IGF-1信号通路相关蛋白在大鼠髁突软骨细胞增殖分化中的表达

目的:研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)信号转导通路在大鼠髁突软骨细胞增殖分化调控过程中相关基因的表达。方法:体外单层培养并鉴定出生后1、7、14、28 d共4组SD大鼠髁突软骨细胞。免疫组织化学方法检测细胞内IGF-1表达情况,Real-time PCR及Western印迹法检测细胞内IGF-1R、Bcl-2、Bax mRNA及蛋白表达。饥饿培养24 h后,实验组加入质量浓度为100 ng/mL的重组大鼠IGF-1细胞因子(rrIGF-1)继续培养24、48 h,CCK-8检测细胞增殖情况,Real-time PCR技术检测各组髁突软骨细胞内IGF-1R、IGF-2R、Raf1、GSK-3、IGFBP3、NF-κB、Bcl-2、Bax、integrin、TGF-βmRNA表达情况;对照组培养液不加rrIGF-1。结果:各鼠龄组SD大鼠髁突软骨细胞内IGF-1表达均阳性,IGF-1R mRNA及蛋白表达相对平稳,Bcl-2、Bax mRNA及蛋白表达逐渐增强,在出生14 d后表达下降(P<0.05)。加入100 ng/mL rrIGF-1后,髁突软骨细胞增殖速度显著增加,细胞凋亡减少,Real-time PCR结果显示实验组IGF-1R、GSK-3、Bax、integrin mRNA表达整体呈下降趋势;IGF-2R、Raf1、IGFBP3、NF-κB、Bcl-2、TGF-βmRNA表达水平总体呈上调趋势,差异有统计学意义。结论 :IGF-1介导的信号转导途径参与了髁突软骨细胞的增殖、分化以及软骨形成早期的调控,并可能与integrin、TGF-β等其他蛋白相互作用,共同参与髁突发育过程。     

间歇性完全鼻阻塞对幼年大鼠髁突软骨细胞凋亡影响的研究

目的 研究幼年大鼠在双侧间歇性鼻阻塞情况下双侧髁突软骨细胞的凋亡情况,来尝试探讨间歇性鼻阻塞对张口呼吸儿童髁突软骨发育的影响。方法 将20只4周龄大鼠（Sprague-Dawley rat,SD rat）分为2组,A组：双侧鼻阻塞组,常氧条件下鼻孔双侧阻塞8 h（8.00AM-16.00PM）,持续35 d;B组：对照组 ,常氧条件下饲养 。2组给予同样的饮食以及饮水,然后分别取出双侧髁突,用甲醛保存做成石蜡切片,同时进行caspase-3以及Bcl-2,Bax蛋白免疫组化染色。以观察在双侧鼻阻塞对髁突前斜面中上部软骨细胞增殖以及凋亡的影响,以及双侧间歇性鼻阻塞情况下Bcl-2基因家族的调控机制以及与下颌骨生长发育的关系。结果 在间歇性双侧完全鼻阻塞情况下,SD幼年大鼠双侧髁突软骨细胞凋亡较对照组明显增加。结论 双侧鼻阻塞的未成年大鼠前斜面中上部髁突细胞Bcl-2蛋白以及Bax蛋白,Caspase-3, Bax蛋白表达均较对照组增加,Bcl-2蛋白表达数量实验组较对照组表达减少,髁突软骨细胞凋亡数量较对照组明显增加。     

IGF-1、IGF-1R及Bcl-2,Bax在大鼠髁突软骨发育中的表达及作用

目的探讨大鼠髁突软骨发育过程中IGF-1、IGF-1R及凋亡相关因子Bcl-2、Bax的表达、分布以及可能发挥的作用。方法获取出生后1、7、14、28d SD大鼠髁突,甲苯胺蓝染色观察软骨结构。免疫组化染色检测IGF-1、IGF-1R、Bcl-2、Bax在各年龄组SD大鼠髁突软骨的分布。Western blot及real-time PCR分别检测各年龄组软骨细胞内IGF-1、IGF-1R、Bcl-2、Bax蛋白及mRNA的表达。结果甲苯胺蓝染色结果显示随年龄递增,大鼠髁突软骨逐渐变薄,宽度增加。免疫组化染色显示IGF-1、IGF-1R、Bcl-2在增殖层至肥大软骨细胞浅层分布最明显,Bax主要表达在成熟层及肥大层。Real time PCR及Western blot结果表明出生后的IGF-1 mRNA的表达逐渐降低,至28d时表达开始增强,IGF-1R蛋白及mRNA出生后稍有波动但表达相对平稳,Bcl-2、Bax蛋白及mRNA表达逐渐增强,至出生14d时表达开始下降(P<0.05)。结论 IGF-1、IGF-1R及凋亡相关因子Bcl-2、Bax的表达及分布相关,共同参与调控髁突软骨的发育。     

