蛋白棕榈酰化修饰在非酒精性脂肪性肝病相关疾病中作用机制的研究进展

非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD）已成为全球范围内威胁人类健康的重大公共卫生问题，但其发病机制复杂，新药研发困难重重，临床用药依旧匮乏。棕榈酰化是广泛发生的一种由棕榈酰基转移酶催化的蛋白质翻译后修饰，影响其稳定性、胞膜定位及功能发挥。近年来，研究表明蛋白棕榈酰化修饰与NAFLD的病程密切相关。本文对目前已报道棕榈酰化修饰在NAFLD相关疾病中作用机制作一综述，并分析GEO数据库NAFLD肝组织中棕榈酰基转移酶家族表达水平，对探寻NAFLD发病新机制具有重要意义。     

棕榈酰化蛋白质组学分析揭示前列腺癌细胞中雄激素促进代谢相关蛋白棕榈酰化修饰

目的 筛选棕榈酰化修饰水平受雄激素诱导的蛋白,探索前列腺癌去雄激素治疗外其他潜在的治疗靶点.方法: 以LNCaP细胞为研究对象,雄激素(Methyltrienolone,R1881,5 nmol/L)或DMSO(dimethyl sulfoxide)处理LNCaP细胞24 h,同时利用人工合成的炔基棕榈酸Alk-C16 (100 μmol/L)对细胞进行代谢标记,收集细胞,裂解,提取总蛋白,加入标记有叠氮化物的琼脂糖珠 (1 mmol/L), 室温反应1 h,利用叠氮化物与Alk-C16末端炔基发生点击化学反应形成的共价键将棕榈酰化修饰蛋白富集在琼脂糖珠上,进行蛋白质谱非标记定量分析(label-free quantitation, LFQ), 比较R1881处理和非处理细胞蛋白棕榈酰化修饰变化情况,筛选棕榈酰化修饰水平受雄激素诱导的蛋白.结果: 实验共鉴定出907个潜在的棕榈酰化修饰蛋白(mascot score> 2, P<0.05), 其中有430个蛋白LFQ值至少有2次不为0.在这430个蛋白中有92个蛋白R1881处理与非处理样品LFQ比值大于 1.5(P<0.05), 说明雄激素能够显著促进该蛋白棕榈酰化修饰.利用Cytoscape软件对92个蛋白进行功能富集分类,发现已知功能蛋白可分为代谢相关,蛋白折叠相关和翻译起始相关3类,其中,代谢相关蛋白包括脂代谢(6个),糖代谢(7个)和呼吸电子传递链(8个)3部分,另外还有少量氨基酸代谢(2个)和其他代谢相关蛋白(2个).参与呼吸电子传递链的细胞色素b-c1复合体亚基2 (cytochrome b-cl complex subunit2, UQCRC2) 雄激素R1881处理和未处理样品LFQ比值最高(>3,P<0.05),说明该蛋白棕榈酰化修饰受雄激素诱导最为明显.LFQ比值最高为UQCRC2,其次为脂代谢相关的长链特异性酰基辅酶A脱氢酶(very long-chain specific acyl-CoA dehydrogenase, ACADVL)和糖代谢相关的6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-phosphogluconate dehydrogenase, PGD), 但其LFQ比值均未超过3.结论: 代谢尤其是呼吸电子传递链相关蛋白的棕榈酰化调控机制的研究可能将为前列腺癌的诊疗和靶向药的研发提供新的指导思路.     

