氧化低密度脂蛋白及其受体与子痫前期发病的关系

目的 探讨氧化低密度脂蛋白(oxLDL)及血凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)与子痫前期发病的关系.方法 选择2007年6月至2008年1月在青岛大学医学院附属医院产科住院分娩的子痫前期孕妇73例,其中轻度子痫前期孕妇35例(轻度子痫前期组),重度子痫前期孕妇38例(重度子痫前期组).选取同期正常晚期妊娠妇女45例为对照组.采用酶联免疫吸附试验检测各组孕妇血浆中oxLDL水平;采用RT-PCR、蛋白印迹法分别检测各组孕妇胎盘组织中LOX-1 mRNA及蛋白表达水平;采用RT-PCR检测各组孕妇胎盘组织中半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)mRNA表达水平.结果 (1)轻度及重度子痫前期组孕妇血浆中oxLDL水平分别为(0.42±0.11)及(0.68±0.12)mg/L,明显高于对照组的(0.35±0.14)mg/L,差异有统计学意义(P<0.01);重度子痫前期组又明显高于轻度子痫前期组(P<0.01).(2)轻度及重度子痫前期组孕妇胎盘组织中LOX-1mRNA表达水平分别为0.70±0.10及0.84±0.08,明显高于对照组的0.58±0.11,差异有统计学意义(P<0.01);重度子痫前期组又明显高于轻度子痫前期组(P<0.01).(3)轻度及重度子痫前期组孕妇胎盘组织中LOX-1蛋白表达水平分别为0.79±0.15及0.90±0.12,明显高于对照组的0.68±0.11,差异有统计学意义(P<0.01);重度子痫前期组又明显高于轻度子痫前期组(P<0.01).(4)轻度及重度子痫前期组孕妇胎盘组织中caspase-3 mRNA表达水平分别为3.82±0.18及5.39±0.14,明显高于对照组的2.19±0.20,差异有统计学意义(P<0.01);重度子痫前期组又明显高于轻度子痫前期组(P<0.01).(5)轻度及重度子痫前期组孕妇血浆中oxLDL水平与胎盘组织中LOX-1 mRNA表达水平呈正相关(r=0.93,P<0.05);胎盘组织中LOX-1 mRNA表达与胎盘组织caspase-3 mRNA表达水平呈正相关(r=0.84,P<0.05).结论 子痫前期孕妇血浆中oxLDL水平升高,并上调胎盘组织中的LOX-1表达水平,从而参与子痫前期的病理生理过程.     

邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯对原代培养的人早孕绒毛细胞滋养细胞凋亡的影响

目的 探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)对原代培养的人早孕绒毛细胞滋养细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2和bax表达的影响.方法 用浓度为0、25、50、100 μmol/L的DEHP作用于原代培养的人早孕绒毛细胞滋养细胞24 h,逆转录(RT)PCR法检测滋养细胞凋亡相关基因Bcl-2和bax的mRNA表达水平;蛋白印迹法检测Bcl-2和bax的蛋白表达水平;原位末端脱氧核苷酸转移酶标记(TUNEL)法和双染流式细胞术检测细胞滋养细胞凋亡情况.结果 (1)Bcl-2表达水平:当DEHP浓度为0、25、50、100 μmol/L时,Bcl-2 mRNA表达水平分别为1.00±0.05、1.03±0.04、1.04±0.03、1.04±±0.04,分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05);Bcl-2蛋白表达水平分别为0.11±0.02、0.11±0.04、0.12±0.02、0.12±0.03,分别比较,差异也无统计学意义(P>0.05).(2)bax表达水平:当DEHP浓度为50、100 μmol/L时,bax mRNA表达水平分别为0.96±0.04、1.02±0.04,与DEHP浓度为0 μmol/L时(0.81±0.05)比较,差异有统计学意义(P<0.05),bax蛋白表达水平分别为0.63±0.04、0.81±0.04,与DEHP浓度为0 μmol/L时(0.23±0.05)比较,差异也有统计学意义(P<0.05).(3)细胞凋亡率:浓度为50、100 μmol/L的DEHP作用24 h后,双染流式细胞术检测细胞滋养细胞凋亡率分别为(18.8±2.6)%和(20.3±2.0)%,与DEHP浓度为0 μmol/L时[(10.6±1.4)%]比较,差异有统计学意义(P<0.05);TUNEL法检测细胞滋养细胞凋亡率为(18.1±4.6)%和(19.5±1.2)%,与DEHP浓度为0 μmol/L时[(11.2±3.1)%]比较,差异也有统计学意义(P<0.05).结论 DEHP可通过增加细胞凋亡相关基因bax的表达,促进细胞滋养细胞凋亡,但对Bcl-2的表达无明显影响.     

