碳青霉烯类抗生素敏感性下降肺炎克雷伯菌耐药机制及分子流行病学研究

目的:研究临床分离对碳青霉烯类抗生素敏感性下降肺炎克雷伯菌的耐药机制及同源性分析。方法:收集对碳青霉烯类抗生素敏感性下降肺炎克雷伯菌25株。E test法测定10种抗菌药物的MIC值;脉冲场凝胶电泳分析菌株同源性;PCR及克隆测序分析耐药基因型。结果:25株菌株对β-内酰胺类抗生素呈多重耐药,但对多黏菌素E和替加环素敏感。PFGE分型除一株外均为同一克隆(暗示医院内感染)。25株菌株均产KPC-2碳青霉烯酶基因,并同时携带CTX-M、SHV、DHA等多种耐药基因。结论:携带KPC-2基因的肺炎克雷伯菌同时携带多种耐药基因。此类菌株对碳青霉烯类抗生素敏感性下降并对除多黏菌素E和替加环素外抗生素多重耐药。     

血流感染肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药机制研究

目的了解临床血流感染肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药机制,为其治疗提供实验依据。方法收集浙江省人民医院2016年1月-12月门诊及住院患者血流感染肺炎克雷伯菌72株,应用法国梅里埃VITEK 2 Compact检测肺炎克雷伯菌药物敏感性;应用PCR法检测相关碳青霉烯酶耐药基因(blaKPC、blaNDM、blaVIM、blaIMI、blaIMP和blaOXA-48),应用MLST方法检测菌株克隆型别。结果 2016年1月-12月门诊及住院患者血流感染肺炎克雷伯菌72株,其中碳青霉烯敏感肺炎克雷伯菌(CSKP) 48株,占66.7%,碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP) 24株,占33.3%;肺炎克雷伯菌对常用抗菌药物敏感性均较低,特别是β-内酰胺类抗菌药物。替加环素体外显示出极高敏感性,仅4.2%菌株耐药;24株菌株全部检出blaKPC-2基因,其他耐药基因未检出。结论本院血流感染肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药机制主要是产KPC-2酶。碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌在本院呈克隆播散趋势,应引起临床高度重视。     

耐碳青霉烯类与喹诺酮类肺炎克雷伯菌的耐药机制研究

目的研究20株耐碳青霉烯类与喹诺酮类肺炎克雷伯菌的耐药机制。方法 20株肺炎克雷伯菌分离自2012年1-6月医院住院患者的痰液样本,采用改良的Hodge试验检测碳青霉烯酶活性,再用PCR法检测A^D类40种β-内酰胺酶基因和喹诺酮类耐药基因。结果 20株肺炎克雷伯菌经改良的Hodge试验检测均有碳青霉烯酶活性,均检出TEM-1和KPC-2型β-内酰胺酶基因,出现gyrA基因第83位密码子TCC→ATC突变(氨基酸序列S→I),第87位密码子GAC→GGC突变(氨基酸序列D→G)。结论肺炎克雷伯菌携带KPC-2型β-内酰胺酶基因和存在gyrA基因QRDR区突变,其是碳青霉烯类与喹诺酮类药物的耐药机制,肺炎克雷伯菌药敏表型与耐药基因型相同疑似医院感染。     

新生儿中分离碳青酶烯类耐药肺炎克雷伯菌的耐药机制研究

目的了解本院新生儿患者分离的碳青酶烯类抗生素耐药肺炎克雷伯菌的检出情况及耐药机制。方法收集本院2009年1月-2014年1月5年间分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌82株,采用改良Hodge试验及EDTA协同试验进行碳青霉烯酶表型的确认,用PCR方法扩增碳青霉烯酶基因(KPC、IMP、NDM、VIM、OXA-48),经电泳检测扩增产物后纯化测序。结果 82株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌主要分布在痰液和尿液标本中。耐药结果显示,对氨基糖苷类抗生素和氟喹诺酮类抗生素保持较高的敏感性。表型检测试验显示,32株改良Hodge试验阳性,8株EDTA协同试验阳性,经PCR确认发现,32株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌携带有blaKPC-2基因,8株携带blaNDM-1基因。结论本院新生儿分离碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌的比例较高,耐药性较强,主要以blaKPC-2基因介导,但也有blaNDM-1基因介导的"超级细菌"存在,应当引起临床重视。     

肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药机制的研究

摘要:目的　研究肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类抗菌药物耐药机制,为临床治疗耐碳青霉烯类抗菌药物肺炎克雷伯菌感染及院内感染控制提供分子生物学依据。方法　采用西门子Microscan Walkaway 40 plus全自动微生物鉴定及药敏分析仪对肺炎克雷伯菌进行鉴定及药敏试验。采用PCR及琼脂糖凝胶电泳对耐药基因进行初筛及确证,将PCR扩增产物进行测序并使用Basic Local Alignment Search Tool（BLAST）分析,判断细菌耐药基因是否发生变异。结果　分离到的2株肺炎克雷伯菌对临床常用抗菌药物敏感性较差。PCR结果显示碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌耐药基因新德里金属β-内酰胺酶1（New Delhi Metallo-β-lactamase 1,NDM-1）均为阳性,测序未发现NDM-1耐药基因发生突变。BLAST比对显示本次试验中检出的NDM-1耐药基因与Genebank公布的NDM-1耐药基因NC_023914.1同源性为100%。结论　分离到的2株碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌均为产NDM-1病原菌,NDM-1基因序列测序未发现突变位点。     

大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌产KPC酶表型筛查与耐药关系

目的:了解浙江省人民医院2008年4月-2010年3月大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素的耐药率及KPC(Klebsiella pneumoniae carbapenemase)酶表型阳性的菌株检出率。方法:采用VITEK32型全自动微生物分析系统、肉汤稀释法进行药敏试验,检测亚胺培南,美罗培南的敏感性;采用改良的Hodge试验,以厄他培南为指示药物进行碳青酶烯酶表型的筛选。结果:在528株大肠埃希菌和336株肺炎克雷伯菌中,对碳青霉烯类药物亚胺培南耐药的大肠埃希菌21株,肺炎克雷伯菌97株;对美罗培南耐药的大肠埃希菌21株,肺炎克雷伯菌74株。Hodge试验结果,大肠埃希菌29株阳性,肺炎克雷伯菌67株阳性。结论:浙江省人民医院2008年至2010年肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素耐药率及产KPC酶的检出率已较高,临床应加强检测和监测。     

肠杆菌科对第三代头孢菌素的耐药性分析

目的 了解德阳市人民医院2010-2012年期间临床常见肠杆菌科细菌对第三代头孢菌素（主要为头孢哌酮、头孢曲松、头孢噻肟、头孢他啶）的耐药情况.方法 进行细菌培养,分离鉴定细菌,药敏试验使用纸片扩散法.结果 重要肠杆菌科细菌对碳青霉烯类耐药率均小于6%,头孢噻肟、头孢曲松、头孢哌酮、头孢他啶对大肠埃希菌耐药率在30%～60%之间,对肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、变形菌属、沙雷菌属耐药率均小于40%.结论 大肠埃希菌对第三代头孢菌素抗菌活性差,而肠杆菌科细菌中肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、变形菌属、沙雷菌属对其仍有较好的抗菌活性,肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素的活性最好,建议使用美罗培南等碳青霉烯类和酶抑制剂类抗生素.     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药基因检测

目的了解耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药基因携带,以减少耐药菌的产生。方法对2009年1月-2012年2月耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌分离株进行筛选,鉴定和药敏采用VITEK-2Compact系统进行,引物特异性PCR法分别检测分离株的碳青霉烯酶耐药基因、ESBLs基因和AmpC等相关耐药基因的存在。结果共分离出6株碳青霉烯耐药或中介的肺炎克雷伯菌,其对青霉素类、青霉素/青霉素酶抑制剂、氨曲南、头孢菌素类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类和碳青霉烯等抗菌药物表现为较高程度的耐药,但对替加环素有较高的敏感性;每一株菌均携带超广谱β-内酰胺酶基因,可检测到3⁵个耐药基因;其中,1株菌经测序证实为携带blaIMP-4,并同时携带blaSHV、blaTEM和blaCTXG9基因;5株菌扩增到Ⅰ类整合子(intⅠ);blaNDM及其他碳青霉烯类耐药基因筛查均为阴性。结论临床分离的碳青霉烯耐药或中介肺炎克雷伯菌的耐药表型和基因型基本相符,因而推测广泛耐药的肺炎克雷伯菌的主要类耐药机制与菌株同时携带产ESBLs、AmpC酶、碳青霉烯酶和Ⅰ类整合子(intⅠ)有关。     

肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因分布与耐药相关性研究

目的研究本院感染性肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因分布与耐药相关性。方法回顾性分析本院肺炎克雷伯菌耐药现状,收集26株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌,依次进行ESBLs检测、改良Hodge实验、金属β-内酰胺酶检测(EDTA协同试验),三维试验检测Amp C酶;应用PCR技术进行碳青霉烯酶相关耐药基因检测,应用多位点序列分析(MLST)与e BURST分析,对肺炎克雷伯菌耐药菌进行分型与进化关系分析。结果本院耐碳青霉烯类耐药率逐年上升,2014年达8.2%。13株(50.0%)产碳青霉烯酶,8株(30.7%)产Amp C酶,2株(7.7%)产金属β-内酰胺酶;26株实验菌中PCR扩增结果示:KPC 12株,SHV 12株,TEM 5株,CTX 2株;未检出B类、C类、D类β-内酰胺酶基因;26株实验菌分为10个ST型,以ST11、ST15和ST764为主(各5株)。结论本院肺炎克雷伯菌耐药及多重耐药性严重,以KPC-2为主,本地区多重耐药肺炎克雷伯菌具有基因多态性,主要克隆系为ST11、ST15、ST764。     

