荧光定量RT-PCR检测甲型H1N1病毒核酸的临床意义

目的观察荧光定量RT-PCR技术在检测甲型H1N1病毒核酸的临床意义。方法对135例经确诊为甲型H1N1的感染患者的咽式子采用荧光定量PCR技术检测H1N1病毒核酸,同时对40例健康体检者的咽式子做为对照组一同进行甲型H1N1病毒核酸检测。结果 135例确诊为甲型H1N1的患者经荧光定量PCR检测阳性129例,符合率为96.99%。40例健康体检者结果全阴性。结论荧光定量PCR检测甲型H1N1病毒核酸具有快速、特异性高等特点,在采用此方法诊断甲型H1N1时,阳性即可确诊,阴性者要结合临床。     

2009甲型H1N1流感大流行期间北京儿童的流感监测

目的 了解2009年甲型H1N1流感大流行期间北京地区儿童中流感流行的情况.方法 采用WHO推荐的实时荧光定量RT-PCR和国家流感中心推荐的分型方法,对2009年甲型H1N1流感大流行期间因流感样症状来首都儿科研究所附属儿童医院就诊患儿的咽拭子标本进行流感病毒核酸检测.结果 2009年6月1日至2010年2月28日期间共检测了4363份咽拭子标本,其中623例为甲型H1N1阳性,阳性率为14.3%,657例为其他甲型流感病毒阳性(15.1%),所有甲型流感病毒的总阳性率为29.3%.623例中有23例为危重症病例(占阳性患者的3.7%),其中5例死亡.618例信息完整的甲型H1N1病例中,患儿年龄为14天～16岁,性别比例为男比女为1.3:1.1～3岁儿童占25.2%,3～6岁学龄前儿童和6～12岁学龄儿童所占比例相近,各约占30%.在监测期间,仅呈现了一个甲型H1N1的流行波.2009年11月达到最高峰,随后减弱,2010年2月快速下降至2.7%.对监测期间每周20～30份临床标本同时进行季节性流感的监测显示,季节性H3N2、甲型H1N1和乙型流感交替流行.呼吸道合胞病毒(RSV)在甲型H1N1流行趋势减缓后逐渐流行成为流行优势株.结论 2009年6月至2010年2月北京地区儿童中出现甲型H1N1的流行,主要累及学龄前和学龄儿童.季节性流感和RSV与甲型H1N1交替流行.     

中国首例甲型H1N1流感二代病例的临床特征

目的了解2009年我国首例甲型H1N1流感二代病例的流行病学、临床、病原学检查特点及预后转归。方法对患者流行病学及临床资料进行回顾性分析,并采用实时荧光聚合酶链反应测定甲型H1N1流感病毒核酸。结果患者与甲型H1N1流感输入病例接触1天后发病。以发热、咽痛、咳嗽起病,白细胞及CD4＋T淋巴细胞计数降低,无肺炎等并发症。多级机构检测咽拭子甲型H1N1流感病毒核酸阳性确诊甲型H1N1流感。RT-PCR测序证实其病毒核苷酸序列与一代输入病例的一致,同源性为100%。经奥司他韦抗病毒及对症治疗痊愈出院。结论本病例的传染源明确,为我国首例报告的甲型H1N1流感二代确诊病例,其临床表现轻,病情恢复快。未发生院内感染,早隔离早诊断等防控措施有效。     

儿童甲型H1N1流感和季节性流感患者的病毒载量及相关临床症状研究

目的 分析并比较儿童甲型H1N1流感和季节性流感患者咽拭子标本的病毒载量及相关临床症状.方法 应用荧光PCR方法对采集的咽拭子标本进行检测,并通过建立核酸标准品,绘制标准曲线,测定标本中的病毒载量,同时结合所收集的患者临床症状数据资料应用随机区组方差和卡方检验方法进行统计分析.结果 2009年9月至2010年9月期间收集的1,040份咽拭子标本中,共检出甲型H1N1流感病毒阳性标本120份,甲型H3N2流感病毒阳性标本61份,乙型流感病毒阳性标本99份;对收集的流感阳性标本病毒载量测定结果显示:不同型别,不同发病时间流感患者咽拭子标本的病毒载量差异无统计学意义(P＞0.05);甲型H1N1流感、季节性流感感染者的性别比例差异无统计学意义,甲型H1N1流感感染者出现咳嗽,流涕临床症状者明显高于与乙型流感感染者.结论 甲型H1N1流感患者咳嗽,流涕症状比季节性乙型流感患者多见,而甲型H1N1流感和季节性流感患者咽拭子标本的病毒载量无显著性差异.     

