SLC7A11基因表达沉默的肝癌细胞株的构建及筛选

目的:构建并筛选出SLC7A11基因表达沉默的肝癌LM3细胞株,为研究SLC7A11基因的表达沉默对肝癌发生发展的影响奠定基础。方法:针对SLC7A11基因的不同部位合成3个siRNA的寡核苷酸片段,分别将其克隆到真核表达载体p GPU6/GFP/Neo中。利用脂质体转染法分别将质粒导入肝癌LM3细胞,24小时后观察细胞内GFP表达情况,并通过real-time PCR及Western blot的方法比较各组细胞SLC7A11基因mRNA和蛋白的表达水平,然后用G418对转染细胞进行筛选培养。结果:经酶切分析及测序验证,成功构建了靶向沉默SLC7A11基因的真核表达质粒p GPU6-SLC7A11-siRNA;通过real-time PCR及Western blot的方法验证,成功筛选出SLC7A11基因表达沉默的肝癌LM3细胞株。结论:成功构建并筛选出SLC7A11基因表达沉默的肝癌细胞株,为进一步研究SLC7A11基因表达沉默对肝癌细胞发生发展的影响奠定了基础。     

重症SARS的临床特点和胸部X线表现

目的总结和观察重症SARS的临床特点和胸部X线表现.方法对我院经临床诊断为重症SARS的24例患者的临床和胸部X线资料进行回顾性分析.结果 24例重症SARS患者中高热24例(100%),呼吸困难23例(95.8%),干咳19例(79.2%),胸闷、胸痛17例(70.8%).2例合并肝炎,1例合并糖尿病,1例同时伴有妊娠.外周血白细胞均正常或降低、淋巴细胞明显降低、低氧血症.胸部X线表现呈斑片状或小片状阴影15例(62.5%),大片状阴影5例(20.8%)及磨玻璃影9例(37.5%),肺纹理增粗11例(45.8%);肺部病灶位于两肺者18例(75%),其中病灶位于两中、下肺野者15例(62.5%),2例(8.3%)同时并发肺不张;肺部病灶位于一侧肺者6例(25%).病情未得到有效控制时,病灶24～48h内进展＞50%者14例(58.3%),且具有游走性.所有患者病灶吸收时间相对于非重症SARS明显延长,平均吸收时间为19d.8例(33.3%)肺部渗出性病灶吸收后肺内有不同程度的纤维化改变.结论重症SARS具有发热、咳嗽和呼吸困难以及外周白细胞正常和降低,CD4T淋巴细胞明显降低和低氧血症等特点.肺部X线表现以两中下肺野多叶多段、大小片状影为主;游走性及磨玻璃样影多见.     

恩替卡韦对慢性乙型肝炎患者细胞免疫功能的影响

目的 探讨慢性乙型肝炎患者接受恩替卡韦抗病毒治疗前后细胞免疫学功能的变化.方法 纳入对象为慢性乙型肝炎患者（CHB）50例,分为治疗组30例,对照组20例,治疗组接受恩替卡韦抗病毒治疗12个月,对照组未接受核苷类似物或干扰素抗病毒治疗.通过流式细胞术动态分析两组患者外周T细胞亚群和CD4＋ CD25＋ Foxp3＋调节性T细胞的表型和频率变化.结果 接受恩替卡韦治疗的患者,与治疗前比较,治疗后3个月、6个月和12个月其CD4 T细胞、CD4/CD8逐渐增高和CD4＋ CD25＋ Foxp3＋调节性T细胞比例逐渐显著性降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;而对照组观察前后差异无统计学意义（P＞0.05）.治疗组治疗后12个月,其调节性T细胞的下降幅度与血清HBV DNA的下降水平呈显著正相关（r=0.65,P＜0.01）.结论 恩替卡韦在有效抗病毒治疗同时具有改善患者的细胞免疫功能.     

