SLFN11基因表达对SW480细胞 L-OHP敏感度的影响

目的 探讨SLFN11基因表达对奥沙利铂抑制结直肠癌细胞株SW480生长的影响。方法 通过SLFN11基因沉默(siRNA)降低SLFN11基因表达水平,并通过RT-qPCR和Western blot法方法鉴定SLFN11基因mRNA和蛋白表达水平;利用MTT实验验证奥沙利铂对SW480细胞株生长增殖的影响;通过流式细胞仪检测SW480细胞周期及细胞凋亡情况。结果 siRNA干扰可特异性地显著降低SW480细胞株SLFN11基因的表达和蛋白表达水平,MTT实验发现SLFN11基因沉默组较基因未干扰组,奥沙利铂对SW480细胞株的生长抑制明显减低(P<0.05),而且减弱奥沙利铂对SW480细胞株的细胞凋亡的诱导(P<0.01),减少G₂/M期细胞周期阻滞(P<0.01)。结论 SLFN11基因低表达可以降低SW480细胞对奥沙利铂的敏感度,可能预测奥沙利铂治疗结直肠癌细胞的疗效。     

奥沙利铂诱导结肠癌细胞株SW480凋亡过程中caspase-8的活化

目的 探讨奥沙利铂诱导结肠癌细胞株SW480凋亡过程中半胱天冬酶亚类8(caspase-8)的变化.方法 以不同浓度(0,0.03,4.0,100 μg/ml)的奥沙利铂干预体外培养的人结肠癌细胞株SW480,分别于24,36,48 h后,应用MTT法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,Western-blot分析caspase-8酶原的变化,半定量RT-PCR检测caspase-8 mRNA水平的改变,肽核酸(pNA)标记底物的比色法检测caspase-8的相对活性.结果 奥沙利铂对结肠癌细胞株SW480生长增殖具有明显抑制作用,其效应呈浓度和时间依赖性.流式细胞仪分析显示SW480细胞呈G2/M期阻滞;奥沙利铂浓度为0,0.03,4.0,100 μg/ml时SW480细胞的凋亡率分别为(0.15±0.09)%、(0.43 ±0.17)%、(6.92 ±0.81)%、(11.76 ±1.25)%.用不同浓度的奥沙利铂处理SW480细胞株24 h,caspase-8酶原的表达随药物浓度的增加而减少,caspase-8 mRNA水平呈浓度依赖性的增加(P＜0.01).用4.0 μg-ml奥沙利铂分别处理细胞0.5,2,6,12,24,36 h,caspase-8活性于2 h开始升高,12 h达高峰(P＜0.01);用不同浓度的奥沙利铂处理细胞12 h,caspase-8活性呈浓度依赖性的升高(P＜0.01).结论 奥沙利铂能够明显抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖,诱导SW480细胞发生G2/M期阻滞,其作用机制可能与caspase-8表达上调有关.     

TRAIL联合奥沙利铂对结肠癌细胞株SW480凋亡的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合奥沙利铂(oxaliplatin)对结肠癌细胞株SW480凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法 应用MTT法分别检测TRAIL组、奥沙利铂组及联合组的细胞抑制率,Annexin Ⅴ-FITC/PI染色,流式细胞仪检测SW480细胞的凋亡率.结果 SW480细胞对TRAIL不敏感,对奥沙利铂相对敏感,TRAIL与亚毒性浓度的奥沙利铂联用对细胞的杀伤作用显著增强;亚毒性浓度的TRAIL、奥沙利铂及联合组作用SW480细胞24h的抑制率分别为8.62%,60.51%,81.28%;凋亡率分别为2.43%,11.76%,18.37%,流式细胞学证实这种杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡实现.结论 TRAIL能显著提高奥沙利铂对结肠癌细胞的杀伤作用,此协同作用主要是通过诱导肿瘤细胞凋亡来实现.     