新型甲型H1N1流感的实验室检测特征及分析

目的比较新型甲型H1N1流感、季节性流感及普通上呼吸道感染的实验室检测特征,进一步认识新型甲型H1N1流感的特点并分析产生的可能机制。方法对我院2009年5～7月收治的新型甲型H1N1流感、季节性流感及普通上呼吸道感染病例的入院实验室检测资料进行回顾性分析。结果新型甲型H1N1流感患者入院时平均血钾为（3.43±0.33）mmol/L,低于季节性流感组和普通上呼吸道感染组,甲型H1N1流感中伴有低钾血症（血钾〈3.5mmol/L）者占60.22%,明显高于另外两组,但合并低钾血症者的血钾平均值在三组间并无明显差异;与另两组相比,新型甲型H1N1流感组外周血白细胞、中性粒细胞、CD4＋T细胞计数降低;其他实验室检测指标包括血钠、血钙、血磷、LDH活性、CK活性等在三组间并无统计学差异。结论新型甲型H1N1流感实验室检测特征包括血钾降低、白细胞、中性粒细胞、CD4＋T细胞减少,其中低钾血症是新型甲型H1N1流感的一个显著实验室特征,其发生的具体机制尚待进一步研究。     

402例甲型H1N1流感病例流行病学特征分析

目的了解深圳市福田区甲型H1N1流感病例的流行病学特征,为甲型H1N1流感预防控制提供科学依据。方法应用描述性流行病学方法分析402例甲型H1N1流感病例的流行病学特征,包括病例的年龄、性别、职业分布、地区分布等。结果 402例甲型H1N1流感病例男性占58.71%,女性占41.29%;90.55%的病例集中在0～30岁年龄段,11～20岁年龄段病例最多,占总病例数的41.79%;从职业构成看,所有病例中,绝大多数为学生,占总病例数的64.18%。结论学生是甲型H1N1流感的危险人群,应当注重学校等场所的甲型H1N1流感防控工作。     

广州市甲型H1N1流感暴发疫点与监测人群病毒抗体检测

目的通过分析广州市甲型H1N1流感暴发疫点与监测人群病毒的抗体水平,了解甲型H1N1流感的流行趋势,为预防甲型H1N1流感疫情提供科学依据。方法应用红细胞血凝抑制（HI）方法检测流感甲型H1N1抗体,对比分析1570名疫区学生与1326名监测人群血清标本H1N1流感病毒的抗体水平。结果疫区学生甲型H1N1流感病毒感染率、流感罹患率分别为32.17%、22.23%,明显高于市区监测人群的22.62%、15.38%（P=0.000,P=0.000）。疫点学生与市区监测人群甲型H1N1流感隐性感染率分别为9.94%、7.24%,差异有统计学意义（P=0.012）。在已感染甲型H1N1流感病毒的疫点学生和市区监测人群中,甲型H1N1流感隐性感染率（30.89%、32.00%）差异无统计学意义（P=0.754）。疫点人群显性感染者的抗体滴度明显高于隐性感染者（t=4.701,P=0.000）,监测人群中显性感染与隐性感染者的抗体滴度无显著差异（t=0.248,P=0.804）。结论疫点学生甲型H1N1流感隐性感染率明显高于监测人群。提示隐性感染人群具有潜在的传染力,应加强隐性感染者的监测。     

