APCDD1在直肠癌及结直肠腺瘤中的定量表达

目的建立荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测APCDD1 mRNA基因表达的方法，了解直肠癌及结直肠腺瘤组织中APCDD1 mRNA的表达水平。方法用荧光定量PCR方法检测86例直肠癌及癌旁组织、20例结直肠腺瘤及配对的正常黏膜组织APCDD1 mRNA相对表达水平并比较其差异。结果75％的结直肠腺瘤和65％的直肠癌表达上调，86例直肠癌APCDD1 mRNA平均相对表达水平为正常黏膜组的4．712倍，20例结直肠腺瘤中APCDD1 mRNA平均相对表达水平为正常黏膜组的3．872倍，直肠癌组和结直肠腺瘤组均较正常黏膜组织上调，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论APCDD1 mRNA表达在腺瘤和直肠癌中表达上调，但在直肠癌中与病理分级无明显相关。     

直肠癌癌旁移行粘膜MTS1基因产物表达的意义

目的 探讨直肠癌癌旁移行粘膜（ＴＭ）的性质及多种种瘤抑制基因（ＭＴＳ１）基因缺失的临床意义。方法 应用粘液组化方法观察了直肠癌旁ＴＭ的范围,免疫组化方法观察了ＭＴＳ１基因产物表达情况,并与正常粘膜及癌组织进行对照 结果 ＭＴＳ１基因产物在正常直肠膜阳性表达率最高,在癌旁ＴＭ、癌组织表达逐渐减少,三者差异有显著意义（Ｐ〈０．０５）;ＭＴＳ１阴性的直肠癌病例,癌旁ＴＭ的明显高于ＭＴＳ１阳性的病例（Ｐ〉     

肺癌肿瘤抑制物1和Wnt-1诱导分泌蛋白3在非小细胞肺癌组织中表达及其临床意义

目的 探讨肺癌肿瘤抑制物1 (TSLC1)和Wnt-1诱导分泌蛋白3(WISP-3)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及两者与NSCLC临床特征之间的关系.方法 采用免疫组织化学法检测80例NSCLC患者手术切除的癌组织和癌旁组织中TSLC1和WISP-3表达水平.结果 TSLC1在NSCLC癌组织中的表达率为30.00％ (24/80),明显低于在癌旁组织中表达率71.25％ (57/80),两者差异有统计学意义(P＜0.01),WISP-3在NSCLC癌组织中的表达率为67.50％( 54/80),明显高于在癌旁组织中表达率16.25％ (13/80),两者差异有统计学意义(P＜0.01).TSLC1表达水平与NSCLC组织学分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关(P＜0.05),WISP-3表达水平与NSCLC组织学分化程度、TNM分期、年龄明显相关(P＜0.05).结论 TSLC1和WISP-3可能参与NSCLC的发生发展,并可能是NSCLC预后相关指标.     

WISP-1在结直肠良恶性病变中的表达

目的观察Wnt1导分泌蛋白-1的表达，探讨其在结直肠腺瘤形成及癌变过程中的作用。方法用免疫组织化学LSAB法分别检测100例结直肠癌、58例结直肠腺瘤、40例正常结直肠黏膜中WISP-1蛋白的表达。结果结直肠癌、结直肠腺瘤、正常结直肠黏膜WISP-1表达阳性率分别是69．0％（69／100）、39．7％（23／58）和20．0％（8／40），组间差异有统计学意义（P〈0．01），即在癌前病变开始逐渐出现高表达趋势。WISP-1的表达在结直肠癌中与分化程度、Dukes分期和淋巴结转移均密切相关（P〈0．05）；WISP-1的表达在结直肠腺瘤中与腺瘤大小，不典型增生程度、数目及组织学类型有关（P〈0．05）。结论WISP．1可能是结直肠肿瘤发生发展中的重要促进因子，参与了腺瘤早期形成以及癌变过程，其可以作为结直肠癌早期诊断的标志和治疗的新靶点。     

SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测结直肠癌中Tiam-1和HPA-1基因的表达

目的：检测Tiam-1基因和HPA-1基因在结直肠癌组织中的表达水平,探讨两者与结直肠癌侵袭转移及预后的关系。方法：选取2009年8月-2010年1月我院行手术治疗的结直肠癌患者53例。采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测Tiam-1 mRNA及HPA-1 mRNA在结直肠癌组织、癌旁组织（距癌2cm）及远离结直肠癌的手术切缘正常组织中（距癌5cm以上）的表达水平,并分析两者与结直肠癌临床病理参数的关系。结果：HPA-1 mRNA和Tiam-1 mRNA在结直肠癌中的表达水平（35.87±12.30,40.79±9.32）显著高于癌旁组织（13.13±6.71,12.39±5.38）和正常组织（4.06±3.55,6.09±4.86,P均〈0.05）,癌旁组织中二者的表达水平高于正常组织,差异有统计学意义（P〈0.05）。Tiam-1和HPA-1的基因表达水平在肿瘤的高/中分化和低分化之间,T1～T2和T3～T4之间,有淋巴结转移和无淋巴结转移之间、有血行转移和无血行转移之间及Ⅰ～Ⅱ和Ⅲ～Ⅳ期之间的差异均有统计学意义（P均〈0.05）。Spearman等级相关分析证明了Tiam-1与HPA-1的表达呈正相关趋势（OR=0.46,P=0.048）。结论：Tiam-1 mRNA和HPA-1 mRNA在结肠癌组织中呈高表达,且二者的表达增强可促进结肠癌的侵袭转移,联合检测Syndecan-1及HPA-1对于指导结肠癌临床治疗及判断预后有重要价值。     

miR-150 和miR-134 在结直肠癌及腺瘤中的表达

目的：探讨miR-150和miR-134在结直肠癌与结直肠腺瘤中的表达及意义。 方法：采用实时定量荧光PCR（qRT-PCR）检测40例结直肠癌组织及其癌旁正常组织与29例结直肠腺瘤组织中miR-150和miR-134表达,并分析两者与结直肠癌临床病理因素之间的关系。 结果：与癌旁正常组织比较,miR-150在腺瘤组织中表达明显升高,而在癌组织中表达明显降低（均P<0.05）;miR-134在腺瘤组织中表达明显降低（P<0.05）,但在癌组织中表达差异无统计学意义（P>0.05）;miR-150表达水平与结直肠癌的组织学类型及分化程度有关（P=0.033,P=0.041）;miR-134表达水平与结直肠癌的各项临床病理因素均无明显关系（均P>0.05）。 结论：miR-150在结直肠癌中表达下调,提示其可能有潜在的抑癌作用,miR-150和miR-134在结直肠腺瘤中的表达均发生异常,提示两者均可能与结直肠腺瘤的发生密切相关。     

Polo样激酶1在结肠直肠癌组织中的表达及其在结肠直肠癌细胞增殖中的作用

目的：探讨Polo样激酶1（PLK1）在结肠直肠癌组织中的表达及体外RNA干扰抑制plk1对结肠直肠癌细胞增殖的影响。方法：应用免疫组化法测56例结肠直肠癌病人的癌组织和癌旁正常组织中PLK1及PCNA的表达;用Western印迹法测肠癌主要细胞株中PLK1的表达;针对plk1基因设计3条小干扰RNA片段,瞬时转染高表达结肠直肠癌细胞株,采用实时定量PCR及Western印迹法测转染后PLK1的基因及蛋白的表达水平;CCK-8法测细胞增殖能力。结果：结肠直肠癌组织中PLK1、PCNA的表达明显高于癌旁正常组织（P〈0.05）,两者的表达与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移和浸润深度均有相关性（P〈0.05）,且两者间的表达呈正相关（P〈0.05）。Western印迹法筛选出SW1116细胞株PLK1表达最高,下调PLK1表达后,其增殖能力较对照组都有所下降（P〈0.05）。结论：PLK1在结肠直肠癌组织中呈过表达,可能在结肠直肠癌细胞增殖调节失衡中起重要作用,并进一步促进其迁移和浸润,其有望成为评估结肠直肠癌进展及预后的一个重要指标。     

Plexin A1在直肠癌中的表达及其意义

目的 研究Plexin A1在直肠癌中的表达及其与淋巴结转移的关系.方法 采用免疫组化和RT-PCR方法检测67例直肠癌组织和45例正常直肠黏膜组织中Plexin A1的表达,并分析Plexin A1与患者临床病理特征的关系.结果 RT-PCR和免疫组织化学结果显示,直肠癌组织中Plexin A1的mRNA表达明显高于癌旁的直肠正常黏膜组织（P＜o.05）.在直肠癌患者中Plexin A1的表达强度与直肠癌的微血管密度（Microvessel density,MVD）、淋巴结转移（P＜o.05）和Dukes分期（P＜o.05）具有相关性.结论 Plexin A1在直肠癌组织中高表达,可能参与了直肠癌的发生发展和血管生成过程,检测Plexin A1的表达能够作为直肠癌的诊断和转移的依据.     

