烟酰胺单核苷酸对D-半乳糖诱导肾脏衰老的作用研究

目的 探讨烟酰胺单核苷酸(NMN)对D-半乳糖(D-gal)诱导小鼠肾脏衰老的作用及其可能的抗炎机制。方法 将24只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组:对照组、NMN组、D-gal组与D-gal+NMN组。采用皮下注射D-gal的方法构建肾脏衰老模型。记录各组小鼠体质量；采用苏木精-伊红(HE)和马松(Masson)染色观察小鼠肾脏病理损伤和纤维化；应用衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色评估组织衰老水平；使用免疫组化法(IHC)和蛋白免疫印迹法(Western blot)观察衰老指标p16、p21的定位及表达；使用Western blot测定抗衰老蛋白沉默信息调节因子1(SIRT1)及炎症指标肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、核因子-κB(NF-κB)的表达水平。采用SPSS 26.0统计软件进行数据分析。根据数据类型,分别采用单因素方差分析、LSD-t检验或Kruskal-Wallis检验进行组间比较。结果 NMN对D-gal组小鼠体质量未产生显著影响(P>0.05)。与对照组比较,D-gal组肾脏出现肾小球萎缩,肾小管肿胀、扩张和间质纤维化改变。IHC结果示p16、p21表达增加,并且主要位于肾小管,同时可见SA-β-gal阳性率增加,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果示D-gal组肾脏衰老蛋白p16、p21及炎症指标TNF-α、IL-1β、NF-κB表达上调,而抗衰老蛋白SIRT1表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。NMN处理后,D-gal组肾小球萎缩,肾小管肿胀、扩张及间质纤维化程度明显降低,衰老及炎症指标显著下降,此外,SIRT1下调及SA-β-gal阳性率增加均得到缓解,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 NMN可能通过促进SIRT1表达和抑制NF-κB途径介导的炎症反应,延缓D-gal诱导的肾脏衰老。     

miR-152-3p调控硫氧还蛋白结合蛋白表达对过氧化氢诱导的内皮祖细胞凋亡的影响

目的]探讨miR-152-3p靶向硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)对过氧化氢(H₂O₂)诱导的内皮祖细胞(EPC)凋亡的影响。 [方法]从健康人外周血分离与鉴定EPC,建立H₂O₂诱导的EPC损伤模型(500 μmol/L H₂O₂处理8 h),RT-qPCR检测EPC中miR-152-3p表达;EPC中过表达miR-152-3p或抑制TXNIP表达或同时过表达miR-152-3p和TXNIP,再使用500 μmol/L H₂O₂处理8 h,分别检测miR-152-3p表达水平、细胞凋亡率及TXNIP、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-152-3p与TXNIP的关系。 [结果]从健康人外周血成功分离EPC,miR-152-3p在H₂O₂诱导的EPC中表达减少65.0%(P＜0.001);与对照组相比,模型组EPC凋亡率及Bax、Caspase-3蛋白表达水平增加895.1%、352.0%、290.3%,Bcl-2蛋白表达水平降低79.4%(均P＜0.001);与miR-NC组相比,miR-152-3p mimic组EPC凋亡率及Bax、Caspase-3蛋白表达水平降低55.7%、60.9%、56.8%(P＜0.001),Bcl-2蛋白表达水平增加389.5%(均P＜0.001);与si-NC组相比,si-TXNIP组EPC凋亡率及TXNIP、Bax、Caspase-3蛋白表达水平降低40.2%、57.5%、59.8%、55.4%(均P＜0.001),Bcl-2蛋白表达水平增加313.0%(P＜0.001);与miR-152-3p mimic＋pcDNA组相比,miR-152-3p mimic＋TXNIP组EPC凋亡率及TXNIP、Bax、Caspase-3蛋白表达水平增加86.8%、184.8%、137.7%、109.2%(P＜0.001),Bcl-2蛋白表达水平降低69.1%(P＜0.001);双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-152-3p可靶向负调控TXNIP表达。 [结论]miR-152-3p在H₂O₂诱导的EPC中低表达,过表达miR-152-3p可通过靶向抑制TXNIP表达抑制H₂O₂诱导的EPC凋亡。     

