紫花牡荆素对肝癌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的研究紫花牡荆素(casticin)诱导肝癌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法体外培养人肝癌PLC/PRF/5和HepG2细胞系。通过碘化丙啶(PI)染色流式细胞术分析细胞凋亡率,ELISA法检测组蛋白/DNA碎片的含量,琼脂糖凝胶电泳观察DNA断裂条带,Western blotting检测细胞内DR4和DR5蛋白表达水平。结果 Casticin以浓度依赖方式增加PLC/PRF/5和HepG2细胞系sub-G1细胞的百分率和组蛋白/DNA片段的含量(P<0.05),casticin(30μmol·L-1)作用细胞24h后可出现DNA梯度条带;casticin可以浓度依赖性方式诱导PLC/PRF/5内DR5蛋白水平的表达,但对DR4蛋白表达无影响;DR5/Fc嵌合蛋白预处理能有效降低casticin诱导的细胞凋亡。结论 Casticin可以浓度依赖性方式诱导肝癌细胞凋亡,其机制可能与上调细胞的DR5蛋白表达有关。     

谷胱甘肽耗竭在芹菜素诱导成骨肉瘤MG- 63 细胞凋亡中的作用

目的研究芹菜素（apigenin）诱导体外培养人成骨肉瘤MG-63细胞凋亡作用及其机制。方法体外培养MG-63细胞,分光光度法测定细胞内谷胱甘肽（GSH）含量;流式细胞术检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA断裂。结果 apigenin显著降低MG-63细胞内GSH水平（P〈0.05）,呈浓度依赖性。apigenin以浓度依赖方式诱导MG-63细胞凋亡率增高（P〈0.05）,并导致细胞DNA断裂;500μmol/LGSH预孵育1h,能有效阻断apigenin诱导MG-63细胞内GSH耗竭和细胞凋亡作用（P〈0.05）。结论 apigenin通过耗竭MG-63细胞内GSH诱导成骨肉瘤细胞凋亡。     

多西他赛体外抗肝癌作用及对细胞内氧化还原状态的影响

目的：研究多西他赛（docetaxel）体外抗肝癌作用及其与氧化还原状态的关系。方法：用不同浓度的多西他赛处理肝癌细胞株（SMMC-7721细胞），用集落形成试验检测多西他赛对SMMC-7721细胞生长抑制作用，通过流式细胞术测定多西他赛对SMMC-7721细胞株细胞周期及凋亡的影响。用DCF／DA作为活性氧（reactive oxygen species，ROS）捕获剂检测用药后细胞内ROS产生。用试剂盒测定细胞谷胱甘肽（glutathione。GSH）水平。结果：多西他赛能抑制SMMC-7721细胞增殖，并呈浓度依赖性；诱导SMMC-7721细胞凋亡和G2／M期阻滞；导致SMMC-7721细胞内ROS产生增多和GSH降低。结论：多西他赛能通过诱导细胞凋亡和G2／M期阻滞而抑制SMMC-7721细胞增殖，用药后细胞内ROS产生增多和GSH降低可能在多西他赛体外抑制SMMC-7721细胞增殖和促进细胞凋亡中起重要作用。     

GSH 耗竭介导5, 7- 二甲氧基黄酮诱导肺癌A 549 细胞凋亡

目的探讨5,7-二甲氧基黄酮（5,7-dimethoxyflavone,DMF）诱导人肺癌A549细胞凋亡作用是否涉及细胞内谷胱甘肽（glutathione,GSH）耗竭。方法体外培养A549细胞,分光光度法测定细胞内GSH含量;流式细胞术检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA断裂。结果 DMF以浓度依赖方式诱导A549细胞凋亡率增高（P〈0.05）,并导致细胞DNA断裂。DMF显著降低A549细胞内GSH水平（P〈0.05）,呈浓度依赖性。500μmol·L-1GSH预孵育1h,能有效阻断DMF诱导细胞内GSH耗竭,并减弱DMF触发细胞凋亡作用（P〈0.05）。结论细胞内GSH耗竭是DMF诱导人肺癌A549细胞凋亡作用机制之一。     

