骨形态发生蛋白7通过PI3K/Akt通路可抑制人髓核细胞的凋亡

背景：骨形态发生蛋白7可促进人髓核细胞的细胞外基质合成,减缓椎间盘退变.近年来,有学者提出其可能通过对抗髓核细胞凋亡从而发挥上述作用,但其进一步的分子机制一直未被详细阐明.目的：观察骨形态发生蛋白7对无血清诱导下发生凋亡的人髓核细胞产生的作用及其对PI3K/Akt通路的影响,分析并探讨骨形态发生蛋白7抑制人髓核细胞凋亡的分子机制.方法：通过改良Pfirrmann分级及相关条件选取12例患者获取椎间盘组织,采用酶消化法获取人髓核细胞后分组实验,以含体积分数15％胎牛血清的培养基正常培养的髓核细胞设为空白组;使用无血清培养基培养48 h诱导凋亡作为阳性对照组;在无血清条件下,通过加入不同剂量的骨形态发生蛋白7以及同时添加PI3K/Akt通路拮抗剂LY294002形成处理组和拮抗组.使用流式细胞术检测各组细胞凋亡率;免疫荧光观察p-Akt表达;蛋白印迹法检测Akt,p-Akt,BAD和Caspase 9等通路蛋白的表达变化.结果与结论：无血清凋亡诱导下,流式细胞术结果显示,随着骨形态发生蛋白7处理浓度上升,髓核细胞凋亡率明显下降,加入LY294002共同作用后细胞凋亡率再次升高（P＜0.05）.p-Akt免疫荧光和蛋白印迹法检测结果进一步表明,与凋亡阳性对照组相比,加入骨形态发生蛋白7的实验组中,p-Akt表达明显增加,其下游凋亡相关蛋白BAD、Caspase 9蛋白表达减少（P＜0.05）,而在同时加入Akt通路拮抗剂LY294002后,p-Akt蛋白表达下降而凋亡相关蛋白的表达又恢复到相对较高的水平（P＜0.05）.结果证明,骨形态发生蛋白7在无血清诱导的人类髓核细胞凋亡中通过激活PI3K/Akt通路,拮抗了BAD-Caspase 9相关的细胞凋亡过程,抑制了髓核细胞的退变.     

竹节香附素A通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察竹节香附素A（RDA）对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 分别使用0、5、10、20及40μmol/L的RDA干预HeLa细胞48 h,CCK-8实验测定细胞增殖率,计算半抑制浓度（IC₅₀）,确定药物浓度。流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹法检测细胞中B细胞淋巴瘤2家族蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、活化胱天蛋白酶-3（Cleaved-caspase-3）、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）的蛋白表达水平。将HeLa细胞分为4组,即空白对照组、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）组、RDA组和联合用药组,检测及比较各组细胞增殖率、凋亡率和p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量。结果 随着RDA浓度的增加,HeLa细胞的增殖率降低、凋亡率升高（P均< 0.05）,Bax、Cleaved-caspase-3蛋白相对表达量升高（P均< 0.05）,Bcl-2、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量降低（P均< 0.05）;IGF-1激活PI3K/Akt/mTOR信号通路后,RDA仍然能抑制HeLa细胞增殖（P均< 0.05）,降低p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量（P均< 0.05）。结论 RDA可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路对人宫颈癌HeLa细胞产生抑制增殖与促进凋亡的效果。     

LY294002对Jeko-1细胞的增殖抑制及作用机制研究

本研究旨在探讨磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶（PI3K/Akt）特异性抑制剂LY294002对人套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞生长、细胞凋亡的影响及其作用机制.四甲基偶氮唑盐（MTT）方法检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞凋亡水平;Western blot检测凋亡相关蛋白Cyclin D1、Bcl-2、procaspase-3及PI3 K/Akt信号通路相关蛋白p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K的变化.结果表明,LY294002能抑制Jeko-1细胞的增殖.Jeko-1细胞经LY294002 0、5、10和20 μmol/L作用24 h后,凋亡率分别为（3.25±1.27）％、（11.34±2.35）％、（22.81±2.74）％和（43.61±3.48）％,差异有统计学意义（P＜0.01）;Westem blot检测发现,凋亡相关蛋白Cyclin D1、Bcl-2、procaspase-3表达下降,PI3K/Akt信号通路相关蛋白p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K磷酸化水平降低.结论：LY294002可明显抑制Jeko-1细胞增殖,其机制可能通过下调PI3K/Akt信号通路中的p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K磷酸化水平,抑制PI3K/Akt信号通路,促进细胞凋亡.     

