日本血吸虫病流行区HBV与血吸虫感染相关性血清流行病学调查

目的 了解血吸虫病流行区HBsAg人群分布规律及其与血吸虫感染的相关性。方法 在安徽省一中度血吸虫病流行村，采用病原学方法（Kato-Katz法，二送六检）和血清学方法（ELISA法、IHA法串联筛检方案）进行血吸虫感染情况检测，同时平行检测HBsAg（ELISA法），并进行相关个案调查。结果 1）居民HBsAg阳性率11．21％（105／937），其中男性12．38％（50／404），女性10．32％（55／533），性别间差异无显著性（wald=1．545，P=0．214）；25-34岁及以上年龄组HBV感染的危险度（OR）是5～14岁组的8．852～10．5ll倍（P均d0．001）；2）血吸虫抗体阳性率与HBsAg携带率年龄性别分布曲线走向基本一致，有随年龄增大而上升趋势；≥25岁居民血吸虫抗体阳性率、粪检阳性率、HBsAg携带率分别在30％、3．13％和10％以上；3）慢性血吸虫病患者与非血吸虫病患者HBsAg携带率分别为7．69％和9．96％，HBsAg平均A值分别为0．180（一0．005，0．364）和0．234（0，141，0．327），差异无显著性（P均〉0．05）。血吸虫抗体阳性与阴性者HBsAg携带率分别为12．26％、10．66％，HBsAg平均A值分别为0，246（0，166，0．327）和0．241（O．182，0．301），差异无显著性（P均〉0．05）。结论 本研究未发现HBV与血吸虫感染有相关性，但≥25岁居民血吸虫合并HBV感染的潜在威胁不能忽视。     

卵黄抗体IgY检测血吸虫病人循环抗原的初步研究

目的 探讨抗可溶性虫卵抗原（SEA）卵黄抗体（IgY）检测血吸虫循环抗原的应用价值。方法以纯化的鸡IgY作为捕捉抗体,以酶标抗SEA单克隆抗体NP28-5B为检测抗体的双抗体夹心酶联免疫吸附试验法（S-ELISA）检测急、慢性血吸虫病人和健康人血清,并与常规检测抗体的酶联免疫吸附试验法（SEA-ELISA）作比较。结果S-ELISA测得SEA浓度（y）与吸光度（A450）值（x）呈明显的正相关（y=459．22x-108．14,r=0．9481）。急性血吸虫病人循环抗原的阳性率为100．00％（9／9）,慢性血吸虫病人循环抗原的阳性率为84．44％（38／45）,健康人的特异性为96．00％（48／50）。两种方法对血吸虫病的检出率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论S-ELISA具有较好的敏感性和特异性,可用于血吸虫病免疫诊断。     

纯化31/32kDa抗原和成虫粗抗原诊断日本血吸虫病的比较

用纯化的日本血吸虫成虫３１／３２ｋＤａ抗原（Ｓｊ３１／３２）与成虫粗抗原（ＡＷＡ）对不同类型日本血吸虫病患者血清抗体进行检测，结果３种不同类型（急性、慢性和晚期）血吸虫病患者血清抗Ｓｊ３１／３２抗体水平（ＯＤ值）分别为２．７７±０．２５、２．６７±０．３０和２．４６±０．１９（Ｐ＜０．０１），抗ＡＷＡ抗体水平分别为３．２７±０．１６、３．２８±０．１６和３．２０±０．１７（Ｐ＞０．０５）。慢性血吸虫病患者血清抗Ｓｊ３１／３２抗体与每克粪便虫卵数（ＥＰＧ）之间有高度的相关性（ｒ＝０．９３），明显高于抗ＡＷＡ抗体与ＥＰＧ的相关性（ｒ＝０．４５）。结果表明，利用纯化Ｓｊ３１／３２诊断血吸虫病能较好地区别不同的感染类型和感染度。     

