钙蛋白酶对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及纤维化模型的影响

【目的】 研究钙蛋白酶在血管紧张素ＩＩ（Ａｎｇ ＩＩ）诱导的心肌纤维化中的作用及作用机制。【方法】 原代培养ＳＤ大鼠心肌成纤维细胞（ＣＦ）,取传代２－４代细胞,,预先给予不同浓度ｃａｌｐａｉｎ抑制剂ＰＤ１５０６１６,观察对Ａｎｇ ＩＩ诱导致纤维化模型的影响。实验分为空白对照组（ｃｏｎｔｒｏｌ）、模型组（Ａｎｇ ＩＩ）、低浓度给药组（Ａｎｇ ＩＩ＋ ＰＤ１５０６１６＿５ μｍｏｌ／Ｌ）、高浓度给药组（Ａｎｇ ＩＩ＋ ＰＤ１５０６１６＿１０ μｍｏｌ／Ｌ）。Ｅｄｕ检测ＣＦ增殖,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测纤维化因子纤连蛋白（ＦＮ）、结缔组织生长因子（ＣＴＧＦ）、α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ）蛋白表达,同时检测ｃａｌｐａｉｎ激活的下游产物Ｃｌｅａｖｅｄ α－Ｆｏｄｒｉｎ以及胞浆中ｐ－ＩκＢ与细胞核内Ｐ６５、ＮＦＡＴ４的蛋白水平变化。【结果】 ＰＤ１５０６１６显著抑制由Ａｎｇ ＩＩ诱导的ＣＦ增殖及ＦＮ、ＣＴＧＦ、α－ＳＭＡ等纤维化因子表达上调。Ａｎｇ ＩＩ显著提高Ｃｌｅａｖｅｄ α－Ｆｏｄｒｉｎ的表达,ＰＤ１５０６１６可阻断Ａｎｇ ＩＩ的作用,提示ｃａｌｐａｉｎ受Ａｎｇ ＩＩ激活,是Ａｎｇ ＩＩ作用的下游因子。ＰＤ１５０６１６可抑制Ａｎｇ ＩＩ引起的胞内ＩκＢ磷酸化和胞核中ｐ６５、ＮＦＡＴ４的表达上调,提示ｃａｌｐａｉｎ的作用与ＮＦ－κＢ 、ＮＦＡＴ４转位入核的信号通路相关。【结论】 ｃａｌｐａｉｎ在Ａｎｇ ＩＩ刺激诱导心肌纤维化过程中发挥重要作用,其机制可能与ＮＦ－κＢ和ＮＦＡＴ信号通路的激活有关。     

人乳头瘤病毒16型E6/E7基因对人角质形成细胞生长及CyclinA,CyclinD1和cdk4的影响

目的 研究１６型人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）Ｅ６／Ｅ７对人角质形成细胞细胞周期素（ＣｙｃｌｉｎＡ,ＣｙｃｌｉｎＤ１）及细胞周期素依赖（ｃｄｋ４）的影响。方法 用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ介导法将ＰＬＸＳＮ１６Ｅ６／Ｅ７质粒转染逆 转录病毒包装细胞ＰＡ３１７,挑选Ｇ４１８抗性克隆检测病毒滴度,将表达ＨＰＶ１６原高滴度逆转 录病毒感染人角质形成细胞;免疫印迹分析感染细胞ＣｙｃｌｉｎＡ,ＣｙｃｌｉｎＤ１,ｃｄ     

