中国首例甲型H1N1流感二代病例的临床特征

目的了解2009年我国首例甲型H1N1流感二代病例的流行病学、临床、病原学检查特点及预后转归。方法对患者流行病学及临床资料进行回顾性分析,并采用实时荧光聚合酶链反应测定甲型H1N1流感病毒核酸。结果患者与甲型H1N1流感输入病例接触1天后发病。以发热、咽痛、咳嗽起病,白细胞及CD4＋T淋巴细胞计数降低,无肺炎等并发症。多级机构检测咽拭子甲型H1N1流感病毒核酸阳性确诊甲型H1N1流感。RT-PCR测序证实其病毒核苷酸序列与一代输入病例的一致,同源性为100%。经奥司他韦抗病毒及对症治疗痊愈出院。结论本病例的传染源明确,为我国首例报告的甲型H1N1流感二代确诊病例,其临床表现轻,病情恢复快。未发生院内感染,早隔离早诊断等防控措施有效。     

儿童甲型H1N1流感和季节性流感患者的病毒载量及相关临床症状研究

目的 分析并比较儿童甲型H1N1流感和季节性流感患者咽拭子标本的病毒载量及相关临床症状.方法 应用荧光PCR方法对采集的咽拭子标本进行检测,并通过建立核酸标准品,绘制标准曲线,测定标本中的病毒载量,同时结合所收集的患者临床症状数据资料应用随机区组方差和卡方检验方法进行统计分析.结果 2009年9月至2010年9月期间收集的1,040份咽拭子标本中,共检出甲型H1N1流感病毒阳性标本120份,甲型H3N2流感病毒阳性标本61份,乙型流感病毒阳性标本99份;对收集的流感阳性标本病毒载量测定结果显示:不同型别,不同发病时间流感患者咽拭子标本的病毒载量差异无统计学意义(P＞0.05);甲型H1N1流感、季节性流感感染者的性别比例差异无统计学意义,甲型H1N1流感感染者出现咳嗽,流涕临床症状者明显高于与乙型流感感染者.结论 甲型H1N1流感患者咳嗽,流涕症状比季节性乙型流感患者多见,而甲型H1N1流感和季节性流感患者咽拭子标本的病毒载量无显著性差异.     

人感染高致病性禽流感病毒H5N1核酸检测方法的建立及应用

目的 建立人感染高致病性禽流感病毒H5N1的核酸检测方法,用于人感染高致病性禽流感病毒疑似病例临床标本的检测.方法 针对甲型流感病毒保守基因M设计RT-PCR和real-time PCR引物检测是否为甲型流感病毒,同时针对H5N1禽流感病毒设计针对H5和N1基因的特异性RT-PCR和real-time PCR引物作亚型检测,建立禽流感H5N1病毒RT-PCR和real-time PCR检测方法.结果 本研究建立的RT-PCR和real-time PCR方法可以特异性地检测H5N1病毒,并且与人流感病毒H1、H3没有交叉反应.RT-PCR检测方法灵敏度可到1TCID50,real-time PCR灵敏度可达0.01TCID50.利用上述方法检测人感染高致病性禽流感病毒H5N1疑似病例临床标本,从42例不明原因肺炎病例中检测出阳性标本13例.结论 本研究建立的RT-PCR和real-time PCR方法可以用于人感染高致病性禽流感病毒H5N1临床标本的实验室检测.     