流感及H5N1亚型禽流感病毒液相检测芯片的制备

目的 建立利用液相芯片技术检测甲、乙型流感和H5N1亚型高致病性禽流感病毒的方法,并对该方法进行评价。方法 对GenBank中甲型流感病毒的NP、乙型流感病毒的HA以及高致病性禽流感病毒（H5N1）的H5、N1基因片段序列进行同源性比对,根据保守序列,设计针对各基因的简并引物和寡核苷酸探针,制备探针偶联微球,将样本核酸多重PCR扩增产物与微球进行杂交,以Bio-Plex液相芯片检测系统进行芯片检测。结果 该方法可以对甲型流感病毒的NP基因、乙型流感病毒的HA基因以及高致病性禽流感病毒（H5N1）的H5、N1基因同时进行检测,病毒核酸的最低检出量为1pg,检测特异性高。结论 成功构建了甲、乙型流感病毒和H5N1亚型高致病性禽流感病毒液相芯片检测系统,为流感、禽流感的快速检测、诊断奠定了基础。     

2010年广州市甲型H1N1流感病毒分离株HA基因变异分析

目的比较2010年广州市分离到的甲型H1N1流感病毒血凝素（HA）基因和2009年中国大陆甲型H1N1流感病毒HA基因的变异情况,为甲型H1N1流感的监测和防控提供理论依据。方法收集2010年广州市有发热和呼吸道症状病人的咽拭子标本,用H1N1流感特异性引物进行PCR检测,扩增分离到的H1N1病毒HA片段,测序后与2009年的H1N1毒株进行比对和分析,并用生物信息学方法对抗原位点和糖基化位点进行分析。结果共收集到426份标本,甲型流感阳性211份,其中H1N1流感4株,与2009年分离的甲型H1N1流感相比,有12个氨基酸碱基位点发生了有意义突变,其中6个位点位于抗原位点上;4株毒株HA基因145位氨基酸都发生了变异;其中2株毒株在第180位氨基酸位点的抗原位点发生了变异。进化分析表明4株毒株与2009年中国大陆分离的8株毒株进化关系较远。结论 2010年广州市甲型H1N1毒株与2009年相比发生了较大变异。HA基因145位和180位氨基酸位点变异对H1N1毒株抗原变异有重要意义。本文分离的A/Guangdong/ZS03/2010（H1N1）和A/Guangdong/ZS01/2010（H1N1）毒株可能已经发生了抗原性漂移。     

应用SEIR模型预测2009年甲型H1N1流感流行趋势

目的 探讨SEIR模型预测甲型H1N1流感流行趋势的功效.方法 利用国庆前北京市流感样病例数、流感样病例中甲型H1N1流感阳性率及二级以上医院流感样病例就诊率等参数估算甲型H1N1流感实际感染人数,基于传染病传播动力学,建立SEIR模型,对国庆后甲型H1N1流感的流行趋势及高峰达到时间进行预测,与甲型H1N1流感病原学...     

The validation of a real-time RT-PCR assay which detects influenza A and types simultaneously for influenza A H1N1 (2009) and oseltamivir-resistant (H275Y) influenza A H1N1 (2009)

Influenza A H1N1 (2009) was declared by the World Health Organisation (WHO) as the first influenza pandemic of the 21st century. Rapid detection of influenza A and differentiation of influenza A H1N1 (2009) and seasonal influenza A is beneficial. In addition the rapid detection of antiviral resistant strains of influenza A H1N1 (2009) would be useful for clinicians to allow for change to an effective treatment at a much earlier stage if resistance is found. It was the aim of this study to develop a real-time RT-PCR that can detect all influenza A viruses and type simultaneously for influenza A H1N1 (2009) and oseltamivir resistant (H275Y) influenza A H1N1 (2009). This multiplex assay will allow laboratories to screen respiratory samples for all types of influenza A, influenza A H1N1 (2009) virus and oseltamivir resistant (H275Y) influenza A H1N1 (2009) virus in a rapid and cost effective format, ensuring that typing methods for seasonal and avian viruses are used on a smaller subset of samples. Since most virology laboratories already offer a molecular service for influenza A this assay could easily be implemented into most areas at little cost therefore increasing local access to resistance testing.     