氟伐他汀对高血压大鼠血管结构和功能的影响及机制

目的　探讨内源性胆固醇合成途径的限速酶－ＨＭＧ－ＣｏＡ 还原酶的抑制剂一氟伐他汀对高血压血管肥厚、血管功能和高血压进程的影响,并揭示其可能的作用机制。　方法　（１）雄性ＳＨＲ（ｎ＝ ２６）,从８周龄起予氟伐他汀（ｆｌｕｖａｓｔａｔｉｎ,Ｆｌｕ）２０ ｍ ｇ·ｋｇ－１·ｄ－１灌胃,分别治疗８ 周和１６周,年龄、性别配对的未治疗的ＳＨＲ（ｎ＝ ２０）和ＷＫＹ（ｎ＝ １８）作对照。分别测定收缩压（ＳＢＰ）,血脂（ＴＣ、ＴＧ 和 ＬＤＬ－Ｃ）（ＣＨＯＤ－ＰＡＰ和ＧＰＯ－ＰＡＰ法）;进行血管组织形态学观察,测定血管壁（中膜）／腔面积（Ｗ／Ｌ）比;应用离体动脉环试验观察血管的功能变化。（２）以培养８周龄的ＳＨＲ 和ＷＫＹ 大鼠胸主动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣｓ）为模型,观察（ｌ）两种不同的有丝分裂原－血管紧张素Ⅱ（Ａｎｇ Ⅱ） 和血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）对ＡＳＭＣｓ 增殖（细胞计数）和ＤＮＡ 合成（３Ｈ－ＴｄＲ掺入率）的影响。（２）Ｆｌｕ 对２０％ ＦＣＳ、ＡｎｇⅡ和ＰＤＧＦ促ＡＳＭＣｓ 分裂增殖的抑制作用及（３）胆固醇合成代谢中间产物甲羟戊酸（ｍ ｅｖａｌｏｎｉｃ ａｃｉｄ,Ｍｅｖａ）对Ｆｌｕ 抑制ＡＳＭＣｓ增殖和ＤＮＡ 合成的逆转效果。     

血管舒缓素对PDGF诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨了血管舒缓素对血小板趋化生长因子（ＰＤＧＦ）诱导培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法 取ＳＤ大鼠胸主动脉平滑肌细胞进行培养,传至５代后,分组观察ＰＤＧＦ、ＰＤＧＦ＋血管舒缓素组、ＰＤＧＦ＋血管舒缓素＋缓激肽受体拮抗剂组等。干预因素作用于血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）,对＾３Ｈ－胸腺嘧啶（＾３Ｈ－ＴｄＲ）的掺入及原癌基因ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ的表达的影响。结果 １．ＰＤＧＦ可促进ＶＳＭＣ     

视黄酸及芳维甲对HL-60细胞细胞周期素及相关激酶P34~(cdk2)蛋白表达的影响

目的：本研究从细胞周期调控这一角度来探讨视黄酸类物质阻遏白血病细胞增殖的分子机理。方法：采用两步过量胸苷阻断法将ＨＬ－６０细胞同步化于Ｇ１／Ｓ期边缘，５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ视黄酸或芳维甲处理１ｄ～４ｄ后收获细胞，以流式细胞仪（ＦＣＭ）分析细胞周期相分布，免疫印迹法检测ＣｙｃｌｉｎＥ、ＣｙｃｌｉｎＤ１和Ｐ３４ｃｄｋ２蛋白表达水平。结果：ＣｙｃｌｉｎＥ和Ｄ１蛋白表达量具有周期依赖性，Ｇ１期开始增加，Ｓ期达到高峰，Ｇ２期逐渐下降，而Ｐ３４ｃｄｋ２蛋白表达量在整个细胞周期中无明显变化；视黄酸或芳维甲处理后，大部分细胞被阻断在Ｇ０／Ｇ１期，Ｐ３４ｃｄｋ２蛋白表达量变化不明显，而ＣｙｃｌｉｎＥ和Ｄ１蛋白表达量明显下降。结论：视黄酸或芳维甲诱导的ＣｙｃｌｉｎＥ和ＣｙｃｌｉｎＤ１蛋白表达的降低，可能与视黄酸类物质干扰细胞Ｇ１→Ｓ期转换、阻遏ＨＬ－６０细胞增殖并诱导其分化有关。     

视黄酸及芳维甲对HL—60细胞细胞周期素及相关激酶P34^cdk2蛋…

目的：本研究从细胞周期调控这一角度来探讨视黄酸类物质阻遏白血病细胞增殖的分子机理方法：采用两步过量胸苷阻断将ＨＬ－６０细胞同步化于Ｇ１／Ｓ期边缘，５×１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ视黄酸或芳维甲处理１ｄ～４ｄ后收获细胞，以流式细胞仪（ＦＣＭ）分析细胞周期相分布，免疫印迹法检测ＣｙｃｌｉｎＥ，ＣｙｃｌｉｎＤ１和Ｐ３４＾３ｋｄ２蛋白表达水平。结果Ｃｙｃｌｉｎ和Ｄ１蛋白表达量具有周期依赖性，Ｇ１期开始增加Ｓ期达到     

