膀胱上皮特异性重组腺病毒的构建及其对膀胱癌细胞的抑制作用

目的构建特异作用于尿路上皮细胞的重组腺病毒并研究其对膀胱癌细胞株的抑制作用。方法 RT-PCR测定人类uroplakinⅡ（hUPⅡ）基因的表达模式以及柯萨奇病毒腺病毒联合受体（CAR）对多重细胞系的影响。瞬时转染和荧光素酶检测分析技术测定hUPⅡ启动子的组织特异性。构建重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A和Ad-UPⅡ-Null,限制性内切酶酶切分析和PCR技术检测其构建的正确性。Western blot分析细胞感染重组腺病毒后腺病毒E1A蛋白在膀胱癌细胞株BIU-87中的表达。测定重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A对于膀胱癌细胞系BIU-87细胞的抑制作用。结果膀胱癌细胞系BIU-87细胞表达hUPⅡ和CAR,其中hUPⅡ启动子具有高活性。在细菌技术上使用同源重组,将hUPⅡ启动子和E1A基因插入到5型的重组腺病毒的基因组中。在BIU-87细胞感染重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A后,E1A蛋白的表达呈强阳性。MTT分析证实重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A抑制了膀胱癌BIU-87细胞的生长。结论 hUPⅡ启动子有高组织特异性。重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A对膀胱癌细胞系BIU-87细胞有抑制作用。     

p53重组腺病毒联合增殖细胞核抗原反义寡核苷酸治疗膀胱癌的研究

目的：探讨重组腺病毒p53(Ad-p53)与增殖细胞核抗原反义寡核苷酸（PCNA-ASO）联合应用对膀胱癌的抑瘤效应。方法：用腺病毒将p53{感染强度（MOI）100}导入细胞，PCNA-ASO(1.6μmol/L)在脂质体（Lipofectin）介导下转染细胞，通过噻唑蓝比色法（MTT）、流式细胞术、克隆形成、建立移植瘤模型，探讨其体内外抗瘤活性。结果：Ad-p53与PCNA-ASO联合应用明显抑膀胱癌胞EJ(89.3%)和BIU-87(78.6%)生长，细胞克隆形成能力分别下降74.8％和67.5％，S期比率（EJ细胞11.4％，BIU-87细胞14.6％）明显降低，细胞生长受阻于G1期(EJ细胞62.2％，BIU-87细胞56.8％)；联合应用7d后，肿瘤体积较初始分别下降47.6％和36.4％。结论：Ad-p53联合PCNA-ASO可抑制膀胱癌细胞体内外生长，产生协同效应。     

Survivin启动子驱动LRIG1基因表达的重组腺病毒对人膀胱癌细胞BIU87生长的影响

目的:构建Survivin启动子驱动LRIG1基因表达的重组腺病毒Ad-Surp-LRIGl,并检测其对人膀胱癌细胞BIU87生长的影响.方法:将经同源重组产生的重组腺病毒Ad-Surp-LRIGl在293细胞中大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化,测其滴度.用Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl分别感染人膀胱癌细胞BIU87及人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1,MTT法评估Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl对BIU87细胞生长的抑制作用.结果:当感染复数(MOI)=25时,Ad-Surp-LRIGl在BIU87细胞中的转染效率为74.56%,在SV-HUC-1细胞中转染率为0,差异有统计学意义(χ2=58.64,P<0.05);Ad-LRIGl在BIU87细胞中的转染效率为68.27%,在SV-HUC-1细胞中转染率为72.52%,差异无统计学意义(χ2=0.075,P>0.05).Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl在BIU87细胞中的转染效率相比,差异无统计学意义(χ2=0.016,P>0.05).与PBS相比,Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl均能明显抑制BIU87细胞的生长,转染后第4天这一差异显著(F=15.96,P<0.05),而Ad-Surp-LRIGl组和Ad-LRIGl组细胞生长速度无明显差异.结论:成功构建了含有Survivin启动子驱动LRIG1基因的重组复制腺病毒Ad-Surp-LRIGl并鉴定正确,Ad-Surp-LRIGl能选择性转染人膀胱癌细胞BIU87,在体外能明显抑制膀胱癌细胞BIU87的生长.     