紫花牡荆素对卵巢癌CoC1 细胞凋亡和Mcl-1 表达的影响

目的研究紫花牡荆素（casticin）诱导人卵巢癌CoC1细胞凋亡作用。方法用不同浓度的casticin处理体外培养的CoC1细胞,碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）分析细胞凋亡率,比色法测定细胞caspase-3活性,Western Blot分析Mcl-1蛋白表达水平。结果紫花牡荆素以浓度依赖方式增高CoC1细胞凋亡率和激活caspase-3（P〈0.05）。1.0μmoL·L-1casticin以时间依赖方式降低Mcl-1蛋白表达水平（P〈0.05）。结论 casticin诱导CoC1细胞凋亡与其抑制Mcl-1蛋白表达相关。     

芹菜素诱导胰腺癌PANC- 1 细胞凋亡与GSH 耗竭的关系

目的研究芹菜素（apigenin）诱导体外培养人胰腺癌PANC-1细胞凋亡作用是否涉及细胞内谷胱甘肽（glutathione,GSH）耗竭。方法体外培养PANc-1细胞,分光光度法测量细胞内GSH水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA法测定细胞DNA断裂。结果apigenin以浓度依赖方式诱导PANC-1细胞凋亡率增高俨〈0．05）,并导致细胞组蛋白／DNA碎片增加。apigenin显著降低PANC-1细胞内GSH水平（P〈0．05）。呈浓度依赖性。500μmol．L^-1GSH预孵育1h,能有效阻断apigenin诱导细胞内GSH耗竭,同时,拮抗apigenin触发细胞凋亡作用（P〈0．05）。结论apigenin诱导人胰腺癌PANC-1细胞凋亡作用与其耗竭细胞内GSH相关。     

DHA诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡及其作用机制研究

目的 探究二十二碳六烯酸(DHA)对人胃癌细胞SGC-7901生长的影响及诱导细胞凋亡的作用机制.方法 MTT法测定细胞存活率.Hoechst染色法进行细胞形态学观察.流式细胞仪检测细胞凋亡和活性氧(ROS)的变化,硫代巴比妥钠比色法(TBA法)测定细胞脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量变化,二硫代二硝基苯甲酸(DNTB)比色法测定谷胱甘肽(GSH)含量.结果 MTT和流式细胞仪分析结果显示.细胞增殖率随DHA处理浓度的递增逐渐下降,呈现明显剂量效应关系.形态学观察显示凋亡细胞细胞质凝聚、浓染,凋亡小体出现.60.80,100/μmol·L-1DHA作用细胞24 h后,MDA含量显著高于对照组(P<0.05);GSH含量下降(P<0.05).80μmol·L-1DHA处理细胞5 h后,ROS出现峰值,且抗氧化剂NAC可以减弱ROS的变化.结论 DHA可以诱导胃癌细胞SOC-7901凋亡,脂质过氧化水平和RoS升高可能是DHA诱导细胞凋亡的重要机制.     

柿叶提取物对氧化应激损伤U257神经胶质细胞的保护作用

目的研究中成药“柿叶提取物”对体外过氧化氢（H2O2）引起U257神经胶质细胞氧化应激损伤的保护作用及其保护机制。方法体外培养U257神经胶质细胞,建立氧化应激引起的细胞损伤模型;采用MTr比色法测定细胞的存活率;以Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡;用丙二醛（MDA）及还原型谷胱甘肽（GSH）测定试剂盒作相应酶活性或产物含量分析。结果U257神经胶质细胞与300μmol／L的H2O2共孵育10h可诱导细胞凋亡。柿叶提取物（5、10、30μg／ml）3个剂量组均能降低凋亡细胞百分率,降低细胞内MDA含量,提高细胞内GSH含量,该作用呈剂量依赖性。结论柿叶提取物片对氧化应激引起的U257神经胶质细胞损伤有明显的保护作用,其保护机制与细胞内氧化还原的平衡状态改善有关。     

氧化应激在TRAIL诱导Hela细胞凋亡中的作用

目的 探讨氧化应激在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用.方法 40μg·L-1 TRAIL处理细胞后,用MTT法检测TRAIL对细胞增殖的抑制作用;用分光光度法检测细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量;流式细胞仪检测胞浆内的活性氧(ROS)水平;激光共聚焦测定细胞线粒体膜电位(△Ψm);蛋白质印迹法检测Bcl-2、Cyt C、DR 4、DR 5蛋白量.结果 40 μg·L-1 TRAIL对Hela细胞的生长具有显著的抑制作用;使抗氧化因子GSH含量明显下降,氧化应激产物ROS、MDA含量明显增多;到6h时△Ψm不断降低,能明显下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,引起线粒体Cyt C向细胞质的释放;同时上调死亡受体DR 5的表达.而抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)能抑制TRAIL引起的这些变化.结论 氧化应激在TRAIL诱导的Hela细胞凋亡中起着重要作用,可能与ROS激活线粒体途径和上调DR 5的表达密切相关.     