Detection of influenza a subtypes in community-based surveillance

A rapid microtitre cell enzyme immuno assay (cell-EIA) was developed for the detection of influenza A subtypes in nasopharyngeal(NPS) swabs taken for surveillance. During the 1997/1998 influenza season in the United Kingdom, cell-EIA was compared to cell culture for the detection and typing of influenza A viruses in NPS obtained by sentinel general practitioners in community surveillance. The cell EIA can also be used to detect different influenza A subtypes (H3N2, H1N1, H5N3, H5N1, H7N7, and H9N2) and was used as a rapid detection assay for the screening of individuals returning from Hong Kong with influenza-like illness suspected to be due to H5N1 in 1997/98, providing a rapid, efficient, inexpensive method for the screening of influenza A cases during an outbreak or pandemic situation. The cell-EIA results reflected the results obtained by traditional virus culture within the age distribution of samples, clinical symptoms, and time between date of illness onset and sampling of cases, indicating its usefulness in surveillance of human and non-human influenza viruses. During two outbreaks of influenza in schools, Directigen Flu-A, a near patient test, the cell-EIA, and tissue culture were compared. The cell-EIA gave higher sensitivity and specificity (74% and 90%) than Directigen Flu-A (65% and 84.6%) in comparison with cell culture.     

实时荧光定量PCR在铁路运输动物携带甲型流感病毒检测中的应用

目的探讨应用实时荧光PCR对铁路运输动物携带甲型流感病毒进行快速检测的可行性,为制定铁路系统有效的流感监测方案奠定基础。方法采集死禽咽喉部和泄殖腔拭子,活体动物用拭子涂抹泄殖腔外周,粪便和毛用拭子涂抹表面。依据《全国流感监测实施方案》、甲型流感病毒核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书以及ABI7500F型实时荧光定量PCR的SDS软件操作。结果共采集广州中铁快运货场动物样本250份,检出甲型流感病毒核酸阳性11份,阳性率4.4%,其中以鸽类样本的阳性检出率最高,鹅次之,鸭最低。结论实时荧光PCR检测方法适合铁路运输的实际要求,结合进一步病毒分型和病毒基因测序,对掌握病毒流行趋势,做好预防控制工作具有重要意义。     

人感染高致病性禽流感病毒H5N1核酸检测方法的建立及应用

目的 建立人感染高致病性禽流感病毒H5N1的核酸检测方法,用于人感染高致病性禽流感病毒疑似病例临床标本的检测.方法 针对甲型流感病毒保守基因M设计RT-PCR和real-time PCR引物检测是否为甲型流感病毒,同时针对H5N1禽流感病毒设计针对H5和N1基因的特异性RT-PCR和real-time PCR引物作亚型检测,建立禽流感H5N1病毒RT-PCR和real-time PCR检测方法.结果 本研究建立的RT-PCR和real-time PCR方法可以特异性地检测H5N1病毒,并且与人流感病毒H1、H3没有交叉反应.RT-PCR检测方法灵敏度可到1TCID50,real-time PCR灵敏度可达0.01TCID50.利用上述方法检测人感染高致病性禽流感病毒H5N1疑似病例临床标本,从42例不明原因肺炎病例中检测出阳性标本13例.结论 本研究建立的RT-PCR和real-time PCR方法可以用于人感染高致病性禽流感病毒H5N1临床标本的实验室检测.     

Accuracy of bedside antigen tests in the diagnosis of new influenza A/H1N1v infection

To evaluate the clinical reliability of two rapid influenza detection tests (RIDTs), we analyzed 107 specimens from patients with clinically suspected pandemic influenza A/H1N1v by these tests as well as by real-time PCR as a standard. Both RIDTs had a moderate sensitivity (28–32%), a high specificity (93–99%) and a negative predictive value of 80%. These results will impact on the clinical management and isolation precautions in patients with suspected infection. Although a positive RITD is mostly confirmatory, a negative result in the presence of high clinical likelihood of infection should be interpreted with caution and be re-evaluated by PCR.