PTEN基因对人膀胱癌细胞系BIU-87化疗敏感性的影响

目的 研究抑癌基因PTEN转染对人膀胱癌细胞系BIU-87化疗敏感性的影响.方法 将携有PTEN基因的重组真核表达质粒pBp-PTEN转化大肠杆菌DH5α并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定;pBp-PTEN体外转染BIU-87细胞(pBp-PTEN-BIU87),筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pBp的BIU-87细胞(pBp-BIU87)和正常BIU-87细胞为对照,用RT-PCR检测PTEN的表达情况,应用MTT法分别研究转染前、后膀胱癌细胞对不同浓度抗癌药物丝裂霉素(MMC)、羟基喜树碱和吡柔比星的敏感性变化. 结果 RT-PCR证实PTEN在转染的BIU-87细胞中能稳定表达.PTEN转染后,BIU-87细胞对MMC的药物敏感性明显提高.对吡柔比星和羟基喜树碱的药物敏感性无明显变化. 结论 PTEN基因转染能提高人膀胱癌细胞系BIU-87对抗癌药物MMC的敏感性.     

干扰素α、丝裂霉素和顺铂对肿瘤坏死因子α抗膀胱肿瘤作用的影响

为探讨细胞因子和抗癌药物对肿瘤坏死因子抗膀胱癌作用的影响,将膀胱癌细胞系BIU-87作体外培养,并将肿瘤坏死因子α和不同浓度的丝裂霉素(MC)、顺铂(CDDP)以及干扰素(IFN-α)作用于细胞,用MTT法测定细胞毒效果。TNF-α对膀胱癌细胞BIU-87有明显的浓度依赖性抑制作用,MC(2.5μg-5.0μg/ml)与TNF-α(10000U/ml)作用于细胞后的细胞活力及增殖明显低于单用TNF-α或MC实验组,说明MC可增强TNF-α对BIU-87细胞的抑制,两者发挥协同作用。虽然CDDP与TNF-α作用细胞后细胞活性及增殖也低于单用TNF-α组,然而与CDDP对照组之间却无显著性差异。IFN-α(2500U-5000U/ml)与TNF-α(10000U/ml)作用于细胞后的细胞活性及增殖明显被抑制。TNF-α与IFN-α或MC对膀胱癌细胞的抑制有协同作用。该研究将对临床应作TNF-α治疗膀胱肿瘤提供一定的理论依据。     

LRIG2基因在膀胱癌中的表达及其对膀胱癌细胞株生物学行为的影响

目的了解LRIG2基因在膀胱肿瘤和正常膀胱组织中的表达及其与膀胱肿瘤分级、分期之间的关系。并将携带有LRIG2基因的重组质粒载体pCMV-LRIG2转染膀胱癌细胞株BIU-87,观察对其生物学行为的影响。方法利用半定量RT-PCR技术检测38例膀胱肿瘤组织和16例正常膀胱黏膜组织内LRIG2基因mRNA表达情况。用脂质体介导的基因转染技术,将携带有LRIG2基因的重组质粒载体pCMV-LRIG2转染至膀胱癌细胞株BIU-87,检测转染前后细胞生长力、侵袭力及黏附能力的改变。结果肿瘤组织内LRIG2mRNA的表达水平显著低于正常膀胱组织,且与肿瘤的分级、分期呈负相关。转染pCMV-LRIG2组细胞生长速度较未转染组和空载体转染组明显减慢,侵袭力显著低于未转染组和空载体转染组,而黏附能力显著高于未转染组和空载体转染组。结论 LRIG2有类似于抑癌基因的作用,通过对EFG-EGFR信号转导途径发挥负反馈抑制作用,从而抑制BIU-87细胞的生长、侵袭和转移。     

建立膀胱癌细胞系BIU-87原位移植瘤模型的实验研究

目的 探讨建立人体膀胱癌细胞系BIU-87膀胱原位移植瘤模型的有效方法,为膀胱癌实验动物的相关研究提供理论基础.方法 BALB-C系裸鼠20只,分成A、B两组(各10只),A组采用手术方法于膀胱壁内注射人体膀胱癌细胞系BIU-87,B组经膀胱灌注人体膀胱癌细胞系BIU-87,分别观察不同阶段两组裸鼠膀胱肿瘤的发生发展情况.实验终点(4周)处死裸鼠,进行瘤体大小及组织学检测.结果 A组裸鼠中,一只于术后第2d死亡,其余存活9只中,8只成瘤,成瘤率为89％;B组10只均未成瘤.结论 经膀胱灌注不能建立理想的膀胱原位移植瘤模型,手术方法建立膀胱原位移植瘤模型的效果确切,能较好地模拟人膀胱肿瘤的疾病发展过程,对国人膀胱肿瘤的研究具有一定应用价值.     