谷胱甘肽耗竭在丁烯酸内酯诱导的细胞毒性中的作用

目的本课题组前期研究显示,镰刀菌毒素丁烯酸内酯(Butenolide,BUT)能够引起HepG2细胞内谷胱甘肽(GSH)含量的降低,且该事件介导了BUT诱导的细胞毒性。现采用不同的巯基含量调节剂调节细胞内GSH水平,进一步阐明GSH耗竭在BUT诱导的细胞毒性中的作用。方法不同的GSH含量调节剂:GSH耗竭剂马来酸二乙酯(DEM)以及巯基化合物GSH和N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理HepG2细胞后,染毒BUT。采用Beutler改良法测定细胞内GSH的含量,MTT法测定细胞存活率。结果1mmol/LDEM作用细胞30min可明显降低细胞内GSH的含量,而与50μg/mlBUT联合作用30min可进一步耗竭细胞内的GSH,使细胞内GSH含量分别由二者单独作用时的44%和47%降至22%。1mmol/LDEM单独作用30min无明显的细胞毒性,但其预处理却能增强BUT的细胞毒性,使细胞存活率由50μg/mlBUT单独作用8h时的51%降至41%。1mmol/LGSH和5mmol/LNAC预处理细胞30min可明显抑制BUT引起的细胞内GSH含量的降低,使GSH含量由50μg/mlBUT单独作用30min时的33%分别增至82%和91%。与对细胞内GSH含量的保护作用相一致,GSH和NAC预处理可完全抑制BUT的细胞毒性,使细胞存活率由50μg/mlBUT单独作用细胞8h时的47%分别提高至115%和112%。结论采用GSH耗竭剂和巯基化合物调节细胞内GSH含量可明显影响BUT的细胞毒性,这一结果进一步阐明,GSH的耗竭介导了BUT诱导的细胞毒性。     

黄芩苷对香烟烟雾提取物诱导的细胞损伤保护作用研究

目的研究黄芩苷对香烟烟雾提取物（cigarette smoke extract,CSE）诱导的人肺泡上皮细胞损伤的影响,并初步探讨其机制。方法制备CSE,用不同浓度黄芩苷对人肺泡上皮细胞A549进行预处理,再用CSE刺激细胞。用MTT法检测细胞存活率,流式细胞术测定细胞凋亡率,彗星实验观察DNA损伤情况,荧光法测定细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量。结果随着CSE浓度的增加和作用时间的延长,细胞存活率下降,各组之间有统计学差异（P〈0.05）;黄芩苷能减少CSE诱导的细胞存活率下降,抑制CSE诱导的细胞内ROS的产生,并有剂量依赖关系（P〈0.05或P〈0.01）;黄芩苷＋CSE组细胞的彗星尾长、尾部DNA含量、尾距、Olive尾距均小于CSE组（P〈0.05）,并且黄芩苷可以减少CSE导致的细胞凋亡。结论黄芩苷可以拮抗CSE对细胞的损伤,提高细胞的存活率,降低凋亡率,其原因可能与黄芩苷能降低细胞ROS含量,减少DNA损伤有关。     

地榆正丁醇萃取层对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响及其机制

目的：利用正丁醇溶剂提取地榆中的鞣质（15.36％）,研究其萃取层对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度的正丁醇萃取层作用于人肝癌HepG2细胞,通过MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率和细胞内活性氧（ROS）的含量。结果 HepG2细胞经不同浓度（100,150,200,250,300μg·mL-1）的地榆正丁醇萃取层作用48 h,细胞增殖明显受到抑制,其IC50为222.87μg·mL-1。不同浓度（200,400,600μg·mL-1）的地榆正丁醇萃取层作用于HepG2细胞48 h后,细胞的凋亡率和细胞内ROS的含量均明显高于空白组（P〈0.05）,且随着地榆正丁醇萃取层浓度的增加,HepG2细胞的凋亡率和细胞内ROS的含量也逐渐升高。结论地榆正丁醇萃取层可以浓度依赖性方式抑制人肝癌细胞株HepG2的增殖并促进其凋亡,这可能与其促进细胞内ROS的产生有关。     

