大蒜素诱导人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡的作用机制研究

目的：探讨大蒜素诱导人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡的作用机制。方法：分别以二甲基亚砜（空白对照组）、大蒜素（12.5、25、50 μg/mL）和LY294002 5 μg/mL干预对数生长期Ishikawa细胞。48 h后,用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术分析细胞凋亡状况,Western Blotting法检测p-PI3K、p-AKT、Cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果：与空白对照组比较,经大蒜素12.5、25、50 μg/mL或LY294002 5 μg/mL干预能够提高Ishikawa细胞增殖抑制率和凋亡率;经大蒜素25、50 μg/mL或LY294002 5 μg/mL干预能够下调p-PI3K、p-AKT、Bcl-2表达并上调Cleaved Caspase-3、Bax表达,提高Bax/Bcl-2比值,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。与LY294002组比较,经大蒜素50 μg/mL干预能够提高Ishikawa细胞增殖抑制率和凋亡率,下调p-PI3K、p-AKT表达并上调Cleaved Caspase-3、Bax表达,提高Bax/Bcl-2比值,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论：大蒜素能够诱导人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡,可能与抑制PI3K/AKT信号通路活化而使其下游促凋亡蛋白表达上调有关。     

二参颗粒对氯化钴诱导的H9C2细胞氧化应激介导的细胞凋亡的保护作用

目的:通过观察二参颗粒对氯化钴(CoCl_2)诱导的缺氧损伤和大鼠心肌细胞H9C2凋亡的影响,阐明二参颗粒对心脏的保护作用。方法:以500μmol/L的CoCl_2与H9C2细胞共同作用24 h,建立心肌细胞缺氧缺血模型。将H9C2细胞分为空白对照组、模型对照组、二参颗粒50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL组。酶联免疫法检测胞外培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,流式细胞术检测胞内活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位(MMP)和凋亡水平,蛋白质印迹分析法检测细胞内Bcl-2/Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的表达水平。结果:与空白对照组比较,模型对照组细胞活力下降、活性氧(ROS)荧光表达值升高、线粒体膜电位JC-1单体阳性细胞显著升高以及细胞培养液中LDH含量升高,凋亡率显著升高,凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的蛋白表达上调,Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,二参颗粒能有效改善细胞活力,降低LDH的含量,显著降低胞内ROS荧光表达值,改善线粒体膜电位和凋亡水平,下调凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的蛋白表达,升高Bcl-2/Bax的比值(P<0.05或P<0.01)。结论:二参颗粒可以抑制CoCl_2诱导的心肌细胞ROS水平,减少氧化应激发生,进而改善氧化应激介导的心肌细胞的细胞凋亡。     

黄连素对人胃癌细胞SGC7901凋亡影响的研究

目的:探讨黄连素对人胃癌细胞SGC7901凋亡的影响。方法:MTS法检测不同浓度的黄连素(100、150、200μmol/L)对胃癌细胞的抑制作用,Hoechst 33258染色检测不同浓度的黄连素(100、150、200μmol/L)对细胞凋亡的影响;Real Time Q-PCR检测胃癌细胞中Cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax的mRNA表达;Western blot检测胃癌细胞中Cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果:不同浓度的黄连素能显著降低人胃癌细胞SGC701活性(P<0.05,P<0.01),促进其凋亡,升高Cleaved Caspase-3、Bax的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),降低Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:不同浓度的黄连素可诱导胃癌细胞凋亡,其机制可能与升高Cleaved Caspase-3、Bax的表达,降低Bcl-2的表达有关。     

毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷对人宫颈癌HeLa细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的影响

目的探讨毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(CG)对宫颈癌细胞系HeLa细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的影响。方法体外培养HeLa细胞,分为对照组和实验组,实验组用不同质量浓度的CG分别处理24、48 h,采用MTT法测定CG对HeLa细胞增殖的影响:Hoechst 33258染色观察细胞凋亡情况;采用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期;Western blotting法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)、Bcl-2/Bax蛋白表达情况。结果 CG(2.5~100μg/mL)能抑制HeLa细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;质量浓度为20、40、80μg/mL的CG作用HeLa细胞48 h后,细胞凋亡率逐渐上升,分别为10.40%、25.50%、39.40%,明显高于对照组(1.80%);实验组HeLa细胞Caspase-3的活性形式cleaved Caspase表达量显著增加;促凋亡蛋白Bax表达量升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达量降低,呈剂量依赖性。结论 CG能抑制HeLa细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与增加细胞Caspase-3活性、下调Bcl-2蛋白的表达及上调Bax蛋白有关。     