高糖对RF/6A细胞内PI3K-Akt信号通路的影响

目的 探讨高糖对视网膜血管内皮细胞内血管新生关键信号通路PI3K-Akt信号通路的影响.方法 以猴视网膜血管内皮细胞RF/6A细胞为研究对象,分为空白对照组、甘露醇对照组、高糖组和PI3K-Akt信号通路特异性阻断剂LY294002组,分别采用MTs法检测RF/6A细胞增殖、划痕实验检测细胞迁移以及Mmrigel法检测细胞管腔形成能力,Western blot法检测PI3K-Akt信号通路中关键蛋白Akt的表达以及磷酸化.结果 与空白对照组相比,甘露醇对照组细胞增殖率、迁移率、管腔形成数以及细胞内Akt及P-Akt的表达无统计学差异(P>0.05);高糖组细胞增殖增加15.12%(P<0.05),细胞迁移增加39.24%(P<0.01),管腔形成数增加59 10%(P<0.01),细胞内Akt及p-Akt的表达分别增加27.34%(P<0.05)、25.23%(P<0.05);LY294002组细胞增殖减少17.56%(P<0.05),细胞迁移减少45 71%(P<0.01),管腔形成减少39.08%(P<0.01),Akt及p-Akt的表达量分别减少37.78%(P<0.01)、42.08%(P<0.01);与高糖组相比,LY294002组细胞增殖减少29.06%(P<0.05),细胞迁移减少61.01%(P<0.01),管腔形成减少62.14%(P<0.01);Akt及p-Akt的表达分别减少51.15%(P<0.01)、53.75%(P<0.01).结论 高糖可经上调RF/6A细胞内PI3K-Akt信号通路促进血管新生,PI3K-Akt信号通路阻断剂可拮抗高糖的促RF/6A细胞血管新生的作用.     

胰岛素急性刺激对 PI3K／Akt 和 ERK 通路的分子调节作用

【目的】研究胰岛素（insulin）急性刺激对PI3K/Akt和ERK信号的调节作用及其意义。【方法】HepG2细胞、6只8周龄BALB/C雄性小鼠分别都给予急性胰岛素刺激和磷酸盐缓冲液（PBS）刺激,细胞提取总蛋白、小鼠提取肝组织总蛋白用 Western blotting 法分析 Akt磷酸化水平和 ERK 磷酸化水平,并用免疫沉淀法检测TERT磷酸化水平。【结果】胰岛素急性刺激组 HepG2细胞和肝组织p-Akt、p-ERK水平均较PBS组上调,抑制PI3K/Akt信号通路后 TERT 活性下降。【结论】胰岛素急性刺激可以激活 PI3K/Akt和 ERK信号通路,抑制PI3K/Akt通路可减弱端粒酶活性,这可能为临床肝癌的诊断与治疗提供依据。     

蝎毒多肽提取物对K562细胞PI3K和p-Akt信号蛋白表达及细胞增殖的影响

本研究旨在探讨蝎毒多肽提取物(PESV)对人慢性髓系白血病细胞系K562细胞凋亡调控的PI3K和p-Akt信号蛋白的影响及作用机制。将体外培养的K562细胞,经PESV处理不同时间后,通过MTT法检测细胞增殖曲线,Western blot法检测PI3K及p-Akt蛋白水平变化。结果表明,与对照组相比,PESV处理后K562细胞凋亡率增加,PI3K及p-Akt蛋白表达降低。结论:PESV可能通过抑制凋亡调控的PI3K、p-Akt信号蛋白,抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡。     

