原发性肝癌中N—ras,c—myc癌基因的表达研究

以点杂交和原位杂交法检测了34例启东地区原发性肝癌手术切除标本N－ras、c－myc基因的表达水平和定位。点杂交结果显示：N－ras、c-myc的检出率分别为647％（22／34）和23．5％（8／34）。前期的实验表明此34例标本HBV－DNA的检出率为588％（20／34），Southernblot实验结果未见病毒DNA的整合。N－ras、c-myc阳性标本中HBV－DNA的检出率分别为54．5％（12／22）和75％（6／8），两者之间无差异，P＞0．05。原位杂交结果显示：肝癌癌组织中N－ras、c－myc基因的表达水平并没有明显增高，相反，肿瘤周围肝组织中的表达水平增高并主要位于慢性肝炎、肝硬变中的再生肝细胞中，阳性细胞呈灶性及成片分布，不伴有毛玻璃样改变（HE染色）。结论：虽然N－ras、c－myc与肝癌的发生密切相关，肝癌患者中常见其表达水平增高，但这很可能只是一种肝细胞损伤后再生时的细胞增殖性调控的表现，此种N－ras、c-myc的高表达是否直接导致肝癌发生，癌基因是否为突变型，有待进一步研究、此外，本实验中c－myc基因相对于N－ras基因的低检出率可能与c－mycMRNA极短的半衰期有关。     

硒对大鼠肝细胞凋亡和原癌基因c-myc、c-fos和c-jun表达的影响

目的　研究亚硒酸钠对大鼠肝细胞凋亡和原癌基因c myc、c fos和c jun表达的影响。方法　选用大鼠 ,每组 5只 ,用 5、10和 2 0 μmol/kg亚硒酸钠腹腔注射染毒。用末端标记法 (TUNEL)、流式细胞术检测细胞凋亡 ,用Northern斑点杂交方法研究原癌基因c myc、c fos和c jun的表达。结果　 5、10和 2 0 μmol/kg的亚硒酸钠染毒大鼠 ,不仅能诱导大鼠肝细胞凋亡 ,细胞凋亡率均较对照组 ( 2 2 2± 0 43 ) %显著增高 ,分别为 ( 3 72± 1 76) % (P <0 0 5 )、( 5 82± 1 42 ) % (P <0 0 1)和 ( 11 76± 1 87) % (P <0 0 1) ,而且还存在着明显的剂量 反应关系。 5、10和 2 0 μmol/kg的亚硒酸钠也能引起大鼠肝细胞c myc、c fos和c junmRNA明显增多 ,免疫组化分析可以检测到表达产物c Myc ,c Fos和c Jun蛋白 ,说明这 3种原癌基因表达增强。结论　一定剂量的亚硒酸钠可以诱导大鼠肝细胞凋亡和原癌基因c myc、c fos和c jun的表达增强     

绞股蓝皂苷对小鼠白血病P388细胞内原癌基因表达的影响

目的　研究绞股蓝皂苷 (gypenosides ,GP)体外给药对小鼠白血病P 388细胞内原癌基因c fos和c myc基因表达的影响。方法　采用Northern杂交和狭线杂交的方法检测c fos和c myc基因表达的水平。 结果　GP在给药剂量0 0 15和 0 0 30 g·L-1的条件下 ,体外给药 2 4h ,c fos和c myc的表达水平分别为 0 5 2 2 ,0 947和 0 16 5 ,0 12 0 ,而对照组则为 0 36 0和 0 30 8。结果表明 ,GP作用 2 4h使P 388细胞内的c fos基因表达水平明显升高 ,c myc基因的表达水平明显降低。结论　GP对原癌基因c fos,c myc表达水平的影响是其抑制P 388细胞生长的机制之一。     

山莨菪碱对红细胞膜流动性和膜内源荧光的影响

应用荧光探针DPH测定完整红细胞膜流动性。山茛菪碱显著增加红细胞膜流动性。山茛菪碱对红细胞膜内源荧光的焠灭呈药物浓度依赖,钙和山茛菪碱对红细胞膜内源荧光的焠灭有协同作用,提示山茛菪碱对膜疏水区有作用,并且直接与膜蛋白反应导致能量转移。     

山莨菪碱对红细胞膜流动性和膜内源荧光的影响

应用荧光探针DPH测定完整红细胞膜流动性。山茛菪碱显著增加红细胞膜流动性。山茛菪碱对红细胞膜内源荧光的焠灭呈药物浓度依赖,钙和山茛菪碱对红细胞膜内源荧光的焠灭有协同作用,提示山茛菪碱对膜疏水区有作用,并且直接与膜蛋白反应导致能量转移。     