血管紧张素Ⅱ促心肌细胞蛋白质合成中信息传递途径的研究

体外研究表明：血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）可引起心肌细胞肥大，但其信息传递途径尚不清楚。本文通过＾３Ｈ－Ｌｅｕ掺入率的测定与ＲＮＡ狭线杂交技术，初步探讨了ＡｎｇⅡ受体、Ｃａ＾２＋及蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）在ＡｕｇⅡ刺激乳鼠心肌细胞蛋白质合成中的作用，并观察了ＡｎｇⅡ对原癌基因ｃ－ｆｏｓ表达的影响。结果发现，培养液中加入钙通道阻断剂－Ｖｅｒａｐａｍｉｌ、细胞外钙螯合剂－ＥＧＴＡ、肌浆网钙释放抑制剂－Ｄａｎｔ     

反义细胞周期D1蛋白抑制肾小球系膜细胞增殖研究

目的探讨细胞周期蛋白（Ｃｙｃｌｉｎ）Ｄ１在肾小球系膜细胞增殖机制中的作用。方法应用免疫组织化学方法检测ＣｙｃｌｉｎＤ１蛋白在系膜细胞内表达;建立了表达ＣｙｃｌｉｎＤ１反义ＲＮＡ的逆转录病毒载体基因转移系统;利用ＭＴＴ法、流式细胞术对基因转录的系膜细胞的增殖状况进行观察。结果（１）体外培养的系膜细胞核内存在ＣｙｃｌｉｎＤ１蛋白;（２）外源基因经逆转录病毒载体高效转导系膜细胞,并高效表达反义ＲＮＡ;（３）反义ＣｙｃｌｉｎＤ１转导后的系膜细胞对内皮素１刺激的增殖反应不明显,而正常细胞（１８小时０２５９±００８０,６小时０１００±０００７）和空载体转导细胞（１８小时０２７８±００２０,６小时００９７±０００８）有显著效应（Ｐ＜００１）;（４）反义ＣｙｃｌｉｎＤ１抑制细胞从Ｇ１期进入Ｓ期。结论ＣｙｃｌｉｎＤ１是肾小球系膜细胞周期Ｇ１期进展的关键调控蛋白,反义ＣｙｃｌｉｎＤ１基因转导系膜细胞能明显抑制内皮素１的促增殖作用。     

钙离子,血管紧张素Ⅱ受体在血管紧张素Ⅱ促心肌细胞蛋白质…

通过＾３Ｈ－Ｌｅｕ掺入量的测定与ＲＮＡ狭线杂交技术，初步探讨血管紧张素Ⅱ受体，Ｃａ＾２＋在血管紧张素Ⅱ刺激乳鼠心肌细胞蛋白质合成中的作用，并观察血管紧张素Ⅱ对原癌基因ｃ－ｆｏｓ表达，结果发现培养液中加入钙通道阻断剂（ｖｅｒａｐａｍｉｌ），细胞外钙螯合剂（ＥＧＴＡ），肌浆网钙释放抑制剂（ｄａｎｔｒｏｌｅｎｅ）和细胞内钙螯合剂（Ｆｕｒａ－２／ＡＭ）可使血管紧张素Ⅱ介导的＾３Ｈ－Ｌｅｕ掺入量较单独加血管     

血管紧张素Ⅱ对培养心肌细胞自发性收缩及（Ca^2＋）瞬间变化的影响

应用倒置微镜闭路电视系统及Ｃａ＾２＋敏感的荧光指标剂Ｆｕｒａ－２／ＡＭ的方法，记录培养心肌细胞的自发性收缩及（Ｃａ＾２＋）瞬间变化，结果发现，应用血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ，１０－１０００ｎｍ０１／Ｌ）５ｍｉｎ后，心肌细胞收缩频率增加，分别增加了５５％，８３％及１０７％，但同样浓度的ＡｎｇⅡ引起细胞边缘运动的速度减少，ＡｎｇⅡ１０，１００ｎｍｏｌ／Ｌ引起（Ｃａ＾２＋）瞬间变化最大值的明显增加，分别增加     

丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶-1对血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制

目的 研究丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP1)对血管平滑肌细胞增殖的影响及机制。方法 转染MKP1质粒72h后，收集培养的血管平滑肌细胞(VSMC)，利用P^42／P^44磷酸化抗MAPK抗体通过免疫印迹法测定MAPK活性，用流试细胞仪测定细胞周期、细胞周期素和P27蛋白的表达。结果 转染MKP1质粒后，MAPK活性明显下降，VSMC阻滞于G0-G1期，同时抑制了细胞周期素D、E的表达，P27蛋白表达却明显增加。结论 MKP1抑制VSMC增殖可能是通过降低MAPK活性，抑制细胞周期素表达和增加P27蛋白表达途径实现的。     