氢吗啡酮后处理经PI3K/Akt通路减轻大鼠心肌缺血-再灌注细胞凋亡

目的:探讨PI3K/Akt信号通路在氢吗啡酮后处理减轻大鼠心肌缺血-再灌注细胞凋亡中的作用。方法:健康雄性SD大鼠40只,按照随机数表法随机分为5组,每组8只,假手术组（Sham组）、缺血-再灌注组（I/R组）、缺血-再灌注+氢吗啡酮组（I/R+H组）、缺血-再灌注+PI3K抑制剂组（I/R+W组）、缺血-再灌注+氢吗啡酮+ PI3K抑制剂组（I/R+ H+ W组）。采用左冠状动脉前降支结扎30 min、再灌注120 min的方法建立心肌缺血-再灌注损伤模型。实验结束后,用TTC染色法测心肌梗死面积;用比色法检测血清乳酸脱氢酶（LDH）漏出量;末端标记法（TUNEL）测心肌细胞凋亡;Western blot法检测p-Akt、Bcl-2、Bax蛋白表达。采用SPSS 13.0软件行统计分析。采用单因素方差分析进行组间比较。结果:与Sham组比较,I/R组心肌梗死面积、血清LDH漏出量及心肌细胞凋亡增多,p-Akt表达和Bax表达上调,Bcl-2表达下调（ P<0.05）;与I/R组比较,I/R+H组心肌梗死面积、血清LDH漏出量及心肌细胞凋亡减少,心肌p-Akt及Bcl-2表达上调,Bax表达下调（ P<0.05）;与I/R+H组比较,I/R+H+W组心肌梗死面积、血清LDH漏出量及心肌细胞凋亡增多,p-Akt表达和Bcl-2表达下调,Bax表达上调（ P<0.05）。 结论:氢吗啡酮后处理可减轻心肌缺血-再灌注引起的心肌细胞凋亡,其心肌保护机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。     

肠三叶因子介导PI3K/Akt信号通路保护胃黏膜上皮细胞紧密连接

目的：探讨肠三叶因子对胃黏膜上皮细胞紧密连接的保护作用,并研究PI3K/Akt信号通路在其中的作用机制。方法：体外培养GES-1细胞,分别设正常对照组,LPS组,ITF组,LPS＋ITF组,LPS＋ITF＋LY294002组,ITF＋LY294002组。正常对照组：正常培养;LPS组：加入浓度为10mg/L的LPS;ITF组：加入浓度为100μg/L的ITF;LPS＋ITF组：加入浓度为10mg/L的LPS,同时加入100μg/L的ITF;LPS＋ITF＋LY294002组：加入浓度为10mg/L的LPS、100μg/L的ITF,同时加入PI3K/Akt信号通路的抑制剂LY294002（15μM）;ITF＋LY294002组：加入100μg/L的ITF,同时加入15μM的LY294002。培养48h,采用Western blot检测ITF对PI3K/Akt信号通路的作用,采用免疫荧光和Western blot检测细胞紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的变化情况。结果：Western blot检测结果说明,与对照组相比,ITF提高了pAkt蛋白的表达水平,而LY294002抑制了ITF激活的pAkt蛋白的表达,说明ITF可以通过激活PI3K/Akt信号通路来调控GES-1细胞的生理活动。免疫荧光和Western blot结果显示LPS导致GES-1细胞的紧密连接遭到破坏,降低紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的表达水平,而ITF可以通过激活PI3K/Akt信号通路来保护GES-1细胞的紧密连接的完整性。结论：ITF保护胃黏膜上皮细胞紧密连接的完整性,提高紧密连接蛋白的表达水平,其发挥作用的主要分子机制是通过激活PI3K/Akt信号通路来实现的。     

血小板源性生长因子-DD通过Akt信号通路促进膀胱癌T24细胞增殖

目的研究外源性血小板源性生长因子-DD(PDGF-DD)对膀胱癌T24细胞增殖及Akt信号转导通路的影响,阐述factor其诱导细胞增殖的机制。方法外源性PDGF-DD蛋白作用T24细胞,采用MTT法分析细胞的增殖;流失细胞仪检测细胞周期的变化;Western blot法观测膀胱癌T24细胞Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR以及核因子NF-κB蛋白表达的变化。结果 PDGF-DD促进T24细胞的增殖,并且具有浓度依赖性;DNA合成前期(G0/G1期)细胞比例下降,合成期(S期)细胞比例上升;Akt、mTOR表达变化不明显,而p-Akt、p-mTOR及NF-κB p65的表达均上调。LY294002抑制PI3K/Akt及其下游靶位蛋白磷酸化;雷帕霉素和PDTC分别抑制p-mTOR和NF-κBp65的表达。结论外源性PDGF-DD刺激T24细胞的增殖,其机制可能是通过Akt/mTOR和Akt/NF-κB两条独立的信号通路实现的。     

