中国黑龙江省斑点热立克次体和日本斑点热立克次体基因…

中国黑龙江斑点热立克次体和日本斑点热立克次体先后被鉴定为斑点热群中的两个新种。通过采用微量免疫荧光广泛和聚合酶链扩增／限制性内切酶片段长度多态性分析技术，对两株斑点热立克次体进行了比较。结果显示，黑龙江立克次抗血清与日本株抗原无交叉反应，黑龙江立克次体抗原与日本株抗血清仅呈低滴度反应。     

斑点热立克次体国内分离株与日本株血清型的比较

自1962年我国分离出第一株斑点热立克次体以来,到目前为止,已经分别从新疆、内蒙古和黑龙江3省内分离出数十株斑点热立克次体。经过血清学、碱基成份测定、核酸杂交、蛋白电泳(PAGE)及免疫印迹、DNA酶切片段多态分析、气相色谱分析其化学成分等方法的鉴定,表明国内分离株分属两个血清型(或种):西伯利亚立克次体(R.sibirica,下称北亚)和黑龙江立克次体(R.heilongjiangensis)。后者与斑点热群其它种比较,有其独立的抗原性,是一新血清型,可能是一新种。本研究分别以自新疆草原革蜱分离的精河株(Jh株)和自黑龙江森林革蜱中分离的054株作为北亚和黑龙江斑点热立克次体血清型国内分离株的代表株与日本新分离的斑点热立克次体株进行血清型比较。 1984年日本学者首次用血清学方法确诊了误诊为恙虫病的患者是斑点热病人。此后陆续从病人血中分离到数株斑点热立克次体,经血清学鉴定表明均与斑点热群参照株不同,故称其为日本斑点热立克次体。1990年日本学     

实时荧光定量PCR检测斑点热立克次体的方法建立

目的 建立检测斑点热立克次体的群特异性实时荧光定量PCR方法.方法 根据斑点热立克次体外膜蛋白B(ompB)基因序列设计群特异性引物和探针,以克隆的斑点热立克次体ompB基因片段作为模板,在荧光定量PCR检测仪上建立实时荧光定量检测法.结果 该方法定量检测标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系,最小检出量小于10个拷贝.用该方法检测斑点热立克次体(立氏立克次体、西伯利亚立克次体、西伯利亚立克次体精河株、康氏立克次体、小蛛立克次体、澳大利亚立克次体、派氏立克次体、扇头蜱立克次体、非洲立克次体、阿斯特罕立克次体、斯洛伐克立克次体、日本立克次体、马赛立克次体、猫立克次体和黑龙江立克次体)DNA样本的结果均为阳性,但检测普氏立克次体、莫氏立克次体、恙虫病东方体、贝氏柯克斯体、查菲埃立克体、汉赛巴通体以及其他9种病原菌DNA样本的结果均为阴性.用荧光定量FCR检测立氏立克次体、黑龙江立克次体、西伯利亚立克次体精河株感染BALB/C小鼠脾脏组织DNA,均检出不同水平的阳性结果,结果与感染进程相关.结论 本研究建立的检测斑点热立克次体的实时荧光定量PCR具有较高的敏感性和群特异性,适合样本中各种斑点热立克次体的快速检测,可用于斑点热的实验室快速诊断和自然疫源地的流行病学研究.     

立克次体的纯化及其分析

本文用斑疹伤寒群和斑点热群立克次体鸡胚培养的感染卵黄囊膜在1MKCl溶液中制成10%～20%悬液,以差速离心沉淀和乙醚处理法提取纯化立克次体.该法纯化的立克次体涂片经Giemsa、H_(33258).荧光素及免疫酶标染色,在光镜下观察,立克次体形态完整,纯度较好.其斑疹伤寒群的普氏立克次体(E株)平均蛋白回收量为0.88mg/g膜,斑点热群的西伯利亚立克次体(Barbash株)和国内分离鉴定的斑点热立克次体精河株、斑点热立克次体黑龙江株及斑点热立克次体内蒙株的平均蛋白回收量为0.34～0.40mg/g膜.纯化的立克次体在核酸提取、DNA碱基成份的测定和全立克次体蛋白组成及抗原多肽构成的分析中取得了满意结果.     