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌多重β-内酰胺酶基因型研究

目的:研究医院感染碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和质粒介导的AmpC酶基因型的分布。方法:筛选出产KPC酶肺炎克雷伯菌,采用改良的Hodge试验、接合试验、聚合酶链反应(PCR)等方法确定多重β-内酰胺酶基因型。结果:收集并证实产KPC-2型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌26株,其中CTX-M型ESBL检出率最高;3株细菌同时编码ESBL和AmpC基因,其中2株细菌同时携带blaCTX-M-3、blaSHV-12和blaDHA-1三种β-内酰胺酶基因。结论:产KPC酶肺炎克雷伯菌同时携带有其他β-内酰胺酶耐药基因,CTX-M型ESBL最为常见,使细菌耐药性更为严重。     

重庆地区HIV阴性男男性行为者药物滥用情况分析

目的 了解重庆市人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）阴性男男性行为者（men who have sex with men,MSM）药物滥用情况及其影响因素,并探究药物滥用与其性病发生率的关系。方法 2018年6月-2019年6月招募重庆地区HIV阴性MSM人群并收集其社会人口学、高危性行为及性病感染等信息,采用单因素和多因素logistic回归分析其药物滥用的影响因素,采用卡方检验分析药物滥用与性病发生的关系。结果 共招募139名HIV阴性MSM,其中34.53%（48/139）近6个月有药物滥用史。单因素和多因素logistic回归分析结果显示,服用过暴露后预防药物是药物滥用的阻碍因素：发生过≥3人的"群交"行为（OR=0.027,95%CI：0.009~0.085）是药物滥用的独立影响因素。药物滥用者性病发生率为16.67%（8/48）,高于非药物滥用者的4.40%（4/91）,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 重庆地区HIV阴性MSM人群药物滥用比例高,且药物滥用导致其发生高危性行为的可能性更大,性病发生率更高。     

产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的研究进展

产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)细菌在世界范围内广泛流行,此酶不仅见于克雷伯菌属,在诸多革兰阴性细菌中皆可检测到.产KPC细菌除了对β-内酰胺类抗菌药物耐药,对其他类抗菌药物如氟喹诺酮类、氨基糖苷类、四环素类也多表现为耐药,受到广泛关注.此文对产KPC肺炎克雷伯菌的流行病学、检测方法、感染的治疗及控制进行了综述.     

新生儿肺炎克雷伯菌脓毒血症细菌的耐药性分析

目的 探讨新生儿肺炎克雷伯菌脓毒血症的耐药特性,为药物治疗提供新依据.方法 对本院近五年确诊新生儿肺炎克雷伯菌脓毒血症临床病例及药敏结果进行回顾性分析.结果 50例肺炎克雷伯菌脓毒血症多为医院内感染,其中检出产ESBLs菌株13株（占26%）,非产ESBLs菌株37株（占74%）,均为多重耐药菌株,药敏试验证明：对常用广谱β-内酰胺类抗生素均有超强耐药;但对亚胺培南及阿米卡星等药敏感,敏感率高达100%.结论 亚胺培南和阿米卡星均可作为新生儿肺炎克雷伯菌感染首选治疗药物.     

老年人肺炎克雷伯菌耐药性和β-内酰胺酶基因分析

目的分析老年人肺炎克雷伯菌的耐药谱及其携带的β-内酰胺酶基因。方法抗菌药物敏感试验采用微量肉汤稀释法测定临床分离的肺炎克雷伯菌对抗菌药物的耐药性，采用PCR法检测pβ-内酰胺酶耐药基因型。结果20株肺炎克雷伯菌对阿莫西林、替卡西林、哌拉西林、头孢噻吩、头孢他啶、头孢吡肟的耐药率均为100％，复方阿莫西林60％、头孢西丁40％、复方哌拉西林30％。PCR扩增后有19株均发现有产酶基因，阳性率为95％，最多的一株有4种基因。基因型主要是TEM型，20株中有19株为TEM型，少数为CTX—M型。结论肺炎克雷伯菌株大多携带β-内酰胺酶耐药基因，其对β-内酰胺类的高耐药率与TEM型基因有关。     