STAT3-siRNA对人结直肠癌细胞SW480的干涉作用

【目的】应用经小干扰RNA（shortinterfereRNA，smNA）表达盒介导的RNAj对结直肠癌细胞中的STAT3基因进行干涉作用以研究STAT3-siRNA对STAT3基因表达阳性的结直肠癌细胞凋亡的影响。【方法】用脂质体转染试剂将STAT3-siRNA表达盒（STAT3-siRNA expression cassettes，STAT3-SECs）体外转染至人结直肠癌SW480细胞及人成纤维细胞中。于48h后收集细胞，先经荧光染色方法观察细胞表象变化，再通过流式细胞仪检测人结直肠癌SW480细胞凋亡情况，最后分别提取细胞总RNA，用RT—PCR测定STAT3基因在mRNA水平的表达。【结果】SW480STAT3-SECs组的细胞可见凋亡小体，出现明显的凋亡现象，而其它实验组均未出现明显的凋亡现象。流式细胞术结果显示SW480STAT3-SECs组中凋亡细胞百分比由0．2％增加至26．0％；S期细胞比率由32．3％下降至9．2％。在mRNA水平上，SW480STAT3-SECs组细胞的STAT3基因表达减少了（62．16±12．50）％，显著低于SW480对照组（P〈0.01）。【结论】应用RNAi技术沉默STAT3基因可以降低人结直肠癌SW480细胞中STAT3的表达，诱导细胞的凋亡。     

hTR反义寡核苷酸对结直肠癌SW480细胞的凋亡及凋亡诱导因子表达的影响

目的 探讨封闭人端粒酶RNA功能区的反义寡核苷酸(human telomerase RNA antisense oligonucleotide,hTR ASODN)对结直肠癌SW480细胞凋亡及凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)表达的影响.方法通过脂质体将hTR ASODN 1次/d,连续3 d转染入人结直肠癌SW480细胞,以未加ASODN的脂质体空白组及脂质体转染的正义组为对照.荧光显微镜观察转染情况,流式细胞仪测定转染后SW480细胞的凋亡率,RT-PCR法测定转染后AIF的表达情况.结果 hTR ASODN转染细胞后,倒置显微镜下观察各组细胞,细胞内有绿色荧光均匀分布表示转染良好.流式细胞仪测定转染24、48、72 h后,各实验组凋亡率分别为:空白组(3.07±0.11)%、(3.71±0.63)%、(4.23±0.41)%,正义组(4.28±0.41)%、(4.49±0.56)%、(5.13±0.56)%,反义组(13.11±0.32)%、(22.04±0.21)%、(16.71±0.82)%,反义组分别与空白组、正义组比较,差异有统计学意义(P<0.05).空白组、正义组、反义组光密度比值分别为(0.152 7±0.002 1)、(0.158 0±0.007 8)、(0.368 3±0.010 9),反义组分别与空白组、正义组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 hTR ASODN具有明显的促进凋亡、抗肿瘤作用.     

白首乌提取物C_(21)甾体苷对结直肠癌细胞株SW480的影响

目的:探讨白首乌提取物C_(21)甾体苷对人结直肠癌细胞株SW480生长、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:体外常规培养人结直肠癌细胞株SW480,以不同浓度的C_(21)甾体苷作用于细胞,分别培养24 h、48 h、72 h,采用溴化二甲噻唑二苯四氮法检测不同浓度的C_(21)甾体苷对人结直肠癌细胞株SW480生长的抑制作用;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Transwell小室法检测细胞的侵袭和迁移能力。结果:C_(21)甾体苷以时间和浓度依赖性抑制人结直肠癌细胞株SW480的生长,促进人结直肠癌细胞株SW480凋亡,抑制人结直肠癌细胞株SW480的侵袭和迁移。结论:C_(21)甾体苷可抑制人结直肠癌细胞株SW480的生长,该抑制作用与诱导其凋亡及降低其侵袭和迁移能力有关。     