不同立克次体DNA的G+Cmol%含量分析

本文以普氏斑疹伤寒立克次体和斑点热立克次体为参照,对我国斑点热立克次体分离株的代表株 DNA 的 G+C mol%含量进行了分析比较,结果指出,斑疹伤寒群与斑点热群立克次体的 G+C mol%含量不同,分别为29.1和32.05;国内分离的精河株和内-01株分别为32.7和32.4,与参照的斑点热立克次体 Barbash 株(32.5)基本一致,054株的 G+C mol%是30.6,低于斑点热群的 G+C mol%数值,高于斑疹伤寒群的含量,揭示了该株 DNA 的 G+C 含量的特殊性,这是否意味着054株的特殊分类地位或是否是新种有待深入研究。     

人CD34单链抗体基因的构建及序列测定

目的：获得抗人ＣＤ３４单链抗体基因。方法;选用一株分泌抗ＣＤ３４抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株,提取总ＲＮＡ,经ＲＴ－ＰＣＲ扩增出此抗本的重链可变区和轻链可变区基因,与Ｋａｂａｔ抗体库比国得到其框架区和互补决定区的氨基酸序列,重新合成两引引物去掉保留的分泌信号前导序列并加入适当的限制性内切酶酶切位点,再经ＰＣＲ得到所需要的重链可变区和轻链可变区基因,经一弹性连接肽连接构建成抗人ＣＤ３４的单链抗体（ｓ     

酶标抗体的制备及细胞内病毒和立克次体抗原的检出

用三种不同方法提取的抗体IgG与辣根过氧化物酶按戊二醛一步法和二步法制备酶标抗体。酶标抗体经免疫化学和免疫组织化学鉴定,初步认为可供光学显微镜检出细胞内病毒和立克次体抗原应用。乙型脑炎病毒感染小白鼠脑石蜡切片间接法酶标抗体染色的结果表明:脑干神经核和皮层海马回等部位的感染神经元的胞体、轴突及树突内均可检出棕黄色颗粒样抗原-抗体反应沉淀物。斑点热立克次体自然感染蜱血淋巴涂片的直接法和间接法酶标抗体染色均显示阳性反应。     

湖北省东北部地区蜱携立克次体的调查

目的 调查湖北省东北部地区蜱携带的立克次体.方法 对采集的蜱种类进行鉴定,提取单个蜱总DNA,采用巢式PCR对DNA样本做斑点热群(SFGR)、无形体属(Anaplasma spp.)和埃立克体属(Ehrlichia spp.)、柯克斯体属(Coxiella spp.)、贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)种特异性基因扩增;测定扩增产物DNA序列,通过特异基因序列鉴定分析蜱携菌种类.结果 与结论共采集152只蜱,形态学鉴定均为长角血蜱(Haemaphysalis longicor?nis).PCR扩增斑点热立克次体ompA基因获得1份(0.66％)蜱DNA阳性样本,扩增柯克斯体属16S rRNA基因获得75份(49.34％)蜱DNA阳性样本,所有样本均未扩增出无形体属和埃立克体属特异基因和贝氏柯克斯体种特异基因.将扩增阳性样本基因片段的DNA序列通过GenBank进行同源性比较,发现检出的1份斑点热立克次体ompA基因序列与劳氏立克次体(Rickettsia raoultii)同源性为100％;检出的75份柯克斯体属16S rRNA基因序列为两种类型,与血蜱属的2种柯克斯体样内共生菌(Coxiella?like endosymbiont)同源性最高,分别为99.73％和100％.本研究证实湖北省东北部地区的长角血蜱可携带劳氏立克次体和柯克斯体样内共生菌.     

山东省恙虫病立克次体的首次分离和初步鉴定

作者等继1986年首次证实山东省恙虫病流行之后,于1987年9～11月间,在流行区进行了病原分离.用小鼠分别自小盾纤恙螨(Leptotrombidium(L) scutellarae)、黑线姬鼠(Apodemus agrarius)以及恙虫病患者血液分离出8株恙虫病立克次体,分离阳性率分别为10、25和50%.所有分离物感染小鼠的肝脾均有3～5倍的扩大,其中3株仅血清抗体阳性而小鼠不发病;5株可使小鼠有规律地发病,并可以从病鼠组织中查见立克次体颗粒,但毒力有区别,其中3株症状不典型、发病晚,有2株感染小鼠接种后5～12天发病,症状典型,7～15天部分小鼠死亡(25～75%).用酶标染色法进行血清学鉴定,结果表明.分离株与普氏立克次体(E株)、Q热立克次体(06株)和斑点热立克次体(246株)无任何交叉反应,而与恙虫病立克次体(Gilliam株)呈阳性反应.初步认为,自山东分离的恙虫病立克次体可能是与Gilliam同一血清型.但山东恙虫病为秋冬型.     