膀胱移行细胞癌微卫星不稳定性表达及机理探讨

目的 探讨微卫星不稳定性在膀胱移行细胞癌的表达及其作用机制。方法 用PCR方法分析35例膀胱移行细胞癌尿沉渣标本中微卫星不稳定性表达;用RT-PCR方法监测5种人类错配修复基因在膀胱癌细胞系mRNA转录水平的表达;用PCR方法检测膀胱癌细胞系BIU-87中错配修复基因hMLH1的启动子区域出现异常甲基化。结果 35例膀胱癌患者尿沉渣中,有31例（88.6%)可检出微卫星不稳定性表现;5种人的错配修复基因在BIU-87膀胱癌细胞系中有hMLH1和hMSH2表达缺失,而在正常近曲小管细胞系中都有表达;BIU-87细胞错配修复基因hMLH1的启动子区域出现异常甲基化,应用去甲基化剂处理后可检测到hMLH1的启动子区域的表达,再次去除去甲基化剂后叠不能检测hMLH1的启动子区域。结论 微卫星不稳定性与错配修复基因表达有关。甲基化对膀胱癌细胞系BIU-87错配修复基因hMLH1的表达具有调控作用。     

原位膀胱癌动物模型的建立及其体外活体成像检测

目的建立可应用于活体成像的原位膀胱癌动物模型并利用生物发光体外活体成像系统检测肿瘤的生长。方法通过感染能表达荧光素酶的重组慢病毒颗粒,将荧光素酶基因转染至膀胱癌细胞BIU87中。然后向6只裸鼠膀胱壁内注射肿瘤细胞BIU87-luc,构建原位膀胱癌模型,并在肿瘤细胞种植后的第5天及第10天,利用生物发光体外活体成像系统检测肿瘤的变化。最后取各个裸鼠的膀胱制作病理切片观察。结果 BIU87与BIU87-luc两种细胞的生长、迁移能力没有明显差别。膀胱壁内注射肿瘤细胞后第5天,所检测到的光子信号强度为(1.78±0.48)×106 p/sec/cm2/sr,第10天所检测到的光子信号强度为(5.07±0.81)×106 p/sec/cm2/sr,二者的差别有统计学意义(P0.01)。最终的膀胱病理切片可以看到大量肿瘤细胞聚集生长。结论荧光素酶标记膀胱癌细胞后,构建的原位膀胱癌动物模型,利用活体成像技术能够动态监测其原位肿瘤的生长。     

DNMT1、DNMT3bsiRNA重组质粒转染对人膀胱癌细胞DNMTs表达的影响及其生物学效应

目的：探讨DNMT1、DNMT3b基因在膀胱癌发生发展中的作用。方法：①将DNMT1、DNMT3bsiRNA重组质粒分别单独和共同转入人膀胱癌细胞系Nu87;②半定量RT—PCR和WesternBlot分别检测DNMT1和DNMT3b基因mRNA和蛋白水平的变化;③用MTT法观察各组细胞生长曲线,流式细胞术观察细胞生长周期及凋亡率的变化。结果：单独和共同转染DNMT1（或DNMT3b）mRNA、蛋白表达量明显下降,能影响BIU一87的生长曲线,使细胞增殖减慢,并使细胞周期阻滞于G1期,明显提高细胞调亡率;转染空质粒和单独转染DNMT3bsiRNA重组质粒对BIU-87细胞的生长和增殖无明显影响。结论：联合转染DNMT1、DNMT3bsiRNA重组质粒,可同时下调DNMT1和DNMT3b在BIU87细胞中的表达,并能在体外抑制BIU-87细胞生长,促进细胞凋亡发生,其效果优于单独转染的重组质粒。单独转染DNMT3bsiRNA重组质粒对BIU-87细胞的生长和增殖无明显影响。     