细胞周期蛋白质依赖激酶抑制因子在血管平滑肌细胞增殖与增生中的作用

目的探讨细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p27、p21和p57在血管平滑肌细胞(VSMC)增殖与增生过程中的调控作用.方法分离SD大鼠主动脉中层平滑肌,贴壁法培养平滑肌细胞,无血清培养基培养静止后,分别加入AngⅡ10-6mol/L,血小板源生长因子(PDGF)20ng/ml和10%FBS,在刺激后6、12、24h分别收集细胞,以无血清培养基培养的VSMC作静止对照,以10%FBS刺激的VSMC作增殖对照.用Westernblot分别检测p27、p57和p21蛋白表达量.结果在AngⅡ刺激的VSMC中,p21,p57和p27蛋白表达水平与静止的VSMC中相近,无明显变化(P>0.05);而在PDGF-BB刺激的VSMC中,p21蛋白表达量随刺激时间延长而逐渐增加,在刺激后12h开始增加,24h达高峰(A值为1.578±0.133,对照组A值为1.000±0.011,P<0.01);p57蛋白表达量在刺激24h增加(A值为1.641±0.342,对照组A值为1.000±0.016,P<0.01);p27蛋白表达量随刺激时间延长而逐渐下降,在24h下降最明显(A值为0.401±0.137,对照组A值为0.985±0.023,P<0.01).结论p21和p57的主要作用在于防止VSMC细胞过度增殖.p27蛋白表达量的变化是决定VSMC增殖的关键,并参与VSMC增生的诱导和维持.     

PP60c-Src在血管紧张素Ⅱ对大鼠血管平滑肌细胞信息转导中的作用

目的：通过观察c—Src在AngⅡ对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)活性和c—fos蛋白表达的影响，以进一步了解AngⅡ促VSMC增殖的细胞内信息转导机制。方法：原代和传代培养SD大民主动脉VSMC，以脂质体包裹反义c—Src寡脱氧核夺酸(Oligodeoxynucleotides ODNs)转染培养的VSMC以抑制c—Src蛋白表达和激酶活性。以未转染的VSMC为对照，观察10^7mol/L AngⅡ刺激对转染的VSMC的MAPK活性和c—fos蛋白表达的影响。蛋白免疫沉淀和酶自身磷酸化率测定c—Src激酶活性；髓鞘碱性蛋白(MBP)底物磷酸化率测定MAPK放酶活性；Western blot免疫印迹法测定c—Src和c—fos蛋白表达情况。始果：转染不同浓度反义c—Src()DNs的VSMCc—Src蛋白含量至浓度依赖性降低，0.2μmol/L、0.5μmol/L、1．0μmol／L和2．0μmol/L分别为对照的68．2％、34．7％、30。3％和15．8％，经方差分析具有显著性意义(P＜0.01)。c—Src激酶活性也显著抑制；以AngⅡ刺激经转染反义c—Src DNs的VSMC，c—Src激酶活性增幅仅为对照组的8．7％；MAPK活性仅为对照的1．6％；c—fos蛋白表达的增幅为对照组的30．0％。结论：AngⅡ可诱导VSMC c—Src激活和细胞内信息转导，且AngⅡ引起的MAPK和c—fos的激活依赖于c—Src的激活，提示c—Src是AngⅡ促血管平滑细胞增殖的重要信息分于。     

温脉通对血管平滑肌细胞增殖及相关因子表达的影响

目的观察温脉通对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用及其对促VSMC生长因子的影响,以期探讨温脉通防治早期肢体动脉硬化性闭塞症(ASO)的作用机制.方法体外培养兔胸主动脉VSMC,以AngⅡ作为诱导因素,复制VSMC增殖模型,分别用温脉通全方及拆方药物血清进行干预.应用四唑盐(MTT)比色法测定各组VSMC增殖活性,用免疫细胞化学检测方法观察各组对血小板源性生长因子(PDGF-BB)表达的影响.结果细胞经AngⅡ作用后其增殖活性明显增加,与空白组比较有显著性差异(P＜0.01);而分别加入各组药物血清后,细胞增殖活性降低,与AngⅡ组比较有显著性差异(P＜0.01),其中以大剂量组细胞增殖活性降低最为明显.血管平滑肌细胞PDGF-BB免疫组化显色,空白组,呈弱阳性表达( /-);AngⅡ组呈强阳性表达( ),与空白组比较有显著性差异;温脉通全方组PDGF-BB表达明显减弱( ),与空白组接近;温经益气拆方组和活血通脉拆方组PDGF-BB呈中度表达( ),其阳性反应强度高于全方组,低于AngⅡ组.结论温脉通可呈剂量依赖性地抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖、抑制PDGF-BB的蛋白表达,提示温脉通防治ASO可能与抑制VSMC异常增殖及PDGF-BB的蛋白表达有关.     