雷公藤内脂醇对SW480细胞的生长抑制作用

目的观察雷公藤内酯醇(Tritolide,TL)对体外培养的SW480细胞(人结直肠癌细胞)的诱导分化机制,为人结直肠癌的治疗提供理论依据。方法应用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的TL对SW480细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测SW480细胞周期进程及凋亡率,相差显微镜观察不同浓度的TL对SW480细胞形态学改变,电子显微镜观察细胞超微结构的变化。结果不同浓度的TL对SW480细胞增殖均有抑制作用,具有明显的剂量依赖性,流式细胞仪结果显示,G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,细胞凋亡率升高,相差显微镜下实验组细胞贴壁不佳,细胞数减少,细胞圆缩,电子显微镜下细胞高度空化,线粒体肿胀,可见凋亡小体。结论TL对SW480细胞有明显的增殖抑制作用,阻止SW480细胞G1期向S期的转化进程并诱导SW480细胞凋亡及超微结构改变。     

罗哌卡因通过线粒体通路诱导人结直肠癌SW620细胞株凋亡的实验研究

目的探究罗哌卡因通过线粒体通路诱导人结直肠癌SW620细胞株凋亡的机制。方法体外培养人结直肠SW620细胞,使用罗哌卡因处理人结直肠SW620细胞,采用CCK-8实验检测癌细胞活力。将结直肠癌SW620细胞分为:结直肠癌细胞组、低剂量罗哌卡因组、中剂量罗哌卡因组和高剂量罗哌卡因组;参考CCK-8实验结果,分别使用20,50和100μg/mL浓度的罗哌卡因处理低、中、高罗哌卡因组的结直肠癌细胞;采用流式细胞仪检测各组细胞线粒体膜电位;使用蛋白质印迹检测凋亡蛋白Bcl-2,Bax,Caspase-3和Caspase-9表达情况;采用流式细胞仪检测结直肠SW620细胞周期及凋亡情况。结果 CCK-8结果显示随着使用罗哌卡因剂量的增加,人结直肠SW620细胞的抑制率显著升高,半数致死浓度约为:69.36μg/mL。结直肠癌细胞组细胞凋亡率为(1.52±0.11)%显著低于低、中、高剂量罗哌卡因组[(35.91±5.69)%、(46.27±6.57)%、(69.36±8.01)%; F=559.203,P0.001];相比结直肠癌细胞组,使用罗哌卡因处理各组线粒体膜电位、G2/M期细胞比例、S期细胞比例、Bax蛋白相对表达水平均显著降低,且呈剂量依赖性(P0.001);相比结直肠癌细胞组,使用罗哌卡因处理各组G0/G1期细胞比例、Bcl-2蛋白、Caspase-3蛋白和Caspase-9蛋白相对表达水平显著升高,且呈剂量依赖性(P0.001)。结论罗哌卡因可以通过线粒体途径促进人结直肠SW620细胞的凋亡,其作用机制可能与Caspase-3及Bcl-2信号传导相关。     

NVP-BEZ235对人结肠癌细胞SW480体外增殖的抑制作用及其机制探讨

目的:探讨NVP-BEZ235对人结直肠癌细胞株SW480的抑制、凋亡作用及其可能的作用机制。方法:以不同浓度的NVP-BEZ235处理体外人结直肠癌细胞株SW480,分别用MTT法、流式细胞术和Western blot法检测NVP-BEZ235对SW480细胞的增殖抑制作用、细胞凋亡率和凋亡相关蛋白的表达。结果:NVP-BEZ235对人结直肠癌细胞株SW480的生长具有显著的抑制活性,诱导其凋亡,抑制p-Akt、p-p70S6K蛋白的表达,且均与药物浓度和作用时间呈正相关。结论:NVP-BEZ235具有抑制人结直肠癌细胞株SW480的生长作用并诱导其凋亡,且机制可能是通过抑制p-Akt、p-p70S6K蛋白的表达来实现的。     