2009甲型H1N1流感大流行期间北京儿童的流感监测

目的 了解2009年甲型H1N1流感大流行期间北京地区儿童中流感流行的情况.方法 采用WHO推荐的实时荧光定量RT-PCR和国家流感中心推荐的分型方法,对2009年甲型H1N1流感大流行期间因流感样症状来首都儿科研究所附属儿童医院就诊患儿的咽拭子标本进行流感病毒核酸检测.结果 2009年6月1日至2010年2月28日期间共检测了4363份咽拭子标本,其中623例为甲型H1N1阳性,阳性率为14.3%,657例为其他甲型流感病毒阳性(15.1%),所有甲型流感病毒的总阳性率为29.3%.623例中有23例为危重症病例(占阳性患者的3.7%),其中5例死亡.618例信息完整的甲型H1N1病例中,患儿年龄为14天～16岁,性别比例为男比女为1.3:1.1～3岁儿童占25.2%,3～6岁学龄前儿童和6～12岁学龄儿童所占比例相近,各约占30%.在监测期间,仅呈现了一个甲型H1N1的流行波.2009年11月达到最高峰,随后减弱,2010年2月快速下降至2.7%.对监测期间每周20～30份临床标本同时进行季节性流感的监测显示,季节性H3N2、甲型H1N1和乙型流感交替流行.呼吸道合胞病毒(RSV)在甲型H1N1流行趋势减缓后逐渐流行成为流行优势株.结论 2009年6月至2010年2月北京地区儿童中出现甲型H1N1的流行,主要累及学龄前和学龄儿童.季节性流感和RSV与甲型H1N1交替流行.     

甲型H1N1流感双重荧光PCR快速筛查方法的研究

目的优化一种甲型H1N1流感的双重荧光PCR快速筛查方法。方法根据WHO推荐的甲型H1N1流感检测方案合成、标记引物和探针。通过改进反应条件与参数．优化了甲型H1N1流感的双重荧光PCR检测方法。结果该方法敏感度高,特异性强,重复性好。应用该方法检测患者实际样品,结果与WHO推荐方法的检测结果一致;应用该法可在4h内完成对样品中甲型H1N1流感的检验。结论本研究优化的甲型H1N1流感的双重荧光PCR快速筛查方法可用于甲型H1N1流感的诊断。     

北京市甲型H1N1型流感病毒基因检测与流行趋势分析

目的 通过对甲H1N1型流感病毒基因的检测分析,揭示其基因变异情况及探讨甲型流感病毒的流行趋势,为甲型流感的防控提供理论依据.方法 样本为患者鼻咽部的粘膜上皮细胞和分泌物.取200μL标本置于核酸分离纯化系统中提取核酸,然后以LightCycler 480 PCR仪进行核酸扩增,最后分析曲线判断结果.每份标本均对甲型H1N1流感病毒基质蛋白基因（M基因）、核蛋白基因（NP基因）、血凝素基因（HA基因）、人类的RNA酶P基因（RNase P基因）进行检测和分析.结果判定：M基因、NP基因、HA基因、RNase P基因均阳性,为真阳性;HA基因阴性,其它三种基因阳性,为可疑阳性.结果 共检测3673份样本,其中,阴性2404份,甲型流感阳性样本共1269份,阳性率34.5％;阳性样本中季节性甲型流感641份,占50.5％;甲型H1N1流感阳性628份,占49.5％（真阳性433份,占68.9％,可疑阳性195份,占31.1％）.在整个流行季,真阳性与可疑阳性在相同时间的检出率比值基本不变.甲型H1N1检出高峰在10月,季节性甲流则分别在9月和12月.中青年人群的阳性检出率为57.5％,儿童为39.9％,而60岁以上的老年人仅占2.6％.结论 甲型H1N1流感以M、HA、NP、RNaesP四种基因阳性毒株为主,其流行高峰出现在10月份,感染人群以中青年和儿童为主.     