金标免疫斑点法检测血吸虫抗体的应用价值

目的 了解金标免疫斑点法在山丘型血吸虫病流行区的血清流行病学和临床应用价值。方法 对血吸虫病流行区有治疗史者48例，无治疗史者104例及非流行区46例，同时用金标免疫斑点法和IHA法查血吸虫抗体；用孵化法查血吸虫毛蚴，用诊断指标进行评价、比较。结果 与IHA法比较，金标免疫斑点法的灵敏度是98．5％，特异度是68.9％，阳性预告值是61．3％；与孵化法比较，其灵敏度是100％，特异度是56．1％，阳性预告值是32．1％；而IHA法对孵化法的灵敏度是100%，特异度是80．5％，阳性预告值为51．5％。结论 金标免疫斑点法灵敏度高，但特异度和阳性预告值偏低。可作为血吸虫病筛查方法之，但不能作为血吸虫病确定诊断的依据。     

Real-time PCR法用于日本血吸虫感染宿主血清DNA的定量检测及其感染度的评价

目的以日本血吸虫高度重复序列-逆转录转座子SjR2为靶序列,建立TaqMan实时定量PCR法检测宿主血清中的日本血吸虫DNA用于评价感染度。方法以real-timePCR法检测不同感染度的家兔模型血清DNA。结果该法具有高度的敏感性和特异性,可以检测到44．7拷贝的重组质粒DNA。在感染家兔后的3d到7周血清中均能检测到血吸虫DNA,不同感染度早期检测的时间节点及其检测阈值分别为,家兔感染30条尾蚴（EPG=14）需在感染后2周才能检测到目的DNA,其含量为119．03拷贝,感染50条尾蚴（EPG=24）、感染100条尾蚴（EPG=48）则在感染后1周可检测到目的DNA,其含量分别为54．36拷贝和72．24拷贝,在家兔感染200条尾蚴（EPG=97）、感染500条尾蚴（EPG=232）最早在感染后3d即可检测到目的DNA,其含量分别为60．34拷贝和142．47拷贝。日本血吸虫感染宿主血清DNA水平与感染度呈正相关,即血清DNA浓度随感染度的增大而上升。结论本研究所建立的real-timePCR法可定量检测血清DNA动态变化并对日本血吸虫病诊断及感染度的评价具有潜在的应用价值,为日本血吸虫病诊断与疗效考核提供了新方法。     

酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血吸虫病患者的IgM及IgE抗体

最近证明在ELISA试验中联合使用血吸虫尾蚴和成虫抗原可以从血清学上区别急性或慢性血吸虫病患者。急性感染患者血清中对尾蚴抗原的IgG抗体多于成虫抗原,而在慢性感染患者则相反。IgM抗体的产生是宿主对许多急性感染反应的特征,蠕虫感染免疫反应的特征是IgE抗体的产生,因之作者探索ELISA试验对检测确诊为急性或慢性血吸虫病患者的特异性IgM及IgE抗体的用途,并对这些抗体水平和尾蚴/成虫     

天津某医院严重急性呼吸综合征暴发期间血清流行病学调查

目的 研究本院严重SARS暴发流行后，疫源地不同人群血清SARS冠状病毒（SARS-CoV）抗体水平及其产生和变化规律；探讨人群SARS-CoV隐性感染和IgG抗体的保护作用。方法 采用血清流行病学法，联合运用ELISA和免疫荧光试验（IFA），调查疫情暴发流行期间及流行后，疫源地内非SARS人群血清抗体水平变化；定性研究SARS患者病后6周内IgM、IgG抗体产生和变化规律；动态观察SARS患者康复期82周内IgG抗体水平变化规律。结果 各100例疫源地一般人群和非疫源地对照人群血清SARS-CoV IgG抗体ELISA抽样检测均为阴性；487例SARS高危人群血清SARS-CoV IgG抗体ELISA检测阳性率为0．41％，经IFA复核后均为阴性；疫源地内非SARS人群IgG抗体A值水平在疫情流行后高于流行期间，差异有统计学意义（P〈0．05）；SARS患者病后1～6周血清抗体IgM和IgG的阳性检出率分别为7．7％、40．0％、57．8％、88．2％、76．6％、57．1％和0、23．1％、48．4％、65．4％、77．8％、100．0％；SARS患者康复期血清IgG抗体A值逐渐增高，病后第22周达到高峰，此后缓慢下降，第82周时仍维持较高水平，下降趋势减缓。结论 SARS可能不存在隐性感染者；绝大多数SARS患者在急性期或恢复早期的血清中存在IgM抗体，其出现较早，消失也较快，抗体IgG出现稍晚，但在血清中存在时间较长，达到高峰后消退缓慢，提示该抗体可能具有保护作用。     