滋养细胞内质网应激特征性分子葡萄糖调节蛋白及内质网凋亡因子caspase-12与子痫前期发病的关系

目的 探讨滋养细胞内质网超微结构变化及内质网应激特征性分子--内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白(GRP)78、94和内质网凋亡因子--半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(caspase-12)mRNA及蛋白表达与子痫前期发病的关系.方法 选择2008年7月-2010年1月在南京医科大学第一附属医院分娩的孕妇共65例,其中子痫前期孕妇30例(子痫前期组),健康孕妇35例为对照组.应用透射电镜扫描观察胎盘组织中滋养细胞内质网超微结构改变,逆转录(RT)PCR技术检测胎盘组织中GRP78、GRP94和caspase-12 mRNA的表达,蛋白印迹法检测胎盘组织中GRP78、GRP94和caspase-12蛋白的表达.结果 (1)对照组胎盘组织中滋养细胞内质网体积无明显增大,内质网无扩张也无肿胀变化;子痫前期组滋养细胞内质网水肿,数量减少,内质网体积增大,内质网扩张及液泡化,且内质网脱颗粒改变明显.(2)子痫前期组胎盘组织中GRP78 mRNA及蛋白表达水平分别为2.59±0.09及0.81±0.31,显著高于对照组的1.16±0.07及0.40±0.10,两组分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01).(3)子痫前期组胎盘组织中GRP94 mRNA和蛋白表达水平分别为1.31±0.91及0.55±0.24,显著高于对照组的0.63±0.57及0.22±0.09,两组分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01).(4)子痫前期组胎盘组织中caspase-12 mRNA和蛋白表达水平分别为4.03±0.65及1.56±0.17,显著高于对照组的1.85±0.85及0.91±0.69,两组分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 子痫前期孕妇的滋养细胞内质网有明显的扩张及肿胀性改变;胎盘组织中GRP78、GRP94以及caspase-12 mRNA及蛋白表达水平比健康孕妇有明显升高.提示,内质网应激介导的滋养细胞凋亡可能是子痫前期发病的又一重要机制.     

胎盘特异蛋白1在早期妊娠丢失患者绒毛中的表达及其临床意义

目的探讨胎盘特异蛋白1(PLAC1)在早期妊娠丢失患者绒毛中的表达变化及其介导滋养细胞凋亡参与病理妊娠发生的潜在机制。方法选择2019年9月至2019年12月在浙江大学医学院附属妇产科医院就诊的早期妊娠丢失和同期因非意愿妊娠而要求人工流产的妇女各33例(分别为早期妊娠丢失组、对照组), 采用蛋白印迹法检测绒毛组织中PLAC1蛋白的表达, 定量PCR技术检测小分子干扰RNA(siRNA)敲低PLAC1基因表达后滋养细胞SWAN-71中36个凋亡相关基因mRNA的表达变化。结果早期妊娠丢失组患者绒毛组织中PLAC1蛋白的表达水平显著低于对照组, 分别为1.30±1.02、2.03±1.18, 两组比较, 差异有统计学意义(P<0.01)。敲低SWAN-71细胞的PLAC1基因表达后, 促凋亡相关基因BECN1、BMF、HRK、BAX、BAK、caspase-7、caspase-9、p53基因mRNA表达水平显著升高, 其中以BMF基因升高尤为显著(P<0.001)。结论 PLAC1在早期妊娠丢失患者绒毛组织中表达显著下降, 其可能通过调控促凋亡基因BMF表达介导滋养细胞凋亡而参...     

