基于原子力显微镜的姜黄素对肺癌细胞机械特性的影响研究

目的:基于Hertz弹性接触模型,基于原子力显微镜(AFM)研究姜黄素对肺癌细胞的机械特性尤其是弹性模量的影响。方法:利用核小体酶联免疫吸附试验检测姜黄素作用后的细胞凋亡,利用AFM检测癌细胞的表面形貌和机械特性。结果:姜黄素明显诱导癌细胞产生凋亡,凋亡细胞的弹性模量和硬度明显增加。结论:姜黄素诱导细胞凋亡的机制提示细胞骨架的参与,癌细胞的硬度增加可能进一步抑制细胞的远处迁移和运动。     

茶氨酸对人宫颈癌Hela细胞增殖作用的影响

目的研究茶氨酸对人宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响。方法 MTT法测定茶氨酸不同浓度不同时间对Hela细胞增殖活性的影响;荧光显微镜观察Hela细胞的形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果茶氨酸对Hela细胞具有显著增殖抑制作用,并呈浓度和时间依赖性;荧光显微镜观察发现茶氨酸处理组的Hela细胞有典型的凋亡特征;流式细胞仪检测结果显示,与空白组比较,茶氨酸处理后的Hela细胞的凋亡率显著增加(P<0.01)。结论茶氨酸对人宫颈癌Hela细胞的增殖具有抑制作用,且其与诱导Hela细胞凋亡有关。     

地锦草对Hela细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨中药地锦草对Hela细胞增殖和凋亡作用的影响。方法:以人宫颈癌Hela细胞株为研究对象,采用MTT法检测地锦草对Hela细胞增殖抑制作用的影响,AO/EB染色法荧光倒置显微镜观察药物作用后凋亡小体的形成,Annexin V-FITC流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡变化情况。结果:地锦草能够抑制Hela细胞的体外增殖,抑制程度随药物浓度50μg·m L~(-1)升高到200μg·m L~(-1),抑制率也由30.4%增大到61.1%,显示了良好的浓度依存关系(P0.05);AO/EB染色法显示药物作用后凋亡小体形成,FCM法结果显示随着药物作用质量浓度由0增高到200μg·m L~(-1),细胞凋亡率也由0.76%升高到57.17%(P0.05)。结论:地锦草能够抑制Hela细胞增殖。其作用可能是通过诱导Hela细胞凋亡和分化实现的。     

姜黄素与5-FU联用对人结肠癌LoVo细胞生长抑制与凋亡诱导作用研究

目的体外观察5-氟尿嘧啶(5-FU)与姜黄素联用对人结肠癌LoVo细胞的生长抑制和凋亡诱导的作用。方法采用MTT方法、流式细胞检测技术和荧光染料AO/EB双染法观察不同浓度姜黄素和5-氟尿嘧啶单独或联合应用对Lovo细胞生长和凋亡的影响。结果 MTT法检测结果显示,各药物组LoVo细胞的生长均受到了显著抑制,各剂量5-FU以及分别联合姜黄素对LoVo细胞的抑制率呈剂量-时间依赖关系;FCM检测结果表明,姜黄素联合低剂量5-FU组的早期、晚期凋亡率显著高于中剂量和高剂量5-FU单用组,姜黄素联合中剂量5-FU组的细胞凋亡率最高;荧光显微镜观察发现各实验组细胞同对照组相比呈现典型凋亡形态,且联合用药组细胞凋亡率最高。结论姜黄素与低剂量5-FU联用对体外培养的结肠癌LoVo细胞的的生长抑制和促凋亡作用能够达到高剂量5-FU单用的效果。     

柚皮素通过ROS/JNK/Bcl2通路抑制宫颈癌Hela细胞增殖和迁移

目的:探讨柚皮素对宫颈癌Hela细胞增殖和迁移影响及分子机制。方法:应用MTT法检测柚皮素对宫颈癌Hela细胞活力的影响,Transwell检测柚皮素对Hela细胞迁移的影响,DCFH染色检测柚皮素对宫颈癌Hela细胞活性氧(ROS)生成的影响,流式细胞仪检测柚皮素对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响,Western blot法检测柚皮素对细胞内p-JNK和Blc2蛋白表达的影响。结果:12.5、25、50、100、200μg/ml柚皮素处理细胞24h,细胞活力呈浓度依赖性降低。ROS抑制剂(NAC)能显著抑制柚皮素对细胞活力的抑制作用。50μg/ml柚皮素处理细胞24h能抑制细胞迁移、促进细胞ROS生成和细胞凋亡,细胞凋亡率为(42.2±1.6)%;促进p-JNK的表达,抑制Bcl2的表达,p-JNK表达水平为(2.34±0.12)倍,Bcl2表达水平为(0.22±0.03)倍。结论:柚皮素可诱导宫颈癌Hela细胞ROS的产生,通过激活ROS/JNK/Bcl2通路诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖和迁移。     