MTSS1蛋白在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨肿瘤转移抑制因子1（MTSS1）基因的表达与结直肠癌生物学行为及预后之间的关系。方法应用免疫组织化学的方法分析MTSS1蛋白在60例结直肠癌患者组织,以及60例同一患者癌旁10cm正常黏膜组织标本中的表达情况,并应用SPSS13．0软件对实验数据进行统计学分析,MTSS1在癌旁正常黏膜和结直肠癌组织中的表达采用卡方检验四格表,MTSS1蛋白的表达与结直肠癌患者临床病理参数的数据采用RxC表的x2检验,校正使用Fisher确切概率法,以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果MTSS1在癌旁10cm正常黏膜和结直肠癌组织中的表达率分别为：100％（60／60）和28．3％（17／60）,在结直肠癌组织中的表达显著低于癌旁10em正常黏膜,其差异有显著统计学意义x2=67．013,P〈O．01）;MTSS1的表达与性别、年龄、病灶位置、癌组织大体分型和远处转移等因素均无明显关系钟=0．134、0．019、0．002、0．334、1．433、P〉0．05）;MTSS1表达下调与结直肠癌浸润深度、分化程度、淋巴结转移以及Dukes分期等因素相关（x2=9．520、13．849、7．171、8．026、P〈0．05）。结论MTSS1蛋白异常表达可能在结直肠癌的发生发展及其浸润转移中起着重要作用。     

Bmi-1及Mel-18反向调节结直肠癌的形成和发展

目的探讨Bmi-1和Mel-18在结直肠癌组织中的表达和临床意义。方法采用免疫组织化学染色法和RT—PER检测Bmi一1和Mel一18基因与蛋白在50例结直肠癌组织、20例结直肠腺瘤组织及20例正常结直肠组织中的表达。分析两者在结直肠癌组织中的表达情况和相关性,以及两者表达与临床病理因素的关系。结果Bmi-1mRNA和蛋白的表达在正常结直肠组织、结直肠腺瘤组织、结直肠癌组织均呈明显依次递增（均P〈0．05）,而Mel-18则呈反向趋势;结直肠癌组织中Bmi．1与Mel-18mRNA及蛋白表达之间均明显呈负相关（r=-0．551,P=0．000;r=-0．579,P：0．000）;Bmi-1基因表达和蛋白阳性率水平与远处转移及临床分期呈正相关（P〈0．05）。Mel-18基因表达水平与远处转移及临床分期呈负相关（P〈0．05）。结论Bmi-1高表达与Mel-18低表达可能是结直肠组织恶性转变以及结直肠癌发生浸润转移的重要生物学诊断指标。     

Genetic polymorphisms of CYP1A1, CYP2E1, GSTM1, and GSTT1 associated with head and neck cancer

BACKGROUND: Alcohol intake and tobacco smoke, in addition to other environmental and genetic factors, have been associated with head and neck cancer. We evaluated the role of metabolic enzyme polymorphisms on the risk of head and neck cancer in a hospital-based case-control study. METHODS: CYP1A1MspI, CYP2E1PstI, GSTM1, and GSTT1polymorphisms were evaluated in 103 histologically confirmed head and neck cancer cases and 102 controls by means of polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism methods. RESULTS: GSTM1null increased the risk of head and neck cancer (odds ratio [OR], 2.2; 95% confidence interval [95% CI], 1.24-3.79), oral cancer (OR, 2.8; 95% CI, 1.28-5.98), and pharyngeal cancer (OR, 2.2; 95% CI, 1.08-4.63). CYP2E1PstI polymorphism indicated a risk for oral cancer (OR, 3.6; 95% CI, 1.29-11.56). The joint effect of GSTM1 null and CYP1A1 polymorphism increased the risk of head and neck cancer (OR, 2.4; 95% CI, 1.13-5.10). CONCLUSIONS: GSTM1 null alone or associated with CYP1A1 increased the risk of head and neck cancer; the CYP2E1PstI mutated allele increased the risk for only oral cancer.     