葛根素对谷氨酸所致大鼠原代神经细胞损伤的保护作用

目的从膜脂流动性等观察葛根素对谷氨酸所致大鼠原代神经细胞损伤的保护作用。方法建立大鼠原代神经细胞谷氨酸损伤模型,以1,6-二苯基-1,3,5-己三烯(DPH)为探针,用荧光偏振法测定荧光偏振度(P)值和微粘度(η),研究细胞膜脂流动性的改变;MTT(四甲基偶氮唑盐)法、培养介质乳酸脱氢酶(LDH)活力测定观察葛根素的保护作用。结果葛根素组荧光偏振度和微粘度低于谷氨酸损伤组,与尼莫地平作用相当,且呈现剂量依赖关系。葛根素组原代神经细胞LDH的释放减少,吸光度增加,但葛根素对正常细胞增殖无影响。结论葛根素对谷氨酸所致的大鼠原代神经细胞损伤具有保护作用,其保护作用可能与葛根素改善神经细胞膜脂流动性有关。     

肝移植术后患者环孢素A药物动力学与红细胞膜脂流动性的动态观察

目的探讨肝移植术后患者细胞膜脂流动性与环孢素A(CsA)药物动力学相关性,减少药物引起的不良反应.方法采用FPLA法测定CsA全血药物浓度,DPH荧光探针法测定红细胞膜脂流动性.结果红细胞膜脂流动性的动态改变与血中CsA药物浓度的变化呈负相关.结论CsA可使细胞膜脂流动性降低,长期低水平的膜脂流动性是导致肝损害的病理学基础.     

苦参碱对U251胶质瘤细胞的增殖抑制和原癌基因表达的影响

目的　探讨苦参碱对胶质瘤细胞株 (U2 5 1细胞株 )的抑制作用及其作用机制。方法　用MTT比色法检测不同浓度苦参碱对U2 5 1细胞的增殖抑制 ,流式细胞仪观察苦参碱对U2 5 1细胞周期的影响 ,RT PCR观察原癌基因C myc表达的变化。结果　苦参碱对U2 5 1细胞增殖抑制作用成剂量依赖性 ,当浓度为 0 10g·L-1时 ,对U2 5 1细胞增殖的抑制率达到 5 3 7%± 6 0 %。流式细胞仪分析显示 ,用 0 10g·L-1苦参碱培养 3d ,细胞周期中G0 /G1期所占比例增高 ,S期占细胞周期的比例减低。RT PCR结果显示 ,随着苦参碱作用剂量的增加 ,C myc基因的表达被明显抑制。结论　苦参碱对人胶质瘤细胞系U2 5 1的增殖具有明显的抑制作用 ,并对原癌基因C myc的表达具有抑制作用     

PELGE空白纳米粒对Chang细胞c-fos、c-myc、p53基因表达的影响

目的 考察PELGE空白纳米粒对Chang细胞原癌基因、抑癌基因表达量的影响,筛选生物相容性好、低毒的载体材料,探索纳米粒可能存在的致癌性.方法 采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术,用荧光标记寡聚核苷酸,Tagman探针法测定与PLEGE和PLGA空白纳米粒共培养的Chang氏细胞,以管家基因β-actin为内参基因,测定了抑癌基因p53及原癌基因c-myc、c-fos表达量的变化.结果 9种空白PELGE纳米粒中,1号材料(PEG 550,5%,LA/GA=7∶3)、7号材料(PEG 750,5%,LA/GA=7∶3)的3种基因表达水平均较低,相对于空白对照无显著差异.结论 1、7号材料性质惰性,不会导致细胞出现原癌基因、抑癌基因表达量的明显变化,说明其生物相容性良好,无潜在的致癌性.     