橙皮素对H2O2诱导H9c2心肌细胞凋亡的抑制效应研究

目的 探讨橙皮素(HES)对H₂O₂诱导的H9c2心肌细胞凋亡有何影响。方法 采用H₂O₂建立H9c2心肌细胞氧化应激损伤模型,实验分为四组：正常对照组(Control组),H₂O₂损伤组(H₂O₂组),单纯橙皮素处理组(HES组),橙皮素预处理 H₂O₂组(HES H₂O₂组)。H₂O₂(400 μM)处理2 h建立心肌细胞氧化应激损伤模型,HES H₂O₂组于建模前1 h加入40 μM橙皮素。采用CCK-8法确定H9c2细胞活性；DCFH-DA 探针检测细胞活性氧簇(ROS)水平,流式细胞术检测心肌细胞凋亡,分光光度计检测Caspase-3活性。结果 橙皮素预处理可明显改善H₂O₂诱导的H9c2心肌细胞活性降低,并且呈浓度依赖性；给予40 μM橙皮素预处理后ROS的产生明显减少,Caspase-3活性显著下降,心肌细胞凋亡率下降到30%左右。结论 橙皮素对氧化应激诱导的心肌细胞凋亡具有抑制效应。     

葛花提取物通过激活PPARγ上调ABCA1的表达而抑制THP-1源性泡沫细胞形成

目的]探寻葛花提取物(PFE)对巨噬细胞源性泡沫细胞脂质蓄积的影响。 [方法]通过MTT法筛选PFE对THP-1源性泡沫细胞的作用浓度,采用油红O染色和胆固醇检测试剂盒检测细胞内脂质蓄积情况,采用胆固醇流出试剂盒检测细胞的胆固醇流出水平,使用RT-qPCR和Western blot检测mRNA和蛋白表达。 [结果]PFE显著降低THP-1源性泡沫细胞内的脂质蓄积。PFE不影响CD36、清道夫受体AⅠ(SR-AⅠ)、固醇调节元件结合蛋白2(SREBP2)及3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)的mRNA表达,但能上调ATP结合盒转运体A1(ABCA1)的mRNA和蛋白表达水平(P＜0.05),促进巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出(P＜0.01)。PFE可以激活过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的活性(P＜0.01)及上调其mRNA和蛋白表达水平(P＜0.05)。与PFE对照组相比,加入GW9662处理后PPARγ和ABCA1的蛋白表达水平均下降(P＜0.01),胆固醇流出水平降低(P＜0.01)。 [结论]PFE可显著改善THP-1源性泡沫细胞内的脂质蓄积,通过PPARγ上调ABCA1表达及其介导的胆固醇流出抑制泡沫细胞形成。     

antagomiR-21上调SIRT1激活PI3K/Akt/eNOS信号通路改善T2DM大鼠冠状动脉内皮依赖性舒张

目的]探讨miR-21抑制剂antagomiR-21调控沉默信息调节因子1(SIRT1)对2型糖尿病(T2DM)大鼠冠状动脉内皮依赖性舒张的影响及其机制。 [方法]以腹腔注射链脲佐菌素加高脂饲料喂养的方法建立T2DM大鼠模型,将28只成模大鼠随机分为模型组、antagomiR-NC组、antagomiR-21组、antagomiR-21＋SIRT1抑制剂EX527组,每组7只；另将7只普通饲料喂养的正常大鼠作为对照组。观察大鼠冠状动脉血流变化,采用离体血管环灌流技术观察大鼠冠状动脉的舒张功能。将体外培养的人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)分为甘露醇组、高糖组、高糖＋antagomiR-NC组、高糖＋antagomiR-21组、高糖＋antagomiR-21＋EX527组,采用qRT-PCR检测miR-21、SIRT1的mRNA表达,Western blot检测SIRT1、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及其磷酸化蛋白的表达。 [结果]与对照组相比,T2DM模型大鼠冠状动脉中miR-21水平升高96.88%,而SIRT1蛋白和mRNA水平、冠状动脉流量分别降低40.85%、64.29%、22.15%(P＜0.05)；与甘露醇组比较,体外高糖处理的HCAEC中miR-21表达升高285.71%,SIRT1蛋白和mRNA表达水平分别降低44.78%、74.51%(P＜0.05)；antagomiR-21干预后体内外miR-21水平分别降低77.42%、58.66%,SIRT1蛋白水平分别升高55.56%、91.43%,SIRT1 mRNA水平分别升高88.57%、97.30%(P＜0.05)；与模型组相比,antagomiR-21干预后大鼠冠状动脉流量升高19.23%,10－8 mol/L、10－7 mol/L、10－6 mol/L及10－5 mol/L乙酰胆碱(Ach)诱导的大鼠冠状动脉舒张率分别升高111.89%、41.88%、41.98%、30.01%(P＜0.05),10－8 mol/L、10－7 mol/L、10－6 mol/L及10－5 mol/L去氧肾上腺素(Phe)诱导的大鼠冠状动脉收缩率分别降低36.71%、47.90%、49.19%、45.27%(P＜0.05)；antagomiR-21干预后HCAEC中PI3K、Akt、eNOS的磷酸化水平较高糖组分别升高48.48%、81.40%、134.29%(P＜0.05)；EX527处理可明显逆转体内外antagomiR-21引起的上述变化(P＜0.05)。 [结论]antagomiR-21可通过上调SIRT1表达激活PI3K/Akt/eNOS信号通路,从而改善T2DM大鼠冠状动脉内皮依赖性舒张。     

