肝脏缺血再灌注损伤发生机制中信号转导的研究进展

肝脏缺血再灌注损伤（HIRI）见于肝叶切除、肝移植、低血容量性休克、严重肝外伤、肝静脉血栓形成等。HIRI早期（再灌注后2-h内）主要由代谢障碍和氧化应激引起,中期（2-6h）主要与库普弗细胞激活及炎症介质作用有关,晚期（再灌注后6～8h）主要是中性粒细胞浸润引起的炎症反应;在HIRI中信号转导作用非常重要,细胞信号转导研究的中心问题是细胞感受、转导环境刺激及调节代谢生理反应和基因表达的分子途径。本文综述近年来有关肝脏缺血再灌注损伤发生机制中信号转导的研究进展。     

缺血再灌注肝一氧化氮合酶活性变化的观察

目的探讨大鼠缺血再灌注肝一氧化氮合酶的变化及其意义。方法健康雄性SD大鼠24只，门静脉插管、肝静脉插管、胆道插管，切取肝，建立大鼠离体肝灌注（IPRL）模型。大鼠随机分为4组（每组6只）：①热缺血对照组，肝切取后，不作冷保存，立即进行灌注；②冷保存6h组，肝切取后作冷保存，保存6h后进行灌注；③冷保存12h组，肝切取后作冷保存，保存12h后进行灌注；④冷保存24h组，肝切取后作冷保存，保存24h后进行灌注。IPRL采用恒温灌注，经门静脉插管灌注pH7．4、38℃的Krebs—Bttlbring buffer液30min。观察胆汁分泌，检测肝静脉流出液中自蛋白（ALB）含量，测定肝组织内皮素-1（ET-1）、一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）、ATP酶（ATPaSe）、超氧化物歧化酶（SOD）、黄嘌呤氧化酶（XOD）、丙二醛（MDA）等指标。结果大鼠肝NOS发生了明显的变化，但肝组织NO、ET-1没有显著变化，ATPase、SOD、XOD、MDA的代偿也是有限的。再灌注过程中，各组大鼠肝均有胆汁分泌。肝静脉引流液中ALB含量无差异。结论NOS的变化是反映缺血再灌注损伤的敏感指标。     

肝脏缺血再灌注损伤机制的研究进展

肝脏缺血再灌注损伤（hepatic ischemia reperfusion in-jury,HIRI）是指肝脏组织缺血一段时间后血流重新恢复,损伤却进一步加重的现象[1]。可分为热缺血再灌注损伤和冷缺血再灌注损伤,其中热缺血再灌注损伤多见于消化道大出血,失血性休克,肝切除手术等,冷缺血再灌注损伤则发生于肝移植过程中。HIRI是导致肝部分切除术后肝功能衰竭及肝移植后供肝功能低下及无功能的重要原因,是肝部分切除及肝移植的主要制约因素之一。本文就近年来有关肝脏缺血再灌注损伤发生机制进的研究进展进行综述。     

供肝冷保存再灌注期间核因子NF—кB和抑制蛋白IкBs的变化及其意义

目的:研究肝移植期间供肝组织中核因子NF-κB的激活特征及其活性调控机制.方法:改良Kamada法建立大鼠原位肝脏移植模型,按供肝在4℃乳酸林格液中的冷保存时间,实验分冷保存2 h组和6 h组,凝胶迁移率改变分析法(EMSA)和Western印迹法测定移植期间不同时相供肝组织中NF-κB的活性变化及其主要抑制蛋白IκB-α、IκB-β的表达水平.结果:两组供肝组织在冷缺血保存期间其NF-κB活性与正常肝组织相比无明显差异(P>0.05),再灌注后30 min至6 h两组的NF-κB活性均出现显著的诱导激活(P<0.01),其中冷保存2 h组供肝组织的NF-κB活性高峰出现在再灌注1 h;而冷保存6 h组在再灌注30 min即达到活性高峰,并维持在较高的激活水平;供肝组织中抑制蛋白IκB-α的含量显著高于IκB-β,两组的IκB-α蛋白在再灌注30 min至1 h均有明显降解(P<0.05),而IκB-β蛋白仅在冷保存6 h组有较明显的降解(再灌注30 min).结论:核因子NF-κB仅在供肝的再灌注早期呈诱导性激活,其激活特征与供肝的冷保存再灌注损伤有关,抑制蛋白IκB-α在供肝的NF-κB活性调控中可能起了主要作用.     