伊立替康长循环脂质体的初步生物学活性研究

目的 采用乙醇注入-硫酸铵梯度法制备伊立替康长循环脂质体,并初步考察其体外抗肿瘤的生物活性.方法 乙醇注入-硫酸铵梯度法制备伊立替康长循环脂质体,以结直肠癌细胞SW480,肝癌细胞HepG2,乳腺癌细胞MCF-7三种细胞为模型,MTT法检测伊立替康长循环脂质体对各种细胞的杀伤能力,同时采用荧光染色法,考察伊立替康长循环脂质体对乳腺癌细胞MCF-7形态及凋亡的影响.结果 与游离伊立替康溶液相比,伊立替康长循环脂质体对人直肠癌细胞SW480,肝癌细胞HepG2,乳腺癌细胞MCF-7有明显的抗肿瘤活性,能够改变MCF-7细胞的形态,促进其凋亡.结论 伊立替康长循环脂质体体外实验表明其能提高药物的抗肿瘤活性,其效果优于伊立替康注射液,体内实验有待于下一步进行.     

重组人白细胞介素17A对结肠癌细胞生长的影响及其作用机制

目的：探讨重组人白细胞介素17A （IL-17A）对结肠癌细胞生长的影响,并阐明其作用机制。方法：将结肠癌SW480细胞分为对照组和实验组,对照组细胞未经处理,实验组细胞加入50 μg·L^-1重组人IL-17A。采用CKK-8法检测2组SW480细胞增殖活性,采用ELISA法检测2组细胞中IL-17A水平,Western blotting法检测2组SW480细胞中信号传导及转录激活因子3（STAT3）和磷酸化信号传导及转录激活因子3（p-STAT3）蛋白表达水平。结果：与对照组比较,实验组细胞增殖活性明显升高（P<0.05）。与对照组比较,实验组SW480细胞中IL-17A水平、STAT3和p-STAT3蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。结论：重组人IL-17A可刺激结肠癌细胞SW480细胞的生长,其作用机制可能与激活STAT3信号通路有关。     

NK细胞联合西妥昔单抗对大肠癌细胞ADCC作用的研究

目的比较3株肠癌细胞株(LOVO、SW480、SW620)与自然杀伤(natural killer,NK)细胞、西妥昔单抗(Cetuximab)混合作用之后,NK细胞抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(antibody dependent cell cytotoxicity,ADCC),探讨Cetuximab抗肿瘤过程中ADCC的作用。方法免疫组织化学方法检测3种不同肠癌细胞系(LOVO、SW480、SW620)的EGFR表达水平;MTT法检测6种不同浓度Cetuximab作用48h后肿瘤细胞的生长抑制情况;NK细胞与Cetuximab包被的肿瘤细胞共孵育,LDH法检测NK细胞的ADCC功能变化。结果免疫组织化学结果显示,3株细胞EGFR表达:LOVO(),SW480(+),SW620(-);Cetuximab对LOVO细胞和SW480细胞的生长抑制呈剂量依赖,对SW620细胞无抑制作用;LOVO细胞和SW480细胞经Cetuximab处理后,NK细胞的ADCC作用均增强且有统计学意义(P<0.05)。结论单独的Cetuximab可抑制EGFR阳性的LOVO细胞和SW480细胞,而对EGFR阴性的SW620细胞生长抑制作用不明显,所选的2株EGFR阳性肿瘤细胞都可被Cetuximab所介导ADCC作用所抑制,高EGFR表达的肿瘤细胞更加敏感。     

苦参碱对K-ras基因突变型结肠癌细胞株增殖的抑制作用及机制研究

【目的】观察苦参碱对K-ras基因突变型结肠癌SW480细胞增殖的抑制作用及机制。【方法】以不同浓度苦参碱干预K-ras基因突变型人结肠癌SW480细胞,采用新型四唑氮盐(MTS)做比色分析测定细胞增殖,流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡,细胞划痕法观察细胞侵袭转移能力的变化,Western blotting方法检测细胞内丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路下游关键激酶MEK1/2蛋白的表达。【结果】与空白对照组比较,0.125~1 mg/m L浓度的苦参碱能显著抑制SW480细胞增殖,促进细胞凋亡,有效抑制结肠癌细胞的移行,降低MEK1/2蛋白的表达(P0.05),其作用强度随药物浓度增加有升高的趋势。【结论】苦参碱可能通过下调MAPK信号通路下游MEK1/2蛋白的表达,有效抑制SW480细胞的增殖和移行,并促进其凋亡。     