莪术醇通过激活p38 MAPK介导的线粒体凋亡途径诱导人舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞凋亡

目的:探讨莪术醇对人舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞凋亡的影响及其可能机制.方法:采用不同浓度莪术醇处理Tca-8113细胞,MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡水平和细胞线粒体膜电位变化;Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3和p38 MAPK信号通路相关蛋白p-p38MAPK、p38MAPK以及线粒体和细胞质中Cyt C等蛋白表达水平.采用p38 MAPK抑制剂SB203580联合莪术醇处理Tca-8113细胞,流式细胞术检测细胞凋亡水平和细胞线粒体膜电位变化;Western blot检测细胞中p38 MAPK信号通路相关蛋白p-p38MAPK、p38MAPK表达水平.结果:莪术醇可呈时间和剂量依赖性抑制Tca-8113细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低线粒体膜电位,并下调Bcl-2和线粒体中Cyt C蛋白表达水平,上调Bax、Cleaved-caspase-3、p-p38MAPK及细胞质中Cyt C蛋白表达水平,而对p38 MAPK蛋白表达水平无影响.然而,SB203580干预可抑制莪术醇对Tca-8113细胞凋亡、线粒体膜电位改变、p38 MAPK信号通路激活的诱导作用.结论:莪术醇可促进Tca-8113细胞凋亡,其机制可能与激活p38 MAPK介导的线粒体凋亡途径有关.     

牵张力对大鼠髁突软骨细胞增殖及相关因子表达的影响

目的:观察牵张力对大鼠髁突软骨细胞增殖、炎性因子及Hedgehog通路基因的表达影响,探讨牵张力对软骨细胞的调控。方法:体外培养软骨细胞并鉴定。用Flexcell 4000TM加力板对细胞施加0.5 Hz,0%、3%和15%的牵张应变,作用4 h后检测细胞增殖情况,对比PCNA、Caspase-3、COL II、IL-1β、TNF-α及Hedgehog通路基因Ihh、Ptc和Smo的表达变化。结果:与对照组相比,3%组细胞增殖速度增加,PCNA、COLII、Ihh、Ptc和Smo的mRNA表达增加,15%组Caspase-3、IL-1β和TNF-α表达增加,而PCNA、Smo表达降低。与3%组相比,15%组细胞增殖速度降低,PCNA、COL II、Ihh和Smo表达降低,而Caspase-3、IL-1β表达增高。结论:不同强度牵张力对大鼠髁突软骨细胞增殖活性及炎性因子表达作用不同。Hedgehog通路对牵张力敏感,可能参与了力学刺激对软骨细胞的调控。     

咀嚼力降低对大鼠髁突软骨中Bax和Bcl-2 mRNA表达的影响

目的：探讨咀嚼力降低对发育期大鼠下颌髁突软骨中凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2 mRNA表达水平的影响.方法：40只18 d雄性大鼠随机分为2组.一组喂以标准的硬食,另一组以粉末状软食喂养.于大鼠4周、5周、6周、7周龄时取其髁突软骨以RT-PCR方法检测其中Bax和Bcl-2mRNA的表达水平.结果：正常硬食组大鼠髁突软骨中Bax mRNA和Bcl-2 mRNA的表达均随时间延长而降低.软食对Bcl-2mRNA表达的影响不大,但却使Bax mRNA表达上调.软食组Bax mRNA与Bcl-2 mRNA的比值在6周和7周时明显高于硬食组p＜0.05）.结论：咀嚼力降低使发育期大鼠髁突软骨Bax mRNA表达水平和Bax mRNA/Bcl-2 mRNA的比值上升,但对Bcl-2 mRNA影响不大.     