神经肽Y刺激肾动脉平滑肌热休克蛋白表达及Losartan的干预作用

目的　探讨以HSP70作为神经肽Y (NPY)和losartan间在肾动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖活动相互作用为信号 ,在高血压肾动脉重塑中的作用。方法　应用快速微量MTT比色法和荧光免疫组织化学定量技术 ,观察神经肽Y作用下肾动脉VSMC增殖活动中热休克蛋白 (heatHSP)表达以及Losartan对NPY作用的干预作用。结果　神经肽Y刺激体外培养肾动脉平滑肌细胞的增殖度 (吸光度A值为 0 2 6 2 6± 0 0 0 2 5 )与细胞内因损伤产生的HSP70表达 (A值为 0 2 44 0±0 0 0 13)明显高于对照组 (A值为 0 2 2 3 9± 0 0 0 10 ) (P <0 0 1)。losartan可降低NPY对肾动脉平滑肌细胞的增殖度 (A值 )的刺激作用 ,减少细胞内HSP70的表达。结论　神经肽Y可影响肾动脉平滑肌细胞增殖引起高血压 ,而HSP70表达水平是肾动脉平滑肌细胞增殖的重要信号。     

TNP—470对大鼠血管平滑肌细胞生长的抑制作用及细胞周期的影响

OBJECTIVE: To study the effect of TNP-470 on the growth and cell cycle of vascular smooth muscle cells (VSMCs) in rats. METHODS: MTT assay was employed to observe the growth inhibition of the VSMCs from rat thoracic aorta cultured in vitro by TNP-470, and the effect of TNP-470 on the cell cycle and expressions of cyclin D1, CDK4 and p27 in the VSMCs were examined by flow cytometry. RESULTS: TNP-470 exhibited inhibiting effect on the growth of VSMCs in vitro, with the IC(50) value of 23.3 g/L. The cell ratios of the VSMCs at S phase and G(2)/M phase were significantly decreased to (15.43+/-5.16)% and (9.49+/-2.70)% respectively in response to TNP-470 treatment from the control levels of (22.29+/-6.80)% (P<0.05) and (16.51+/-8.61)% (P<0.05), and G(0)/G(1)-phase cell ratio significantly increased to (75.14+/-6.62)% from (60.38+/-7.23)% (P<0.001). TNP-470 had resulted in significantly lowered proliferation indexes of the VSMCs, from 39.62+/-7.23 down to 23.76+/-7.92 (P<0.001). After TNP-470 treatment, the expression of cyclin D1 and CDK4 in the VSMCs were both significantly decreased (P<0.05) while p27 underwent contrary changes (P<0.001). CONCLUSION: TNP-470 executes its inhibiting effect on VSMC growth by way of halting the cell cycles, the mechanism of which may involve the expressions of cyclin D1, CDK4 and p27.     

三七总皂苷对大鼠血管平滑肌细胞增殖模型细胞周期相关蛋白表达的影响

目的研究三七总皂苷(TPNS)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖细胞周期相关蛋白表达的影响。方法以血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)诱导大鼠VSMC,观察含药血浆对VSMC增殖的影响,以免疫荧光流式细胞术测定增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞周期相关蛋白的表达。结果血小板衍生生长因子(PDGF)剌激VSMC后,VSMC PCNA、VSMC细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)蛋白表达增强,细胞周期抑制因子P21蛋白表达下调。阿托伐他汀含药血浆和TPNS含药血浆均可抑制PDGF诱导的VSMC PCNA、cyclinD1和CDK4蛋白表达增强及P21蛋白表达下调。TPNS与阿托伐他汀比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PDGF剌激VSMC后,可促进细胞周期转化,细胞增殖加快。阿托伐他汀、TPNS可抑制PDGF诱导的VSMC增殖,其作用可能是通过抑制了细胞周期相关调节蛋白的表达,从而抑制了VSMC细胞周期转化和增殖。     

INHIBITORY EFFECT OF ANGIOTENSIN Ⅱ TYPE 1 RECEPTOR-ASSOCIATED PROTEIN ON VASCULAR SMOOTH MUSCLE CELL GROWTH AND NEOINTIMAL FORMATION