卵巢癌细胞株SKOV3中ERβ表达对细胞增殖凋亡影响的研究

目的:研究卵巢癌细胞株SKOV3中ERβ表达对细胞增殖凋亡的影响。方法:MTT法检测卵巢癌细胞暴露于17β-E2不同浓度及不同时间的细胞增殖率。用特异性雌激素受体激动剂DPN联合17β-E2或单独使用DPN处理细胞,RT-PCR法检测ERβmRNA、ERK1/2 mRNA及caspase-3 mRNA表达,蛋白免疫印记法检测ERβ和p-ERK1/2蛋白表达。结果:10-6mol/L 17β-E2作用60min时,细胞的增殖活性最强(5.7±0.23),与对照组相比(3.5±0.45),差异有统计学意义(P0.05)。ERβ在卵巢癌中低表达。随着DPN作用时间延长及浓度增加,ERβmRNA、caspase-3 mRNA表达逐渐增加(P0.05),ERK2 mRNA表达逐渐降低,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。随着DPN作用时间延长及浓度的增加,ERβ蛋白表达逐渐增加,p-ERK1/2蛋白表达逐渐降低,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:ERβ在卵巢癌中低表达,上调ERβ表达能抑制卵巢癌细胞的增殖,同时促进细胞的凋亡。     

缺氧对体外培养的早孕期细胞滋养细胞中缺氧适应相关部分基因表达及细胞浸润能力的调控

目的:探讨缺氧对细胞滋养细胞表达缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及氧感受器缺氧诱导因子脯氨酸羟化酶1、2(HPH/PHD1、2)和抑制缺氧诱导因子-1(FIH-1)的调控,以及缺氧对体外培养的细胞滋养细胞浸润能力的调节。方法:用RT-PCR和Western blot法检测在常氧、缺氧再复氧及持续缺氧等条件下,细胞滋养细胞中HIF-1α、HPH/PHD1、2和FIH-1 mRNA和蛋白表达的变化;并用体外侵袭实验检测缺氧再复氧、持续低氧对细胞滋养细胞浸润能力的影响。结果:(1)持续缺氧条件下培养的细胞滋养细胞HIF-1α和HPH/PHD2 mRNA和蛋白表达显著高于常氧组(P<0.01);HPH/PHD1和FIH-1 mRNA和蛋白表达显著低于常氧组(P<0.01)。缺氧再复氧后培养的细胞滋养细胞HIF-1α和HPH/PHD2 mRNA和蛋白表达显著高于常氧组(P<0.05),但显著低于持续缺氧组(P<0.05);HPH/PHD1和FIH-1 mRNA和蛋白表达均显著低于常氧组(P<0.05),但显著高于持续缺氧组(P<0.05)。(2)持续缺氧显著抑制细胞滋养细胞的浸润能力,与常氧组比较明显降低(P<0.01);缺氧后再复氧细胞滋养细胞的浸润能力居中,与常氧组比较明显降低(P<0.05);与持续缺氧组比较明显升高(P<0.05)。结论:滋养细胞可感受氧分压变化,HIF-1α、HPH/PHD1、HPH/PHD2和FIH-1相互作用与滋养细胞浸润能力调节有关。     

