基于血清蛋白组学的慢性肾衰预测模型探讨

 目的 通过比较慢性肾衰（CRF）患者与正常人血清蛋白表达谱的差异,筛选血清蛋白标志物并建立诊断模型,探讨其在慢性肾衰血清学诊断中的意义。方法 收集62例CRF患者和28例正常人的血清,经表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)检验并筛选血清蛋白标志物。经生物信息学分析建立预测模型并进行验证。结果 在质荷比(m/z)1500～30000范围内,检测到51个有效蛋白峰,发现有19个峰有显著差异 (P<0.001),其中18个峰呈低表达,1个峰呈高表达;且CRF组和正常组的聚类性质明显不同;组内样本彼此靠近,组间样本彼此分开。构建的"慢性肾衰组－正常组"诊断决策树模型,预测正确率为87.8%,灵敏度为87.1%,特异度为89.3%。结论 该决策树模型能对慢性肾衰做出较为准确的预测判断,为慢性肾衰的临床早期发现提供一定的实验依据     

SELDI-TOF-MS技术筛选NSCLC血清肿瘤标志物

目的 分析非小细胞肺癌(NSCLC)血清蛋白表达谱的改变,筛选并建立NSCLC血清蛋白的差异表达谱。方法 应用表面增强激光解析电离化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS,简称SELDI-TOF或SELDI)技术,分析100例NSCLC患者和100例正常对照血清,获得蛋白表达图谱。用Biomarker Pattern(BPS)软件分析NSCLC差异蛋白并初步建立诊断模型。通过盲筛进一步验证诊断模型。结 果 发现NSCLC患者血清与正常人有16个显著差异的蛋白波峰,显著高表达8个（P<0.001）。显著低表达8个（P<0.001）。经BPS软件分析,建立分类树模型,其诊断的灵敏度为100％,特异度为100％。100例样本盲筛验证结果显示,其灵敏度为96.15％,特异度为95.83％。无吸烟史患者较有吸烟史患者血清中显著高表达蛋白质波峰有3个（P<0.05）。鳞癌患者较腺癌患者血清中显著高表达蛋白质波峰有2个（P<0.01）。不同病理分期患者之间未发现差异蛋白峰。结 论 SELDI-TOF-MS 技术可筛选出NSCLC差异性蛋白并建立NSCLC诊断的分类树模型,有望成为NSCLC早期诊断的辅助指标。     

应用蛋白质谱建立活动性肺结核病的血清诊断模型

目的 应用蛋白质谱技术研究活动性肺结核病患者的血清诊断标志物,建立诊断模型早期诊断活动性肺结核.方法 应用表面加强激光解吸-电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)和蛋白芯片技术检测264例活动性肺结核患者、其他呼吸疾病患者和正常人血清;应用Ciphergen蛋白芯片3.1.1软件比较、分析血清蛋白峰,找出差异蛋白;应用Biomarker Pattern 5.0软件建立活动性肺结核的诊断模型.结果 129例活动性肺结核血清和135例对照血清蛋白指纹图谱比较,有50个差异蛋白峰(P<0.01).以69例其他呼吸疾病血清和66例健康人血清为对照,选择5个蛋白峰(4360、3311、8160、5723、15173 m/z)建立诊断模型1,该模型诊断活动性肺结核的灵敏度为82.95%,特异性为89.63%,准确率为86.36%.以69例其他呼吸疾病血清为对照,选择3个蛋白峰(5643、4486、4360 m/z)建立诊断模型2,该模型诊断活动性肺结核的灵敏度为96.9%,特异性为97.8%,准确率为97.3%.结论 应用蛋白质谱技术分析肺结核病患者血清可能建立一种新的结核病早期诊断方法 .     