微生物检验中革兰氏阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶检测结果分析

目的通过对骨创伤患者分泌物所分离的克雷伯菌属、大肠埃希菌和其他肠杆菌科超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的临床微生物检验,研究该酶介导的耐药性能及其在临床上的应用。方法收集骨创伤患者分泌物分离的耐氨苄西林的克雷伯菌属、大肠埃希菌40株,以NCCLs推荐的初筛,Etest法操作,表型确证试验。结果其中有14株即35％的细菌被确认产出ESBLs,其中9株确认试验与Etest均阳性,产ESBEs的克雷伯菌属检出率为50％,大肠埃希菌的检出率为30．4％,其他肠杆菌科细菌检出率为33．3％。结论大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌属于产出超广谱β-内酰胺酶的重要菌株,但是其他肠杆菌科细菌的检出率也在上升,尤其是不能忽略检测阴沟杆菌。头孢噻肟（CTX）是本地区超广谱β-内酰胺酶筛选的最佳底物。     

肺炎克雷伯菌的临床分布与耐药性分析

目的分析本院2015年-2017年临床分离肺炎克雷伯菌的流行病学特点及抗菌药物耐药情况。方法对临床送检的各类标本进行常规培养,采用法国梅里埃公司的VITEK 2 Compact系统对肺炎克雷伯菌进行鉴定及药敏试验,对于仪器检测受限的抗生素选用Kirby-Bauer纸片扩散法进行补充。使用WHONET 5.6软件统计分析肺炎克雷伯菌的检出率、科室分布、标本来源及抗菌药物的耐药性变迁。结果 2015年-2017年共检出肺炎克雷伯菌613株,检出率为12.66%。ICU、眼科、泌尿外科肺炎克雷伯菌的检出率分别为10.3%、8.3%、8.2%,居临床科室前3位。送检标本中痰液标本的检出率最高,为51.4%,其次为尿标本,检出率为11.3%。3年间肺炎克雷伯菌对头孢唑啉的耐药率较高(高于50%),碳青霉烯类药物亚胺培南、美罗培南的耐药率逐年升高,氨基糖苷类、喹诺酮类药物对肺炎克雷伯菌的耐药率呈下降趋势。结论肺炎克雷伯菌对抗菌药物的耐药性不断发生变化,应加强耐药性监测,采取有效的院感防控措施,合理使用抗菌药物。     

耐头孢西丁肺炎克雷伯菌AmpC酶的检测及耐药性基因分析

目的对耐头孢西丁肺炎克雷伯菌AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)进行检测及其耐药基因进行分析,探讨产AmpC酶基因对其耐药表型的影响。方法采用头孢西丁三维试验检测AmpC酶,采用双纸片确诊试验测定ESBLs,PCR扩增AmpC酶与ESBLs基因及其序列测定确定其基因型。结果 72株耐头孢西丁肺炎克雷伯菌中AmpC酶阳性有45株,阳性率为62.5%(45/72),3株为CMY-2型,43株为DHA-1型,其中在1株菌株中同时存在CMY-2和DHA-1两种基因;45株AmpC酶阳性肺炎克雷伯菌中33株检测出ESBLs,检出率为73.3%(33/45),23株携带CTX-M基因,15株携带SHV基因,19株携带TEM基因。结论 AmpC阳性肺炎克雷伯菌菌株中ESBLs检出率高,加强监测高产AmpC酶耐头孢西丁肺炎克雷伯菌,治疗相关菌感染以亚胺培南和美罗培南为首选,合并产AmpC酶和ESBLs肺炎克雷伯菌比单产AmpC酶菌株对亚胺培南和美罗培南的耐药率低。     

婴幼儿配方奶粉中肺炎克雷伯菌与阪崎肠杆菌分离株的药敏分析

目的研究中国婴幼儿配方奶粉中肺炎克雷伯菌及阪崎肠杆菌分离株的药物敏感性。方法采用纸片扩散法测定15株细菌对氨苄西林、头孢唑林、环丙沙星、阿米卡星等8大类共24种抗生素的敏感性。结果 2009年自30份婴幼儿奶粉样品中共分离得到15株肠杆菌科细菌,经生化鉴定,其中肺炎克雷伯菌8株(53.3%),阪崎肠杆菌7株(46.7%)。药敏结果显示:所有菌株对β-内酰胺类抗生素均有不同程度的耐药性,对氟喹诺酮类和氨基糖甙类均敏感。分别有1株肺炎克雷伯菌和1株阪崎肠杆菌几乎对所有头孢类抗生素耐药。结论婴幼儿配方奶粉中肺炎克雷伯菌和阪崎肠杆菌对β-内酰胺类抗生素的耐药性较强,其多重耐药性不断的出现对婴幼儿构成了极大的危害。