胎盘组织中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1和凋亡相关基因的表达与子痫前期发病的关系

目的 探讨胎盘组织中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)和凋亡相关基因easpase-3、Bax及bcl-2的表达及其与子痫前期发病的关系.方法 选择2005年6月-2006年12月在中国医科大学附属盛京医院产科住院的子痫前期患者30例(子痫前期组),以同期正常孕妇40例为对照组.采用免疫组化、RT.PCR技术和蛋白印迹(western-blot)法检测两组孕妇不同孕周胎盘组织中LOX-1和caspase-3、Bax及bel-2的表达.结果 (1)子痫前期组20周+1～24周、24周+1～28周、28周+1-32周、32周+1～36周、36周+1～40周孕妇胎盘组织中LOX-1蛋白表达水平分别为20.1±1.8、25.6±1.3、32.8±1.6、34.3±1.5、39.9±1.2,对照组分别为11.2±0.6、18.5±1.6、26.1±1.8、28.3±1.6、32.3±1.6,两组分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05);子痫前期组孕妇胎盘组织中easpase-3蛋白表达水平分别为12.3±0.9、16.3 4-0.9、24.4±0.8、28.3±0.5、36.3±1.1,对照组分别为8.5±1.0、12.3±1.1、17.4±1.2、20.4±0.5、24.2±1.3,两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(2)子痫前期组不同孕周孕妇胎盘组织中LOX-1、easpase-3及Bax mRNA和蛋白的表达水平明显高于对照组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);bel-2 mRNA和蛋白的表达趋势与Bax表达结果相反.结论 LOX-1和caspase-3、Bax在子痫前期患者胎盘组织中表达上调,bcl-2表达下调,-与子痫前期发病有关.     

缺氧调控滋养细胞和内皮细胞sFlt-1差异表达的研究

目的:探讨缺氧条件下,人早孕绒毛滋养细胞(TEV-1)及人脐静脉内皮细胞(EVC-304)中可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)差异表达的特点。方法:CoCl2诱导TEV-1及EVC-304化学缺氧,并于0,6,12,24,48,72,96,120h用ELISA法分别检测上清中sFlt-1蛋白表达,RealtimeRT-PCR法检测各组sFlt-1mRNA表达。结果:缺氧72h后滋养细胞sFlt-1mRNA及蛋白表达随时间延长明显升高(P<0.05),而内皮细胞sFlt-1mRNA及蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:正常情况下滋养细胞及脐静脉内皮细胞中均有sFlt-1表达;缺氧诱导滋养细胞sFlt-1表达明显增加,而内皮细胞sFlt-1表达对缺氧刺激无明显反应。     

Neogenin对人滋养细胞RGMa、DAPK、Neogenin mRNA表达及细胞凋亡的影响

目的:观察不同浓度Neogenin对人滋养细胞RGMa、DAPK、Neogenin表达的影响,以阐明Neogenin在滋养细胞凋亡过程中的作用。方法:先用含0,0.5,1,5,10及50ng/ml的Neogenin无血清培养基预处理TEV-1细胞24h,用噻唑蓝(MTT)比色、流式细胞术(FCM)检测细胞增殖指数及凋亡率;用实时定量PCR检测TEV-1细胞RGMa、DAPK、Neogenin mRNA的变化。结果:MTT、FCM检测表明Neogenin能诱导TEV-1凋亡,且呈一定的浓度依赖性,Neogenin对TEV-1细胞增殖无明显影响。TEV-1细胞RGMa mRNA的表达水平依次为空白对照组(0ng/ml Neogenin)的0.62±0.04,0.90±0.04,0.97±0.04,0.90±0.03及0.75±0.03;DAPK mRNA的表达水平依次为空白对照组的0.68±0.02,0.35±0.01,0.74±0.01,0.51±0.01及0.33±0.01;Neogenin mRNA的表达水平依次为空白对照组的1.45±0.03,1.80±0.05,1.22±0.08,1.47±0.00及1.14±0.00。即随着Neogenin浓度增加,TEV-1细胞内DAPK mRNA表达下调,Neogenin mRNA表达上升,RGMa mRNA的表达水平基本不变。结论:Neogenin可促进TEV-1细胞凋亡,这一过程可能是经DAPK途径调控的。     