大萼香茶菜甲素通过线粒体途径诱导HL-60白血病细胞凋亡

目的：观察大萼香茶菜甲素（macrocalyxinA,MA）体外诱导HL-60细胞凋亡,并探讨其作用机制。方法：不同浓度的MA与HL-60细胞进行培养,采用MTT比色法观察其对HL-60细胞增殖的抑制作用;细胞形态学、DNA含量、DNA梯度电泳及细胞周期分析、Annexin—V／PI双标记和Hoechst 33258荧光染色等分析其促细胞凋亡效应;流式细胞术和RT-PCR分别检测Bcl-2、Bax、P53、Fas、线粒体膜蛋白（Ap02．7）、线粒体跨膜电位（AWm）与Bcl-2、Bax、P53、caspase-3 mRNA变化水平,研究其促凋亡机制。结果：MA呈现作用时间和剂量依赖性地抑制HL-60细胞增殖和活力;HL-60细胞经MA作用后,Wright—Giemsa染色和Hoechst荧光染色后细胞出现典型的凋亡小体,细胞阻滞于G0／G1期,DNA片段化,亚二倍体明显增高,Annexin—V／PI标记升高;MA诱导HL-60细胞凋亡过程中,Bcl-2、Fas、P53表达无明显变化,Bax、线粒体膜蛋白（Apo2．7）、caspase-3表达显著增加,Bax／Bcl-2比值升高,龇下降。结论：MA能抑制HL-60细胞增殖和细胞活力、诱导细胞凋亡,其机制通过上调Bax基因和Bax／Bcl-2比值,使线粒体膜电位下降、膜通透性增高,最终使caspase-3激活而促进凋亡。     

DDPH对血管平滑肌细胞增殖及PDGF-B、bFGFc-sis、c-myc的影响

目的：观察１－（２，６－二甲基苯氧基）－２－（３，４－二甲氧基苯乙胺基）丙烷盐酸盐（ＤＤＰＨ）对血管平滑肌细胞增殖的作用及对生长因子ＰＤＧＦ－Ｂ，ｂＦＧＦ及其相关癌基因ｃ－ｓｉｓ，ｃ－ｍｙｃ表达的影响。方法：内皮素建立培养的ＶＳＭＣ增殖模型，氚—胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）参入法，流式细胞术，１９９７－０３－２３收稿，１９９７－０４－０４修回＊国家教委优秀年轻教师基金资助项目１同济医院心内科，武汉４３００３０作者简介：熊一力，女，４１岁，博士后钱家庆，男，６３岁，博士生导师，药理教研室主任，中国药理学会常务理事免疫细胞化学及Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交方法测定。结果：ＤＤＰＨ能逆转内皮素所致的３Ｈ－ＴｄＲ参入量增多，阻止ＶＳＭＣ由静止期（Ｇ０／Ｇ１期）进入ＤＮＡ合成期（Ｓ期）和有丝分裂期（Ｇ２／Ｍ期），并能逆转内皮素引起的ＰＤＧＦ－Ｂ，ｂＦＧＦ抗原，ｃ－ｓｉｓ，ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达增强。结论：ＤＤＰＨ能抑制ＶＳＭＣ增殖，与生长因子及癌基因调控的分子生物学机制有关。     

Ginsenoside Rb3 Inhibits Angiotensin II‐Induced Vascular Smooth Muscle Cells Proliferation

Abstract: This study was designed to examine the effect of ginsenoside Rb₃ on angiotensin (Ang) II‐induced proliferation of cultured rat vascular smooth muscle cells (VSMCs). VSMCs proliferation was evaluated by [³H]Thymidine incorporation. The cell cycle was examined by flow cytometry. The expression of mRNA of proto‐oncogene c‐myc, c‐fos and c‐jun was observed by RT‐PCR. Ginsenoside Rb₃ had no effects on VSMCs proliferation in physiological condition. Ang II significantly increased the proliferation of VSMCs and the expression of mRNA of proto‐oncogene c‐myc, c‐fos and c‐jun. Ginsenoside Rb₃ markedly inhibited Ang II‐induced VSMCs proliferation. Concomitantly, ginsenoside Rb₃ decreased cell cycle progression from G₀/G₁ to S phase. Furthermore, ginsenoside Rb₃ significantly attenuated the expression of mRNA of proto‐oncogene c‐myc, c‐fos and c‐jun. This study showed that ginsenoside Rb₃ inhibited Ang II‐induced VSMCs proliferation, at least in part by inhibiting Ang II‐induced G₀/G₁ to S phase transition and attenuating the expression of mRNA of c‐fos, c‐jun and c‐myc. The findings may explain the beneficial effects of ginsenoside Rb₃ in cardiovascular diseases, and it will be useful to develop prevention and therapeutics of cardiovascular diseases.     

抗三尖杉酯碱的HL60细胞抗粉防己碱诱导的细胞凋亡

抗三尖杉酯碱的ＨＬ６０细胞抗粉防己碱诱导的细胞凋亡１何琪杨，张鸿卿，庞大本２，池旭生２，薛绍白３（北京师范大学生物系，北京１００８７５；２中国中医研究院基础理论研究所，北京１００７００，中国）目的：用粉防己碱（Ｔｅｔ）研究抗三尖杉酯碱（Ｈａｒ）的ＨＬ...     