吴茱萸碱抑制HDAC6促进人白血病K562细胞周期阻滞和凋亡的机制研究

目的探讨吴茱萸碱通过抑制组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)促进人白血病K562细胞周期阻滞以及凋亡的机制。方法采用CCK-8法检测吴茱萸碱对K562细胞增殖的影响;流式细胞术检测K562细胞周期和凋亡;化学比色法检测K562细胞HDAC6活性;Western blotting法检测K562细胞中HDAC6、Cyclin D1、CDK4、Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、ERK、p-ERK、p38和p-p38蛋白的表达。结果 CCK-8法结果提示,吴茱萸碱在一定浓度范围内(1~16μmol/L)可以有效抑制K562细胞增殖,并呈时间和浓度依赖性;流式细胞术结果显示,吴茱萸碱可将K562的细胞周期阻滞于G0/G1期;2、4、8μmol/L吴茱萸碱诱导K562细胞48 h后,其凋亡率分别为(11.47±1.05)%、(12.77±0.79)%和(18.58±1.37)%,与对照组(2.79±1.01)%相比差异显著(P0.01);化学比色法结果显示,吴茱萸碱能有效抑制HDAC6的活性;Western blotting结果显示,吴茱萸碱能上调Bax、Cleaved Caspase-3、p38和p-p38蛋白的表达,下调CDK4、Cyclin D1、Bcl-2、HDAC6、ERK和p-ERK蛋白的表达。结论吴茱萸碱可能是通过抑制HDAC6的活性,激活MAPK信号通路,进而上调促凋亡蛋白的表达,下调周期蛋白的表达,从而抑制K562细胞的增殖,诱导细胞周期阻滞和凋亡。     

丹参酮Ⅱ_A对白血病K562细胞的体外诱导凋亡作用研究

目的研究丹参酮ⅡA对人急性白血病K562细胞的诱导凋亡作用及其作用机制。方法以不同浓度的丹参酮ⅡA(10~50μmol/L)作用于体外培养的K562细胞24、48、72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,并对50μmol/L的药物作用不同时间后亚G1期细胞进行检测。应用免疫印迹法(Western blotting)检测Caspase-3及其裂解底物多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)的表达水平,并对凋亡调节蛋白Fas、Bax、Bcl-2、Bak、Bid的表达水平进行检测。结果 20μmol/L以上的丹参酮ⅡA可显著抑制K562细胞的生长、诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系;FCM检测结果表明50μmol/L丹参酮ⅡA作用不同时间后,亚G1期细胞(凋亡细胞)逐渐增多。20μmol/L以上的丹参酮ⅡA作用48 h后Caspase-3逐渐被活化出现17 000的亚单位,Caspase-3的作用底物PARP被活化裂解出现89 000的亚单位片段,而且Caspase-3的激活以及PARP的裂解可被Caspase-3的特异性抑制剂z-DEVD-FMK所阻断,促凋亡蛋白Fas以及Bax的表达水平明显升高,而凋亡抑制蛋白Bcl-2及其他促凋亡蛋白Bak和Bid的表达水平则无明显变化。结论丹参酮ⅡA可以通过诱导白血病K562细胞凋亡而发挥体外抗白血病作用,上调促凋亡蛋白Fas和Bax的表达水平及激活Caspase-3可能是丹参酮ⅡA诱导白血病K562细胞发生凋亡的重要作用机制之一。     

大蒜素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞生长的影响

目的:研究大蒜素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞生长的抑制作用及其机制。方法:取对数生长期Tca8113细胞设空白对照组,顺铂组,大蒜素低、中、高剂量组,给药干预48小时后,观察各组细胞生长状态,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期时相变化和细胞凋亡状况,Western blotting法检测Bax、B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、激活型Caspase-3蛋白表达。结果:与空白对照组比较,大蒜素各组和顺铂组Tca8113细胞呈现胞体破裂,核固缩、深染等病理性改变,以大蒜素50μg/m L组最为显著;大蒜素各组和顺铂组Tca8113细胞增殖抑制率和凋亡率显著提高(P0.05);大蒜素(25、50μg/m L)组和顺铂组G_2/M期比例显著提高(P0.05),Bax、激活型Caspase-3蛋白表达显著上调且Bcl-2蛋白显著下调(P0.05),Bax/Bcl-2值显著提高(P0.05)。结论:大蒜素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞生长具有一定的抑制作用,可能与大蒜素阻滞细胞有丝分裂以及调控凋亡相关蛋白表达而促进细胞凋亡有关。     