日本血吸虫抗体检测试剂盒（IHA法）早期诊断效果的初步评估

目的  初步评估日本血吸虫抗体检测试剂盒（IHA法）的早期诊断效果。 方法  建立日本血吸虫感染家兔模型,日本血吸虫抗体检测试剂盒（IHA法）及基于该试剂盒所使用的血吸虫天然蛋白抗原X的ELISA法 (抗原X-ELISA法) 检测感染前及感染后第1、2、3、4、5、6周兔血清,并比较两种方法的早期诊断效果。 结果  日本血吸虫抗体检测试剂盒（IHA法）检测感染前及感染后第1、2周兔血清的阳性率均为0,从感染后第3w开始阳性率均达到100%;抗原X-ELISA法检测日本血吸虫感染前正常兔血清的假阳性率为30.77%,检测感染后第1、2周兔血清的阳性率分别为0和16.67%,从感染第3周开始阳性率也达到100%。两种方法检测同一时间点兔血清的阳性率差异均无统计学意义（P＞0.05）。 结论  日本血吸虫抗体检测试剂盒（IHA法）在早期诊断日本血吸虫病方面具有一定的潜在价值。     

感染鼠肝脏切片免疫酶染色法诊断日本血吸虫病的初步研究

以感染日本血吸虫小鼠肝脏肉芽肿切片,应用辣根过氧化物酶标记抗体间接染色法检测62例急性、慢性和晚期血吸虫病人及50例正常人。结果表明,该法对急性与慢性早期血吸虫病患者血清中特异性抗体的检出有较高的敏感性和特异性。     

检测外周血特异性结核分枝杆菌抗体对活动性结核病的诊断价值研究

目的研究外周血浆细胞分泌特异性结核分枝杆菌抗体对活动性结核病的诊断价值。方法纳入2013年4月至7月期间深圳市第三人民医院肺科门诊活动性结核病患者;健康对照组人员来自体检科门诊志愿者,分为3个组：活动性结核病组（104例）、结核分枝杆菌（Mtb）潜伏感染组（26例）和健康对照组（33名）。分离其外周血单个核细胞（PBMCs）。体外培养4d后收集培养上清液,用ELISA法和蛋白免疫印迹法,ELISA和蛋白免疫印迹法检测外周血浆细胞分泌的特异性结核分枝杆菌抗体;检测各组收集的PBMCs培养上清液中的特异性结核分枝杆菌抗体,比较各组间的差异。所有数据均使用GraphPadPrism5．0进行统计学分析,用受试者工作特征（ROC）曲线评价ELISA法检测的诊断价值,得出敏感度、特异度;多组间的比较采用Kruskal—Wallis检验;两组间比较采用Dunnmultiplecomparison检验;蛋白免疫印迹法用四格表的卡方检验;以P〈0．05为差异有统计学意义。结果ELISA法检测活动性结核病组特异性结核分枝杆菌抗体的A450nm值（0．593±0．206）高于Mtb潜伏感染组（0．342±0．152）和健康对照组（0．246±0．121）,差异有统计学意义（H=77．27,P〈0．001）。特异性结核分枝杆菌抗体区分活动性结核病患者和Mtb潜伏感染者、健康对照者曲线下面积（AUC）分别为0．857、0．944,当诊断界限值为0．42时,其区分活动性结核病和Mtb潜伏感染的敏感度为77．9％（81／104）,特异度为80．8％（21／26）;区分活动性结核病和健康人的敏感度为77．9％（81／104）,特异度为93．9％（31／33）。蛋白免疫印迹法检测活动性结核病和健康人的敏感度、特异度和准确性分别为79．2％（61／77）、100．0％（11／11）、81．8％（72／88）（x2=24．8,P〈0．001）。结论ELISA法和蛋白免疫印迹法检测外周血浆细胞分泌特异性结核分枝杆菌抗体诊断活动性结核病特异度高,可以作为临床结核病实验诊断的辅助方法。     