大鼠胰岛B细胞长寿基因SIRT1与转录调节因子FOXO1表达及其相关性研究

目的探讨大鼠胰岛B细胞在衰老进程中长寿基因SIRT1与转录调节因子FOXO1表达的相关性。方法2005年10月至2006年10月,在汕头大学医学院第二附属医院将11只18月龄健康雄性SD大鼠随机分为热量限制(CR)组6只和正常喂养对照组5只,饲养6个月后取胰尾组织,应用免疫组化染色分别检测胰岛中SIRT1、FOXO1和胰岛素表达及分布,衰老相关β-半乳糖苷酶(β-Gal)染色以反映胰岛B细胞衰老情况。结果SIRT1与FOXO1均可表达于胰岛细胞胞浆、胞核中;β-Gal和胰岛素表达于细胞浆中;与对照组大鼠相比,CR组大鼠胰岛SIRT1表达量较多(P<0.05),衰老相关β-Gal染色强度较弱(P<0.01),胰岛素表达量较低(P<0.05),但FOXO1表达量差异无显著性意义(P>0.05),伴随着SIRT1表达增加,FOXO1胞核阳性率明显降低(P<0.01)。结论热量限制诱导了大鼠胰岛B细胞SIRT1蛋白高表达;SIRT1可能通过抑制FOXO1活性而调控胰岛B细胞的衰老,有利于2型糖尿病的防治。     

紫花牡荆素抑制氧化应激诱导的HUVEC细胞凋亡

目的　研究紫花牡荆素（CAS）对H₂O₂　氧化应激诱导的HUVEC细胞凋亡的影响及其可能机制。方法　体外培养HUVEC细胞,在添加H₂O₂　氧化应激诱导之前先加入不同浓度的CAS　（5、10和20　μmoL/L）　预孵30　min,用MTT法观察各组细胞生长活性;用AO/EB染色和FCM法检测HUVEC细胞凋亡情况及其凋亡率;用Western　blot检测细胞凋亡相关蛋白表达活性。结果　MTT提示与H₂O₂组相比较,CAS呈浓度和时间依赖性增加H₂O₂氧化应激诱导的HUVEC细胞的生长活性（P<0.05）,降低HUVEC细胞的凋亡数量及凋亡率（P<0.05）;同时下调Cytochrome　C、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达降低（P<0.05）,激活Bcl-2蛋白表达（P<0.05）,而Bax蛋白表达不变（P>0.05）,Bcl-2/Bax上升（P<0.05）。结论　CAS拮抗H₂O₂氧化应激诱导的HUVEC细胞凋亡可能与其调节内源性线粒体凋亡途径有关。     