Targeting the Akt/mammalian target of rapamycin pathway for radiosensitization of breast cancer

The phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt pathway is known to be activated by radiation. The mammalian target of rapamycin (mTOR) is downstream of Akt, and we investigated the effects of radiation on Akt/mTOR signaling in breast cancer cell models. RAD001 (everolimus), a potent derivative of the mTOR inhibitor rapamycin, was used to study the effects of mTOR inhibition, as the role of mTOR inhibition in enhancing radiation remains unexplored. RAD001 decreased clonogenic cell survival in both breast cancer cell lines MDA-MB-231 and MCF-7, although the effect is greater in MDA-MB-231 cells. Irradiation induced Akt and mTOR signaling, and this signaling is attenuated by RAD001. The radiation-induced signaling activation is mediated by PI3K because inhibition of PI3K with LY294002 inhibited the increase in downstream mTOR signaling. Additionally, caspase-dependent apoptosis is an important mechanism of cell death when RAD001 is combined with 3 Gy radiation, as shown by induction of caspase-3 cleavage. An increase in G(2)-M cell cycle arrest was seen in the combination treatment group when compared with controls, suggesting that cell cycle arrest may have been a contributing factor in the increased radiosensitization seen in this study. We conclude that RAD001 attenuates radiation-induced prosurvival Akt/mTOR signaling and enhances the cytotoxic effects of radiation in breast cancer cell models, showing promise as a method of radiosensitization of breast cancer.     

Isoginkgetin inhibits tumor cell invasion by regulating phosphatidylinositol 3-kinase/Akt-dependent matrix metalloproteinase-9 expression

Matrix metalloproteinase (MMP)-9 plays a key role in tumor invasion. Inhibitors of MMP-9 were screened from Metasequoia glyptostroboides (Dawn redwood) and one potent inhibitor, isoginkgetin, a biflavonoid, was identified. Noncytotoxic levels of isoginkgetin decreased MMP-9 production profoundly, but up-regulated the level of tissue inhibitor of metalloproteinase (TIMP)-1, an inhibitor of MMP-9, in HT1080 human fibrosarcoma cells. The major mechanism of Ras-dependent MMP-9 production in HT1080 cells was phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt/nuclear factor-kappaB (NF-kappaB) activation. Expression of dominant-active H-Ras and p85 (a subunit of PI3K) increased MMP-9 activity, whereas dominant-negative forms of these molecules decreased the level of MMP-9. H-Ras did not increase MMP-9 in the presence of a PI3K inhibitor, LY294002, and a NF-kappaB inhibitor, SN50. Further studies showed that isoginkgetin regulated MMP-9 production via PI3K/Akt/NF-kappaB pathway, as evidenced by the findings that isoginkgetin inhibited activities of both Akt and NF-kappaB. PI3K/Akt is a well-known key pathway for cell invasion, and isoginkgetin inhibited HT1080 tumor cell invasion substantially. Isoginkgetin was also quite effective in inhibiting the activities of Akt and MMP-9 in MDA-MB-231 breast carcinomas and B16F10 melanoma. Moreover, isoginkgetin treatment resulted in marked decrease in invasion of these cells. In summary, PI3K/Akt is a major pathway for MMP-9 expression and isoginkgetin markedly decreased MMP-9 expression and invasion through inhibition of this pathway. This suggests that isoginkgetin could be a potential candidate as a therapeutic agent against tumor invasion.     