SELDI-TOF-MS技术检测心绞痛患者血浆蛋白指纹图谱的研究

目的： 采用表面增强激光解析/电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术检测心绞痛患者血浆蛋白质指纹图谱,从中筛选出特异的分子标志物。方法: 应用SELDI-TOF-MS技术及金属离子螯合（IMAC-3）蛋白质芯片对20例心绞痛患者和29例正常对照者血浆样本进行检测,借助生物信息学工具（非线性的支持向量机,SVM）提出心绞痛的诊断模型,并运用留一交叉验证法来评估该模型的判别效能。结果: 用SELDI-TOF-MS技术筛选出由3个有显著差异的蛋白质峰［质荷比（m/z）分别为2 667.3、5 914.0和6 890.5］组合构建的诊断模型,可将20例心绞痛患者和29例正常人全部正确分组,诊断特异性和灵敏度均为100%。结论: SELDI-TOF-MS技术在心绞痛的诊断中具有较高灵敏度和特异性,发现的蛋白质峰可能在心绞痛的发病中起一定作用,血浆中分子标志物的发现有助于心绞痛的早期诊断。     

类风湿关节炎并发间质性肺疾病患者血清蛋白质指纹图谱的临床价值分析

目的:应用表面加强激光解吸电离飞行时间质谱筛选出类风湿关节炎并发间质性肺疾病(RA-ILD)患者血清中的差异蛋白,并对其临床价值进行初步分析。方法:用WCX2(弱阳离子交换芯片)蛋白芯片结合表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(Surface enhanced laser desorption/ionization time of flight mass spectrum,SELDI-TOF-MS)检测19例RA-ILD患者,15例单纯RA、未合并间质性肺疾病患者,13例相对健康的对照组患者的血清样本,应用Biomarker Wizard软件、Biomarker Pattern软件以及SPSS13.0对测得的数据进行处理,初步构建分类树模型并随机选取部分病例进行验证。结果:患者血清中共检测出142个蛋白峰,经方差分析,发现了4个蛋白质峰差异有统计学意义,质荷比分别为3382.59、3453.39、11886.0、5825.48,Biomarker Pattern软件对所检测的所有数据分析后,发现以质荷比11689.4、2266.49、1020.22、4392.28、5074.38、2764.69为最适合建立分类树模型,灵敏度为92.31%(12/13),特异度为91.18%(31/34)。随机选取RA-ILD、RA、相对健康的对照组患者的血清样本各10例进行模型验证,灵敏度为90%(9/10),特异度为90%(18/20)。结论:SELDI-TOF-MS技术可筛选出RA-ILD患者血清中差异性表达蛋白,作为生物标志物,其诊断敏感度高,特异度好,对其测定具有较好的临床应用前景。     

蛋白质芯片筛选急性白血病血清标记蛋白质

目的利用蛋白质芯片从初诊急性白血病患者血清中筛选标记蛋白质。方法采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS surfaced enhanced laser desorption/ionization time of flight mass spectroscopy)和弱阳离子交换(WCX2)蛋白质芯片对80例初诊急性白血病患者(44例儿童急性淋巴细胞白血病、36例成人急性粒细胞白血病)血清和78例正常人(35例为儿童)血清的蛋白质图谱进行检测,使用PBSII-C型蛋白质芯片阅读机读取数据。结果急性淋巴细胞白血病初诊患儿与正常儿童血清蛋白质谱相比有显著差异蛋白质7个,用标记分子建立儿童急性淋巴细胞白血病诊断的分类树模型,检测灵敏度为88.6%(39/44)、特异性为82.9%(29/35);成人急性粒细胞白血病患者与正常成人血清蛋白质谱相比有显著差异蛋白质8个,用其中的7个标记分子建立成人急性粒细胞白血病诊断的分类树模型,检测灵敏度为86.1%(31/36)、特异性为95.3%(41/43)。结论蛋白质芯片技术对于发现和筛选急性白血病血清中的标记蛋白质是一种有效、快速的工具。     