Sirt3在晚期糖基化终产物诱导的心肌老化中的作用及机制

目的 研究沉默信息调节因子3(Sirt3)在晚期糖基化终产物(AGEs)诱导心肌老化过程中的作用,并初步探讨黄山药总皂苷(TSDP)改善心肌老化的机制。方法 提取原代心肌细胞,AGEs干预诱导细胞老化,转染小干扰RNA(siRNA)敲降Sirt3表达。免疫印迹实验检测P16、P53、超氧化物歧化酶-2(SOD2)及SIRT3的蛋白表达水平。半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色试剂盒检测细胞老化。2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯探针(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)。TSDP预干预AGEs诱导的心肌老化后,采用SA-β-Gal染色试剂盒检测细胞老化。采用GraphPad Prism统计软件进行数据分析。组间比较采用单因素方差分析。结果 和未转染慢病毒的对照组相比,转染阴性参照NC siRNA后加入AGEs的干预组SIRT3及SOD2的表达减少,P53的表达增加,SA-β-Gal染色阳性细胞比例及活性氧的水平增加。转染Sirt3 siRNA后加入AGEs的干预组与对照组相比,SIRT3及SOD2表达减少,SA-β-Gal染色阳性细胞比例及活性氧水平升高,且与转染Sirt3 siRNA组相比,P53表达水平进一步增加。转染NC siRNA的TSDP预处理AGEs干预组较转染NC siRNA后AGEs干预组SA-β-Gal染色阳性细胞比例减少,但转染Sirt3 siRNA的TSDP预处理AGEs干预细胞后上述TSDP引起的SA-β-Gal改变作用消失。结论 AGEs可能是通过下调Sirt3的表达水平,减少抗氧化物蛋白SOD2的表达,加重线粒体氧化应激,促进AGEs诱导的心肌老化进程。TSDP可能通过调控 Sirt3的表达水平而影响老化。     

丙型肝炎病毒核心蛋白下调沉默信息调节因子2相关酶1-AMP激活蛋白激酶信号通路活性致肝细胞能量代谢紊乱

目的 探讨沉默信息调节因子2相关酶1 (SIRT1)-AMP激活的蛋白激酶(AMPK)信号通路在HCV核心蛋白所致肝细胞能量代谢紊乱中的作用.方法 pcDNA3.1-core重组质粒转染HepG2细胞,流式细胞仪测定表达HCV核心蛋白的HepG2细胞的活性氧(ROS),液体闪烁计数仪测定ATP/ADP比例和AMPK α2酶活性,比色法测定烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化态与还原态之比(NAD+/NADH),荧光定量检测SIRT1酶活性,RT-PCR和Western印迹检测SIRT1、AMPK α2的表达.计量资料比较采用t检验.结果 Western印迹检测证实,HepG2细胞表达相对分子质量为22 000的HCV核心蛋白.与HepG2细胞相比,表达HCV核心蛋白的HepG2细胞ROS水平升高(1.0±0.1比4.0±0.5,t=14.411,P＜0.01);ATP/ADP比例无明显变化(8.2±2.2比9.3±2.8,t=0.757,P＞0.05);AMPK α2酶活性(0.8±0.2比0.2±0,t=7.345,P＜0.01)明显降低;NAD+/NADH比例明显降低(0.08±0.02比0.02±0,t=7.348,P＜0.01);SIRT1酶活性[(0.30±0.05) pmol·μg 1·min-1比(0.15±0.04) pmol·μtg-1·min-1,t=5.738,P＜0.01)]明显降低;SIRT1 mRNA(0.8±0.2比0.4±0.1,t=4.382,P＜0.01)和AMPK α2 mRNA(0.9±0.3比0.2±0,t=5.715,P＜0.01)表达明显降低;SIRT1蛋白(0.8±0.2比0.3±0,t=5.941,P＜0.01)和磷酸化AMPK蛋白(0.5±0.1比0.1±0,t=9.608,P＜0.01)水平明显降低.结论 HCV核心蛋白能下调SIRT1-AMPK信号通路活性,导致肝细胞能量代谢紊乱.     