供肝冷保存再灌注期间核因子NF-κB和抑制蛋白IκBs的变化及其意义

目的:研究肝移植期间供肝组织中核因子NF-κB的激活特征及其活性调控机制.方法:改良Kamada法建立大鼠原位肝脏移植模型,按供肝在4℃乳酸林格液中的冷保存时间,实验分冷保存2 h组和6 h组,凝胶迁移率改变分析法(EMSA)和Western印迹法测定移植期间不同时相供肝组织中NF-κB的活性变化及其主要抑制蛋白IκB-α、IκB-β的表达水平.结果:两组供肝组织在冷缺血保存期间其NF-κB活性与正常肝组织相比无明显差异(P>0.05),再灌注后30 min至6 h两组的NF-κB活性均出现显著的诱导激活(P<0.01),其中冷保存2 h组供肝组织的NF-κB活性高峰出现在再灌注1 h;而冷保存6 h组在再灌注30 min即达到活性高峰,并维持在较高的激活水平;供肝组织中抑制蛋白IκB-α的含量显著高于IκB-β,两组的IκB-α蛋白在再灌注30 min至1 h均有明显降解(P<0.05),而IκB-β蛋白仅在冷保存6 h组有较明显的降解(再灌注30 min).结论:核因子NF-κB仅在供肝的再灌注早期呈诱导性激活,其激活特征与供肝的冷保存再灌注损伤有关,抑制蛋白IκB-α在供肝的NF-κB活性调控中可能起了主要作用.     

丹参对大鼠移植肝脏再灌注损伤的防护及肝细胞凋亡的影响

目的 研究含丹参冷灌注液对移植肝缺血再灌流损伤的防护及肝细胞凋亡的影响.方法 将40只SD大鼠分为对照组、丹参组及假手术组,建立原位肝移植模型,在供肝灌注冷保存时,以4℃乳酸林格氏液为基液,丹参组灌注保存液中加丹参注射液(60ml/L),对照组不加丹参.保存5 h后置入受体.移植后6h处死大鼠取样,检测血清中AST、ALT及肝组织中氧自由基代谢相关指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)水平,采用TUNEL法检测移植术后肝细胞凋亡情况,光镜及透射电镜下观察移植肝脏组织形态学及超微结构的改变.结果 移植肝再灌注后丹参组AST、ALT显著低于对照组.与对照组相比,丹参组肝细胞凋亡指数明显下降(P<0.01),肝组织中MDA含量较对照组降低(P<0.01),SOD、GSH-PX活性较对照组升高(P<0.01).丹参组较对照组肝组织形态及超微结构上再灌注损害程度明显减轻.结论 丹参可抑制冷保存再灌注导致的肝细胞凋亡,对原位肝移植肝脏的缺血-再灌注损伤有保护作用.     

原位肝移植术后胆道并发症3例分析

目的:探讨肝移植术后胆道并发症的发生原因。方法:回顾分析3例原位肝移植术后发生胆道并发症患者的临床资料。结果:3例术后发生胆道并发症的时间为1~3个月,供肝冷缺血时间平均为8.5h,热缺血时间为3min;其中1例术后发生巨细胞病毒感染,1例发生急性排斥反应。结论:肝移植术后胆道并发症是多种因素的结果,其中肝动脉供血不足、灌注损伤、缺血再灌注、术后病毒感染及排斥反应是其主要原因。     