PI3K/Akt/mTOR信号通路参与缺氧诱导因子-1α在急性胰腺炎大鼠的表达调节

目的 探讨急性胰腺炎(AP)大鼠PI3K/Akt/mTOR信号通路与HIF-1α表达的关系.方法 56只雄性SD大鼠随机分为7组:空白对照组(n=8)、假手术组(n=8)、AP模型组(n=8)、wortmannin预处理组(n=8)、rapamycin预处理组(n=8)、wortmannin+rapamycin预处理组(n=8)和溶剂对照组(n=8).用逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠制备大鼠AP模型,wortmannin预处理组、rapamycin预处理组、wortmannin+rapamycin预处理组分别于AP模型复制前30 min腹腔注射wortmannin、rapamycin、wortmannin+rapamycin DMSO/PBS溶液,溶剂对照组仅注射DMSO/PBS溶液.模型复制成功后6 h处死大鼠取胰头部胰腺组织,应用Western blot检测HIF-1α、Akt、p-Akt、p70~(s6k)、p-p70~(s6k)蛋白的表达.结果 Akt、p70~(s6k)蛋白在胰腺组织中表达稳定,各组间差异无统计学意义(P>0.05),HIF-1α、p-Akt、p-p70~(s6k)蛋白在空白对照组和假手术组中均有极少量阳性表达,两组间差异无统计学意义(P>0.05).AP模型组HIF-1α、p-Akt、p-p70~(s6k)蛋白含量与空白对照组相比明显升高(P<0.01);wortmannin预处理组、rapamycin预处理组、wortmannin+rapamycin预处理组中HIF-1α、p-p70~(s6k)蛋白表达明显高于空白对照组(P<0.01),但较AP模型组明显降低(P<0.01),其中HIF-1α蛋白表达在wortmannin+rapamycin预处理组比wortmannin预处理组、rapamycin预处理组降低更明显(P<0.05).HIF-1α、p-Akt、p-p70~(s6k)蛋白含量在溶剂对照组和AP模型组之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 PI3K/Akt/mTOR信号通路阻断剂wortmannin、rapamycin能够显著降低急性胰腺炎大鼠HIF-1α的表达,PI3K/Akt/mTOR信号通路参与了HIF-1α的表达调控,PI3K/Akt/mTOR信号通路可作为AP防治中的新靶点.     

骨碎补总黄酮依赖PI3K/Akt通路与牙髓干细胞的成骨分化

背景：PI3K/Akt通路可能在骨碎补总黄酮促成骨分化作用中发挥重要调控作用。目的：观察骨碎补总黄酮对大鼠牙髓干细胞成骨分化的影响,并对PI3K/Akt通路在其中的作用进行初步探讨。方法：采用组织块消化法获得大鼠牙髓细胞,克隆化分离培养大鼠牙髓干细胞并进行鉴定。在培养体系中加入不同质量浓度（0.01,0.05,0.1g/L）的骨碎补总黄酮,观察各组细胞的碱性磷酸酶水平及钙结节形成情况,并用Western Blot法检测各组细胞磷酸化Akt的表达变化。结果与结论：分离得到的牙髓干细胞的细胞表面标志CD44和CD29呈阳性表达,而CD34表达呈阴性。骨碎补总黄酮组牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性、钙结节形成能力和磷酸化Akt蛋白相对表达量增加,较空白对照组差异有显著性意义,且随骨碎补总黄酮质量浓度的增加而升高,表现出一定浓度和时间依赖性。说明骨碎补总黄酮对大鼠牙髓干细胞成骨分化具有促进作用,且该作用可能是依赖PI3K/Akt通路所介导的。     

Tissue inhibitor of metalloproteinase-1 decreased chemosensitivity of MDA-435 breast cancer cells to chemotherapeutic drugs through the PI3K/AKT/NF-кB pathway