白藜芦醇联合姜黄素对SMMC-7721肝癌细胞作用

目的:观察白藜芦醇联合姜黄素对体外人肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响及相关信号通路.方法:不同浓度白藜芦醇、姜黄素及两药联合干预SMMC-7721细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡、Hoechst 33258染色检测细胞凋亡形态变化,比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3,caspase-8,caspase-9酶活性,Western blot法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶切割底物(PARP).结果:与对照组相比,白藜芦醇、姜黄素单独或联合作用SMMC-7721细胞均可抑制SMMC-7721细胞增殖,两药联合后抑制作用更显著.白藜芦醇、姜黄素联合较单独用药可增强SMMC-7721细胞凋亡,呈现凋亡形态改变,白藜芦醇、姜黄素及联合组细胞凋亡率分别为( 17.39±1.41)％,(14.96±2.23)％,(25.36±2.68)％;同时提高SMMC-7721细胞caspase-3,caspase-8及caspase-9活性,促使PARP蛋白剪辑.结论:白藜芦醇、姜黄素联合使用可增强对人肝癌细胞SMMC-7721的抗癌作用,并可能与caspase-8,caspase-9/caspase-3/PA RP信号通路介导细胞凋亡相关.     

槲皮素单独及联合放射线对Hela细胞生物学行为的影响

目的研究槲皮素、放射线单独及联用对体外培养宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响并探讨分子机制。方法槲皮素、放射线单独及联合作用Hela细胞后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞法检测细胞凋亡,划痕法及Transwell法检测细胞迁移及侵袭,免疫印迹法检测MMP-9蛋白。结果槲皮素、放射线单独或合用均可对Hela细胞产生明显的抑制增殖和诱导凋亡作用(P0.05),联用效果更好;放射线可刺激Hela细胞迁移及侵袭并上调MMP-9蛋白表达,而槲皮素则可抑制这种作用并下调MMP-9蛋白表达。结论槲皮素可通过诱导凋亡方式增强宫颈癌细胞对放射线敏感性,并可通过下调MMP-9蛋白表达抑制放疗期间癌细胞的侵袭和转移。     

姜黄素对人前列腺增生间质细胞凋亡及Bcl02,Bax表达的影响

目的:研究姜黄素对人前列腺增生间质细胞凋亡的诱导作用.方法:通过MTT法测定姜黄素抑制间质细胞的增殖效应;TUNEL法检测细胞凋亡;RT-PCR技术检测Bcl-2和Bax mRNA的表达;流式细胞术测定凋亡细胞周期的分布.结果:10,20,40 vLmol·L-1浓度的姜黄素对增生间质细胞的生长均有抑制作用,这种抑制作用具有时间/剂量依赖性(P<0.05).TUNEL结果:与阴性组相比,10,20,40 panol·L-1浓度的姜黄素可以诱导间质细胞发生凋亡,凋亡率依次为(20.52±2.52)%,(48.33±0.75)%,(84.60±0.57)%(P<0.01).RT-PCR结果:姜黄素作用于间质细胞24 h,Bcl-2/Bax mlLNA的水平下降(P<0.05).流式细胞检测发现姜黄素可以诱导人前列腺增生间质细胞周期阻滞于G.期,10,20,40μmol·L-1浓度的姜黄素组细胞G1期分别为(59.3 4±4.9)%,(65.2 4±5.1)%和(71.0±4.7)%.结论:姜黄素可以诱导人良性前列腺增生问质细胞发生凋亡,其机制可能与姜黄素改变凋亡相关基因Bcl-2和Bax mRNA的表达有关.     