β受体阻滞剂对自发性高血压大鼠血管老化的影响

目的]探讨β受体阻滞剂在自发性高血压大鼠(SHR)血管老化中的防治作用及其潜在机制。 [方法]将24只3月龄雄性SHR随机分为安慰剂组、硝苯地平组、硝苯地平＋美托洛尔组、美托洛尔组,分别以食用淀粉、硝苯地平缓释片60 mg、硝苯地平缓释片40 mg＋美托洛尔缓释片75 mg、美托洛尔缓释片150 mg灌胃治疗,普通饲料喂养9个月,动态观察大鼠血压、心率及一般情况。HE染色观察大鼠股动脉形态学特征,离体股动脉血管环灌流实验检测血管舒缩功能,免疫荧光组织学染色和实时聚合酶链反应(RT-PCR)测定衰老相关基因p53、p21及内质网应激相关基因CHOP、XBP1的表达。 [结果]与安慰剂组相比,硝苯地平组、硝苯地平＋美托洛尔组、美托洛尔组收缩压下降约30%,舒张压下降约20%,心率分别下降了9%、36%、41%(均P＜0.01)。与安慰剂组相比,硝苯地平组、硝苯地平＋美托洛尔组、美托洛尔组舒缩功能显著改善,内膜中膜厚度分别下降了24%、14%、37%(均P＜0.01);与硝苯地平组、硝苯地平＋美托洛尔组相比,美托洛尔组舒缩功能显著改善,内膜中膜厚度分别下降了18%、27%(均P＜0.01)。与安慰剂组相比,硝苯地平组p53蛋白、p53 mRNA、p21蛋白、p21 mRNA、CHOP蛋白、CHOP mRNA、XBP1蛋白、XBP1 mRNA的表达水平分别下降了35%(P＜0.01)、23%(P＜0.05)、25%(P＜0.01)、3%(P＞0.05)、51%(P＜0.01)、24%(P＞0.05)、21%(P＜0.01)、23%(P＞0.05),硝苯地平＋美托洛尔组分别下降了36%(P＜0.01)、42%(P＜0.01)、4%(P＞0.05)、24%(P＜0.05)、32%(P＜0.01)、44%(P＜0.05)、13%(P＜0.01)、42%(P＜0.05),美托洛尔组分别下降了47%(P＜0.01)、43%(P＜0.01)、42%(P＜0.01)、49%(P＜0.01)、78%(P＜0.01)、56%(P＜0.01)、32%(P＜0.01)、81%(P＜0.01)。与硝苯地平组、硝苯地平＋美托洛尔组相比,美托洛尔组进一步抑制衰老和内质网应激相关基因的表达。 [结论]SHR的动脉存在明显老化,β受体阻断剂在抑制SHR血管老化方面优于钙通道阻断剂,且高剂量β受体阻断剂改善血管老化程度优于联合用药,其机制可能与抑制内质网应激有关。     

1-Naphthyl isocyanate and 1-naphthylamine as metabolites of 1-naphthylisothiocyanate

Abstract: The importance of the bioactivation of 1-naphthylisothiocyanate was studied. Forty minutes after 1-naphthylisothiocyanate administration to rats, bile was collected over a 2.5-h period; the liver was then excised and homogenized. 1-naphthylisothiocyanate and its metabolites in bile and liver of rats were identified and quantified using coupled gas chromatography-mass spectrometry. Three main compounds were found in all 1-naphthylisothiocyanate-treated animals. They were identified as 1-naphthyl isocyanate, 1-naphthylamine and the parent compound, 1-naphthylisothiocyanate. When rats were given cycloheximide, which attenuates 1-naphthylisothiocyanate toxicity, 30 min before 1-naphthylisothiocyanate (300 mg/kg), 1-naphthyl isocyanate concentration was significantly lower than in rats receiving only 1-naphthylisothiocyanate. The appearance of 1-naphthylamine was also inhibited by cycloheximide, although not to the same extent as 1-naphthyl isocyanate. On the other hand, phenobarbital, which potentiates 1-naphthylisothiocyanate hepatotoxicity, enhanced 1-naphthyl isocyanate and 1-naphthylamine formation. It is suggested that 1-naphthyl isocyanate, 1-naphthylamine and the highly reactive sulfur released from 1-naphthylisothiocyanate might be involved in the hepatotoxic effect of 1-naphthylisothiocyanate.     

The target of ezetimibe is Niemann-Pick C1-Like 1 (NPC1L1)

Ezetimibe is a potent inhibitor of cholesterol absorption that has been approved for the treatment of hypercholesterolemia, but its molecular target has been elusive. Using a genetic approach, we recently identified Niemann-Pick C1-Like 1 (NPC1L1) as a critical mediator of cholesterol absorption and an essential component of the ezetimibe-sensitive pathway. To determine whether NPC1L1 is the direct molecular target of ezetimibe, we have developed a binding assay and shown that labeled ezetimibe glucuronide binds specifically to a single site in brush border membranes and to human embryonic kidney 293 cells expressing NPC1L1. Moreover, the binding affinities of ezetimibe and several key analogs to recombinant NPC1L1 are virtually identical to those observed for native enterocyte membranes. KD values of ezetimibe glucuronide for mouse, rat, rhesus monkey, and human NPC1L1 are 12,000, 540, 40, and 220 nM, respectively. Last, ezetimibe no longer binds to membranes from NPC1L1 knockout mice. These results unequivocally establish NPC1L1 as the direct target of ezetimibe and should facilitate efforts to identify the molecular mechanism of cholesterol transport.     