sFlt-1及缺氧因素导致子痫前期孕鼠模型滋养细胞凋亡的分析

目的:探讨可溶性血管内皮因子受体-1(sFlt-1)及缺氧因素对子痫前期(PE)孕鼠动物模型滋养细胞凋亡的作用。方法:将120只孕鼠随机分为对照组(A组)和PE模型组(B、C、D组)。建立以L-NAME、PS/PC、STBM全面的复合PE和体外sFlt-1浓度孕鼠模型。妊娠10天开始、B、D组孕鼠腹腔注射sFlt-1,A、C组腹腔注射0.9%生理盐水,均持续13天。妊娠第22天测定孕鼠血压及蛋白尿。断鼠尾取静脉血,ELISA法检测各组孕鼠血浆sFlt-1水平。剖宫产取各组孕鼠胎盘绒毛组织清洗后行原代滋养细胞组织皿培养。A、B、C、D组滋养细胞分别于正常氧压、50ng/ml sFlt-1 2ml+正常氧压、低氧和50ng/ml sFlt-1 2ml+低氧培养箱中培养。48h后,收集培养的原代滋养细胞。流式细胞技术检测细胞调亡;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及Caspase-3表达。结果:对照组与PE模型组孕鼠的血浆sFlt-1水平、收缩压、舒张压及尿蛋白指标比较,差异有统计学意义(P0.01);PE模型组的胎盘滋养细胞凋亡率与对照组(3.95%)比较,差异有统计学意义(P0.01),PE模型组间两两比较,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,PE模型组胎盘组织中的促凋亡蛋白Bax明显上调,抑凋亡蛋白Bcl-2明显下调,凋亡执行蛋白caspase-3表达上调;PE模型组两两比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:sFlt-1及缺氧因素与PE滋养细胞过度凋亡发生密切相关,两者促进PE的发生发展。     

子痫前期血清对滋养-平滑肌细胞共培养体系平滑肌细胞凋亡的影响

目的:探讨子痫前期血清对细胞滋养细胞-平滑肌细胞共培养体系平滑肌细胞凋亡的影响。方法:采用组织块贴壁法培养人早孕期细胞滋养细胞(CTB)和人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC),传代后建立滋养细胞与人脐动脉平滑肌细胞共培养模型并分别加入正常和子痫前期患者静脉血清培养24h,并设立相对应的单培养组;Transwell小室检测CTB的侵袭能力;细胞计数试剂盒(CCK-8)测定HUASMC活力;Annexin V-FITC检测HUASMC凋亡率;RT-PCR检测滋养细胞FasL mRNA与HUASMC的Fas mRNA的表达;W estern blot检测HUASMC的Fas蛋白的表达。结果:子痫前期患者血清能显著降低共培养体系中CTB的侵袭能力,上调HUASMC活力,降低HUASMC早期凋亡率、FasmRNA和Fas蛋白的表达。结论:子痫前期血清可能通过降调细胞滋养细胞-平滑肌细胞共培养体系滋养细胞的侵袭能力,降调共培养体系HUASMC Fas的表达,从而抑制HUASMC凋亡。     