棕榈酰化蛋白质组学分析揭示前列腺癌细胞中雄激素促进代谢相关蛋白棕榈酰化修饰

目的 筛选棕榈酰化修饰水平受雄激素诱导的蛋白,探索前列腺癌去雄激素治疗外其他潜在的治疗靶点.方法: 以LNCaP细胞为研究对象,雄激素(Methyltrienolone,R1881,5 nmol/L)或DMSO(dimethyl sulfoxide)处理LNCaP细胞24 h,同时利用人工合成的炔基棕榈酸Alk-C16 (100 μmol/L)对细胞进行代谢标记,收集细胞,裂解,提取总蛋白,加入标记有叠氮化物的琼脂糖珠 (1 mmol/L), 室温反应1 h,利用叠氮化物与Alk-C16末端炔基发生点击化学反应形成的共价键将棕榈酰化修饰蛋白富集在琼脂糖珠上,进行蛋白质谱非标记定量分析(label-free quantitation, LFQ), 比较R1881处理和非处理细胞蛋白棕榈酰化修饰变化情况,筛选棕榈酰化修饰水平受雄激素诱导的蛋白.结果: 实验共鉴定出907个潜在的棕榈酰化修饰蛋白(mascot score> 2, P<0.05), 其中有430个蛋白LFQ值至少有2次不为0.在这430个蛋白中有92个蛋白R1881处理与非处理样品LFQ比值大于 1.5(P<0.05), 说明雄激素能够显著促进该蛋白棕榈酰化修饰.利用Cytoscape软件对92个蛋白进行功能富集分类,发现已知功能蛋白可分为代谢相关,蛋白折叠相关和翻译起始相关3类,其中,代谢相关蛋白包括脂代谢(6个),糖代谢(7个)和呼吸电子传递链(8个)3部分,另外还有少量氨基酸代谢(2个)和其他代谢相关蛋白(2个).参与呼吸电子传递链的细胞色素b-c1复合体亚基2 (cytochrome b-cl complex subunit2, UQCRC2) 雄激素R1881处理和未处理样品LFQ比值最高(>3,P<0.05),说明该蛋白棕榈酰化修饰受雄激素诱导最为明显.LFQ比值最高为UQCRC2,其次为脂代谢相关的长链特异性酰基辅酶A脱氢酶(very long-chain specific acyl-CoA dehydrogenase, ACADVL)和糖代谢相关的6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-phosphogluconate dehydrogenase, PGD), 但其LFQ比值均未超过3.结论: 代谢尤其是呼吸电子传递链相关蛋白的棕榈酰化调控机制的研究可能将为前列腺癌的诊疗和靶向药的研发提供新的指导思路.     

遗传密码子拓展技术在赖氨酸酰化修饰研究中的应用

赖氨酸酰化修饰在细胞中普遍存在，控制着蛋白质的多种功能；然而，在活细胞中进行特定位点酰化修饰的生物学功能研究还存在困难。近年来发展的遗传密码子拓展（genetic code expansion，GCE）技术通过正交的氨酰基-tRNA合成酶/tRNA能够在活细胞内定向插入与天然酰化修饰结构一致的非天然氨基酸(unnatural amino acids, UAAs)，实现在精准引入酰化修饰的基础上研究目的蛋白的理化性质和生物学行为的改变。此外，GCE技术还能定点引入无法被去酰化酶识别的模拟酰化修饰的UAAs，从而提高目的蛋白赖氨酸酰化修饰产物的稳定性。在目的蛋白特定位点插入“光交联”型UAA则被用于阐明酰化修饰蛋白的互作蛋白质组。根据不同结构和功能的酰化修饰分类，分别阐述了GCE技术结合上述3类UAAs的新颖设计，及其在研究蛋白酰化修饰对目的蛋白的活性、稳定性、细胞定位、蛋白质-DNA相互作用和蛋白质-蛋白质相互作用等功能影响中的应用。最后，展望了GCE技术在蛋白质酰化修饰研究中的局限和应用前景。     

H_2O_2对SD大鼠海马AMPA受体棕榈酰化水平的影响

目的研究H_2O_2对SD大鼠海马-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(AMPA)受体棕榈酰化水平的影响。方法用400 M H_2O_2孵育正常大鼠急性脑片后,分离海马组织;酰基生物素交换技术提取AMPA受体亚基GluA1、GluA2棕榈酰化蛋白;蛋白免疫印迹技术检测上述蛋白表达水平。结果与对照组相比,H_2O_2升高大鼠海马蛋白棕榈酰化总水平、Glu A1(P0.05)和Glu A2(P0.01)棕榈酰化水平。结论400 MH_2O_2可显著提高SD大鼠海马AMPA受体棕榈酰化水平。     