弓形虫主要表面抗原基因克隆的初步研究

根据已发表的弓形虫主要表面抗原Ｐ３０基因序列，自行设计合成一对寡核苷酸引物。利用ＰＣＲ技术获取Ｐ３０抗原基因整个开放阅读框架的碱基序列。ＰＣＲ产物经ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ双酶切后，与经同样两种内切酶切割的质粒载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ连接构成重组质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ－Ｐ３０，转化大肠杆菌ＤＨ５α。通过遗传标记筛选、ＰＣＲ扩增及酶切分析对重组子进行了初步的鉴定，构建了弓形虫主要表面抗原Ｐ３０基因克隆，为进一步选择真核系统或原核系统体外表达该抗原，用于临床弓形虫病的免疫学诊断及弓形虫病的预防打下了必要的基础。     

Rickettsia in the regiment

A case of Rocky Mountain Spotted Fever (RMSF) is described, together with other cases of pyrexia whose occurrence originally gave the impression of a significant outbreak of the disease in a TA regiment after annual training in the USA. The role of the RMO is considered in such circumstances.     

普氏立克次体120×103表面抗原的N端和C端重组蛋白免疫原性的研究

目的:评价普氏立克次体120×103表面抗原的N端和C端重组蛋白的免疫原性。方法:将纯化的N端和C端重组蛋白分别免疫小鼠,采用酶联免疫吸附试验和间接免疫荧光试验分析免疫小鼠的体液免疫应答水平;用MTT法评价小鼠脾淋巴细胞的增殖情况,分析免疫小鼠的细胞免疫应答水平,并采用RT-PCR方法检测免疫小鼠脾淋巴细胞被重组蛋白刺激后细胞因子的表达。结果:N端和C端重组蛋白均诱导小鼠产生较高水平的特异性IgG抗体,诱导高水平的小鼠脾淋巴细胞增殖;经两种重组蛋白刺激的小鼠脾淋巴细胞均表达了IFN-γ和IL-2。结论:普氏立克次体120×103表面抗原的N端和C端重组蛋白具有良好的免疫原性,能够诱导机体产生高水平的体液免疫和细胞免疫应答,可作为流行性斑疹伤寒亚单位疫苗的候选蛋白。     

A new approach to computer-aided comparison of skull and photograph

A computer-based method developed for the purpose of checking the results of identification performed with the traditional method of video-superprojection (developed by Helmer and Grüner) is demonstrated; it does not require any special programs in addition to those necessary for digitising the video pictures. The method is suitable for filtering out false-positive cases. A great advantage is that the phase of computer evaluation can be separated from the job performed in the video studio, both in time and space. The process can be reconstructed, which means it can be checked. The results can be easily documented and interpreted for lay people.     

从SARS患者标本中分离的呼肠病毒的分纯及鉴定

目的：对SARS患者标本中分离的4株呼肠病毒进行分纯和鉴定。方法：根据呼肠病毒与有膜的冠状病毒对乙醚敏感性的不同对呼肠病毒进行分纯；对分纯后的呼肠病毒进行理化性质鉴定和血凝试验；用抗呼肠病毒猴血清对4株呼肠病毒进行抗原性分析。结果与结论：4株新分离呼肠病毒的理化性质符合呼肠病毒科呼肠病毒属的特性；4株呼肠病毒的抗原性相同；该病毒尚人“O”型红细胞未见有血凝，与已报道的呼肠病毒有所不同。     

1株蝙蝠来源细小病毒的分离鉴定

目的：对1株蝙蝠来源病毒进行分离鉴定,进行简单的基因分析。方法从云南沧源县8个居民地附近捕获50只棕果蝠并制作组织标本,采用细胞培养分离病毒,采用 cDNA-RAPD 方法扩增序列,采用分子克隆进一步扩增序列,将序列在 NCBI 上进行 BLAST 比对,采用 DNAMAN5.0进行同源性分析,采用 MEGA 5建序列进化树。结果50份接毒细胞中,6份细胞出现细胞病变,cDNA-RAPD 扩增得到1份阳性片段,测序大小为614 bp,经比对该病毒株是细小病毒科细小病毒亚科博卡病毒属牛细小病毒种的一个毒株。结论成功分离并鉴定该毒株,确定该病毒是牛细小病毒的一个新的基因型。     