自噬在蝙蝠葛碱诱导宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用

目的探讨自噬在蝙蝠葛碱诱导宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用。方法采用MTT法检测蝙蝠葛碱(3.2,6.4,12.8,25.6μmol·L~(-1))以及蝙蝠葛碱与3-MA联合用药对宫颈癌Hela细胞增殖的影响,应用流式细胞术观察自噬在蝙蝠葛碱诱导宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用;Western blot检测蝙蝠葛碱和3-MA对宫颈癌Hela细胞Cleaved caspase-3、Bcl-2、Bax和Beclin-1表达的影响。结果蝙蝠葛碱显著抑制宫颈癌Hela细胞增殖,其抑制作用随着药物浓度的增加和作用时间的延长而增加;而3-MA与蝙蝠葛碱联合应用后,HeLa细胞凋亡率明显减少;蝙蝠葛碱上调Hela细胞Cleaved caspase-3、Bax和Beclin-1的表达(P0.05),下调Bcl-2蛋白表达(P0.05);与蝙蝠葛碱组比较,3-MA与蝙蝠葛碱联合应用组Cleaved caspase-3、Beclin-1、Bax表达均明显降低(P0.05),而Bcl-2蛋白的表达明显升高(P0.05)。结论蝙蝠葛碱能够抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖,上调凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3、Bax和自噬相关蛋白Beclin-1的表达、下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,从而诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡和自噬性死亡。     

苦参碱对宫颈癌细胞中Bcl-2/Bax表达水平及生物学行为的影响

目的:探讨苦参碱对宫颈癌细胞中Bcl-2/Bax表达水平及生物学行为的影响。方法:将宫颈癌Hela细胞分为宫颈癌组和药物组,宫颈癌组无药物干预,药物组采用三种1.0、1.5、2.0 g/L浓度干预,采用MTT法、Transwell法、流式细胞仪及免疫印迹分别检测Hela细胞活性抑制率、细胞侵袭数目、细胞凋亡及细胞中Bcl-2/Bax蛋白表达。结果:MTT结果显示,宫颈癌组Hela细胞活性抑制率低于药物组(P<0.05),2 g/L药物组Hela细胞活性抑制率高于1、1.5 g/L药物组(P<0.05),同一组中,72 h Hela细胞活性抑制率高于24、48 h(P<0.05),随着药物浓度及时间延长Hela细胞活性抑制率逐渐升高; 1 g/L药物组Hela细胞侵袭数目低于宫颈癌组(P<0.05),2 g/L药物组Hela细胞侵袭数目低于1、2 g/L药物组(P<0.05),四组细胞侵袭数目比较,差异有统计学意义(P<0.05); G₀-G₁期宫颈癌组细胞凋亡与药物组比较,具有统计学差异(P<0.05),G₀-G₁期、G₂-M期各组相差较小(P>0.05),2 g/L药物组Hela细胞凋亡率最高,宫颈癌组细胞凋亡率最低,四组Hela细胞凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05); 1 g/L药物组Hela细胞下Bcl-2蛋白水平低于宫颈癌组(P<0.05),2 g/L药物组Hela细胞下Bcl-2蛋白水平低于1、1.5 g/L药物组(P<0.05),Bax表达与Bcl-2相反。结论:苦参碱抑制宫颈癌Hela细胞活性,加快Hela凋亡,减少Hela细胞侵袭,并具有浓度依赖性,其作用机制可能与抑制Bcl-2表达,增加Bax水平相关。     

枳实消痞丸配合西药对幽门螺杆菌感染小鼠胃黏膜上皮细胞Fas蛋白表达的影响

目的:观察枳实消痞丸配合西药对幽门螺杆菌(Hp)感染小鼠胃黏膜上皮细胞Fas蛋白表达的影响,探讨中西药合用提高幽门螺杆菌感染相关性胃炎疗效的作用机制.方法:采用5％ NaHCO3溶液及幽门螺杆菌国际标准菌株SS1灌喂BALB/c小鼠,建立Hp感染动物模型.对造模动物分别投以中药、西药和中西药联用,分别采用HE染色、TUNEL法和免疫组化(sABC法)观察胃黏膜损伤程度(LI)、细胞凋亡指数(AI)和Fas蛋白表达的变化.结果:3个治疗组均能抑制胃黏膜上皮细胞Fas蛋白的过高表达,模型组表达为(28.30 ±2.36)％,抑制程度中西药合用组＞西药组＞中药组[Fas表达依次为(15.50±2.39)％,(22.0±1.90)％,(25.90±2.34)％];3个治疗组对胃黏膜损伤有不同程度的改善,中西药合用组强于单用中药组、西药组[LI依次为(1.10±0.18),(1.80±0.25),(1.30±0.26)分];3个治疗组能对抗Hp所引起的细胞凋亡增加,模型组、中药组、西药组、中西药合用组AI依次为(16.60±1.74)％,(11.60±1.11)％,(8.70±0.88)％,(5.10±0.67)％,合用组抑制作用最强.结论:对细胞凋亡和胃黏膜上皮细胞Fas蛋白表达的抑制可能是枳实消痞丸合用西药三联提高幽门螺杆菌感染相关性胃炎疗效的机制之一.     