miR-26a靶向HMGA1基因对结肠癌细胞生长、侵袭和迁移的影响

目的：探讨miR-26a靶向高迁移率族蛋白1（HMGA1）基因对结肠癌细胞生长、侵袭和迁移的影响,阐明HMGA1基因是否为miR-26a的靶基因。方法：将miR-NC （对照）、miR-26a mimics （模拟物）和miR-26a inhibitor （抑制物）转染人结肠癌SW480细胞作为miR-NC组、miR-26a mimics组和miR-26a inhibitor组。RT-PCR和Western blotting法分别检测各组SW480细胞中HMGA1 mRNA和蛋白表达水平。采用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测各组SW480细胞中双荧光素酶活性,以此确定HMGA1是否为miR-26a的靶基因。采用CCK8实验检测各组细胞增殖活力,Transwell小室法检测各组细胞侵袭数和迁移数。结果：HMGA1基因是miR-26a的靶基因。与miR-NC组比较,转染24、48和72 h时miR-26a mimics组SW480细胞增殖活力明显降低（P<0.01）,而miR-26a inhibitor组细胞增殖活力明显升高（P<0.01）。与miR-NC组比较,各时间点miR-26a mimics组和miR-26a mimics+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均降低（P<0.01）,而miR-NC+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均升高（P<0.01）;与miR-26a mimics组比较,各时间点miR-26a mimics+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均升高（P<0.01）;与miR-NC+pcDNA3.1-HMGA1组比较,各时间点miR-26a+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均降低（P<0.01）。结论：HMGA1是miR-26a的靶基因。上调miR-26a表达可抑制人结肠癌SW480细胞增殖,下调miR-26a表达可促进人结肠癌SW480细胞增殖。     

百里醌对大肠癌生长和转移的抑制作用

目的探讨百里醌对大肠癌生长及转移的影响及其机制。方法百里醌作用大肠癌细胞株SW480后,cell count-ing kit-8(CCK-8)法检测细胞增殖;荧光显微镜下观察细胞形态;划痕试验和Transwell小室实验分别测定大肠癌细胞体外迁移和侵袭能力;用Western blotting检测大肠癌细胞中Mucin-4、HER-2和FAK蛋白表达;建立起裸鼠大肠癌皮下移植模型,观察百里醌对裸鼠大肠癌移植瘤生长的影响;免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki-67和Mucin-4阳性表达。结果与对照组相比较,百里醌可显著抑制体外大肠癌SW480细胞生长、迁移和侵袭,并明显诱导细胞凋亡;百里醌可呈显著下调大肠癌细胞中Mucin-4和HER-2的表达,并抑制FAK磷酸化;百里醌可显著抑制裸鼠大肠癌皮下移植瘤生长;百里醌可明显降低大肠癌肿瘤组织中Ki-67和Mucin-4的阳性表达。结论百里醌可显著抑制大肠癌生长和转移,该作用可能通过抑制Mucin-4蛋白表达而实现。     

五味子乙素通过p38MAPK信号通路对结肠癌SW480细胞凋亡和侵袭的影响

目的: 观察五味子乙素(SchB) 对人结肠癌 SW480 细胞凋亡和侵袭的作用及对p38MAPK信号通路的影响,阐明其作用机制。方法: 将处于对数生长期的SW480细胞分为对照组、SchB低剂量组(20 μmol·L^-1,SchB₁组)、SchB中剂量组(40 μmol·L^-1,SchB₂组)和SchB高剂量组(80 μmol·L^-1,SchB₃组)。用不同剂量SchB处理SW480细胞后,MTT法检测各组细胞增殖抑制率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Transwell法检测SW480细胞的侵袭情况,Western blotting法检测SW480细胞中p-p38、p38、p-p53和p53蛋白表达水平。结果: 与对照组比较,SchB低、中、高剂量组SW480细胞增殖抑制率和细胞凋亡率明显升高(均P<0.01),SW480细胞的侵袭率及穿膜细胞数明显降低(P<0.01),p-p38和p-p53蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论: SchB可抑制结肠癌SW480细胞的增殖和侵袭,促进细胞的凋亡,p38MAPK信号途径可能参与了SchB对肿瘤细胞的抑制作用。     