乙型肝炎患者自然杀伤细胞G2D受体差异表达及其临床意义

目的 探讨乙型肝炎患者自然杀伤(NK)细胞表面NKG2D受体差异表达及临床意义.方法 应用流式细胞术和RT-PCR方法检测慢性乙型肝炎(CHB)患者22例、急性乙型肝炎(AHB)患者18例、HBV携带者(HBVC) 10例以及18名健康对照者(HD)的外周血NK细胞NKG2D蛋白和NKG2D mRNA表达水平,分析NKG2D表达水平与血清中HBV DNA定量的相互关系.采用方差分析和直线回归进行统计学处理.结果 NKG2D mRNA表达水平HBVC组为0.96±0.17、HD组为1.03±0.12、AHB组为1.53±0.30、CHB组为1.51±0.35,各组间的差异有统计学意义(q=7.586、7.485、7.920、7.880,均P＜0.01).NK细胞中NKG2D蛋白表达量AHB组为0.87±0.14、HD组为0.89±0.17、CHB组为0.67±0.09、HBVC组为0.59±0.13,各组间的差异有统计学意义(q=6.92、7.67、7.53、8.16,均P＜0.01).乙型肝炎患者NK细胞NKG2DmRNA表达水平与其对应的血清中HBV DNA水平分别呈负相关(CHB组r=-0.75,P＜0.01;AHB组r=-0.66,P＜0.01;HBVC组r=-0.69,P＜0.01).AHB、CHB NK细胞NKG2D蛋白表达量与血清HBV DNA水平呈负相关(r=-0.47、-0.45,均P＜0.05).结论 NKG2D诱导的NK细胞毒可能在乙型肝炎HBV清除中起一定的作用.     

SARS患者合并肺纤维化的影像学随访

目的探讨SARS患者并发肺纤维化的程度和发生率.方法对确诊的44例SARS患者进行影像学随访观察,包括摄胸部X线及CT扫描检查.结果44例SARS患者中,24例在住院时期有不同程度的肺部纤维化改变,其中19例重症病例中15例出现肺纤维化,25例普通型中9例并发肺纤维化(P＜0.05).出院时,12例(27%)存在肺纤维化.随访1个月、3个月、6个月及12个月时,分别有5例(11%)、3例(6%)、2例(4%)及2例(4%)两肺见纤维条索状影.结论肺纤维化是SARS患者较常见的并发症,重症较普通型者易发生肺纤维化,而且程度较重,吸收慢.     

不同亚型乙型病毒性肝炎患者T细胞亚群调查研究

目的研究不同亚型乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群变化及其临床意义。方法选择40例慢性活动性乙型肝炎、30例乙型肝炎病毒携带者、30例乙型肝炎肝硬化、20例急性乙型肝炎患者和30例健康对照者,采用流式细胞仪检测各组外周血T淋巴细胞亚群的表型和频率。结果与正常对照组比较,慢性活动性肝炎、肝炎肝硬变患者外周血CD4 、CD4 /CD8 比值均有显著性下降(P<0.01),以肝炎肝硬变下降最显著,慢性病毒携带者肝炎、急性乙型肝炎外周血T细胞亚群数量和比值变化不明显(P>0.05)。HBV DNA病毒载量与患者外周血CD4 T细胞数量无相关性(P>0.05)。结论慢性活动性乙型肝炎和肝硬化患者的细胞免疫功能降低,其下降程度与病毒复制水平无相关性。     

重型和普通型严重急性呼吸综合征患者合并肺纤维化和股骨头坏死的X线对比研究

严重急性呼吸综合征(SARS)是一种新发传染病，于2002年11月最早发生在广东省，短时间内迅速扩展到世界各国，病死率达11％(7％～27％)。我们对2003年2月至6月在我院住院治疗并确诊的44例sARs患者进行为期1年的X线随访调查，观察重型和普通型SARS患者并发肺纤维化以及应用大剂量糖皮质激素后股骨头坏死的发生情况。     