Objective To investigate the mechanism of a novel angiotensin Ⅱ type 1 receptor-associated protein （ATRAP） interfering with angiotensin Ⅱ type 1 （AT1） receptor-mediated vascular smooth muscle cell （VSMC） growth and neointimal formation. Methods VSMCs isolated from thoracic aorta of adult Sprague-Dawley （SD） rats were used in this study. ATRAP cDNA was subcloned into pcDNA3 vector and then transfected into VSMCs. DNA synthesis and extracellular signal-regulated kinase （ERK） and phospho-ERK expressions in VSMCs were assayed by measurement of ^3H thymidine incorporation and Western blotting, respectively. Morphological changes were observed in the balloon injured artery with or without transfection of ATRAP cDNA using 12-week-old male SD rats. Results ATRAP overexpression in VSMCs inhibited angiotensin Ⅱ （Ang Ⅱ）-induced ^3H thymidine incorporation 48 hours after Ang Ⅱ stimulation （ P 〈 0. 05 ）. In VSMC, Ang Ⅱ stimulation increased the phosphorylation of ERK, which reached the peak around 60 minutes. The activation of phospho-ERK was significantly decreased by ATRAP （ P 〈 0. 05 ）. Neointimal formation was markedly inhibited by ATRAP overexpression in injuried arteries. Conclusions The AT1 receptor-derived activation of ERK plays an essential role in Ang Ⅱ-induced VSMC growth. The growth inhibitory effects of ATRAP might be due to interfering with AT1 receptor-mediated activation of ERK in VSMC growth and neointimal formation.     

重组人白介素10对离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察重组人白介素１０（ｒｈＩＬ－１０）对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的影响。方法 离体培养大鼠胸主动脉 ＶＳＭＣ并分别接受不同浓度ｒｈＩＬ－１０、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）、血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ－ＢＢ）的刺激,采用ＭＴＳ／ＰＥＳ 法确定ＶＳＭＣ的增殖状态并与对照组比较。结果　与对照组相比,ＴＮＦ－α和ＰＤＧＦ－ＢＢ均对ＶＳＭＣ增殖具有明显的刺 激作用（Ｐ＜０．０５）。单独应用ｒｈＩＬ－１０对血管平滑肌细胞生长没有影响。在ＴＮＦ－α和ＰＤＧＦ－ＢＢ分别刺激下,ｒｈＩＬ－１０均可 抑制ＶＳＭＣ的生长（Ｐ<０．０５）。结论　ｒｈＩＬ－１０可抑制细胞因子和生长因子诱导的ＶＳＭＣ增殖。     

紫草素对大鼠血管平滑肌细胞增殖与凋亡作用的实验研究

目的研究紫草素对体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC)抑制增殖、促进凋亡及诱导细胞周期停滞的作用。方法组织块贴壁法原代培养的大鼠VSMC,经不同浓度的紫草素作用不同时间后,应用MTT法、台盼蓝拒染法、3H胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法测定紫草素对VSMC的细胞活力的影响、生长及增殖抑制;应用流式细胞仪分析细胞周期分布及观察凋亡现象;应用荧光显微镜计数凋亡细胞百分率并观察形态学变化;应用Western印迹法检测细胞周期调节蛋白的变化。结果(1)与对照组相比,0.25～1μmol/L紫草素对VSMC细胞活力无明显影响(均P>0.05);可时间和剂量依赖性地抑制细胞生长,以1μmol/L作用72h最为显著(1.9×105/孔vs5.8×105/孔,P<0.05);并呈时间和剂量依赖性地抑制DNA合成(抑制率达33%～98%,P<0.05及P<0.01)。(2)1μmol/L紫草素显著抑制增殖VSMC细胞周期进程,使S及G2/M期减少(P<0.05)、G0/G1期增加(P<0.05),接近静止细胞水平,并在48h出现subG1期凋亡峰(10.9%±0.3%)。(3)1～2μmol/L紫草素可显著提高凋亡细胞百分率(2.8%～23.7%vs0.2%～0.4%,P<0.05),呈时间和剂量依赖性,可见典型的凋亡细胞核形态学变化。(4)1μmol/L紫草素可显著抑制细胞周期蛋白D1、E及增殖细胞核抗原的表达,促进p21waf1/cip1表达,对p27kip1及p53表达无显著影响。结论紫草素对VSMC具有明确的抗增殖、促凋亡、阻滞细胞周期进程的作用,并且与细胞周期调节蛋白的变化密切相关。