手术创伤中腹膜组织Sp1、COL1A1和TIMP-1的表达

目的　探讨人手术创伤腹膜组织中核转录因子Sp1激活 ,COL1A1和TIMP 1表达变化与腹膜纤维化之间的关系。方法　采用凝胶电泳迁移率改变分析法 (EMSA)检测手术创伤后不同时间的腹膜组织核转录因子Sp1的表达水平 ,WesternBlot检测COL1A1和TIMP 1蛋白表达 ,Masson染色观察腹膜组织中胶原纤维的变化。结果　Sp1在手术创伤后 0 .5h被活化 ,随着手术时间延长Sp1活性逐渐增强 ,至创伤后 4h时达高峰 ,同时创伤腹膜组织中的COL1A1和TIMP 1蛋白表达水平逐渐升高 ,存在差异显著性 (P <0 .0 1)。在手术创伤期内随手术时间的延长腹膜组织中胶原纤维增加。结论　核转录因子Sp1活化导致Ⅰ型胶原合成增加 ,细胞外基质降解减少 ,从而启动腹膜纤维化进程。     

IgA肾病患者C1GALT1C1基因的体细胞突变筛查

目的 探讨IgA肾病（IgAN）患者β1,3半乳糖转移酶的分子伴侣Cosme编码基因C1GALT1C1基因体细胞突变情况。方法 27例IgA肾病患者及19例正常健康对照作为研究对象。提取研究对象外周血基因组DNA,扩增C1GALT1C1基因的编码区,采用PCR产物直接测序的方法进行突变筛查。然后,分离其中15例IgA肾病患者及7例健康男性对照的外周血B淋巴细胞,提取DNA。对C1GALT1C1基因编码区进行扩增,PCR产物进行克隆,各挑选平均8～10个克隆进行体细胞突变筛查。结果 46例个体全血基因组DNA的PCR扩增产物测序发现,2例患者及1例健康对照存在外显子T393A变异,次等位基因频率（MAF）为6．9%[SNP数据库（dbSNP）报告为9．5%]。B淋巴细胞DNA序列分析显示,在22例个体（15例IgA肾病患者,7例健康对照）送检的总共202个克隆中,未发现新的突变和多态性位点。结论 C1GALT1C1基因编码区T393A多态位点在本研究人群中为唯一发现的多态性位点,其次等位基因频率（MAF）较既往报道略低。本研究尚未发现IgA肾病患者B淋巴细胞存在体细胞突变。     

Deficiency of TBL1XR1 causes asthenozoospermia

Transducin (β)-like 1 X-linked receptor 1 (TBL1XR1) is an evolutionarily conserved protein related to spermatozoa. To clarify its role and mechanism of action in spermatozoa, qRT-PCR was used to analyse the expression of TBL1XR1 in human spermatozoa and mouse testes. The mice were established as an animal model by injecting the mice testes with small interfering RNA against TBL1XR1 or control siRNA. Our results indicated that deficiency of TBL1XR1 in mice reduced the motility of spermatozoa and disrupted the histone-to-protamine transition. We also found the decreased expression of TBL1XR1 in the spermatozoa of human patients with asthenozoospermia (AZ) compared with that in the spermatozoa of healthy males. Moreover, we carried out chromatin immunoprecipitation analyses and found that genes downstream of TBL1XR1 were related to sperm motility. Thus, TBL1XR1 might be related to sperm motility and might function through its downstream genes. Our data highlight the role of TBL1XR1 involved in spermatozoa and provide new molecular insights into the intricate systems required for male fertility.     

通过PD-1/PD-L1共刺激通路诱导小鼠胰岛移植免疫耐受的研究

目的 观察重组腺病毒Ad-PD-L1对诱导小鼠胰岛移植免疫耐受的作用.方法 酶切含有小鼠全长PD-L1 cDNA的pSport 1-mCD274质粒,亚克隆到穿梭质粒pShuale-GFP-CMV(-)上,再通过酶切、连接等方法构建腺病毒骨架质粒pAdxsi-GFP-CMV-PD-L1,转化DH5α感受态细菌,筛选阳性克隆.经酶切、测序鉴定正确,线性化后脂质体法转染293细胞进行包装、扩增,氯化铯密度梯度离心纯化病毒.链脲霉素(250 mg/kg)腹腔注射诱导C57BL/6(H-2b)小鼠糖尿病模型,将C57BL/6小鼠随机分为3组,A为对照组,B为Ad-EGFP处理组,C为Ad-PD-L1处理组,在进行胰岛移植的前1天,经尾静脉输注5×108 pfu的Ad-PD-L1.将DBA/2(H-2d)小鼠的胰岛移植在糖尿病小鼠肾被膜下.术后监测不同时间各组小鼠的血糖变化及胰岛移植物的存活时间,并观察混合淋巴细胞反应的特异性.结果 酶切及测序证实Ad-PD-L1构建成功.Ad-PD-L1在小鼠体内可以高效地表达PD-L1,Ad-PD-L1治疗组胰岛移植物的存活时间明显延长到27.63±3.51 d(P<0.01),混合淋巴细胞反应表明小鼠对供体反应特异性降低. 结论通过PD-L1/PD-1共刺激通路可以抑制T细胞的活化,从而延长了胰岛移植物的存活时间.     