单克隆抗独特型抗体NP30用于日本血吸虫病血清学诊断的研究

本研究用单克隆抗独特型抗体NP30与日本血吸虫肠相关抗原(GAA)和可溶性虫卵抗原(SEA)检测了702份不同病期及正常人群中的血清抗体,结果显示,在急性感染时,NP30抗体的检出率为98％,与GAA(94％)和SEA(98％)的无差别。在慢性感染时NP30抗体的检出率为87％,与GAA(86％)的无差别,但低于SEA(98％)的。在正常人群中,上述3种的抗体假阳性率均为3％左右,无差别。NP30的抗体滴度几何均数在急性血吸虫感染时高于GAA的,低于SEA的,在慢性感染时低于后两者,提示NP30的抗体在血吸虫感染期间出现比较早,消退较快。上述结果提示,NP30可以替代虫源性抗原,用于日本血吸虫病诊断。     

Schistosomiasis mansoni: immunoblot analysis to diagnose and differentiate recent and chronic infection.

One hundred seven patients classified into three different groups (11 with acute schistosomiasis, 58 with chronic schistosomiasis, and 38 children with high IgM-specific antibody titers against schistosome gut-associated antigens living in an endemic schistosomiasis area) were studied by immunoblotting for the presence of IgG, IgM, and IgA antibodies against Schistosoma mansoni soluble adult worm antigen preparation. We used sera from 15 individuals infected with various intestinal parasites, as well as sera from 19 uninfected individuals, as controls. An immunogenic fraction with a molecular weight of 31-32 kD (Sm31/32) was the most frequently recognized by the different antibody isotypes. In the group with acute disease, this fraction was recognized by IgG and IgM antibodies of all patients, and by 10 (90.9%) of 11 samples for IgA antibodies. Approximately 98% of the patients with chronic infections had IgG antibodies against Sm31/32, but only about 10% had IgM and IgA antibodies against this fraction. The IgG immunoblot profiles of the children from the endemic area were similar to those obtained for the group with acute schistosomiasis. This observation suggests recent infection of these children. Our data show that the Sm31/32 protein fraction is highly immunogenic and may be a useful serologic marker for diagnosing and differentiating between acute and chronic schistosomiasis infection.     

Immunoblot analysis of Schistosoma japonicum egg antigens with sera from patients with acute and chronic schistosomiasis japonica

Humoral immune responses of IgG, IgM, IgA, IgE and IgG subclass antibodies to Schistosoma japonicum egg antigens were determined by immunoblotting with serum samples from individuals in China with acute (n=24) or chronic (n=35) schistosomiasis. In general, IgM, IgA, and IgE in sera from acute patients exhibited strong binding to antigens but binding was much weaker in chronic cases. Reaction of IgG4 of chronic cases was stronger than that of IgG4 of acute cases. The recognition profile of each antibody isotype in sera was analyzed for 11 major antigen molecules (antigens with apparent molecular weights of 82, 76, 61, 57, 53, 46, 40, 32, 27, 10 and less than 6.5 kDa). Except for the 10 kDa molecule, they were well-recognized by IgA and IgE in sera of acute cases. In other combinations of antibody class and clinical phase, recognition patterns against these molecules differed among individuals. Notably, the 10 kDa molecule was specifically recognized by total IgG and IgG4 in sera from most of the chronic patients, but in sera from only one acute case. This result suggests that the 10 kDa molecule is one of the major target antigens of IgG4 and may be useful as a marker antigen to characterize the clinical phases of S. japonicum infection.     