应用SELDI-TOF-MS技术对肝损伤模型大鼠血清蛋白质表达谱的比较分析

目的： 应用SELDI-TOF-MS技术对肝损伤模型大鼠血清内蛋白质表达谱进行比较分析，以揭示肝损伤模型大鼠血清促使骨髓间质细胞向肝细胞方向分化的分子基础。方法: 采用2种不同蛋白质芯片CM10和IMAC3先对肝损伤模型大鼠血清进行吸附分馏，后置入蛋白质芯片阅读机，用激光解吸和离子化飞行时间质谱检测被富集到芯片样品点上的蛋白质，对肝损伤模型大鼠血清和正常大鼠血清间的蛋白质表达谱进行比较分析。结果: 肝损伤大鼠血清能诱导骨髓间质细胞向肝细胞方向分化。蛋白质芯片-飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）结果显示，CM10芯片共捕获到9个差异蛋白峰，其中有6个蛋白表达峰的峰值在肝损伤实验血清中明显高于对照组血清，其质荷比（m/z）分别为3 480、7 888、8 275、8 528、15 101和15 787；另有3个蛋白表达峰的峰值在肝损伤实验血清中明显低于对照组血清，其质荷比（m/z）分别为8 833、12 039和12 720。IMAC3芯片共捕获到5个差异蛋白峰，其中有3个蛋白表达峰的峰值在肝损伤实验血清中明显高于对照组血清，其质荷比（m/z）分别为3 481、15 105和15 792；另有2个蛋白表达峰的峰值在肝损伤实验血清中明显低于对照组血清，其质荷比（m/z）分别为9 018和11 593。结论: 肝损伤模型大鼠血清内确实存在差异表达蛋白，这些差异表达蛋白很可能是决定骨髓间质干细胞分化方向的“信号分子”。     

胃肠病患者针灸治疗前后蛋白表达改变

目的 探讨针灸前后胃肠病患者血清蛋白谱表达的改变.方法 用MALDI-TOF质谱仪和血生化分析仪对7名胃肠病患者针灸前后血生化指标及血清蛋白谱进行检测.结果 与治疗前比较,针灸可使胃肠病患者甘油三酯出现降低趋势;胃肠病患者针灸治疗前后比较得到2个蛋白差异峰,它们分别是：2625（m/z）,2742（m/z）;接受针灸治疗前胃肠病患者组与对照组比较得到4个差异蛋白峰：2767 （m/z）,2742（m/z）,2754（m/z）,2568（m/z）;以统计差异最显著峰2767（m/z）（X轴）和2742（m/z）（Y轴）建立坐标系进行二维分组分析,发现针灸治疗对胃肠病有明显效果,接近了正常人.结论2742（m/z）和2767 （m/z）这两个差异蛋白对揭示胃肠病的针灸治疗机理具有重要意义.     

甲型副伤寒沙门氏菌蛋白指纹图谱的建立

目的:利用表面增强激光解析电离飞行时间质谱建立甲型副伤寒沙门氏菌蛋白指纹图谱。方法:收集临床中分离获得的甲型副伤寒沙门氏菌36株,同时采集对照菌96株,对所收集的细菌利用16S rDNA测序技术进行分子生物学验证鉴定。利用表面增强激光解析电离飞行时间质谱检测细菌蛋白,ProteinChip和Biomarker Wizard软件自动采集数据,将结果用BioMarker Patterns软件建立分类树鉴定模型,并进行盲法验证。结果:在相对分子质量(Mr)3 000～20 000范围内,捕获104个蛋白峰,其中90个蛋白峰差异有统计学意义(P<0.01),择优选出质荷比(M/Z)为10 061.7的蛋白峰建立甲型副伤寒沙门氏菌的分类树模型,甲型副伤寒沙门氏菌诊断的灵敏度和特异度通过盲法验证为100%。结论:采用SELDI-TOF MS技术建立的甲型副伤寒沙门氏菌的分类树诊断模型,可用于该菌的快速鉴定。     

