新型布尼亚病毒感染患者血小板膜糖蛋白的表达及临床意义

目的 探讨新型布尼亚病毒感染患者血小板膜糖蛋白表达的意义.方法 收集2011年5月至2013年5月浙江省舟山医院收治的并发多器官功能障碍综合征(MODS)(8例)和未并发MODS(20例)新型布尼亚病毒感染患者.对两组患者血小板进行常规检测并比较,检测两组患者二磷酸腺苷(ADP)诱导前后的血小板膜糖蛋白(CD41a、CD42a、CD61、CD62p)的阳性表达率和平均荧光强度(MFI),采用独立样本t检验比较两组间的差异.结果 MODS组与非MODS组ADP诱导前比较,血小板的计数差异无统计学意义(t=0.139,P＞0.05),但平均体积偏大(t=6.417,P＜0.01),血小板分布宽度大(t =9.664,P＜0.01);MODS组患者血小板膜糖蛋白阳性表达率和MFI较非MODS组患者显著增高(CD41a:t=14.486和49.419,P＜0.01;CD42a:t =41.693和58.160,P＜0.01;CD61:t=15.452和19.251,P＜0.01;CD62p:t 18.230和24.258,P＜0.05);经ADP诱导活化处理后MODS组患者血小板膜糖蛋白阳性表达率和MFI未出现明显变化(CD41a:t=1.364和1.237,P＞0.05;CD42a:t=1.247和1.448,P＞0.05; CD61:t=1.258和1.354,P＞ 0.05;CD62p:t=1.213和1.147,P＞0.05),而非MODS组患者经ADP诱导活化处理后血小板膜糖蛋白阳性表达率和MFI均明显升高(CD41a:t=15.891和18.417,P＜0.01;CD42a:t=54.367和14.217,P＜0.01;CD61:t=16.257和21.348,P＜0.01;CD62p:t =58.268和18.145,P＜0.01).结论 新型布尼亚病毒感染并发MODS患者血小板膜糖蛋白阳性表达率和MFI较轻症患者高,而且持续活化表达能力极低,血小板膜糖蛋白的检测可以作为判断新布尼亚病毒感染患者疾病严重程度的重要指标之一.     

地西他滨联合丙戊酸钠对U937细胞hPer3基因表达调控的影响

目的观察地西他滨(DCA)和丙戊酸钠(VPA)联用对白血病细胞株U937的作用及对hPer3基因表达的影响。方法分6组:A组(未处理组),B、C组(DCA 1,4μmol·L-1),D组(VPA 2 mmol·L-1),E、F组(DCA 1,4μmol·L-1+VPA 2,2 mmol·L-1),作用48 h。用甲基化聚合酶链反应(MS-PCR)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测hPer3启动子甲基化和mRNA表达;MTT法检测生长抑制率;Annexin V/PI法检测凋亡;FCM检测CD117和CD14。结果E、F组的hPer3 mRNA、抑制率、凋亡率、CD117 MFI、CD14表达率均高(或低)于各自相应的单药组,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。结论 DCA联合VPA在U937细胞中能显著加强抗白血病效应,并增强hPer3基因的表达。     

非小细胞肺癌Stathmin mRNA的表达及临床意义

目的 探讨Stathmin mRNA在非小细胞肺癌中的表达及临床意义.方法 成对收集非小细胞肺癌手术切除的癌和癌旁组织,抽提总RNA,利用半定量RT-PCR技术检测Stathmin mRNA的表达,对其与临床病理指标的关系进行统计学分析.结果 共收集癌和癌旁组织43对,癌组织中Stathmin mRNA表达的阳性率为76.7%,癌旁组织中为60.5%,癌组织的Stathmin相对表达量明显高于癌旁组织（Z=5.359,P=0.000）;无论是癌还是癌旁组织,男性中Stathmin的相对表达量明显高于女性（χ^2=5.059、5.799,P=0.024、0.016）.癌组织中,鳞癌中Stathmin的相对表达量高于腺癌（χ^2=5.821,P=0.016）、中央型明显高于周围型（χ^2=4.308,P=0.038）.结论 非小细胞肺癌中Stathmin mRNA的表达具有较高的阳性率,其中鳞癌、中央型肺癌和男性患者中增高最明显.     