Inhibition of procarcinogen-bioactivating human CYP1A1, CYP1A2 and CYP1B1 enzymes by melatonin

Abstract:  Administration of melatonin to rodents decreases the incidence of tumorigenesis initiated by benzo[ a ]pyrene or 7,12-dimethylbenz[ a ]anthracene, which requires bioactivation by cytochrome P450 enzymes, such as CYP1A1, CYP1A2 and CYP1B1, to produce carcinogenic metabolites. The present study tested the hypothesis that melatonin is a modulator of human CYP1 catalytic activity and gene expression. As a comparison, we also investigated the effect of melatonin on the catalytic activity of CYP2A6, which is also a procarcinogen-bioactivating enzyme. Melatonin (3–300 μ m ) decreased 7-ethoxyresorufin O -dealkylation catalyzed by human hepatic microsomes and recombinant CYP1A1, CYP1A2 and CYP1B1, whereas it did not affect coumarin 7-hydroxylation catalyzed by hepatic microsomes or recombinant CYP2A6. Melatonin inhibited CYP1 enzymes by mixed inhibition, with apparent K _i values (mean ± S.E.M.) of 59 ± 1 (CYP1A1), 12 ± 1 (CYP1A2), 14 ± 2 (CYP1B1) and 46 ± 8 μ m (hepatic microsomes). Additional experiments indicated that melatonin decreased benzo[ a ]pyrene hydroxylation catalyzed by hepatic microsomes and CYP1A2 but not by CYP1A1 or CYP1B1. Treatment of MCF-10A human mammary epithelial cells with melatonin (up to 300 μ m ) did not affect basal or benzo[ a ]pyrene-inducible CYP1A1 or CYP1B1 gene expression. Consistent with this finding, melatonin did not influence reporter activity in aryl hydrocarbon receptor-dependent pGudluc6.1-transfected MCF-10A cells treated with or without benzo[ a ]pyrene, as assessed in an in vitro cell-based luciferase reporter gene assay. Overall, melatonin is an in vitro inhibitor of human CYP1 catalytic activity, and it may be useful to develop potent analogues of melatonin as potential cancer chemopreventive agents that block CYP1-mediated chemical carcinogenesis.     

甲型H1N1与季节性H1N1流感病毒血凝素基因比较分析

目的分析泰安市2008～2009年度季节性流感与2009年度甲型H1N1流感病原学检测结果 ,比较季节性H1N1与甲型H1N1血凝素基因变异情况。方法选择国家级流感监测哨点医院以及暴发疫情的疫点,采集流感样病例的鼻咽拭子标本,通过RealtimePCR进行病毒检测,用MDCK细胞进行病毒分离,通过RT-PCR扩增血凝素HA1片段的基因并测序,利用生物信息学进行序列分析。结果 2008～2009年共检测鼻咽拭子标本283份,分离出流感病毒33株,分离阳性率为11.67%,其中季节性H1N1亚型31株。2009年5月1日～12月31日,检测鼻咽拭子标本996份,流感核酸检测阳性417份,阳性率为41.86%,其中甲型H1N1337份,季节性H1N1亚型1份。6株季节性H1N1病毒均在多个氨基酸位点上发生变异,与疫苗株A/Brisbane/59/2007(H1N1)比较,有11个位点发生了突变,其中5个位点位于抗原决定簇上;测序成功的6株甲型H1N1病毒在多个氨基酸位点发生变异,与疫苗株A/California/07/2009(H1N1)比较,有6个位点发生突变,其中1个位点位于抗原决定簇的B区。结论 2008～2009年度季节性H1N1为优势株,甲流暴发后,甲型H1N1成为绝对优势毒株。季节性H1N1分离株有多处氨基酸替换,抗原决定簇B区变异频繁;甲型H1N1病毒分离株的基因有变异,但关键位点第222位仍为D(天冬氨酸),与疫苗株相比抗原决定簇的关键位点变化不大。