蛋白芯片技术筛选无精症患者精浆中标志蛋白质

目的：利用蛋白质芯片和生物信息学方法从无精症患者精浆中筛选标志蛋白质。方法：采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术（SELDI-TOF-MS）和IMAC3蛋白质芯片对30例无精症患者精浆和57例健康人精浆的蛋白质谱图进行了检测,使用PBSⅡ-C型蛋白质芯片阅读机读取数据,获得的结果采用CI-PHERGEN公司的Biomarkerwizard和BiomarkerPatternsSystem软件分析。结果：无精症患者与正常人精浆蛋白质谱相比有16个显著差异蛋白质,其中6个蛋白质在患者精浆中高表达,10个蛋白质在患者精浆中低表达。BiomarkerPatternsSystem软件用16个显著差异蛋白质中的3个标志分子建立无精症诊断的分类树模型。检测灵敏度为86.7%（26/30）、特异性为96.5%（55/57）。结论：实验证明利用蛋白质组学和生物信息学方法可以从精浆中筛选出无精症相关的标志蛋白质,而且蛋白质芯片技术对于发现和筛选精浆中的无精症标志蛋白质是一种有效、快速的工具。     

CA19—9与TGF-β联检对胰腺癌的诊断价值

目的：探讨了肿瘤标志物CA19—9与细胞因子TGF-β联检对诊断胰腺癌的临床价值。方法：采用放射免疫分析和酶联免疫双抗体法对30例胰腺癌患者进行了血清CA19—9与TGF-β测定，并与35名正常健康人作比较。结果：胰腺癌患者血清中CA19—9与TGF-β水平均非常显著的高于正常人对照组（P〈0．01）。CA19—9检测胰腺癌的敏感性为70．8％，低于TGF-β的敏感性（80．2％，P〈0．05）。两者检测胰腺癌的特异性分别为90．2％和93．4％，P〉0．05。结论：CA19—9与TGF—β诊断胰腺癌的特异性均较高，TGF-β的锸臆件高干CA19—9,两者联榆可提高胰腺痛的诊断率。     

癌胚抗原、糖链抗原19-9、C-反应蛋白和铁蛋白联合检测对胰腺癌的诊断价值

目的探讨联合检测血清癌胚抗原(CEA)、糖链抗原19-9(CA19-9)、铁蛋白(Ferr)和C-反应蛋白(CRP)对胰腺癌和慢性胰腺炎的诊断价值。方法分别检测CEA、CA19-9、CRP和Ferr在正常对照组、慢性胰腺炎和胰腺癌患者的含量。结果四项指标单独区分正常对照组和胰腺癌组的诊断能力依次为Ferr、CRP、CA19-9和CEA,Ferr的诊断灵敏度和特异性分别为96.60%和96.20%;区分慢性胰腺炎组和胰腺癌组的诊断能力依次为Ferr、CA19-9、CRP和CEA,Ferr的诊断灵敏度和特异性分别为71.20%和87.50%。利用二元logistic回归分析多项指标联合检测的诊断价值,当Ferr和CEA联合检测时,其曲线下面积为0.866,高于CEA、CA19-9、CRP和Ferr单独检测,诊断的灵敏度和特异性分别为74.60%和91.70%。结论 Ferr和CEA联合检测,可提高区分慢性胰腺炎和胰腺癌的诊断能力。     

血清CA19—9、CA125、CA242、CEA联检诊断胰腺癌的临床价值

目的：评价血清糖类抗原19—9（CA19—9），糖类抗原125（CA125），糖类抗原242（CA242）及癌胚抗原（CEA）四项指标联检对胰腺癌的诊断价值。方法：四项标志物均应用全自动化学免疫分析检测。结果：胰腺癌患者血清CA19—9、CA125、CA242、CEA水平明显高于胰腺良性病组，差异均有显著性（P〈0．01）。四项指标联检诊断胰腺癌的敏感性为91．7％，特异性92．1％。结论：血清CA19—9、CA125、CA242及CEA单项检测在胰腺癌诊断中特异性均偏低，且四项联检可提高胰腺癌的敏感性及特异性，临床诊断价值更大。     