Survivin启动子驱动LRIG1基因表达的重组腺病毒对人膀胱癌细胞BIU87生长的影响

目的:构建Survivin启动子驱动LRIG1基因表达的重组腺病毒Ad-Surp-LRIGl,并检测其对人膀胱癌细胞BIU87生长的影响.方法:将经同源重组产生的重组腺病毒Ad-Surp-LRIGl在293细胞中大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化,测其滴度.用Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl分别感染人膀胱癌细胞BIU87及人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1,MTT法评估Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl对BIU87细胞生长的抑制作用.结果:当感染复数(MOI)=25时,Ad-Surp-LRIGl在BIU87细胞中的转染效率为74.56%,在SV-HUC-1细胞中转染率为0,差异有统计学意义(χ2=58.64,P<0.05);Ad-LRIGl在BIU87细胞中的转染效率为68.27%,在SV-HUC-1细胞中转染率为72.52%,差异无统计学意义(χ2=0.075,P>0.05).Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl在BIU87细胞中的转染效率相比,差异无统计学意义(χ2=0.016,P>0.05).与PBS相比,Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl均能明显抑制BIU87细胞的生长,转染后第4天这一差异显著(F=15.96,P<0.05),而Ad-Surp-LRIGl组和Ad-LRIGl组细胞生长速度无明显差异.结论:成功构建了含有Survivin启动子驱动LRIG1基因的重组复制腺病毒Ad-Surp-LRIGl并鉴定正确,Ad-Surp-LRIGl能选择性转染人膀胱癌细胞BIU87,在体外能明显抑制膀胱癌细胞BIU87的生长.     

一氧化氮对组织特异性溶瘤腺病毒转染膀胱肿瘤细胞的影响

目的:研究一氧化氮(NO)对肿瘤组织特异性溶瘤病毒转染过程的影响及对外源基因表达的调节作用。方法:构建组织特异性溶瘤腺病毒,常规培养膀胱肿瘤BIU-87和5637细胞株,以硝普钠作为外源性NO的供体。应用PTIO和L-NMMA分别作为内源性NO的清除剂和诱导型一氧化氮合酶(NOS)的抑制剂。采用Nitrate/Nitrite Assay Kit检测NO和(或)病毒作用前后膀胱肿瘤细胞培养液中的NO水平。应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测NO对重组病毒抗肿瘤细胞增殖的影响;透射电镜观察腺病毒颗粒进入细胞情况和亚细胞结构变化。结果:膀胱肿瘤细胞BIU-87和5637本身培养液中NO水平很低,给予外源性NO供体后NO水平随时间延长而升高。重组病毒Ad-UPⅡ-E1A能通过E1A基因发挥溶瘤作用。NO能够促进该病毒转染入BIU-87、5637细胞。50μmol/L和100μmol/L的NO联合Ad-UPⅡ-E1A 30MOI作用后能够促进肿瘤细胞的增殖,而200μmol/L的NO联合重组腺病毒作用后则促进肿瘤细胞的死亡。NO对Ad-UPⅡ-E1A的作用具有时间依赖性。透射电镜观察发现,重组病毒Ad-UPⅡ-E1A能够进入并在膀胱肿瘤细胞内复制,而NO能够提高病毒的转染效率并引起肿瘤细胞自吞噬和凋亡。结论:NO能够促进溶瘤腺病毒Ad-UPIIE1A转染膀胱肿瘤细胞的效率,但NO因其浓度不同对溶瘤腺病毒的溶瘤效果具有双向调节作用,低剂量的NO能够下调重组病毒E1A的表达从而促进肿瘤细胞增殖,而高剂量的NO通过上调E1A的表达因而发挥溶瘤效应。     