TIMP-1 is well known to be capable of inhibiting apoptosis. Elevated levels of TIMP-1 in tumor tissue have been shown to be strongly associated with a poor response to chemotherapy. In this study, using conventional cytotoxic drugs commonly used in the treatment of breast cancer, we investigated how TIMP-1 influenced the efficacy using breast cell lines. Our data demonstrated that overexpression of TIMP-1 could significantly decrease the sensitivity of MDA-435 breast cancer cells to epirubicin and paclitaxel. TIMP-1 can potently activate phosphatidylinositol 3-kinase (PI3 K)/Akt and nuclear factor-kappaB (NF-кB) signaling. Furthermore, the TIMP-1-induced attenuation of the effect of epirubicin and paclitaxel was reversed by the PI3K/Akt chemical inhibitor LY294002 and the NF-кB inhibitor pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC), showing that the PI3 K/Akt and NF-кB signaling pathway was involved in the TIMP-1-induced effect on chemoresistance. Taken together, our results indicate that TIMP-1 decreased chemosensitivity through the PI3 K/Akt/NF-кB signal transduction pathway in MDA-435 breast cancer cells.     

传代次数对人胶质瘤U87细胞系生物学特性的影响

目的 探索不同传代次数对人胶质瘤U87细胞系生物学特性的影响及其分子机制。 方法 以两种不同传代次数的U87（I）、U87（II）为研究对象,使用MTT细胞增殖实验、Transwell小室迁移实验及Boyden小室侵袭实验分别检测U87细胞的增殖、迁移和侵袭能力;使用Western Blot技术检测U87（Ⅰ）及U87（Ⅱ）的CTHRC1, FOXM1, PLOD2, MMP9, TGF-β, E-cadherin, Slug, Snail, Vimentin, PI3K, p-PI3K, Akt, p-Akt的表达量差异。 结果 U87（Ⅰ）较U87（Ⅱ）更容易形成网状结构,有更强的侵袭能力,但在增殖和迁移能力上二者无明显差异。在EMT相关蛋白表达水平上,U87（Ⅰ）中的Snail、Vimentin的表达量较U87（Ⅱ）的高,而E-Cadherin、Slug则较低;在PI3K/Akt通路蛋白表达水平上,U87（Ⅰ）的p-Akt,Akt的表达量均低于U87（II）,而p-PI3K的表达量却高于U87（II）,两者在PI3K的表达量上无明显差异;除此之外,U87（I）中PLOD2、CTHRC1及MMP9的表达量也明显高于U87（II）,而TGF-β的表达量则低于后者。 结论 随着传代次数的增加,U87细胞在侵袭能力以及多个促癌基因表达上发生了变化,这可能造成分子机制研究的前后结果不一致,降低结果的可信程度,因此研究人员在进行细胞系实验时,应尽可能在短时间内,使用同一批次细胞完成生物学特性、分子机制研究,以减少传代次数对肿瘤细胞系生物学特性以及基因表达的影响。       

pI3K、p-Akt和PTEN在鼻咽癌中的表达及意义

目的观察鼻咽癌（NPC）组织中pI3K、p-Akt和PIEN表达,探讨它们在鼻咽癌发生中的作用。方法应用免疫组化方法检测60例NPC组织和23例鼻咽部慢性炎症组织中pI3K、p-Akt和PTEN的表达。结果NPC与慢性炎症组pI3K的表达率分别为86．7％（52160）和60．9％（14／23）（P〈0．05）;p-Akt表达率分别为76．7％（46／60）和47．8％（11／23）（P〈0．05）;PIEN的表达率分别为41．7％（25160）和65．2％（15／23）（P〈0．01）。pI3K／p-Akt表达率NPC组明显高于慢性炎症组;PTEN表达率NPC组明显低于慢性炎症组,二组表达均与PTEN表达呈负相关。结论pI3K／Akt信号通路的激活、PrEN的抑制,可能在鼻咽癌的发生中起重要作用。     