Snapin蛋白研究进展

细胞的分泌功能是一个涉及许多蛋白质、脂质分子等物质并有多个细胞器参与的复杂过程,通过囊泡胞吐过程来完成,真核细胞内生物大分子的分泌通过组成型和调节性囊泡运输两种方式进行,其中组成型囊泡运输涉及了一系列细胞器与细胞膜之间的囊泡融合,囊泡与细胞膜的融合涉及到了几个蛋白家族包括:SNAREs,Rab蛋白和Sec1/Munc-18相关蛋白等.SNARE(可溶性N-乙基-马来酰胺敏感因子结合蛋白受体)蛋白是介导囊泡与细胞膜或其他细胞器融合的主要蛋白分子, 参与囊泡内蛋白质与膜转运、调节性和非调节性囊泡胞吐活动的激活和融合过程.囊泡融合是通过几种辅助蛋白与SNAREs相互作用完成的,Snapin就是SNAREs的辅助蛋白之一.     

硒蛋白K的生物学功能研究进展

硒蛋白K(SelK)是2003年发现的一种内质网膜蛋白。关于SelK的生物学功能,近几年有一些研究成果,如SelK在心肌细胞中参与应对氧化应激;在人肝癌细胞中参与调节内质网应激;在受体介导的免疫细胞活化过程中促进钙流;参与内质网相关蛋白降解;参与调节巨噬细胞表面CD36棕榈酰化,影响泡沫细胞的形成和动脉粥样化。本文就SelK的结构特征、细胞内定位和组织分布以及生物学功能的最新研究进展作一综述。     

生物膜与临床

生物膜是指广义的细胞膜,它包括所有细胞的外周膜和细胞内各种细胞器膜.后者包括线粒体膜、高尔基复合体膜、内质网膜、溶酶体膜等.生物膜是由脂质、蛋白质和少量多糖组成的具有多种功能的动态结构.许多基本生命过程如能量转换、物质运输、信息识别和传递、组织细胞发育分化以及激素和药物作用、疾病的发生、机体和衰老等都和生物膜有着密切关系.膜结构和功能的异常必然影响机体的正常功能而引起多种疾病.     

脂肪酸结合蛋白在代谢性疾病中的作用

脂质是许多生物学过程中的重要组成部分，在多种常见病的发病过程中起关键作用，但细胞内的脂质与生物学靶点及信号通路偶联的特殊机制还不清楚。对具有很高的脂质沉积、运输和信号转导能力的细胞而言更是如此，如脂肪细胞和巨噬细胞。脂质伴侣——脂肪酸结合蛋白的作用是调节多种脂质信号介导的生物学过程和维持系统代谢稳态。调节脂肪酸结合蛋白功能的药物可在组织或细胞特异性地调控脂质信号通路、炎症和代谢应答，很可能成为治疗肥胖、糖尿病、动脉粥样硬化等疾病的一类新药。     

人哺乳期乳腺中的细胞死亡

乳腺组织是长期处于非功能状态的静止期,而处于功能状态的哺乳期是极为有限的。哺乳期的乳腺产生、分泌新生儿和乳幼儿生长所必需的许多营养成份如糖(乳糖)、蛋白质(酪蛋白、乳白蛋白、免疫球蛋白)脂质、灰分等。机体内的许多腺体组织由于分泌蛋白质或脂质,所以产生了功能分化,乳腺可以称为分泌多种营养成分的特殊腺体组织。伴随着这种功能的表达,组织形成也发生了显著改变。     

CD44分子十六酰化干扰人T淋巴细胞CD3介导的信号传递的研究

证实细胞表面ＣＤ４４分子的十六酰化可能参与淋巴细胞的信号传递。利用不同类型的ＣＤ４４单克隆抗体，观察它们对ＣＤ２或ＣＤ３抗体刺激正常人外周血淋巴细胞增生的作用以及对ＣＤ４４分子十六酰化的影响。     

Polysaccharides from the Green Alga Ulva lactuca Improve Antioxidant Balance and Bone Mineral Density in Diabetic Rats

Diabetes mellitus (DM), the 10th? leading cause of death worldwide, is a major and growing public health problem estimated to affect more than 578 million people in 2030 and 700 million people in 2045[1]. In diabetic animals, protein glycation and glucose autoxidation generate free radicals, which cause lipid peroxidation. Therefore, reactive oxygen species (ROS) can quickly accumulate, decrease antioxidant activity, and cause deterioration of kidney and liver function. A disrupted redox balance in cells also damages crucial biomolecules such as deoxyribonucleic acid (DNA), proteins and lipids. Oxidative stress (OS) is elevated in diabetes mellitus and may be a major factor in the development and evolution of the typical long-term pathophysiology of?diabetes?and?its?associated?complications[2].     