FHIT基因转染对人结肠癌细胞系SW480增殖和侵袭力的影响

目的 探讨真核表达质粒pRc/CMV2-FHIT对结肠癌细胞株SW480增殖和侵袭活性的影响。方法 将携有FHIT基因的重组真核表达质粒pRc/CMV2-FHIT转化大肠杆菌DH5α并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定,pRc/CMV2-FHIT体外转染SW480细胞（SW480-FHIT）,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pRc/CMV2的SW480细胞（SW480-pRc/CMV2）和正常SW480细胞为对照,用RT-PCR检测FHIT的表达情况,并用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）和细胞侵袭实验分别检测FHIT基因转染前、后SW480细胞增殖和侵袭活性的变化。结果 pRc/CMV2-FHIT的酶切鉴定证实含有目的基因FHIT;SW480-FHIT细胞的RT-PCR产物经凝胶电泳有明显的阳性条带,而对照组则无;MTT实验结果显示重组质粒转染组SW480细胞的增殖明显受到抑制;Transwell体外侵袭实验显示转染pRc/CMV2-FHIT能明显抑制SW480细胞的体外侵袭力(P<0.01)。结论 应用基因转染技术重表达FHIT基因能有效抑制细胞的生长、增殖及侵袭活性,为以FHIT为靶向的结肠癌基因治疗提供了新的思路和手段。     

蒸馏水与稀释碘伏对结肠癌细胞SW480体外增殖的比较研究

目的研究蒸馏水与稀释碘伏对人结肠癌细胞SW480体外增殖的抑制作用。方法体外培养人结肠癌细胞株SW480,分别用蒸馏水与不同浓度稀释碘伏（0.05%,0.025%,0.01%）处理,MTT（噻唑蓝）法检测蒸馏水与稀释碘伏对SW480细胞的生长影响作用,并进行分析评价。结果 0.01%碘伏处理细胞1 min即可表现出明显的细胞毒性作用,效果远远高于单纯使用蒸馏水的杀伤作用。结论稀释碘伏在体外对人结肠癌细胞SW480的杀伤作用明显高于单纯使用蒸馏水,可望为临床手术中控制腹腔结肠癌细胞种植转移提供临床依据。     

三磷酸肌醇、钙离子在胃泌素促人结肠癌SW480细胞株增殖中的作用

目的：探讨胃泌素对人结肠癌细胞株ＳＷ４８０内三磷酸肌醇（ＩＰ３）、钙离子（Ｃａ２＋）的影响及其在细胞增殖中的作用,为结肠癌抗信息传导治疗提供实验依据。方法：①３Ｈ－肌醇标记细胞进行ＩＰ３分析。②应用Ｃａ２＋荧光指示剂Ｆｕｒａ－２检测细胞内Ｃａ２＋的浓度。③ＭＴＴ比色分析法检测活细胞数（吸光度Ａ值）。结果：５肽胃泌素（Ｐｅｎｔａｇａｓｔｒｉｎ,ＰＧ）可使ＳＷ４８０细胞内ＩＰ３、Ｃａ２＋水平升高,同时活细胞数Ａ值增加;５肽胃泌素与其受体拮抗剂丙谷胺（Ｐｒｏｇｌｕｍｉｄｅ,ＰＧＬ）合用时,癌细胞内ＩＰ３、Ｃａ２＋水平和活细胞数Ａ值均无明显变化。结论：提示胃泌素可能通过肌醇脂质信号传导途径促进人结肠癌细胞株ＳＷ４８０的增殖