活性氧/c-Jun氨基末端激酶/核因子-κB信号分子通过调控凋亡参与牙周炎诱导肝损伤

目的 牙周炎和非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的发生发展与活性氧（ROS）的大量积累密切相关。ROS参与调控c-Jun氨基末端激酶（JNK）/核因子-κB（NF-κB）信号分子的激活,当该信号分子被ROS过度激活后可引发机体内环境紊乱。因此,本研究旨在探究ROS/JNK/NF-κB信号分子在牙周炎诱导肝损伤中的作用机制。 方法 将12只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为对照组和牙周炎组,在牙周炎组大鼠双侧上颌第一磨牙颈部进行钢丝结扎构建牙周炎模型,8周后检查大鼠牙周临床指标并处死,Micro-CT重建牙槽骨三维结构并分析牙槽骨吸收情况,组织病理学分析牙周及肝组织的病理改变,MitoSOX red试剂检测肝组织中ROS含量,生化试剂盒检测肝功指标和氧化应激生物标志物,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测肝组织中NF-κB、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、BCL2-Associated X的蛋白质（Bax）和B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）mRNA表达水平,蛋白免疫印迹（Western blot）法检测肝组织中磷酸化c-Jun氨基末端激酶（P-JNK）、JNK、NF-κB、Bax、Bcl-2和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）蛋白表达水平,末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记（TUNEL）染色法检测肝细胞凋亡。 结果 Micro-CT结果显示,牙周炎组大鼠牙槽骨骨质吸收明显,且釉牙骨质界到牙槽嵴顶的距离明显大于对照组。组织病理学结果显示,牙周炎组大鼠牙周组织内可见大量炎症细胞浸润和牙槽骨明显吸收;肝组织结构破坏,可见大量气球样变和红色脂滴形成。MitoSOX red染色结果显示牙周炎组肝组织中ROS含量明显升高。生化检测结果显示,牙周炎组血清中谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）含量升高;肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）含量降低,丙二醛（MDA）含量升高。qRT-PCR和Western blot结果显示,牙周炎组肝组织中IL-6、TNF-α、Bax和NF-κB mRNA及P-JNK/JNK、NF-κB、Caspase-3和Bax蛋白表达水平较对照组显著上升,而Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平下降。TUNEL染色结果显示牙周炎组肝组织中凋亡细胞数量明显增多。 结论 ROS/JNK/ NF-κB信号分子通过调控细胞凋亡参与牙周炎诱导肝损伤。     

下颌骨髁状突软骨发育中的细胞凋亡及增殖

目的：研究胎儿下颌骨髁状突软骨细胞凋亡及增殖情况。方法：32例胎儿下颌骨髁状软骨标本按胎龄分为两组：A组（13－22周）；B组（23－33周）。采用原位末端标记法（TUNEL）及免疫组织化学法观察胎儿髁状突软骨发育不同时中的细胞凋亡及PCNA的表达，并对表达结果作定量分析。结果：两胎龄组中均有PCNA及TUNEL阳性表。PCNA、TUNEL染色以增殖层阳性细胞率最大，其次为成软骨细胞层，肥大软骨细胞层最小，B组PCNA染色强于A组，A组TUNEL染色强于B超。A组TUNEL／PCNA大于B组，TUNEL／PCNA在肥大软骨细胞层大于成软骨细胞层，增殖层最大小。结论：细胞凋亡与细胞增殖在胎儿颗状突软发育中具有一定意义。     

PPARγ在脂多糖刺激牙周膜细胞中调控NF-κB信号通路的作用研究

目的:探讨PPARγ在牙周炎中调控作用机制。方法:组织块法培养健康人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells, hPDLCs)并鉴定。细胞处理分为以下4组,A组:对照组;B组:脂多糖(lipopolysaccharide,LPS )刺激组;C组:罗格列酮对照组,即二甲基亚砜(dimethylsulfoxide, DMSO)处理组;D组:罗格列酮处理组。免疫印迹法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor γ,PPARγ)和核因子κB(nuclear factor κB, NF-κB) p65胞核、胞浆及总蛋白含量,细胞免疫荧光检测NF-κB p65表达部位。实时定量PCR和酶联免疫法检测白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)RNA和蛋白表达。结果:LPS刺激下,胞核PPARγ表达降低NF-κB p65表达升高,相应的IL-1β和TNF-α RNA及蛋白表达量均升高。同时加入罗格列酮后,胞核PPARγ表达升高NF-κB p65表达降低,且IL-1β和TNF-α RNA及蛋白表达量均降低。差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:PPARγ通过下调NF-κB信号通路抑制脂多糖刺激下牙周膜细胞炎症因子RNA表达和蛋白分泌,进而调节牙周炎症反应。     