流式细胞术在CML-CP和N-LR鉴别诊断中的应用

目的:探讨流式细胞术在慢性粒细胞白血病慢性期(CML-CP)和中性粒型类白血病反应(N-LR)鉴别诊断中的价值。方法:采用流式细胞术检测10例CMP-CP和8例N-LR患者骨髓免疫表型。结果:CML-CP的CD117、CD56、BCR-ABL阳性率高于N-LR,差异具有显著统计学意义(P<0.01或P<0.05);CML-CP的CD13、CD33平均荧光强度(MFI)、中性粒细胞碱性磷酸酶染色(NAP)阳性率和积分均低于N-LR,差异具有显著统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:流式检测骨髓病态造血有助于CML-CP和N-LR的鉴别诊断。     

流式免疫微球捕获技术和荧光定量PCR检测BCR-ABL融合基因的方法学比较

目的:对流式微球捕获技术和荧光定量PCR技术在BCR-ABL融合基因中的检测进行比较和评价。方法:选取18例慢性粒细胞性白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者、6例急性髓系白血病(acute myeloblasticleukemia,AML)患者、9例缺铁性贫血(iron deficiency anemia,IDA)患者,分别用流式微球捕获技术和荧光定量PCR技术检测其骨髓BCR-ABL融合基因蛋白和mRNA。结果:6例AML和9例IDA患者均未检出阳性。18例CML患者荧光定量PCR检出16例P210和2例P190,流式微球捕获技术则均检出阳性。流式微球捕获技术的lgMFI(平均荧光强度)和荧光定量PCR法的lgCopies(拷贝数)的相关系数为0.708(P<0.01)。结论:流式免疫微球捕获技术对BCR-ABL各种断裂类型敏感性高,但不能区分断裂类型,适合作为初筛实验。     

地西他滨联合丙戊酸钠促进胃癌MGC-803细胞凋亡和G0/G1期阻滞的机制研究

目的: 探讨地西他滨(DCA)和丙戊酸钠(VPA)联用对胃癌细胞株MGC-803凋亡和细胞周期的影响及机制。方法: DCA 1.5 μmol·L^-1、DCA 3.0 μmol·L^-1、VPA 1.5 mmol·L^-1、DCA 1.5 μmol·L^-1+VPA 1.5 mmol·L^-1和DCA 3.0 μmol·L^-1+VPA 1.5 mmol·L^-1作用MGC-803细胞72 h。Annexin V/PI法检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,实时荧光定量PCR检测nm23-H1 mRNA表达。结果: VPA 1.5 mmol·L^-1+DCA 1.5 μmol·L^-1联合用药组 和VPA 1.5 mmol·L^-1+DCA 3.0 μmol·L^-1联合用药组 凋亡率均高于其相应单药组,差异有统计学意义(P<0.01)。MGC-803细胞G₀/G₁期比例在VPA 1.5 mmol·L^-1+DCA 1.5 μmol·L^-1联合用药组(61.55%±2.38%)和VPA 1.5 mmol·L^-1+DCA 3.0 μmol·L^-1联合用药组(66.75%±2.48%)的表达水平均高于其相应单药组,差异有统计学意义(P<0.01)。nm23-H1 mRNA在VPA 1.5 mmol·L^-1+DCA 1.5 μmol·L^-1联合用药组(1.84±0.46)和VPA 1.5 mmol·L^-1+DCA 3.0 μmol·L^-1联合用药组(2.88±0.42)的表达水平均高于其相应单药组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论: DCA联合VPA能显著促进MGC-803细胞凋亡及G₀/G₁期阻滞,其机制可能与促nm23-H1基因的表达有关。     

肾康灵汤剂对IgA肾病患者外周血T淋巴细胞体外作用研究

IgA肾病（IgA nephropathy,IgAN）是一类机体产生抗微生物抗原IgA抗体,继而大量IgA抗原和抗体形成免疫复合物在系膜区沉积,激活补体旁路途径,引起肾脏损伤的疾病[1]。有报道显示,IgAN患者通常存在T细胞亚群的明显失衡[2],进而造成免疫应答紊乱。肾康灵汤剂主要由黄芪、生地黄、太子参、丹参等成分组成,在临床应用中,     