活性氧介导5, 7- 二甲氧基黄酮增敏TRAIL 诱导肺癌细胞凋亡

目的研究5,7-二甲氧基黄酮(5,7-DMF)是否能增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导的人肺癌细胞凋亡及其作用机制。方法体外培养人肺癌A549细胞。MTT法测定细胞增殖活性;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)和ELISA试剂盒检测细胞凋亡;DCFH-DA荧光标记FCM检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果 5,7-DMF能增强TRAIL诱导的A549细胞凋亡和ROS生成。N-乙酰半胱氨酸能有效阻断5,7-DMF与TRAIL所诱导的A549细胞凋亡及ROS生成。结论 5,7-DMF通过促进A549细胞内活性氧生成从而增强TRAIL诱导的凋亡。     

药用纳米SiO2对人正常肺细胞的氧化损伤

目的：探讨药用纳米SiO2对人正常肺细胞MRC-5的生长抑制与氧化损伤作用。方法：纳米SiO2暴露于MRC-5细胞48h后,以MTT法测定其对细胞增殖的影响,HE染色观察细胞的形态学变化,并检测暴露后细胞内活性氧（ROS）和还原型谷胱甘肽（GSH）含量以及超氧化物歧化酶（SOD）活性的改变,分析纳米材料对MRC-5细胞的氧化损伤作用。结果：两种尺度（粒径21.6、48.6nm）纳米SiO2暴露浓度分别达到0.4mg/mL与1.0mg/mL以上时,细胞存活率随暴露剂量的增加而降低,IC50分别为0.8mg/mL和1.9mg/mL。细胞形态皱缩,核质凝聚。细胞内活性氧明显升高（P〈0.01）,GSH含量和SOD活性显著降低（P〈0.05）,且呈现明显的剂量效应关系。结论：较高浓度纳米SiO2直接暴露可抑制人正常肺细胞MRC-5的增殖,其机理与细胞的氧化损伤有关。     

氧化还原状态的改变控制手霉素诱导HL-60白血病细胞凋亡

目的研究手霉素对HL-60白血病细胞的作用,探讨其作用机制,主要是线粒体的改变。方法使用人的白血病细胞株HL-60细胞。MTT细胞毒性测定评价对白血病细胞的作用,使用Annexin V和一氧化氮(nitric oxide,NO)染料标记细胞,应用流式细胞仪术检测细胞内NO生成和细胞凋亡。细胞内超氧阴离子通过二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)测定。应用化学发光法测定超氧歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性。采用荧光法测定谷胱甘肽(glutathi-one,GSH),萤光素-萤光素酶发光法测定ATP含量。免疫印迹技术检测细胞色素C和Mn-SOD的表达。结果手霉素引起HL-60细胞活性的下降,且呈剂量依赖性。手霉素诱导产生反应性氧基(reactive oxygen species,ROS):NO和超氧阴离子,降低GSH,但不影响SOD。手霉素诱导线粒体降低细胞ATP的含量,线粒体肿胀和细胞色素C从线粒体释放到细胞质。手霉素诱导的凋亡与ROS的增加有关。用N-乙酰基-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)抑制ROS可保护HL-60细胞逃避手霉素的细胞毒作用和避免手霉素诱导的凋亡。结论细胞内ROS的产生对手霉素的细胞毒作用起非常重要的作用。手霉素通过包括上游ROS产生,线粒体形态改变和细胞色素C释放的线粒体途径,诱导白血病细胞凋亡。     

Triapine通过ROS/GSH/GPX4轴诱导A549细胞铁死亡北大核心CSCD

目的探究Triapine诱导非小细胞肺癌细胞A549发生铁死亡的作用与机制。方法MTT实验和克隆形成实验评价Triapine对A549细胞增殖的作用;使用DCFH-DA探针分析Triapine对A549细胞内ROS水平的影响;试剂盒检测Triapine处理后A549细胞内谷胱甘肽(glutathione,GSH)和脂质过氧化物(lipid peroxides,LPO)水平变化;Western blot分析Triapine对A549细胞内谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)蛋白表达的影响;用ROS抑制剂进行干预,检测GPX4蛋白的表达和细胞活性的变化。结果Triapine能够抑制A549细胞增殖,且IC_(50)为(3.7±0.08)mg·L^(-1);Triapine能诱导A549细胞ROS累积,降低GSH水平,提升LPO含量,下调GPX4的表达;ROS抑制剂干预能恢复Triapine引起的GPX4表达降低及细胞活性下降。结论Triapine可能通过提升A549细胞内ROS水平消耗GSH,导致GPX4表达下降,诱导铁死亡发生。     