BALB/c小鼠感染日本血吸虫后血清中SEA特异性抗体的动态观察

目的 观察BALB/c小鼠感染日本血吸虫后18周内血清中可溶性虫卵抗原 （SEA） 特异性IgG、 IgM抗体水平的动态变化。方法 尾蚴感染BALB/c小鼠, 感染2周后开始每周采血并分离血清, 以SEA为抗原, 通过ELISA测定不同感染时间血清IgG、 IgM值; 通过免疫印迹法检测不同感染时间小鼠血清中SEA特异性IgG、 IgM抗体条带。结果 ELISA检测结果表明感染小鼠血清IgG水平在感染5、 6、 9、 11周上升明显; IgM在感染5周和9周时上升明显。免疫印迹试验结果表明感染血吸虫4周后, 小鼠血清中开始出现140、 180、 210 kDa蛋白特异性IgG抗体; 感染5周后出现43、 50 kDa强反应IgG特异性抗体带; 感染6周后在60～130 kDa处出现 IgG特异性弥散带; 感染9周后出现38、 73 kDa 蛋白特异性IgG条带, 其中38 kDa 条带较弱, 随感染时间延长, 条带反应逐渐增强, 直至感染18周; 感染11周后新增26、 32、 35、 80 kDa特异性IgG条带, 并且在12周后增强。感染3周后出现100、 140、 180 kDa IgM特异性反应条带, 感染9周后出现73 kDa特异性IgM强反应条带及 38、 43、 50 kDa弱反应IgM抗体带, 后3条蛋白条带随感染时间延长逐渐变强。 结论 SEA中不同组分抗原对感染宿主的免疫调节具有时间特异性, 其中43、 50、 100、 140、 180 kDa具有早期诊断价值; 73 kDa 既可用于急性血吸虫病诊断, 也可用于慢性血吸虫病诊断; 28、 32、 35、 38、 80 kDa抗原既可作为慢性血吸虫感染的优势抗原, 同时也可能具有一定的抗血吸虫感染作用, 可作为疫苗开发的候选抗原。     

单克隆抗体Dot-ELISA检测血吸虫病循环抗原的研究.Ⅰ.

将血吸虫肠相关阴极抗原的单克隆抗体3D8A联结过氧化物酶后用于直接法Dot-ELISA检测急性、慢性与晚期血吸虫病人血清中循环抗原,阳性率分别为90.6、83.2及30.7％。正常人血清及非寄生虫感染病人血清均未见阳性反应。EPG>100组血清阳性率及抗原水平高于EPG<100。慢性血吸虫病人经吡喹酮治疗后一年,粪检阴性者大部分血清抗原转为阴性;粪检阳性者血清检查仍为阳性。结果表明,肠相关阴极抗原单克隆抗体3D8A能用于Dot-ELISA检测各期病人血清中循环抗原,并能反映病人感染度与药物治疗效果。     

双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫循环抗原的研究

目的建立双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫循环抗原(Cag)。方法采用两株抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单克隆抗体,应用双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫CAg,并摸索该法的最佳实验条件。对感染大鼠、小鼠、疑似和确诊广州管圆线虫病病例血清进行检测,评价方法的敏感性;对日本血吸虫、肺吸虫、旋毛虫、囊虫病人血清进行交叉反应试验,评价方法的特异性。结果10μg/ml单抗包被,酶标记单抗1∶1 600稀释为最佳工作浓度。利用该法检测不同血清广州管圆线虫循环抗原的敏感性为84.2%~87.2%,特异性为100%。结论建立的双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫循环抗原具有敏感性高、特异性强和经济、简便易行等优点。     

血吸虫病快速早期诊断试纸条的研究

目的探索一种血吸虫病快速早期诊断的试纸条检测方法.方法用标记胶体染料的可溶性尾蚴抗原(SCA)作为检测抗原,建立用于血吸虫病早期诊断的简便快速的可溶性尾蚴抗原胶体染料试纸条法(SCA-DDIA),并与可溶性虫卵抗原胶体染料试纸条法(SEA-DDIA)比较,检测感染家兔早期血清和急、慢性血吸虫病人血清中抗血吸虫抗体,并检测卫氏并殖吸虫病、华支睾吸虫病、姜片虫病人和健康人血清.结果早期感染血吸虫家兔感染后首次检出阳性的平均时间为22 d,全部家兔检出阳性为30 d,均早于SEA-DDIA法.检测急、慢性血吸虫病人的敏感性分别为100.0%、93.3%,检测非血吸虫病流行区健康人的特异性为99.0%,与卫氏并殖吸虫病、华支睾吸虫病、姜片虫病人的交叉反应率分别为26.3%、0、0.其敏感性、特异性和交叉反应率与SEA-DDIA法相似.结论 SCA胶体染料试纸条法是一种快速简便的血吸虫病早期诊断方法,并具有较高的敏感性和特异性.     

