下降,NF-κB p65的mRNA和蛋白表达在2 d、14 d、28d持续增加(P＜0.05),术后14 d、28d被动运动组腓肠肌湿重比高于同期失神经对照组(P＜0.05),被动运动组mRNA和蛋白的表达在各个时间点低于失神经对照组(P＜0.05),差异有统计学意义.结论 在失神经骨骼肌萎缩中,NF-κB p65的表达持续增高.被动运动可以通过干扰NF-κB p65的mRNA和蛋白质的表达来延缓失神经骨骼肌萎缩.     

沉默蛋白激酶C 对高糖刺激成纤维细胞Toll 样受体及核因子kappa B 基因表达的影响

目的:探索siRNA 沉默蛋白激酶C(PKC)对高糖刺激成纤维细胞在Toll 样受体(TLRs)信号传导通路中TLRs 及核因子kappa B(NF-κB) 表达的影响。方法:高糖刺激下用real-time PCR 检测TLR2、TLR4 的表达水平,确定何种受体发生改变后进行后续实验。设计并合成针对PKC 不同亚单位的特异性siRNA :PKC-αsiRNA、PKC-βsiRNA、PKC-δsiRNA,在高效率转染的基础上,对PKC 进行沉默,高糖刺激后用real-time PCR 方法检测TLRs、NF-κBp50 和NF-κB p65 的表达情况,以低糖培养作对比。结果:成纤维细胞中高糖刺激下TLR2 的mRNA 水平显著升高(P ＜ 0.05),而TLR4 的mRNA 表达无明显变化(P ＞ 0.05)。在高糖刺激下PKC-αsiRNA、PKC-δsiRNA 可下调TLR2、NF-κB p65的mRNA 水平(P ＜ 0.05),而PKC-βsiRNA 对TLR2、NF-κB p65 的mRNA 水平无影响(P ＞ 0.05)。与低糖培养条件对比,高糖刺激下NF-κB p50 水平无改变(P ＞ 0.05),而且PKC-α siRNA、PKC-β siRNA 和PKC-δ siRNA 转染后不改变细胞中NF-κB p50 的水平。结论:成纤维细胞信号传导通路中PKC-α、PKC-δ 位于TLR2、NF-κB p65 的上游。