人源化乙肝表面抗体重链克隆、表达及免疫学特性初步鉴定

目的建立一种利用单细胞分选技术克隆人源化乙肝表面抗体重链的方法。方法从乙肝疫苗接种志愿者外周血中分选得到单个抗体分泌细胞,单细胞RT-PCR筛选20个单菌落,挑选其中有IgG保守区域的克隆全长,并将IgG(H)基因全长克隆到pEGFP-N1载体,转染COS-7细胞,取上清液进行Western blotting验证,并采用Batty饱和法测定亲和力常数。结果筛选得到IgG(H)能与HBsAg结合,且Ka值达到2.39×109L/mol。结论利用单细胞分选克隆技术获得的抗体重链亲和力较高。     

从兔外周血直接克隆B细胞κ轻链的可变区

目的 从兔外周血总RNA中直接扩增出B细胞κ轻链的可变区序列.方法 首先从IMGT/GENE-DB数据库中获取大耳白兔Ig胚系基因Vκ(IGKV)、Jκ(IGKJ)和Cκ(IGKC)的cDNA序列、设计引物,然后以非免疫兔外周血总RNA为模板进行RT-PCR扩增,回收产物并克隆到T载体,随机挑选单克隆测序,最终将序列提交到IMGT/V-QUEST,分析出每个克隆的Vκ-Jκ组合,并利用BioEdit的本地Blast程序比较出Cκ的基因型.结果 共设计出4对引物,其中引物对RK.C1[4-5-9]无产物,引物对RK.C1[1-2-7]、RK.C1[3-6-8]和RK.C2[1-2-3-4]有产物,分别回收、克隆到T载体后各挑取20个克隆,共获得51个克隆的插入子序列.没有任何2个克隆的插入子序列完全相同,每个克隆均包含完整的兔Vκ、Jκ及Cκ的5'端序列,其中Vκ-Jκ-IGKC1组合的克隆33个,Vκ-Jκ-IGKC2组合的克隆18个;68个Vκ胚系基因中有22个出现,其中频率最高的是IGKV1S10*01(12次),其次是IGKV1S36*01、IGKV1S37*01和IGKV1S4*01(各5次),其余均为3次以下;8个Jκ胚系基因中只有1个出现,为IGKJ1-2*01;2个Cκ基因的等位基因分别为IGKC1*01和IGKC2*03.33个Vκ-[IGKJ1-2*01]-[IGKC1*01]克隆中有17种不同的组合方式,其中频率最高的为[IGKV1S10*01]-[IGKJ1-2*01]-[IGKC1*01](7次).18个Vκ-[IGKJ1-2*01]-[IGKC2*03]克隆中有11种不同的组合方式,频率最高的为[IGKV1S10*01]-[IGKJ1-2*01]-[IGKC2*03](5次).Vκ-Jκ-Cκ组合方式相同的克隆,序列仍具有明显的差异.结论 利用自行设计的兼并引物,成功并特异地从兔外周血总RNA中直接扩增出了κ轻链的可变区,且产物具有良好的多样性,但所有Vκ-Jκ-Cκ组合中只出现了1种Jκ基因.     

散发性胆囊癌组织hMLH1基因启动子甲基化检测及其临床意义

目的:探讨散发性胆囊癌组织中错配修复基因hMLH1启动子甲基化状态和蛋白表达检测的临床意义。方法:收集我院胆囊癌患者47例,采用甲基化PCR和Envision免疫组化法检测其胆囊癌组织中hMLH1启动子甲基化状态和蛋白表达。结果:hMLH1启动子甲基化阳性率在肝脏浸润组间、淋巴结转移组间、Nevin分期之间差异均具有显著统计学意义(P<0.01或P<0.05)。hMLH1蛋白表达在hMLH1基因启动子组间、肝脏浸润组间、淋巴结转移组间、Nevin分期之间差异均具有显著统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:散发性胆囊癌中启动子甲基化是hMLH1基因失活的原因之一,hMLH1的启动子甲基化和蛋白检测对评估胆囊癌浸润和转移具有重要意义。