重组人促红细胞生成素与骨髓间充质干细胞的迁移及黏附☆

背景:促红细胞生成素可促进内皮祖细胞的增殖分化并增强其黏附性。目的:观察重组人促红细胞生成素干预对人骨髓间充质干细胞迁移和黏附能力及相关细胞信号传导通路的影响。方法:体外培养人骨髓间充质干细胞,使用重组人促红细胞生成素干预第6代人骨髓间充质干细胞。分别用PI3K/Akt通路特异抑制剂Ly294002或p38MAPK通路特异激动剂anisomycin或ERK1/2通路特异抑制剂U0126预处理。结果与结论:重组人促红细胞生成素可使人骨髓间充质干细胞的PI3K/Akt通路磷酸化水平升高,抑制p38MAPK通路磷酸化水平,对人骨髓间充质干细胞的ERK通路和总Akt、总p38MAPK水平无明显影响。重组人促红细胞生成素作用组中迁移细胞数目显著高于对照组(P<0.01),黏附细胞数亦明显增加(P<0.01),PI3K/AKT通路特异抑制剂Ly294002预处理后重组人促红细胞生成素对迁移能力的作用消失,p38MAPK通路特异激动剂anisomycin预处理对两种作用影响均不明显。提示重组人促红细胞生成素具有增强人骨髓间充质干细胞迁移和黏附能力的作用,其增强迁移能力的作用与激活人骨髓间充质干细胞的PI3K/Akt通路有关,但是它对黏附能力的作用与PI3K/Akt和p38MAPK通路均无关。     

Tamoxifen reduces P-gp-mediated multidrug resistance via inhibiting the PI3K/Akt signaling pathway in ER-negative human gastric cancer cells

Multidrug resistance (MDR), mediated by overexpression of drug efflux transporters such as P-glycoprotein (P-gp), is a major problem limiting successful chemotherapy of gastric cancer. Tamoxifen (TAM), a triphenylethylene nonsteroidal antiestrogen agent, shows broad-spectrum antitumor properties. Emerging studies demonstrated that TAM could significantly reduce the MDR in a variety of human cancers. Here we investigated the effects and possible underlying mechanisms of action of TAM on the reversion of MDR in ER-negative human gastric cancer cells. Our results demonstrated that in MDR phenotype SGC7901/CDDP gastric cancer cells TAM dramatically lowered the IC₅₀ of CDDP, 5-FU and ADM, increased the intracellular Rhodamine123 accumulation and induced G0/G1 phase arrest, while G2/M phase decreased accordingly. Furthermore, at the molecular level, TAM substantially decreased the expression of P-gp, p-Akt and the Akt-regulated downstream effectors such as p-GSK-3β, p-BAD, Bcl-XL and cyclinD1 proteins without affecting the expression of t-Akt, t-GSK-3β, t-BAD proteins in SGC7901/CDDP cells. Thus, our findings demonstrate that TAM reverses P-gp-mediated gastric cancer cell MDR via inhibiting the PI3K/Akt signaling pathway.     

2-甲氧基雌二醇诱导K562细胞凋亡及机制研究

本研究探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME2）对K562细胞的诱导凋亡作用及其机制。采用不同浓度2-ME2处理K562细胞,MTT法检测K562细胞的增殖活性,DNA琼脂糖凝胶电泳和Annexinv／PI双染色法检测K562细胞的凋亡效应,流式细胞术检测细胞线粒体膜电位的变化,RT-PCR和Western blot方法分别检测相关基因mRNA和／或蛋白的表达变化。结果表明：2-ME2抑制K562细胞增殖呈时间和剂量依赖性;48小时的半数抑制浓度（IC。）为2μmol／L;2μmol／L2-ME2作用于K562细胞24、48、72小时,DNA凝胶电泳分析可见典型DNA梯形条带;Annexinv／PI双染色法检测显示,细胞凋亡率分别为13．78％、22．32％和29．43％,而对照组凋亡率仅为1．78％（P〈0．05）;1、2和4μmol／L2-ME2分别处理K562细胞24小时,流式细胞术检测显示细胞线粒体膜电位下降;2μmol／L2-ME2处理K562细胞24、48和72小时,K562细胞中bcr／abl、bcl-2mRNA表达下调,而baxmRNA表达上调,Bcl-2、procaspase-3、procaspase-9、PARP（116 kD）和p-Akt蛋白表达下调,胞浆Cyto-C和PARP活性片段（85kD）表达上调,而对总Akt蛋白表达无影响。结论：2-ME2通过升高bax／bcl-2比值降低线粒体膜电位、促使细胞色素C（Cyto-c）释放入胞浆、触发K562细胞的线粒体凋亡途径,活化caspase-3,导致K562细胞凋亡并抑制其增殖;通过下调bcr／ab1 mRNA表达以阻断P13K／Akt信号通路也参与了该过程。