栝蒌根提取物对Hela细胞作用的初步研究

目的：研究栝蒌根提取(简称栝蒌根)物体外对Hela细胞毒作用,探讨其抑癌作用机理。方法：用M1vr法检测栝蒌根对Hela细胞毒作用,扫描电镜和透射电镜观察细胞超微结构变化,DNA琼脂糖凝胶电泳法检测其生化特征改变。结果：Hela细胞经栝蒌根作用24～48h后,细胞体外杀伤作用明显,呈量效、时效关系(r>0．880,P<0．01);电镜观察可见Hela细胞表面微绒毛明显减少或消失,胞膜发泡,细胞核固缩,核染色质浓缩边集,并出现凋亡小体;细胞DNA经琼脂糖凝胶电泳可见典型的梯形带。结论：栝蒌根提取物对Hela细胞具有良好的抗癌活性,其作用机制与诱导细胞凋亡相关。     

二脱甲氧基姜黄素对体外培养宫颈癌Hela细胞Caspase-8的影响

目的:观察二脱甲氧基姜黄素对体外培养人宫颈癌Hela细胞Caspase-8的作用。方法:MTT法检测二脱甲氧基姜黄素对体外培养人宫颈癌细胞Hela的抑制作用;分光光度计检测其对Caspase-8酶活性的影响;免疫组化法检测其对人宫颈癌细胞Hela Caspase-8蛋白表达的影响。结果:二脱甲氧基姜黄素对人宫颈癌细胞Hela有明显的抑制作用(P0.001),且呈剂量关系,与姜黄素有显著差异(P0.001);二脱甲氧基姜黄素能增强Caspase-8酶活性,增强Caspase-8蛋白的表达。结论:二脱甲氧基姜黄素能激活Caspase-8蛋白活性,这可能也是其体外抑制宫颈癌细胞Hela生长的机理之一。     

阳和汤血清增强阿霉素对MCF-7肿瘤细胞 抑制作用机制的研究

目的:研究小鼠阳和汤血清增强阿霉素对MCF-7肿瘤细胞抑制作用的机制。方法:用1.08 g.mL-1阳和汤按小鼠体重20 mL.kg-1连续ig 7 d,末次给药1 h采血,分离得含阳和汤1 g.mL-1的血清(YHDS)。用SMY培养细胞24 h,5-溴脱氧尿核苷(BrdU)掺入法检测细胞增殖,软琼脂克隆形成法检测细胞分化,Western blotting检测Bax/Bcl-2表达,原位末端标记检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞线粒体膜电位。结果:小鼠阳和汤血清能促进阿霉素引起的MCF-7细胞生长抑制(抑制率为61.25%±1.66%,P<0.05),上调MCF-7细胞Bax/Bcl-2表达比率,增加细胞凋亡。小鼠阳和汤血清对MCF-7细胞有诱导分化作用(与对照组比较克隆数减少了68.4%,P<0.05)。结论:阳和汤血清有增强阿霉素对MCF-7肿瘤细胞抑制作用,其机制与易化肿瘤细胞凋亡和诱导肿瘤细胞分化有关。     

姜黄素联合氟尿嘧啶对结肠癌细胞增殖凋亡迁移作用

目的:探索姜黄素调控上皮细胞间质转化(EMT)增敏5-FU的抗肿瘤作用。方法:采用姜黄素、5-FU不同给药浓度诱导结肠癌细胞株HCT8的凋亡,MTT法及克隆形成实验检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移能力;Compusyn软件分析姜黄素的增敏效力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;WesternBlot检测E-Cadherin、N-Cadherin、vimentin、cleaved-Caspase3、snail、β-catenin蛋白的表达量。结果:姜黄素能抑制HCT8细胞的增殖;6μmol/L姜黄素显著促进8μmol/L 5-FU对HCT8细胞的生长抑制和凋亡作用,联合药物指数(CI)值=0.7576;联合用药后降低HCT8细胞迁移能力,上调cleaved-Caspase3、E-Cadherin蛋白表达,同时抑制N-Cadherin、snail、β-catenin、vimentin蛋白表达。结论:姜黄素增加5-FU对HCT8细胞的敏感性,其机制可能与抑制EMT、诱导细胞凋亡有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对Hela细胞的诱导凋亡作用及靶点蛋白质研究