日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)及其单克隆抗体用于诊断的价值

目的探讨纯化的日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)及其相应单克隆抗体对日本血吸虫病的诊断价值。方法利用纯化的rSj14-3-3抗原和可溶性虫卵抗原(SEA)间接ELISA方法检测急、慢性日本血吸虫病患者血清中特异性抗体;以纯化的抗rSj14-3-3单克隆抗体包板,以兔抗rSj14-3-3多抗和酶标羊抗兔多抗为检测系统的酶标夹心法检测患者血清中的循环抗原。结果用rSj14-3-3检测急、慢性血吸虫病患者血清中特异性抗体的阳性率分别为100%和933%,用抗rSj14-3-3单克隆抗体检测循环抗原的阳性率分别为100%和956%,两者联合检测的总阳性率分别为100%和978%;经治疗后2、4、6、12个月,抗体转阴率分别为387%、548%、75%、90%,血清循环抗原转阴率分别为177%、419%、55%、85%,两者联合检测的总转阴率分别为452%、63%、85%、90%;对正常人血清的检测未见假阳性反应,与华支睾吸虫病和钩虫病患者血清出现轻微的交叉反应;用SEA检测抗体的阳性率分别为978%和956%,与正常人及华支睾吸虫病和钩虫病患者血清均有不同程度的交叉反应,治疗后2、4、6、12个月阴转率分别为32%、65%、125%、15%。结论rSj14-3-3检测急慢性血吸虫病患者血清中的特异性抗体和利用抗rSj14-3-3单克隆抗体检测循环抗原具有高度的特异性和敏感性,抗原和单抗可规模化     

金标免疫渗滤法(DIGFA)快速检测血吸虫循环抗原的研究

目的　建立一种简便、快速的血吸虫病诊断方法。方法　在已建立的检测血吸虫抗体的ＤＩＧＦＡ基础上,以抗血吸虫重组蛋白ＳＶＬＢＰ多抗为捕捉抗体,金标抗ＳＥＡ多抗为覆盖抗体,建立快速检测病人血清中血吸虫循环抗原的双夹心ＤＩＧＦＡ。结果　用该法检测了急性血吸病人血清３０ 人份和慢性血吸病人血清３８ 人份,其阳性检出率分别为１００ ％ 和５２－６ ％ ;１２０ 人份流行区健康人血清全为阴性;１００ 人份非流行区健康人群血清的阴性符合率为１００％ ,与１０ 例华支睾病人血清无交叉反应;１５ 例肺吸虫病人血清有１ 例阳性,交叉反应率为６－７ ％ ;与双夹心ＥＬＩＳＡ的符合率为９７－４％ ,经χ２ 检验表明两法检测效果无显著性差异。结论　用ＤＩＧＦＡ检测血吸虫循环抗原具有较高的敏感性和特异性,并且方法简便、快速、不需特殊仪器设备,有广阔的应用前景。     

金标渗滤法快速检测血吸虫循环抗原的现场应用研究

将抗重组蛋白ＳＶＬＢＰ－ＩｇＧ用于ＤＩＧＦＡ检测２２２１例血清中血吸虫循环抗原,其中急性血吸虫病人血清７０份,慢性血吸虫病人血清３０７份,循环抗原检出率分别为１００％和６８．４％。非流行区健康人血清２００份,未见阳性反应。除肺吸虫外,与其它寄生虫或非寄生虫感染病人血清无明显交叉反应。用ＤＩＧＦＡ单盲法检测２批血清,结果显示对急性血吸虫病人的敏感性均为１００％;对慢性血吸虫病人的敏感性分别为６９．４