Effect of anti-ICAM-1 and anti-LFA-1 antibodies on rat liver transplantation

The effect of the anti-cell adhesion molecule anti-bodies, anti-ICAM-1 (1A29) and anti-LFA-1 (WT1), on rat liver transplantation was investigated. Livers from ACI rats were transplanted into Lewis rats by Kamada's method and during the recipient operation 1A29 1 mg/kg, and WT1 1 mg/kg were administered intravenously to one group of rats (treated group). The survival time of the treated group was significantly longer than that of the untreated group, but permanent unresponsiveness could not be induced. Postmortem examination revealed little histological evidence of acute rejection in the treated rats, in which the main cause of death was thought to be chronic rejection.     

Syndecan-1和MMP-1在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨Syndecan-1和MMP－1在胃癌组织中的表达及意义。方法：应用SP免疫组化染色技术，检测82例胃癌、18例异型增生及36例正常胃黏膜组织中Syndecan-1和MMP－1的表达。结果：胃癌组织Syndecan-1表达阳性率为57．32％（47/82),胃异型增生组织为83．33％（15／18），正常胃黏膜组织均呈Syndecan-1阳性表达。胃癌组织的Syndecan-1表达与正常胃黏膜上皮、胃异型增生组织中的表达相比差异显著（P＜0．01）。胃癌组织的MMP－1表达阳性率为98．78％（81／82），其中强阳性表达占45例（54．88％）；胃异型增生组织MMP－1阳性率为88．89％（16／18），无强阳性表达；正常胃黏膜组织MMP－1表达阳性率为5．56％（2／36）。胃癌组织的MMP－1表达与正常胃黏膜上皮、胃异型增生组织中的表达相比差异显著（P＜0．01）。Syndecan-1表达的减弱、MMP－1表达的增强与胃癌的淋巴结转移、静脉侵犯、淋巴管仇犯、浸润深度、TNM分期显著相关（P＜0．05）。Syndecan-1表达与MMP－1表达呈负相关。结论：联合检测Syndecan-1和MMP－1对胃癌的早期诊断及判断预后有参考价值。     

Exploration the potential mechanism of the SIRT1 and its target gene FOXO1/PPARGC1A in uteropelvic junction obstruction

BackgroundUteropelvic junction obstruction (UPJO) is a common surgical condition, which refers to the blockage of urine flowing through kidney into proximal upper ureter. However, the underlying mechanism of UPJO is poorly understood, especially the regulated and targeted genes of sirtuin 1 in UPJO.MethodsWe sequenced three renal tissues on the obstructed side of independent children with <20% differential renal function (DRF) and three samples with >40% DRF. Gene expression values were obtained and compared for differentially expressed genes (DEGs). Protein-protein interaction (PPI) analysis was conducted to identify the overlapping proteins of DEGs and Sirtuin 1 (SIRT1). The co-expression genes of overlapped genes were computed using Pearson correlation coefficient. The potential role of SIRT1 gene in UPJO was explored by resequencing 3 microarray data from RNA interference (RNAi) SIRT1 lines of renal tubular epithelial (NRK52E) cells in rat and three control datasets were sequenced again. The DEGs were obtained as parallel. GO/KEGG enrichment analysis and co-expression network were conducted to explore the underlying mechanism, particularly shared pathways or function in GO/KEGG enrichment analysis results.ResultsA total of 427 up-regulated genes and 1,099 down-regulated genes were identified among 3 mRNA-seq of renal tissue on the obstructed side of the independent children with <20% DRF and 3 samples with >40% DRF. According to prediction using the Search Tool for Retrieval of Interacting Genes/Proteins, 2 PPIs, FOXO1 and PPARGC1A, were identified among 2,524 DEGs, predicted as targets of SIRT1. Gene set enrichment analysis (GSEA) of their co-expression genes showed they may co-participate in biological activities including fatty acid degradation, regulation of signal transduction by p53 mediator. Moreover, GSEA results of DEGs was confirmed through RNAi SIRT1 lines of rat renal tubular epithelial (NRK52E) cells.ConclusionsUPJO may cause abnormal phenotypic changes of renal tubular epithelial cells through SIRT1/FOXO1 mediated protein transport, establishment of protein localization, and intracellular transport. In addition, UPJO is involved in regulation of signal transduction, regulation of intracellular estrogen receptor signaling pathways, and nucleoprotein localization through SIRT1/PPARGC1A-mediated p53 mediators, causing abnormal phenotypic changes in renal tubular epithelial cells.