荧光定量PCR在筛查甲型流感病毒中的诊断价值

目的:探讨荧光定量PCR技术在筛查甲型流感病毒中的诊断价值。方法:用荧光定量RT-PCR方法检测150例疑似流感患者咽拭子中的甲型流感病毒RNA,用XT-1800全自动血液分析仪检测150例疑似流感患者EDTA抗凝全血中的白细胞计数,用胶体金法检测54例甲型流感病毒RNA阳性患者的甲型流感病毒核心蛋白。结果:在150例患者中,甲型流感病毒RNA检测阳性者有54例,阳性率为36%。54例甲型流感病毒RNA检测阳性者采用胶体金法检测甲型流感病毒核心蛋白,结果均为阴性。甲型流感病毒RNA检测阳性者白细胞计数为(6.81±2.12)×109/L,阴性者为(6.64±3.13)×109/L,白细胞计数在甲型流感患者和非甲型流感患者中无统计学差异(P0.05)。结论:荧光定量RT-PCR在检测甲型流感病毒RNA中有较好的阳性检出率,其敏感性和特异性明显优于胶体金方法和白细胞计数,能快速有效筛选出甲型流感患者,防止疫情爆发流行。     

中国大陆首例人感染高致病性禽流感病毒(H5N1)病例的实验室诊断

目的 对2005年10月湖南省湘潭市湘潭县发生的一名不明原因肺炎病例进行实验室检测,以确定导致该病例的主要病因.方法 采集病例呼吸道标本以及血清标本,对呼吸道标本利用分子鉴别诊断技术以及RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR检测病毒核酸;通过血凝抑制试验以及微量中和试验检测血清中的特异性抗体.结果 该病例所有的呼吸道标本H5N1病毒特异性核酸及病毒分离均为阴性.红细胞凝集抑制及微量中和实验显示,恢复期血清较急性期血清H5N1特异性抗体阳转并且有4倍以上增高.结论 通过实验室检测结果分析,该病例为中国大陆第一例人感染高致病性禽流感病毒（H5N1）实验室确诊病例.     

北京市房山区2014-2015年流感病原学监测结果分析

目的 通过对北京市房山区2014-2015年流感病原学的监测结果进行分析,了解房山区流感病毒的流行特征.方法 采集房山区哨点医院流感样病例的咽拭子标本1 339份,用荧光定量PCR法检测核酸及亚型,同时进行流感病毒分离及血凝实验(HA)检测.结果 2014年1月6日-2015年12月28日,共采集1 339份流感样病例咽拭子,荧光定量PCR法检测核酸阳性数为215例(阳性率为16.06％),其中甲型H1N1流感病毒32株,甲型H3N2流感病毒107株,乙型流感病毒76株.病毒分离阳性数为148例(阳性分离率为11.05％).本年度第2-6周和第48-52周流感阳性率较高,且第2-6周以甲型H1N1和乙型流感病毒为主,第48-52周以甲型H3N2流感病毒为主.结论 房山区2014-2015年流感高发季节为第2-6周和第48-52周,上半年致病病原体以甲型HIN1流感病毒和乙型流感病毒为主,下半年以H3N2流感病毒为主,不同性别之间各亚型流感病毒的阳性率构成比无统计学差异(P＞ 0.05).     

甲型H1N1流感患者排毒规律及抗病毒治疗研究

目的 研究2009年深圳市收治的甲型H1N1流感确诊病例排毒规律和抗病毒治疗疗效.方法 75例患者均经两次鼻咽拭子甲型H1N1流感病毒核酸检测阳性（RT-PCR）,此后每天检测病毒核酸直至连续两天均阴性.第1次病毒检测阳性后立即随机分三组抗病毒治疗,分别为奥司他韦（Oseltamivir）（组Ⅰ）、中药（组Ⅱ）和奥司他韦联合中药（组Ⅲ）抗病毒治疗,5 d为一疗程.应用流式细胞仪检测T细胞亚群和IL-17表达.结果 75例患者中,78.7%（59/75）在起病后甲型H1N1流感病毒核酸阳性持续≤7 d,平均年龄为（22.25±10.38）岁;21.3%（16/75）病毒持续＞7 d,年龄为（17.16±13.66）岁.对其中56例患者细胞与体液免疫功能进行分析,发现其IL-17表达明显低于季节性流感和健康人（P＜0.01）.进一步研究发现,10例病毒持续＞7 d的患者IL-17表达值（1.91±0.80）明显低于46例病毒持续≤7 d者IL-17表达（3.05±1.59）（P＜0.05）,也明显低于季节性流感（P＜0.01）和正常对照组（P＜0.001）.比较三治疗组抗病毒治疗5 d疗程结束时病毒核酸转阴率,分别为组Ⅲ92.86%,组Ⅰ71.43%,组Ⅱ46.15%,组Ⅱ明显低于前两组（分别为P＜0.01,P＜0.05）.组Ⅲ经治疗后体温恢复正常时间较组Ⅰ、组Ⅱ缩短（P＜0.05）.结论 IL-17和年龄与甲型H1N1流感病毒感染及排毒时间长短可能存在一定关系.奥司他韦联合中药治疗在抗病毒疗效和减轻症状方面均有其独特优势.     