外磁场协同表阿霉素-羧甲基磁性纳米颗粒对膀胱癌体内外的杀伤作用

目的探讨脉冲外电磁场协同表阿霉素(EPI)-羧甲基葡聚糖氧化铁磁性纳米颗粒(CDMN)对人膀胱癌BIU-87细胞体外增殖活性和裸鼠皮下移植膀胱癌生长及其凋亡的影响。方法用化学共沉淀和氧化还原法制备EPI-CDMN并检测其理化性质,建立膀胱癌BIU-87细胞裸鼠皮下移植瘤动物模型,并设立空白对照组、磁场组、EPI组和EPI-CDMN组作为对照。分别采用噻唑蓝(MTT)比色法、双标流式细胞术、DNA原位末端标记法观察脉冲外电磁场联合EPI-CDMN对BIU-87细胞生长增殖活性和裸鼠皮下瘤生长状况及凋亡的影响。结果EPI-CDMN的直径、比饱和磁化强度分别为8～10 nm、0．22 emu/g。外磁场协同EPI-CDMN可以显著抑制BIU-87细胞增殖,抑制率达(21．82±3．18)%,并诱导细胞发生明显的凋亡,凋亡率为(16．8±3．4)%,均显著高于其他各组(P＜0．05)；裸鼠皮下瘤体积(1．57±0．42)cm~3和重量(2．00±0．21)g,均显著低于其他各组,抑瘤率51．69%和细胞凋亡指数(60．45±6．93)%均明显高于其他各组。结论外磁场可以显著增强EPI-CDMN对膀胱肿瘤的杀伤作用,为抗膀胱肿瘤的磁靶向治疗提供了实验依据。     

hTERT启动子调控腺病毒介导的HSV-tk/GCV基因系统治疗人膀胱癌

我们在体外实验已证实,hTERT启动子调控腺病毒介导的HSV-tk/GCV基因对膀胱癌细胞有选择性的杀伤作用,而对正常细胞不产生明显影响[1].我们采用BALB/C裸鼠建立荷人膀胱癌动物模型,给予重组腺病毒静脉内注射治疗,观察其在体内的治疗效果及安全性.     

PTEN基因转染对人膀胱癌细胞BIU-87中PI3K-Akt信号通路的影响

目的 研究抑癌基因PTEN转染对人膀胱癌细胞BIU-87中PI3K-Akt信号通路的作用.方法 将携有PTEN基因的重组真核表达质粒pBp-PTEN转化大肠杆菌DH5α并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定,pBp-PTEN体外转染BIU-87细胞(pBp-PTEN-BIU87),筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pBp的BIU-87细胞(pBp-BIU87)和正常BIU-87细胞为对照,用RT-PCR检测PTEN的表达情况.将PTEN基因的真核表达质粒转染膀胱癌细胞BIU-87(pBp-PTEN-BIU87),以BIU87细胞和pBp-BIU87细胞为对照,应用Wester blot方法 检测三组细胞P110(PI3K的催化亚单位)、磷酸化P110、Akt和磷酸化Akt表达的情况.结果 3种细胞P110和Akt蛋白总水平没有变化,但磷酸化P110和磷酸化Akt在PTEN转染细胞中的表达明显弱于对照组.结论 PTEN是通过对PI3K-Akt信号传导途径的负调控而抑制肿瘤的形成.PTEN-PI3K-Akt途径可能是PTEN抑癌作用的重要机制.     

pCH510转染膀胱癌细胞系BIU-87对卡介苗抑瘤作用的影响

目的研究膀胱癌细胞系BIU-87体外转染pCH510后,CH50多肽的表达及其对卡介苗(bacilluscalmette-guerin,BCG)抑瘤作用的影响。方法在LipofectimineTM2000的介导下,将质粒pCH510体外转染给BIU-87细胞,采用免疫组织化学S-P法和WesternBlot法鉴定CH50多肽的表达;通过四唑盐比色法(MTT法)观察pCH510转染BIU-87对BCG细胞毒作用的影响。结果BIU-87细胞转染pCH510后阳性表达CH50多肽,对照组则不表达;CH50多肽阳性表达增强了BCG对BIU-87的细胞毒性作用(P<0.05)。结论转染pCH510后,BIU-87细胞表达CH50多肽,并因此促进了BCG对膀胱癌细胞的抑制作用。     

一种应用绿色荧光蛋白筛选小鼠原位膀胱癌模型的非侵入实验方法

小鼠原位膀胱癌模型能模拟肿瘤的生物微环境 ,为研究浅表膀胱癌的治疗方法提供了可能。作者利用绿色荧光蛋白 (GFP)转染细胞 ,通过检测裸鼠膀胱癌模型尿液中是否存在表达GFP的细胞 ,为筛选浅表膀胱癌动物模型提供了一种敏感的实验方法。作者将膀胱癌细胞系KU 7,UM UC 3和UM UC 14转染绿色荧光蛋白表达载体pEGFP N3,用G4 18筛选能稳定表达GFP的细胞系KU 7 GFP ,UM UC 3 GFP和UM UC 14 GFP ,然后将上述三种细胞灌注到裸鼠膀胱留置 3h ,制备小鼠原位浅表膀胱癌动物模型。连续 3周收集小鼠尿样 ,通过荧光显微镜观察脱落细胞…     