青钱柳三萜对链脲佐菌素损伤的INS-1细胞自噬和凋亡的影响

目的:观察青钱柳三萜对STZ损伤的INS-1细胞自噬和凋亡的影响。方法:用链脲佐菌素(STZ)诱导INS-1细胞建立损伤模型。MTT法检测不同浓度青钱柳三萜对INS-1细胞增殖的影响,荧光酶标仪检测青钱柳三萜对胞内活性氧(ROS)含量的影响,用放射免疫法测定其胰岛素分泌能力,比色法测定上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛(MDA)含量;比色法测定心肌细胞中Caspase-3、Caspase-9的活性,荧光定量PCR测定Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值,Western blot检测细胞中自噬调控蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3)和凋亡调控蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白表达。结果:当青钱柳三萜浓度低于25μg/ml时,无论单用青钱柳三萜还是与STZ联用均对INS-1细胞增殖具有促进作用,但是当其浓度大于100μg/ml或与STZ联用大于50μg/ml时,均对其细胞生长具有抑制作用;青钱柳三萜(6.25、12.5、25μg/ml)可抑制INS-1细胞凋亡,促进INS-1细胞分泌胰岛素,降低细胞内ROS含量;升高上清液中SOD、CAT和GSH-Px活性,降低MDA含量,降低自噬调控蛋白LC3-Ⅱ和凋亡调控蛋白Cleaved PARP的蛋白表达,上抗凋亡蛋白Bcl-2 mRNA表达,下调促凋亡蛋白Bax mRNA表达及Bcl-2/Bax,降低Caspase-9及Caspase-3的活性。结论:青钱柳三萜对STZ损伤的INS-1细胞具有较好的保护作用。它通过抑制STZ损伤的INS-1细胞过量产生ROS,增强内源性抗氧化酶GSH-Px、SOD、CAT的活性,降低自噬调控蛋白LC3-Ⅱ和凋亡调控蛋白Cleaved PARP的表达,上抗凋亡蛋白Bcl-2表达,下调促凋亡蛋白Bax表达及降低Caspase-9及Caspase-3的活性,进而提高INS-1细胞存活率,来发挥对受损INS-1细胞的保护作用。     

葡萄柚黄酮抑制白血病细胞株增殖的体外实验研究

目的研究葡萄柚黄酮组分(PTFC)对Kasumi-1、K562细胞株的生长抑制作用及诱导凋亡情况,从而为白血病的临床治疗提供实验基础。方法不同浓度的PTFC(0、0.125、0.25、0.5、1、2 mg/mL)作用于Kasumi-1、K562细胞株,采用MTT法检测PTFC对Kasumi-1、K562细胞株的生长抑制作用;AnnexinⅤ/PI流式细胞术检测PTFC诱导Kasumi-1、K562细胞株的凋亡情况;Hoechst 33258染色法观察PTFC诱导白血病细胞凋亡的形态学改变;Western Blot法检测PTFC作用后Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、PARP蛋白表达变化。结果 0.125～2 mg/mL PTFC可明显抑制Kasumi-1、K562细胞株增殖,与空白对照组(PTFC 0 mg/mL)比较,细胞存活率明显降低(P0.05),对Kasumi-1的IC_(50)(24、48 h)分别为1.99、0.89 mg/mL,对K562的IC_(50)(24、48 h)分别为1.23、1.03 mg/mL;通过AnnexinⅤ/PI流式细胞术检测,0.125～2 mg/mL PTFC作用24 h可诱导Kasumi-1、K562细胞凋亡,诱导Kasumi-1凋亡率分别为2.98%、3.2%、3.66%、8.6%、19.8%,K562的凋亡率分别为3.19%、3.19%、3.49%、7.25%、16.87%;Hoechst 33258染色法检测发现PTFC作用后Kasumi-1、K562细胞中出现明显凋亡小体;与空白对照组比较,Caspase-3、Caspase-9、PARP被激活(P0.05)。结论 PTFC可抑制Kasumi-1、K562细胞增殖并诱导其凋亡,其凋亡相关机制与PARP、Caspase-3,Caspase-9蛋白表达变化相关。     

线粒体膜电位在三氧化二砷诱导K562细胞凋亡中的作用

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导K562细胞凋亡的发生机制。方法分别以1、2、4、8、16μmol/LAs2O3诱导K562细胞凋亡,MTT法检测不同时间点细胞增殖抑制率,DNA Ladder法检测细胞凋亡,Annexin V/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率,Rhodamine123染色流式细胞术检测线粒体膜电位(ΔΨm)变化,ELISA法检测胞浆细胞色素C(CYTC)水平,分光光度法检测Caspase-3活性,流式细胞术检测Bcl-2和Bax表达。结果MTT结果显示As2O3能抑制K562细胞生长,且呈现时间剂量依赖性;4~16μmol/L的As2O3作用24h均可诱导K562细胞凋亡,同时伴有ΔΨm下降,胞浆内CYTC蛋白浓度及Caspase-3活性增高,胞浆Bcl-2/Bax值下降,且均呈剂量依赖性。结论As2O3诱导K562细胞凋亡可能是通过降低ΔΨm,激活线粒体凋亡途径实现的,Bcl-2/Bax值下降可能与其有关。