阴道病原菌感染与胎膜早破的关系及其耐药性分析

目的探讨影响孕妇胎膜早破的具体病原菌及其耐药情况,以合理地指导临床用药。方法随机选取2010年1月至2012年7月该院就诊的感染性胎膜早破的妊娠晚期女性为研究对象（患者组）,未发生胎膜早破的孕妇作为对照（健康对照组）,收集阴道分泌物病原菌,采用肉汤法进行药敏试验。结果患者组病原菌表现为无乳链球菌（b群）和金黄色葡萄球菌检出率高于健康对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。金黄色葡萄球菌对氨苄西林和青霉素完全耐药,对红霉素和克林霉素敏感性分别为33.3%和50%,对四环素为66.7%,对其他抗菌药物均达到83.3%以上。无乳链球菌（b群）对左旋氧氟沙星、阿奇霉素、红霉素和氧氟沙星的敏感性在30%∽40%,但对青霉素类及头孢类抗菌药物敏感率超过80%。结论阴道无乳链球菌（b群）和金黄色葡萄球菌感染对胎膜早破有影响。2种细菌目前药物敏感性控制较好,临床医师应合理使用抗菌药物,避免耐药菌株的产生。     

Th17淋巴细胞对甲型H1N1流行性感冒病毒清除作用的探讨

目的 探讨甲型H1N1流行性感冒(流感)患者Th17淋巴细胞表型、比例及其与病毒清除之间的关系.方法 将甲型H1N1流感患者70例、季节性流感患者30例、健康对照者68例分别纳入3组.通过细胞内染色,流式细胞技术测定3组人群外周血Th1、Th2、Th17、调节性T细胞(Treg)淋巴细胞比例;ELISA法测定血浆及外周血单个核细胞(PBMC)培养上清液中的IFN-γ、转化生长因子-β(TGF-β)、IL-6水平;RT-PCR检测鼻咽拭子甲型H1N1流感病毒载量.统计学方法采用单因素方差分析和线性相关分析.结果 甲型H1N1流感患者Th17淋巴细胞比例为(2.740±0.210)%,较健康对照者的(3.443±0.154)%及季节性流感患者的(3.443±0.277)%显著下降(F=4.242,P＜0.05),而3组间Th1、Th2、Treg淋巴细胞比例无明显差异;甲型H1N1流感患者血浆TGF-β水平为(10±8)ng/mL,较健康者的(43±32)ng/mL及季节性流感患者的(18±10)ng/mL显著下降(F=17.72,P＜0.01);甲型H1N1流感患者PBMC中TGF-β水平为(782±736)pg/mL,较健康者的(1462±315)pg/mL及季节性流感患者的(1481±348)pg/mL显著下降(F=5.730,P＜0.01);Th17淋巴细胞比例与病毒清除时间呈负相关(r=-0.38,P=0.02).结论 甲型H1N1流感患者Th17淋巴细胞比例显著降低,且与TGF-β水平密切相关,其降低可能导致机体延长排毒时间.     

深圳市首例H5N1型人禽流感临床报告

目的探索H5N1型人禽流感病例的临床特点及诊治经验。方法一例H5N1型人禽流感患者,采用荧光定量RT-PCR评价抗病毒治疗效果,流式细胞术监测细胞免疫,即时动态的放射学检查、血气分析、生化检查监测病情变化,即时的细菌学检查监测细菌感染情况和抗生素治疗效果。采用抗病毒、禽流感恢复期血浆、机械辅助通气、糖皮质激素、免疫调节、抗生素、对症支持等综合治疗。结果患者以高热、咳嗽、呼吸困难为主要症状,临床诊断为重症病毒性肺炎,合并急性呼吸窘迫综合征(ARDS)和多脏器功能衰竭,并继发严重肺部细菌感染。联合奥司他韦和禽流感患者恢复期血浆治疗,患者体内的病毒在短期内得到有效控制和清除;机械通气、激素及其他对症支持治疗有效控制ARDS和多脏器功能衰竭;多黏菌素治疗有效控制广泛耐药的铜绿假单胞菌感染;免疫调节治疗促进患者免疫功能的恢复。结论H5N1型人禽流感病情重、进展快,严重的ARDS及多器官功能障碍综合征是主要临床特征。早期清除病毒、及时正确的对症辅助支持治疗、选择有效抗生素控制继发细菌感染是治疗成功的关键。激素和免疫调节剂的使用值得进一步探索。恢复期血浆治疗是重症禽流感治疗的有益尝试。