大鼠肺缺血再灌注损伤后前炎症细胞因子IL-1βmRNA的表达分析

 [摘要] 目的 通过对大鼠移植肺灌洗后、冷缺血保存和再灌注期间前炎症细胞因子IL-1βmRNA的表达进行分析，探讨IL-1β在此过程中介导的移植肺炎性损伤机制。 方法 本研究大鼠分6组，包括：正常肺（未灌洗）对照组、仅肺灌洗处理组、肺灌洗后冷缺血保存6h、12h、24h各1组、冷缺血保存24h后左肺移植再灌注3h组。在相应各时间点采取肺组织，用荧光定量实时PCR法检测IL-1βmRNA的表达并进行髓过氧化物酶（MPO）活性测定。 结果 除冷缺血12h组和冷缺血24h组之间IL-1βmRNA表达相对量差别不显著外（P=0.167），其余各组之间IL-1β表达相对量差别均有显著统计学意义(P<0.05)。仅灌洗组、冷缺血组和24h冷缺血移植再灌注3h组的IL-1βmRNA表达相对量均高于正常对照组，且随处理时间的延长而表达增加。仅灌洗组、冷缺血组和24h冷缺血移植再灌注3h组的MPO活性均高于正常对照组，且随处理时间的延长而表达增加，P<0.05。各组肺组织中MPO活性和IL-1βmRNA相对表达量呈较强的正相关关系，相关系数r=0.869，P<0.01。结论 前炎症因子IL-1β在肺缺血再灌注损伤机制中发挥着重要炎性损伤作用，可以作为移植肺功能评价及预后的重要指标之一；IL-1β基因的表达在保存液灌洗后的冷缺血保存早期就开始出现，而不是在再灌注之后的事件。     

丹参对大鼠移植肝脏再灌注损伤中TNF α及IL 1水平的影响

目的探讨丹参对大鼠原位肝移植供肝缺血-再灌流损伤中肿瘤坏死因子α(TNF α)及白介素1(IL 1)的影响。方法将40只SD大鼠分为对照组、丹参组及假手术组,建立原位肝移植模型,在供肝灌注冷保存时,以4?℃乳酸林格氏液为基液,丹参组灌注保存液中加丹参注射液(60?mL/L),对照组不加丹参。保存5?h后置入受体。移植后6?h处死大鼠取样,检测血清中AST、ALT水平;测定肝组织中丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子α(TNF α)及白介素1(IL 1)的含量,并对比观察病理形态学的改变。结果对照组、丹参组较假手术组肝移植术后AST、ALT明显升高,肝组织中MDA含量、TNF α和IL 1明显升高,但丹参组上述指标的异常变化均明显减轻,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。丹参组较对照组肝组织的再灌注损害程度明显减轻。结论丹参可以降低大鼠移植肝脏再灌注损伤中TNF α及IL 1水平,对移植肝脏缺血-再灌注损伤具有保护作用。     

大鼠移植肝再灌注损伤过程中肝细胞凋亡及其调控基因表达变化

目的 研究移植肝缺血冷保存再灌流损伤过程中肝细胞凋亡变化情况及凋亡调控基因Bcl-2,FasL的表达变化.方法 将72只SD大鼠分为假手术组及移植组,移植组建立原位肝移植模型,以4℃乳酸林格氏液为基液对供肝灌注并冷保存4 h后置人受体,于移植后1,6,24h处死大鼠取样,检测血清中AST、ALT水平,采用TUNEL法检测移植肝肝细胞凋亡情况,流式细胞仪检测凋亡相关基因Bcl-2,FasL蛋白的表达.结果 再灌注后移植组AST、ALT显著高于假手术组.与假手术组相比,移植组各时点肝细胞凋亡指数明显升高,肝组织中Bcl-2表达减少,FasL表达量增加(P<0.01),以再灌注后6h变化最为显著.结论 移植术后移植肝缺血-再灌注损伤过程中肝细胞凋亡加重,于冉灌注早期达到高峰,这可能与抗凋亡基因Bcl-2的表达减少,促凋亡基因FasL表达增加有关.