牙髓卟啉单胞菌脂多糖对小鼠成骨细胞表达IL-34mRNA的影响

目的:探讨牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.e)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对成骨细胞产生白介素34(interleukin-34,IL-34)mRNA表达的影响及此过程是否有p38MAPK、ERK1/2、NF-κB和SIRT1蛋白的参与.方法:以不同浓度P.e-LPS(0～50 mg/L)刺激MC3T3-El细胞和以20 mg/L P.e-LPS作用细胞不同时间(0～24 h)后,采用实时反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)检测IL-34 mRNA的表达.以同样方法检测NF-κB抑制剂BAY 11-7082、p38MAPK抑制剂SB203580、ERK1/2抑制剂PD98059、沉默调节蛋白1(sirtuin1,SIRT1)激动剂白藜芦醇(resveratrol,RES)和SIRT1抑制剂EX-527对Re-LPS刺激MC3T3-El细胞后IL-34 mRNA表达的影响.采用SPSS 13.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验.结果:不同浓度P.e-LPS (0～50 mg/L)刺激MC3T3-El细胞后,IL-34 mRNA的表达具有剂量依赖性.20 mg/L P.e-LPS作用MC3T3-El细胞24 h时,IL-34 mRNA的表达量最大;48 h时,IL-34 mRNA的表达量有所下降.10 mol/LBAY-117082、SB203580、PD98059预处理细胞1h,可以降低P.e-LPS诱导的IL-34 mRNA的表达水平.50 mol/L RES下调P.e-LPS诱导小鼠成骨细胞表达IL-34 mRNA,而10 mol/L EX-527则上调IL-34 mRNA的表达.结论:Re-LPS可诱导成骨细胞表达IL-34 mRNA,其机制可能是激活p38MAPK、ERK1/2、NF-κB和SIRT1信号通路.     

白藜芦醇减轻LPS诱导的牙周膜细胞损伤并抑制TLR4/NF-κB活化

目的:探究白藜芦醇(RES)对脂多糖(LPS)诱导的人牙周膜细胞(hPDLCs)损伤的保护作用.方法:体外培养并鉴定hPDLCs,将培养的hPDLCs随机分为5组:对照组、LPS(10 μg/ml)+RES(0、30、60、90tμmol/L)组,MTT法检测各组细胞增殖能力,ELISA检测各组细胞分泌TNF-α/IL-6水平,PCR和Western blot检测各组细胞TLR4/NF-κB mRNA和蛋白表达.结果:分离培养的hPDLCs抗波丝蛋白表达阳性,抗角蛋白表达阴性.与对照组比,LPS处理后细胞增殖能力明显降低,细胞分泌TNF-α/IL-6水平和TLR4/NF-κB mRNA和蛋白表达明显增加;30～90 μmol/L白藜芦醇预处理后,细胞增殖能力增加(P＜0.05),细胞分泌TNF-α/IL-6水平、TLR4/NF-κB mRNA以及蛋白表达则下调(P＜0.05),均呈现一定的浓度依赖性.结论:白藜芦醇可抑制TLR4/NF-κB活化并减轻LPS诱导的牙周膜细胞损伤.     

Signaling Pathways Activation by Primary Endodontic Infectious Contents and Production of Inflammatory Mediators

Introduction

This study investigated the bacterial community involved in primary endodontic diseases, evaluated its ability to activate the macrophage Toll-like receptor 4 receptor through p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK) and nuclear factor kappa B (NF-κB) signaling pathways, and determined the levels of endotoxins and interleukins (interleukin [IL]-6 and -10) produced by endodontic content-stimulated macrophages.

Methods

Samples were taken from 21 root canals by using sterile/apyrogenic paper points. Raw 264.7 macrophages were stimulated with root canal contents. Checkerboard DNA-DNA hybridization was used for bacterial analysis and the limulus amebocyte lysate assay for endotoxin measurement; p38 MAPK and NF-κB activation was determined by Western blot analysis. IL-6 and IL-10 were measured using the enzyme-linked immunosorbent assay.