新的肿瘤转移抑制基因LASS2在不同侵袭潜能的膀胱癌细胞中表达的体外研究

目的探讨新发现的肿瘤转移抑制基因人源性长寿保障基因Ⅱ型(homo sapiens longevity assurance homologue2,LASS2)与人膀胱癌细胞侵袭潜能的关系。方法通过细胞生长曲线和体外侵袭实验,确定膀胱癌BIU-87、EJ、T24和EJ-M3细胞的增殖和侵袭能力;运用实时定量PCR法和Western blot法检测4株细胞中LASS2基因的表达。结果 4株膀胱癌细胞中,EJ-M3的增殖和侵袭能力最强;增殖和侵袭能力高的细胞系EJ-M3和BIU-87的LASS2mRNA表达降低(P<0.001),而在低转移能力的人膀胱癌细胞株T24和EJ细胞中则相对较高表达。结论 LASS2基因表达的降低,可能与膀胱癌细胞的增殖和侵袭有关。     

靶向沉默Notch1基因对人膀胱癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨沉默Notch1基因对人膀胱癌细胞生物学行为的影响. 方法 将靶向Notch1的siRNA真核表达载体psiRNA Notch1-1转染膀胱癌细胞株T24和BIU-87,噻唑盐法、流式细胞术检测沉默Notch1后膀胱癌细胞生长、细胞周期和凋亡情况.RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染前后Notch1基因mRNA和蛋白表达的变化. 结果 转染后72 h,T24和BIU-87细胞G0/G1期细胞比例明显增加,分别为(80.13±2.69)%和(69.44±2.41)%,与T24对照组(23.89±1.32)%和BIU-87对照组(24.63±1.68)%比较差异有统计学意义(P值均<0.05).转染后72 h,T24和BIU-87细胞凋亡率分别为(13.75±1.23)%和(8.72±1.01)%,与T24对照组(1.28±0.14)%和BIU-87对照组(1.01±0.27)%比较差异均有统计学意义(P值均<0.05).转染后24 h细胞生长明显受到抑制,该抑制作用持续到转染后96 h.转染后72 h,T24和BIU-87细胞中Notch1基因mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05). 结论 Notch1在膀胱癌细胞株中可能起致癌作用.沉默Notch1基因能够抑制膀胱癌细胞的增殖.     

人端粒酶逆转录酶启动子调控的重组腺病毒的构建及其在膀胱癌细胞中的表达

目的构建人端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子调控的表达增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的腺病毒系统，观察其在膀胱癌细胞中的表达。方法构建带有hTERT启动子的腺病毒穿梭载体pDC315-Tp—EGFP，细胞重组技术获得腺病毒Ad-hTERT-EGFP，按感染复数（MOI）100体外转染膀胱癌细胞株253J及人胚肺成纤维细胞株MRC-5，通过倒置荧光显微镜和Rt—PCR分别检测EGFP的表达。带有小鼠巨细胞病毒（mCMV）启动子的腺病毒Ad-EGFP作为阳性对照。结果成功构建出重组腺病毒Ad-hTERT-EGFP，滴度为3．8×10^10空斑形成单位（pfu）／ml，Ad—hTERT-EG-FP感染的253J细胞中，（85．2±3．3）％发出明亮的绿色荧光；而其感染的MRC-5细胞未产生绿色荧光（P〈0．01）；对照病毒Ad-EGFP在253J和MRC-5中分别有（87．1±2．2）％及（92．5±3．1）％的细胞可见到绿色荧光。RT-PCR检测显示：253J细胞转染Ad-hTERT-EGFP、Ad-EGFP后及MRC-5细胞转染Ad-EGFP后均有EGFP基因表达；而MRC-5细胞转染Ad-hTERT-EGFP后未见EGFP基因表达。结论该腺病毒系统中hTERT启动子调控下游基因可选择性地在膀胱肿瘤细胞中表达，在正常细胞中不表达，具有明显的靶向性。