毛蕊异黄酮苷对卵巢上皮性肿瘤细胞的增殖和凋亡的影响及作用机制#br#

Objective?To investigate the effect and mechanism of Calycosin-7-O-β-D-glucoside(CG) on the proliferation inhibition and apoptosis induction of ovarian epithelial cancer cells (SKOV3). Methods?The objects were divided into negative control group and experimental group, the latter group was divided into low concentration group (50 μmol/L), medium concentration group (100 μmol/L) and high concentration group (200 μmol/L). The effect of CG on the proliferation activity of SKOV3 cells were detected by the CCK8 method. Apoptosis was detected by flow cytometry and Hoechst33258 staining. The mRNA and protein expression levels of apoptosis-related genes of ovarian epithelial cancer cells was detected by RT-qPCR and Western blot. Results?CG inhibited cell proliferation in a concentration of (0~200 μmol/L) in a time-and dose-dependent manner. The cell cycle was arrested in G0/G1 phase, and the total apoptosis rate increased with the increase of the concentration of CG (P<0.05) after 48 h. Protein expression levels of apoptosis-related genes such as Caspase-3, Caspase-9, p53, and Bax increased with increasing drug concentration and Caspase-3 enzyme activity also significantly increased, meanwhile the mRNA and protein expression levels of the anti-apoptotic gene bcl-2 decreased with increasing drug concentration, and the differences were statistically significant (P<0.05). Conclusion?CG can play an anti-tumor effect by inhibiting the proliferation and inducing apoptosis of SKOV3. The mechanism may be related to the activation of p53 pathway and the enhanced activity of caspase-3.     

MDR1及MDR3基因沉默逆转卵巢上皮性癌细胞对紫杉醇耐药的实验研究

目的 研究多药耐药基因——MDR1及MDR3基因沉默逆转卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞A2780／taxol对紫杉醇耐药的作用。方法 用真核质粒介导的针对MDR 1及MDR3基因的短发夹状RNA（shRNA）转染A2780／taxol细胞（分别为MDR1组、MDR3组），空质粒转染作为对照（空载体组）。流式细胞仪分别检测细胞早期凋亡、罗丹明123（Rh123）积聚情况，末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸标记法（TUNEL）检测细胞晚期凋亡情况，四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞对紫杉醇的半数抑制浓度（IC50），RT-PCR技术检测MDR1及MDR3mRNA的表达，蛋白印迹法（western blot）检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）蛋白的表达。结果转染后，MDR1组及MDR3组A2780／taxol细胞的早期凋亡率分别达（20．21±0．56）％和（10．87±1．24）％。MDR1、MDR3组A2780／taxol细胞内的Rh123平均荧光强度分别为116．6±8．1、98．4±3．8，显著高于空载体组的40．2±1．6，差异有统计学意义（P〈0．05）。TUNEL检测显示细胞发生了晚期凋亡。MDR1、MDR3组A2780／taxol细胞对紫杉醇的IC50明显下降，分别与空载体组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。转染48h后，A2780／taxol细胞中MDR1和MDR3mRNA的表达水平分别下降了（73．3±0．8）％和（51．6±0．4）％；MDR1、MDR3组细胞caspase-3的表达量分别为（80．8±2．6）％、（72．0±4．7）％，均较空载体组增加。结论 MDR1及MDR3基因沉默能恢复A2780／taxol细胞对紫杉醇的敏感性并诱导细胞凋亡，从而逆转A2780／taxol细胞对紫杉醇的耐药性。     

黏附分子VCAM-1和ICAM-1在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的:探讨血管细胞黏附分子(VCAM-1)和细胞间黏附分子(ICAM-1)在子宫内膜异位症(EMT)发病中的作用及意义。方法:采用荧光定量聚合酶链反应技术(Real-Time PCR)和免疫印迹法(Western-Blot)分别检测EMT(15例)患者异位内膜、在位内膜和对照组(15例)子宫内膜中VCAM-1、ICAM-1mRNA及蛋白的表达情况。采用双抗夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)检测EMT组(44例)与对照组(28例)中可溶性VCAM-1(s VCAM-1)和可溶性ICAM-1(s ICAM-1)的水平,并对VCAM-1、ICAM-1在不同组中的mRNA、蛋白及血清中的表达行相关性分析。结果:1EMT异位内膜组VCAM-1、ICAM-1mRNA的表达均明显高于在位内膜组及对照组(P0.01);在位内膜组VCAM-1、ICAM-1mRNA的表达与对照组差异无统计学意义(P0.05)。2EMT异位内膜组VCAM-1、ICAM-1蛋白的表达明显高于在位内膜组及对照组(P0.01),在位内膜组VCAM-1蛋白表达高于对照组(P0.01);EMT在位内膜组ICAM-1蛋白的表达与对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。3EMT患者血清中s VCAM-1和s ICAM-1水平均明显高于对照组(P0.01),Ⅲ、Ⅳ期患者血清中s ICAM-1水平较Ⅰ、Ⅱ期患者明显升高(P0.01)。4EMT异位内膜组组织中VCAM-1与ICAM-1在mRNA、蛋白表达及血清中的水平均无相关性(P0.05)。结论:异位内膜的VCAM-1和ICAM-1的表达异常可能在EMT的发生发展中具有重要作用,但ICAM-1与VCAM-1在EMT中可能具有各自的信号通路及蛋白表达的途径。     