超声、CT、MRI和血清CA19-9对胰腺癌诊断的对比分析

目的：探讨了3种非创伤性影像检查方法,超声（US）、X线计算机体层摄影术（CT）和磁共振成像（MRI）及血清CA19-9水平在胰腺癌诊断中的敏感性和准确性,以提高对早期胰腺癌的诊断方法。方法：回顾性分析比较31例胰腺癌患者的US、CT和MRI及血清CA19-9测定的优缺点。结果：胰腺癌的确诊率US为77.8%,CT为87.2%、MRI为93.8%、CA19-9为70.8%,US对胰腺癌的早期检出率较高,但确诊率较低。CT和MRI对胰腺癌的确诊率较高,血清CA19-9的确诊率也较低。结论：US、CT、MRI和血清CA19-9各有其特点,合理的综合利用,可提高对胰腺癌的早期诊断。     

CA19-9、CA242和CA50联检对胰腺癌诊断的价值

目的：探讨联检肿瘤标志物CA19-9、CA242和CA50在胰腺癌诊断中的应用价值。方法：选择2007年1月～2008年10月湖南省人民医院门诊及住院患者共250人进行了CA19-9、CA242和CA50联检,其中120例为临床明确诊断的胰腺癌患者。结果：胰腺癌患者血清中的CA19-9、CA242和CA50水平明显高于对照组。CA19-9敏感性和特异性分别为82.0%和79.6%;CA242敏感性和特异性分别为78.5%和81.6%;CA50敏感性和特异性分别为52.7%和74.6%;联检CA19-9、CA242和CA50其敏感性和特异性提高为96.82%和98.75%。结论：采用CA19-9、CA242和CA50联检的方法,对胰腺癌的早期诊断具有一定的临床意义。     

固相配体文库技术分析胰腺癌差异血清蛋白表达谱的研究

 目的：通过胰腺癌患者血清差异蛋白表达谱鉴定胰腺癌的血清学生物标志物。 方法：应用固相配体文库技术处理胰腺癌及非癌对照的血清,然后采用二维电泳技术分析差异点、串联质谱鉴定与胰腺癌变相关的血清差异蛋白质分子;应用ELISA检测凝集素在胰腺癌血清中的表达情况。 结果: 7种蛋白质分子在胰腺癌患者血清中的表达量升高,包括凝集素（clusterin）, 玻连蛋白（vitronectin）,补体C4-A( complement C4-A), 维生素蛋白D结合蛋白（vitamin D-binding protein）,抗凝血酶III（ anitthrombin-III）, 补体C6（complement component C6）, 凝血酶原（prothrombin）;补体C7（complement component C7）血清表达量下降。ELISA检测结果表明胰腺癌患者血清凝集素水平显著高于非癌对照（P<0.05）。 结论: 凝集素可能与胰腺癌的发生发展过程密切相关,血清凝集素检测可能是重要的胰腺癌诊断生物标志物。     

Development of proteomic patterns for detecting lung cancer

Lung cancer is at present the number one cause of cancer death and no biomarker is available to detect early lung cancer in serum samples so far. The objective of this study is to find specific biomarkers for detection of lung cancer using Surface Enhanced Laser Desorption/Ionization (SELDI) technology. In this study, serum samples from 30 lung cancer patients and 51 age-and sex-matched healthy were analyzed by SELDI based ProteinChip reader, PBSII-C. The spectra were generated on WCX2 chips and protein peaks clustering and classification analyses were performed utilizing Biomarker Wizard and Biomarker Patterns software packages, respectively. Three protein peaks were automatically chosen for the system training and the development of a decision classification tree. The constructed model was then used to test an independent set of masked serum samples from 15 lung cancer patients and 31 healthy individuals. The analysis yielded a sensitivity of 93.3%, and a specificity of 96.7%. These results suggest that the serum is a capable resource for detection of specific lung cancer biomarkers. SELDI technique combined with an artificial intelligence classification algorithm can both facilitate the discovery of better biomarkers for lung cancer and provide a useful tool for molecular diagnosis in future.     