聚酯型儿茶素对HL-60细胞的诱导分化作用及其机制研究

目的　研究聚酯型儿茶素对人急性早幼粒白血病HL 6 0细胞的分化作用并探讨其作用机制。方法　应用电镜、NBT还原试验、同位素掺入试验、细胞内cAMP/cGMP浓度测定、原位杂交和免疫细胞化学等方法研究细胞分化及机制。结果　聚酯型儿茶素作用于HL 6 0细胞后 ,扫描电镜和透射电镜观察显示分化细胞的特征 ;NBT还原能力明显增强 ;[3H] TdR ,[3H] Leu掺入试验证明聚酯型儿茶素可明显抑制细胞DNA和蛋白质合成 ;聚酯型儿茶素作用后 ,细胞内cAMP浓度及cAMP/cGMP比值明显增加 ,HL 6 0细胞的c myc基因mRNA和蛋白产物的表达均明显降低 ,而c fos基因mRNA和蛋白产物的表达均明显升高。结论　聚酯型儿茶素可诱导HL 6 0细胞向成熟细胞分化 ,其分化作用可能与其升高细胞内cAMP/cGMP比值和抑制c myc基因表达、增强c fos基因表达有关。本研究为聚酯型儿茶素在肿瘤防治领域的开发应用提供了充分的理论依据     

Immunohistochemical detection of ras and myc oncogene expression in regenerating rat liver.

The expression of ras and myc oncogene proteins was examined in formalin-fixed paraffin-embedded sections of male Sprague-Dawley rat liver at various times after liver regeneration was induced by either a necrogenic dose of CCl4 or a 2/3 partial hepatectomy. Antibody specific for these proteins and immunohistochemical (IHC) procedures were used to detect oncogene expression in the liver. Increased expression of both oncogene proteins was detected at times comparable to those reported by others using either Northern or Western blot methods. However, the IHC procedure provided additional information since oncogene expression was detected only in hepatocytes, mainly occupying liver lobule zones known to contain proliferating hepatocytes during regeneration. Also, ras and myc stain intensity of individual hepatocytes did not increase during regeneration. Rather, a greater number of hepatocytes were positive at several time points in the regeneration process. This suggested that the increased ras and myc expression detected in Northern and Western blot methods probably represents a greater number of hepatocytes expressing the oncogene proteins rather than increased expression by individual hepatocytes. Overall, this study provides additional information on the cells involved in the expression of the ras and myc oncogenes during regeneration and further substantiates their role in a normal physiological process.     

EGF受体介导c-erbB2癌基因反义寡核苷酸对p185蛋白表达的影响

目的 研究c-erbB2癌基因反义寡核苷酸探针^99mTc-ASODN-EGF对SK-Br-3乳腺癌细胞c-erbB2蛋白表达的影响。方法将反义寡脱氧核苷酸与次乙酰双半胱氨酸偶联,用锝(^99mTc)标记,再与表皮生长因子联合,形成分子复合物^99mTc-ASODN-EGF。将该复合物给予SK-Br-3乳腺癌细胞,用免疫组化方法测定细胞膜c-erbB2蛋白的表达。结果 ^99cmTc-ASODN-EGF明显抑制c-erbB2蛋白表达,免疫组化的平均光密度值最低,对照正义和无义组对蛋白表达的影响较小。结论 c-erbB2反义寡脱氧核苷酸明显抑制目的基因表达,使p185蛋白减少,细胞活力减弱。     

d-宁烯、丹参及姜黄素衍生物对ras基因产物膜结合和细胞间隙信息传导的影响

目的旨在寻找新型抗肿瘤药物,进一步研究d-宁烯、丹参及姜黄素衍生物的抗肿瘤机理。采用分子生物学方法及划痕标记染料示踪技术,研究了4种人实体瘤起源的细胞系的细胞间隙信息传导(GJIC)、H-ras癌基因表达以及ras癌基因产物(P21^ras蛋白)表达状态,并观察了4种天然产物对它们的影响。结果表明,细胞内染料传输功能的丧失与ras基因突变率呈正相关;单萜化合物d-宁烯和酚类化合物丹参衍生物的抗肿瘤作用可能与抑制P21^ras蛋白膜结合和增强细胞间隙信息传导功能有关。提示Ras癌基因产物P21^ras蛋白膜结合的抑制与细胞间隙信息传导功能的增强有直接关系。