大鼠星形胶质细胞和少突胶质细胞的纯化培养与鉴定

目的 纯化培养并鉴定大鼠脑组织星形胶质细胞和少突胶质细胞。方法 根据星形胶质细胞和少突胶质细胞的生长时间差异、细胞生长方式及细胞对培养层粘附等特性的不同,改进ＭｃＣａｒｔｈｙ方法纯化培养星形胶质细胞和少突胶质细胞,用免疫组化法对其鉴定。结果 （１）混合培养的星形胶质细胞和少突胶质细胞生长分化状况均优于纯化后的生长,以少突胶质细胞表现更为明显;（２）星形胶质细胞呈向心性生长,细胞相邻的接触面有较多的     

Potential for personal identification using the volume of the mastoid air cells extracted from postmortem computed tomographic images

This study revealed the usefulness of volumetric analysis of mastoid air cells (MACs) extracted from postmortem computed tomography (PMCT) images in characterizing individuals. To characterize deceased persons, the MACs volumes of 61 Japanese PMCT images were measured after thresholding in Hounsfield units and based on the number of voxels on the right and left sides and the voxel size for each person. The volume differences between the right and left MACs and sex were examined. Although there were no obvious volume differences between males and females, the order of sizes on the two sides varied for each person. Moreover, deceased persons could be roughly classified using the total volume of MACs. Deceased persons with similar total volumes could be distinguished further by comparing the ratio of volumes in bilateral MACs. Although the identification process is dependent on samples and different sizes of bilateral MACs, our pilot study indicated that 81.9% (50/61) of deceased persons could be distinguished. In conclusion, volumetric analysis of MACs measured using PMCT imaging has the potential to identify individuals and reduce the number of candidates.     

建立高效的转基因动物鉴定技术体系

转基因动物的鉴定是转基因动物研究领域的重要内容。本文简要回顾了相关鉴定技术的研究进展 ,建立和完善了特异性PCR扩增及其产物酶切的转基因动物鉴定体系 ,在引物设计、PCR参数优化、设立内源性标记等方面作了进一步的改进 ,提高了PCR的特异性和可靠性。实验表明 ,PCR扩增及其产物酶切是一种准确、灵敏、简便、重现性好的转基因动物筛选鉴定方法     

Determination of MN blood group from blood stains by electrophoresis and immunoblotting

Summary The determination of blood groups from blood stains is extremely important in medicolegal practice, but there is the possibility of an error in the determination of MN phenotypes by the absorption-elution test. We investigated a new method applying electrophoresis and immunoblotting. As a consequence of various experiments, the most appropriate pretreatment of blood stains was as follows. Blood stains were immersed in physiological saline for 0.5 to 1h and centrifuged. The supernatant was discarded. The sediment was dissolved in sample buffer (TRIS-buffered physiological saline containing 2% sodium dodecyl sulfate) and followed by thermodegradation. It was subjected to sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). After transfer to a nitrocellulose membrane by Western blotting, MN phenotypes could be determined accurately from blood stains by an enzyme immunoassay (EIA) using commercially available polyclonal anti-M and anti-N sera. For blood stains more than 1 month old it was not easy to determine the MN phenotypes.     

Identification of organ tissue types and skin from forensic samples by microRNA expression analysis

The identification of organ tissues in traces recovered from scenes and objects with regard to violent crimes involving serious injuries can be of considerable relevance in forensic investigations. Molecular genetic approaches are provably superior to histological and immunological assays in characterizing organ tissues, and micro-RNAs (miRNAs), due to their cell type specific expression patterns and stability against degradation, emerged as a promising molecular species for forensic analyses, with a range of tried and tested indicative markers.Thus, herein we present the first miRNA based approach for the forensic identification of organ tissues. Using quantitative PCR employing an empirically derived strategy for data normalization and unbiased statistical decision making, we assessed the differential expression of 15 preselected miRNAs in tissues of brain, kidney, lung, liver, heart muscle, skeletal muscle and skin. We show that not only can miRNA expression profiling be used to reliably differentiate between organ tissues but also that this method, which is compatible with and complementary to forensic DNA analysis, is applicable to realistic forensic samples e.g. mixtures, aged and degraded material as well as traces generated by mock stabbings and experimental shootings at ballistic models.