依非韦伦的肝细胞毒性作用及对蛋白质表达谱的影响

目的 探讨依非韦伦对肝细胞的毒性作用及对蛋白质表达谱的影响.方法 人肝癌细胞系Huh7中分别加入依非韦伦1.25,2.5,5和10 mg·L-1,培养5h后采用原位比色法测定细胞内活性氧类(ROS)的含量;依非韦伦2.5mg·L-1与细胞作用5h后,用膜联蛋白-Ⅴ/碘化丙啶细胞凋亡检测试剂盒染色.用流式细胞仪测定细胞凋...     

亚硒酸钠诱导人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞氧化应激和细胞凋亡

目的研究亚硒酸钠诱导NB4细胞的氧化应激和细胞凋亡。方法MTT比色法检测亚硒酸钠对NB4细胞的生长抑制;用形态学、DNA琼脂糖电泳和流式细胞术研究亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡的作用;用化学发光法和比色法研究亚硒酸钠对NB4细胞内氧化应激的影响。 结果亚硒酸钠可以时间和剂量依赖性地抑制NB4细胞生长和诱导NB4细胞凋亡。亚硒酸钠(≥5 μmol·L^-1)提高了NB4细胞内ROS水平,同时伴有细胞内还原型谷胱甘肽含量下降,而抗氧化剂NAC可抑制亚硒酸钠诱导的NB4细胞氧化应激和细胞凋亡。结论亚硒酸钠诱导NB4细胞氧化应激可能是其诱导NB4细胞凋亡的重要机理。     

大黄素诱导人肝癌HepG2细胞线粒体凋亡作用研究

目的 研究大黄素对人肝癌HepG2细胞线粒体凋亡的影响。方法 培养人肝癌HepG2细胞,与5、10、20、40、60、80、100 μmol/L的大黄素作用24、48 h,MTS法检测细胞增殖;40、80、160 μmol/L大黄素作用HepG2细胞24 h,AO/EB双荧光染色法观察细胞凋亡的形态学改变;Annexin V/PI染色经流式细胞仪检测细胞凋亡;分光光度法检测caspase 3活性;ATP试剂盒检测细胞ATP含量,不同荧光探针加载后流式细胞仪测定大黄素对HepG2细胞内活性氧（ROS）含量、Ca²⁺浓度、线粒体膜电位（MMP）变化的影响。结果 大黄素抑制HepG2细胞生长,且呈时间、浓度相关性,半数抑制浓度（IC₅₀）为（77.42±1.25）μmol/L;随着大黄素浓度升高,AO/EB双染观察到细胞核浓缩、碎裂、凋亡小体等凋亡形态;与对照组比较,大黄素40、80、160 μmol/L作用于HepG2细胞24 h后细胞凋亡率显著增加,caspase 3活性显著增强,ROS水平、Ca²⁺浓度明显增加（P<0.05、0.01、0.001）,80、160 μmol/L组线粒体膜电位明显降低,ATP含量显著下降（P<0.05、0.01、0.001）。结论 大黄素造成HepG2细胞内ROS堆积,ATP合成功能障碍,线粒体膜电位明显下降,进而诱导线粒体通透转运孔开放,导致钙离子和细胞色素C外流,活化caspase蛋白家族,导致细胞凋亡。     

三氧化二砷对肝癌细胞内活性氧水平的影响

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对肝癌细胞增殖及细胞内活性氧（ROS）水平的影响。方法用As2O3作用于体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞株，分别用MTT法和流式细胞仪观察SMMC-7721细胞增殖情况并检测ROS。结果MTT结果显示As2O3能明显抑制SMMC-7721细胞的增殖．并呈时间和浓度依赖性。流式细胞仪分析显示As2O3作用后的人肝癌SMMC-7721细胞内ROS水平明显增高（P〈0．01）．并也呈时间和浓度依赖性。结论As2O3可通过抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖和提高细胞内ROS水平诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用，这可能也是As2O3抗肝癌的主要途径之一。