Comprehensive sequence analysis of HLA-DQA1 and -DQB1 alleles and characterization of DRB1-QAP-DQA1-DQB1 haplotypes

It is well known that both chain and β chain of HLA-DQ are highly polymorphic. However the polymorphisms outside the hypervariable region were not fully examined so far. To further clarify the polymorphisms in DQ genes, we determined the nucleotide sequences of full length cDNA, spanning from the leader sequence to the stop codon, from 15 DQA1 alleles and 15 DQB1 alleles. We identified several new DQ alleles which had identical exon 2 sequence and were different in other exons. On the basis of the sequence analyses, a comprehensive PCR-based oligotyping system for DQA1 gene was established. We then characterized DRB1-QAP(DQA1 promoter)-DQA1-DQB1 haplotypes of B-lymphoblastoid cell lines homozygous for HLA and healthy unrelated Japanese and Norwegian populations. It was revealed that DQA1 alleles, which were identical in exon 2 but different in other exons, showed close linkage disequilibrium with diferent characteristic DRB1, QAP and DQB1 alleles. These results suggest that DR-DQ haplotypes have been generated in the early stage of molecular evolution.     

Initial Changes of Rat Leukemia Induced by 1-Ethyl-1-Nitrosourea and 1-Butyl-1-Nitrosourea

The initial histological changes of leukemia were investigated in rats to which 1-ethyl- 1-nitrosourea and 1 butyl 1 nitrosourea were orally administered. The appearance of orthochromatic erythroblasts in the peripheral blood was used as the index of the initial stage of leukemia. The rat leukemia progressed from solitary lesions to scattered and further diffuse lesions. These leukemias are thought to begin as one, or only a few nodular foci, mainly in the bone marrow and partly in the spleen. Acta Pathol Jpn 42: 158–165, 1992.     

FoxO1 基因对Jurkat 细胞FoxO1-KLF2-S1P1 通路的调节作用

目的:通过构建FoxO1 表达和干扰慢病毒载体,建立细胞内FoxO1-KLF2-S1P1 信号通路调控研究模型,观察FoxO1 过表达、干扰表达在Jurkat 细胞内对其下游分子表达及功能的影响。方法:构建FoxO1 表达和干扰表达慢病毒载体,分别感染Jurkat 细胞,采用荧光定量PCR、Western blot 和流式细胞术检测S1P1、CD62L、CCR7、CD69 mRNA 水平和蛋白分子的表达。结果:FoxO1 过表达组于感染后120 h FoxO1、KLF2、S1P1 和CD62L mRNA 水平显著增高(P<0.05),FoxO1、FoxO1-p 和KLF2 胞浆蛋白水平增高,S1P1+细胞和CD62L+ 细胞比率增高(P<0.05),CCR7+ 细胞和CD69+ 细胞未见显著改变(P>0.05)。FoxO1 干扰组于转染后120 h FoxO1、KLF2、S1P1 和CD62L mRNA 水平降低(P<0.05),FoxO1、FoxO1-p 和KLF2 胞浆蛋白水平低于对照组,S1P1+细胞百分比增多(P<0.05) ,但S1P1+细胞和CD62L+细胞在72 h 时减少(P<0.05)。结论:FoxO1 表达和干扰慢病毒载体转染Jurkat 细胞并调节KLF2、S1P1 和CD62L 等分子的表达,为开展细胞内FoxO1-KLF2-S1P1 信号通路调控和细胞相关功能的研究打下了基础。     

Initial changes of rat leukemia induced by 1-ethyl-1-nitrosourea and 1-butyl-1-nitrosourea.