肿瘤相关脂类及脂类组学的研究进展

[摘要] 脂类组学是一门新兴的代谢组学的分支学科,旨在系统研究生物体内所有脂类分子的特性,以及它们在蛋白质表达和基因表达调节过程中的作用。脂类参与调节生物体的众多生理过程,包括能量存储、信号转导、细胞凋亡等,随着新的分析技术的发展,特别是质谱技术的应用和发展,使得脂类的测定能够快速、精确和高通量的进行。大量研究表明,脂类代谢异常与肿瘤的发生发展有着密切联系,脂类组学技术的应用能揭示与肿瘤相关的脂类变化,找到其异常的代谢通路,并在肿瘤脂类生物标记物的识别,肿瘤早期诊断,抗肿瘤药物靶点的发现等方面展现出广泛的应用前景。本文就上述研究的近期进展做简要评述。 [关键字] 脂类;脂类组学;质谱技术;肿瘤     

联合应用棕榈酰化肽与聚肌胞对黑色素瘤特异性CD8+T细胞的影响

目的：探讨联合应用棕榈酰化肽与聚肌胞（poly IC ）对肿瘤特异性CD8＋ T 细胞的影响。方法15只C57BL／6小鼠随机分为5组（每组3只）：对照组（仅给予PBS ）、线性肽（g p10025‐33,黑色素瘤特异性CD8＋ T细胞表位）组、线性肽＋poly IC组、棕榈酰化肽组、棕榈酰化肽＋poly IC组。经肌内注射免疫小鼠后,取得外周血及脾组织,通过流式细胞仪分析黑色素瘤特异性CD8＋ T细胞数量,通过Elisa及Elispot法分析疫苗活化的CD8＋ T细胞体外对黑色素瘤细胞的识别。取15只荷黑色素瘤C57BL／6小鼠,监测不同方法免疫后皮下肿瘤的大小。结果与线性肽＋poly IC组比较,棕榈酰化肽与poly IC联合应用显著增加外周血gp10025‐33特异性CD8＋ T 细胞的数量[（23．53±5．398）％ v s（1．158±0．239）％,P＝0．014],且内源性CD8＋ T 细胞可以识别黑色素瘤细胞并显著抑制皮下肿瘤生长（P＜0．001）。结论联合应用棕榈酰化肽与poly IC可促进黑色素瘤特异性CD8＋ T细胞的免疫应答,从而显著抑制肿瘤生长。     

内皮型一氧化氮合酶脱偶联与氧化应激

内皮细胞功能障碍是造成许多心脑血管疾病的共同病理基础。NO利用率降低和活性氧（ROS）过量生成是导致内皮功能紊乱的一个重要因素。内皮型一氧化氮合酶脱偶联（eNOS uncoupling）是导致NO水平下降和氧自由基水平升高的重要机制,其中ROS水平升高又是造成eNOS脱偶联的主要原因。随着对ROS病理生理作用认识的不断深入,发现ROS的生物学作用具有两面性,一方面ROS与蛋白质、脂质、核酸等生物大分子反应,引发一些病理过程,另一方面ROS通过不同的信号途径对一些生理过程进行调控。该现象主要是由ROS分布的区域化造成。通过抑制ROS合成特异性关键酶减少特定区域内的具体的ROS减少氧化应激、逆转eNOS脱偶联、进而改善血管内皮功能,为防治心脑血管疾病提开辟新的途径。     

外泌体micro RNA在动脉粥样硬化性脑梗死中的研究进展

外泌体是分泌到细胞外的一种小囊泡,是近年来医学研究中的一大热点,其构成为脂质双分子层,含有脂质、蛋白质及RNA等物质,可结合某些靶细胞受体,作为细胞间通信的桥梁,是一种重要的细胞与细胞之间交流的方式,参与神经元-神经胶质网络的组成,其在脑梗死的诊治上具有极大的潜能。本文在其作为生物学标志物及其micro RNA功能等方面,对外泌体在动脉粥样硬化性脑梗死的研究进展作一综述。