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对Hela细胞的诱导凋亡作用,寻找其可能的靶点蛋白质。方法:用50、1002、00、400μg/mL梯度浓度的EGCG孵育Hela细胞24h和48h,荧光显微镜下观察Hela细胞凋亡形态,用MTT检测其生长抑制率,用Annexin V-FITC/PI染色观察其凋亡率,鬼笔环肽染色观察其肌动蛋白聚合体(F-actin)降解程度。然后利用偶联EGCG的微球与Hela细胞裂解液孵育,结合靶点蛋白,靶点蛋白经考马斯蓝染色后,切下目标条带进行质谱鉴定。结果:EGCG能诱导Hela细胞凋亡和F-actin的破坏,并呈时间和剂量依赖性。EGCG结合的靶带蛋白为actin类蛋白。结论:直接结合于actin类蛋白并破坏细胞骨架可能是EGCG诱导Hela凋亡的途径之一。     

艾灸对老年大鼠海马线粒体膜电位、神经元凋亡的影响

目的:通过测定老年大鼠海马线粒体膜电位、神经元凋亡的数量,探讨线粒体、细胞凋亡在衰老中的作用以及艾灸的延缓衰老作用。方法:依月龄将Wistar大鼠分为青年组、老年组、老年艾灸组,艾灸“百会”“肾俞”穴40 d后,用碘化丙啶(PI)和罗丹明123(Rhodamine-123)荧光染料染色30 min,通过流式细胞仪测定细胞内PI和Rhodamine-123的荧光强度,分析细胞线粒体膜电位、神经元凋亡的变化。结果:老年组海马线粒体膜电位、神经元凋亡阳性百分比均较青年组、艾灸组显著增高(P<0.01),青年组与艾灸组间无显著性差异(P>0.05)。结论:艾灸具有延缓衰老的作用,可以抑制线粒体膜电位的改变,减少神经元凋亡。     

姜黄素对膀胱癌EJ细胞的作用研究

目的:观察姜黄素对膀胱癌系细胞EJ的体外作用,并探讨其可能的作用机制.方法:应用光镜形态学,MTT法、流式细胞仪和免疫细胞化学法观察了5、10、20 mg/L姜黄素在体外对膀胱癌EJ细胞的生长抑制和诱导凋亡作用,以及对细胞DNA含量,对NF-κB、Cyclin D1表达的影响.结果:所有浓度组姜黄素均对膀胱癌EJ细胞有明显的生长抑制作用,抑制率≥(27.5±3.1)%(P＜0.05).10 mg/L以上浓度均可出现显著的诱导调亡作用,凋亡率≥4.6%±1.8%(P＜0.05),下调NF-κΒ(表达率≤35.8%±4.2%,P＜0.05),下调Cyclin D1的表达(表达率≤29.7%±3.2%,P＜0.05).姜黄素导致的细胞周期阻滞以G1期为主,使S期细胞比例显著减少(P＜0.05).结论:姜黄素对膀胱癌细胞系EJ有明显的生长抑制和诱导凋亡作用,其作用机制与其影响细胞周期和下调NF-κB、Cyclin D1的表达相关,显示了姜黄素用于治疗膀胱癌的可能性.     

健脾解毒方对人结肠癌多药耐药细胞的逆转作用

目的:探讨健脾解毒方对人结肠癌多药耐药细胞HCT8/V的逆转作用及其可能机制.方法:人结肠癌HCT8/V多药耐药细胞常规培养,5％健脾解毒方药物血清作用48 h后,MTT法检测HCT8/V细胞对化疗药敏感性的影响,高效液相色谱法( HPLC)检测耐药细胞内长春新碱(VCR)药物浓度,流式细胞仪分析健脾解毒方对5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导的HCT8/V细胞凋亡和细胞周期的影响.结果:健脾解毒方能增加HCT8/V细胞对VCR、顺铂(DDP)、5-Fu、吡柔比星(THP)4种化疗药物的敏感性,4种化疗药的IC50分别从( 191.08±18.18 )mg·L-1下降到(90.13±6.33 )mg·L-1;(290.79±28.38) mg·L-1下降到(22.16±1.82) mg·L-1;(23.12±1.99) mg·L-1下降到(9.88±0.86 )mg·L-1;(26.40±2.92) mg·L-1下降到(19.41±1.48) mg·L-1;健脾解毒方药物血清作用HCT8/V细胞48 h后细胞内VCR浓度明显增高(P＜0.01),且呈剂量依赖性.健脾解毒方能提高5-Fu诱导的HCT8/V细胞的凋亡率,使细胞阻滞于G1期.结论:健脾解毒方通过增加结肠癌多药耐药细胞内化疗药物浓度,抑制细胞增殖,诱导其凋亡,逆转HCT8/V细胞株的多药耐药性.