多种肿瘤标志物在胰腺癌中的诊断价值及相关性研究

目的：探讨血清肿瘤标志物联合检测对胰腺癌的诊断价值及相关性。 方法：选取2013年1月至2016年5月我院胰腺癌患者146例,非胰腺癌患者128例和健康体检者124例,放射免疫分析仪检测各组血清CA19-9、CA242、CA50、CA125、CEA及TSGF水平,并进行各组间比较。绘制受试工作特征曲线（ROC）分析各肿瘤标志物在胰腺癌患者中的诊断价值,线性相关分析各肿瘤标志物的相关性。应用多元Logistic回归模型分析胰腺癌的独立危险因素。结果：胰腺癌组血清CA19-9、CA242、CA50、CA125、CEA及TSGF水平明显高于对照组和非胰腺癌组,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。Ⅳ期和Ⅲ期患者血清CA19-9、CA242、CA50、CA125及TSGF水平明显高于Ⅰ期和Ⅱ期（P<0.01）,且Ⅳ期患者血清CA19-9、CA242、CA125及CEA水平明显高于Ⅲ期（P<0.01）。胰腺癌组血清CA19-9、CA242、CA50、CA125、CEA及TSGF的阳性率明显高于对照组和非胰腺癌组（P<0.01）。ROC曲线显示,血清CA19-9的AUC高于其他单项指标,其最佳临界值、灵敏度和特异度分别为114.5 U/ml、81.2%和79.3%。6项联合检测的诊断效能均优于各单项检测,其灵敏度和特异度分别为92.4%和76.5%。相关性分析显示,血清CA19-9与CA242、CA50及CA125均呈正相关（r=0.703,P=0.005;r=0.572,P=0.024;r=0.439,P=0.036）。多元Logistic回归分析显示,吸烟、不正确的饮食习惯、糖尿病史、胆系疾病史及CA19-9、CA242、CEA进入回归模型,其OR值及95%CI分别为1.717（0.736～2.359）、2.865（2.217～3.685）、2.614（2.186～3.127）、3.527（2.842～4.377）、4.214（3.570～4.962）、2.315（2.114～2.539）、1.876（1.175～2.852）。 结论：血清肿瘤标志物联合检测有助于提高早期胰腺癌诊断的准确性,吸烟、不正确的饮食习惯、糖尿病史、胆系疾病史及高水平的CA19-9、CA242、CEA是胰腺癌的独立危险因素。     

Is tissue polypeptide antigen more accurate than serum CEA for diagnosing pancreatic cancer?

Tissue polypeptide antigen (TPA) and carcinoembryonic antigen (CEA) were determined in the sera of 36 control subjects, 30 patients with pancreatic cancer, 35 with chronic pancreatitis and 25 with non-pancreatic digestive disease to evaluate their role in detecting pancreatic malignancy. Abnormal values of TPA and CEA were found in 28 and 19 of 30 patients with pancreatic cancer, and in four and seven of 35 patients with chronic pancreatitis, respectively. Raised titres of TPA were observed more often than equivalent serum CEA in simulated pancreatic diseases. The receiver-operating (ROC) characteristic curves showed that TPA was more discriminating than CEA in detecting pancreatic cancer. Specificity was enhanced when both titres were abnormally high and sensitivity when one titre was raised, but the diagnostic accuracy of TPA alone has not improved, which satisfactorily discriminates pancreatic cancer from chronic pancreatitis.     

Diagnostic usefulness of Ca 19-9 antigen in cancer of the pancreas and neoplasms of the pancreato-biliary intersection

Antigen CA 19-9 was measured in the serum of a group of 16 patients with pancreatic cancer, in 19 patients with non-pancreatic gastrointestinal malignancies, and in 19 others with benign pancreatobiliary disease. The test showed a high sensitivity with a low specificity and a positive predictive value for diagnosis of pancreatic cancer when confronted with a group of controls that included both benign and malignant gastrointestinal disease. The low specificity was due to high CA 19-9 values in other gastrointestinal cancers, especially in carcinoma of the ampulla and the biliary tract. When the latter were added to the group of patients with pancreatic cancer, and the diagnostic accuracy of the test was re-evaluated, sensitivity, specificity and both positive and negative predictive values increased. Values of CA 19-9 over 100 U/ml are highly predictive of malignancy in patients with pancreato-biliary disease.