Results

Bacteria and endotoxins were detected in 100% of the samples (21/21). The most frequently observed species were Parvimonas micra (16/21, 76%), Fusobacterium nucleatum ssp. nucleatum (15/21, 71%), and Porphyromonas endodontalis (14/21, 66%). Correlations were found between endotoxins and IL-6 and IL-10 (P < .05); p38 phosphorylation had a peak at 60 minutes, and NF-κB was quickly activated after 10 minutes of stimulation.

Conclusions

It was concluded that the complex bacterial community was shown to be a potent activator of TLR-4 determined by the p38 MAPK and NF-κB signaling pathways, culminating in a high antigenicity against macrophages through the levels of IL-6 and IL-10, all significantly affected by endotoxin levels.     

NF-κB在牙髓卟啉单胞菌脂多糖诱导小鼠成骨细胞白介素6表达中的作用

目的:探讨核因子κB(NF-κB)在牙髓卟啉单胞菌(P.e)脂多糖(LPS)诱导小鼠成骨细胞株MC3T3-El白介素6(IL-6)表达中的作用。方法：10 mg/L P.e -LPS刺激MC3T3-El细胞不同时间后,应用免疫荧光方法检测NF-κB核易位情况和BAY-117082对NF-κB核易位抑制情况,反转录聚合酶链反应(RT—PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BAY-117082对MC3T3-El细胞的IL-6基因和蛋白表达的影响。采用SPSS 13.0软件包对结果进行多因素方差分析和Dunnett t检验。结果：在静息状态下,NF-κB 定位在胞质中,10 mg/L P.e-LPS刺激MC3T3-El细胞30 min后即引起NF-κB快速的核易位;60 min后,大部分NF-κB重新定位在胞质里,10 μmol/L BAY-117082预处理1 h可抑制 P.e-LPS引起的NF-κB核易位,降低P.e-LPS诱导MC3T3-El细胞IL-6 mRNA表达水平和IL-6蛋白的分泌水平,其中,蛋白分泌水平从(774.983±6.585) ng/L降低至 (377.384±14.620) ng/L(P<0.O1),而BAY-117082单独刺激组与空白对照组无显著差异。结论：P.e-LPS可诱导MC3T3-El细胞中NF-κB的核易位,P.e-LPS可通过激活NF-κB信号途径诱导MC3T3-El细胞产生IL-6。     

慢性睡眠剥夺对大鼠髁突软骨的影响

目的： 建立大鼠慢性睡眠剥夺模型,观察大鼠颞下颌关节髁突软骨形态变化和软骨中IL-1β、TNF-α、IGF-1和VEGF的表达变化。方法： 将60只大鼠随机分为实验组、对照组和恢复组。利用改良多平台法（modified multiple platform method,MMPM）对实验组和恢复组大鼠进行1、2、3、4周的慢性睡眠剥夺。恢复组大鼠睡眠剥夺后正常笼养1周。利用H-E染色观察颞下颌关节髁突的组织结构变化,免疫组织化学法检测IL-1β、TNF-α、IGF-1和VEGF在髁突软骨内的表达水平。采用SPSS 23.0软件包对数据进行统计学分析。结果： 改良水平台法可以成功建立大鼠慢性睡眠剥夺模型。H-E染色观察到实验组髁突软骨出现纤维带分裂、细胞界限模糊,恢复组纤维裂隙减小或被纤维样组织占据。免疫组织化学结果显示,IL-1β、TNF-α在实验组中的阳性表达显著高于对照组（P<0.05）,恢复组表达显著低于实验组（P<0.05）。IGF-1和VEGF在实验组中的表达显著高于对照组（P<0.05）,恢复组1、2、3周IGF-1和VEGF的阳性表达显著下降（P<0.05）。结论： 慢性睡眠剥夺可引起髁突软骨内IL-1β、TNF-α、VEGF的表达增加,加重炎症表现。慢性睡眠剥夺可导致髁突软骨内IGF-1表达增加,发挥保护和促进软骨改建的作用。慢性睡眠剥夺停止1周后,各因子表达有所下降,髁突进行恢复性改建。     

七氟烷通过MAPK/STAT3信号通路诱导人口腔舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞凋亡

目的:探究七氟烷对人舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞的凋亡机制.方法:用2～10 μmol/L七氟烷作用体外培养人舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞.MTT实验检测细胞活力;Hochest/PI双染法以及流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测MAPK/STAT3信号通路中相关蛋白表达含量的变化以及通过加入...