The initial histological changes of leukemia were investigated in rats to which 1-ethyl-1-nitrosourea and 1-butyl-1-nitrosourea were orally administered. The appearance of orthochromatic erythroblasts in the peripheral blood was used as the index of the initial stage of leukemia. The rat leukemia progressed from solitary lesions to scattered and further diffuse lesions. These leukemias are thought to begin as one, or only a few nodular foci, mainly in the bone marrow and partly in the spleen.     

韩国人CYP450 1A1、CYP450 2E1和GSTM1、GSTT1、GSTP1基因座遗传多态性分析

目的 调查代谢相关的CYP4501A1、CYP4502E1和GSTM1、GSIT1、GSTP1基因座在韩国人群中的遗传多态性分布状况。方法 采用多重聚合酶链式反应、聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术，分析300名韩国健康大学生的CYP1A1基因3′端限制性内切酶Msp Ⅰ位点、CYP2E1基因5′端转录调节区Pst Ⅰ位点和GSTM1、GSTT1缺失与存在、GSTP1基因第5外显子BsmA Ⅰ位点的基因型，计算基因型和基因频率。结果 CYP1A1基因型频率为ml／ml型39．7％、ml／m2型49．7％、m2／m2型10．7％，基因频率为ml 0．645、m2 0．355。CYP2E1基因型频率为cl／cl型66．7％、cl／c2型30％、c2／c2型3．3％，基因频率为C1 0．818、C2 0．182。GSTM1基因缺失型频率为53．3％。GSTT1基因缺失型频率为54．7％。GSTP1基因型频率为Ile／Ile型62％、Ile／Val型34．3％、VaL／Val型3．7％，基因频率为Ile 0．792、Val 0．208。基因分布符合Hardy-Weirtberg平衡定律。结论 韩国人CYP1A1、CYP2E1、GSTM1、GSTT1基因分布与我国人群较为相近，半数以上人缺乏GSTM1和GSTT1基因，纯合缺失型频率超过印度人的3倍。     

Differential regulation of CYP1A1 and CYP1B1 expression in resveratrol-treated human medulloblastoma cells

Resveratrol induces differentiation and Fas-independent apoptosis of medulloblastoma cells by a largely unknown mechanism. CYP1A1 and 1B1 are involved in resveratrol-mediated tumor suppression but their expression in medulloblastoma cells and their relevance to anti-medulloblastoma activity of resveratrol have not been described. The statuses of CYP1A1 and 1B1 in UW228-3 medulloblastoma cells without and with resveratrol treatments were elucidated in this study with ethoxyresorufin O-deethylation assay, followed by RT-PCR, immunocytochemical staining and Western blot hybridization. CYP1A1/1B1 enzymatic activity was low in UW228-3 cells but became several folds higher upon resveratrol treatments. CYP1A1 was undetectable and CYP1B1 was expressed in normally cultured cells. Accompanied by the increased fraction of apoptosis, enhanced CYP1A1 and downregulated CYP1B1 were observed in resveratrol-treated cells in time- and dose-related fashions. Our results demonstrate for the first time that in the medulloblastoma cell system, CYP1A1 upregulation is paralleled with resveratrol-induced differentiation and apoptosis, while CYP1B1 may not be an essential element in metabolic activation of resveratrol in those cells. CYP1A1 and 1B1 are resveratrol response genes and potential chemosensitive markers of medulloblastoma cells.