低分子肝素对不同氧浓度下早孕绒毛滋养层细胞侵袭力的影响作用

目的:研究低分子肝素(LMWH)对不同氧浓度下早孕绒毛滋养层细胞侵袭力的影响。方法:取妊娠8~10周正常绒毛组织,酶消化法分离人早孕绒毛滋养层细胞,分别置2%和20%O_2分压的细胞培养箱培养。用不同浓度LMWH(0、0.1、5、10IU/ml)处理滋养细胞,观察滋养层细胞侵袭力的改变,检测细胞中HIF-1α、MMP-2、MMP-9、TIMP-2、TIMP-3表达。结果:低氧浓度下,早孕绒毛滋养层细胞的侵袭能力随着LMWH浓度(0,0.1,5IU/ml)升高而增强,但高浓度的LMWH(10IU/ml)对其有抑制作用;随着LMWH浓度增加,HIF-1α和MMP-2表达呈先上升后下降的趋势;TIMP-2、TIMP-3表达改变的趋势与MMP-2相同。正常氧浓度下的滋养层细胞,其侵袭能力未见显著增强,各细胞因子的表达无上调。结论:低氧环境下,一定浓度的LMWH可提高早孕绒毛滋养层细胞的侵袭能力,其发生机制可能是通过诱导、增强滋养层细胞HIF-1α和MMP-2基因表达。     

丙氨瑞林与DDP对卵巢癌耐药细胞CoC1/cDDP凋亡的影响

目的 探讨促性腺激素释放激素类似物(GnRHa)丙氨瑞林(Alarelin)与顺铂(DDP)对人卵巢癌耐药细胞CoC1/cDDP凋亡的影响.方法 CoC1/cDDP细胞分别加入不同浓度的丙氨瑞林及DDP+丙氨瑞林培养,设空白对照组(不加药),流式细胞仪检测亚G1期细胞及凋亡细胞和线粒体膜电位(ΔΨm),半定量RT-PCR法检测CoC1/cDDP细胞生存素(survivin)-⊿Ex3 mRNA及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase-3 mRNA的表达.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定各组细胞生长抑制率.结果 ①随DDP浓度增加,亚G1期细胞及AnnexinV+/PI-细胞比例上升,对细胞的抑制作用增强(P＜0.05).丙氨瑞林作用于卵巢癌耐药细胞CoCl/cDDP后,随浓度增加降低ΔΨm,亚G1期细胞及AnnexinV+/PI-细胞比例增加,凋亡细胞增多,细胞增殖抑制率上升(P＜0.01).联合应用丙氨瑞林及10 μg/ml DDP后,线粒体膜电位(ΔΨm)降低,Rh123-细胞数增加,G1期细胞及AnnexinV+/PI-细胞增多,细胞抑制率明显上升,强于单用DDP或丙氨瑞林；②丙氨瑞林单独或联合DDP作用于CoCl/cDDP细胞,caspase-3mRNA的表达随丙氨瑞林浓度增加而上调,但survinin-⊿ Ex3 mRNA表达无明显变化(P＞0.05).结论 丙氨瑞林能促进凋亡,逆转CoCl/cDDP细胞对DDP耐药,其机制可能与降低ΔΨm,上调caspase-3mRNA表达有关.