桦木酸对大鼠肺纤维化模型肺组织的影响＊

目的 探讨桦木酸对大鼠肺纤维化模型肺组织中NF-κB、β-arrestin2表达的影响。方法 15只SPF级雄性SD大鼠分为对照组、模型组、桦木酸组，每组5只。对照组予以单次气管内注射1 mL·kg^-1 0.9%生理盐水，模型组和桦木酸组予单次气管内快速注射5 mg·kg^-1博来霉素建立大鼠肺纤维化模型。造模1天后，对照组及模型组给予10 mL·kg^-1 1%可溶性淀粉溶液，桦木酸组给予50 mg·kg^-1的桦木酸悬浮液，持续21天。HE、Masson染色方法观察肺组织病理改变。酶联免疫吸附法（ELISA）检测肺组织匀浆IL-6的水平。免疫组化法检测肺组织中NF-κB、β-arrestin2、IκBα的表达。结果 与对照组相比，模型组肺组织匀浆中IL-6水平升高，NF-κB、β-arrestin2、IκBα蛋白表达均上调（P<0.05）。与模型组相比，桦木酸组肺组织匀浆中IL-6水平降低，肺组织中NF-κB、β-arrestin2、IκBα蛋白表达均下调（P<0.05）。结论 桦木酸可减轻肺部炎症、减慢肺纤维化的发生发展，可能与下调肺组织中NF-κB、β-arrestin2有关。     

三七对酒精性肝病大鼠肝组织NF-κB、c-Jun表达的影响

 目的 观察三七对酒精性肝病大鼠肝组织NF-κB、c-Jun表达的影响。方法 SD雄性大鼠连续14周给予酒精建立酒精性肝病模型,随机分为模型对照组,三七高、低剂量组和硫普罗宁组,在模型制备同时,每天下午分别灌服给药,连续14周。同时设立正常对照组,连续14周灌胃给水。免疫组化法检测肝组织中NF-κBp65/IκBα、p-IκBα、p-JNK、c-Jun蛋白的表达。结果 模型对照组大鼠肝组织NF-κBp65/IκBα、p-IκBα、p-JNK/c-Jun均较正常对照组明显升高（P<0.01）;三七高、低剂量组大鼠肝组织NF-κBp65/IκBα、p-IκBα、p-JNK/c-Jun表达较模型对照组明显降低（P<0.01,P<0.05）。结论 三七能显著抑制肝组织中NF-κBp65/IκBα、p-JNK/c-Jun的过度表达,这可能是其有效防治酒精性肝病发生发展的重要机制之一。     

痛泻要方调节T淋巴细胞亚群改善慢性应激下大肠癌免疫微环境的机制

目的 探讨痛泻要方对慢性应激下小鼠大肠癌免疫微环境的影响及可能的作用机制。方法 取SPF级BABL/C雄性小鼠40只,随机分成正常组、应激组、痛泻要方组（13.65 g·kg^-1）、痛泻要方应激组（13.65 g·kg^-1）,每组10只。采用慢性束缚应激方法构建应激性小鼠模型,应激7 d后治疗组给予痛泻要方灌胃,在第14天通过强迫游泳实验和悬尾实验检测痛泻要方对应激后小鼠的行为学改变情况,同时对各组小鼠进行大肠癌皮下瘤种植。观察痛泻要方对小鼠体质量、肿瘤体积的影响;末次给药后,收集小鼠血清、瘤体样本。用免疫组化、流式细胞术检测瘤体内T淋巴细胞亚群（CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺及CD4⁺/CD8⁺）含量变化;用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠外周血中皮质酮（CORT）、血清白细胞介素（IL）-2、γ干扰素（IFN-γ）、IL-6和IL-10含量;并用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠核转录因子-κB（NF-κB）抑制蛋白（IκB）激酶α/β（IKKα/β）、NF-κB抑制蛋白α（IκBα）、NF-κB p65、磷酸化（p）-NF-κB p65蛋白表达。结果 与正常组比较,应激组小鼠瘤体体积增大（P<0.05）;CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺数量下降（P<0.05,P<0.01）;CD8⁺数量有上升趋势;辅助性T细胞1（Th1）细胞因子IFN-γ含量降低（P<0.05）;辅助性T细胞2（Th2）细胞因子IL-10含量升高（P<0.05）;CORT含量升高（P<0.05）;p-NF-κB p65、NF-κB p65蛋白表达升高,但差异无统计学意义;IKKα/β蛋白表达升高（P<0.05）;IκBα蛋白表达明显下降（P<0.05）。与正常组比较,痛泻要方组瘤体生长速度下降,但差异无统计学意义;CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺数量显著上升（P<0.01）;CD8⁺数量下降（P<0.05）;Th1细胞因子IL-2、IFN-γ含量升高（P<0.05）;Th2细胞因子IL-6、IL-10含量降低（P<0.05）;CORT含量降低,但差异无统计学意义;p-NF-κB p65蛋白表达下降,但差异无统计学意义;NF-κB p65、IKKα/β蛋白表达明显下降（P<0.05）;IκBα蛋白表达显著升高（P<0.01）。与应激组比较,痛泻要方应激组瘤体生长速度下降,但差异无统计学意义;CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺数量上升（P<0.01）;CD8⁺数量下降（P<0.05）;Th1细胞因子IL-2、IFN-γ含量升高（P<0.05）;Th2细胞因子IL-6、IL-10含量降低（P<0.05）;CORT含量降低（P<0.05）;p-NF-κB p65、NF-κB p65、IKKα/β蛋白表达明显下降（P<0.05,P<0.01）,IκBα蛋白表达显著升高（P<0.01）。结论 痛泻要方可阻延慢性应激下大肠癌生长,有效改善大肠癌免疫微环境的恶化,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路,调节T淋巴细胞亚群功能,从而抑制促炎因子分泌有关。     

桑苏饮调控TLR4通路抑制哮喘大鼠气道炎症

目的 探讨桑苏饮调控Toll样受体4（TLR4）通路对哮喘大鼠气道炎症的抑制作用。方法 48只SD大鼠中选取40只建立哮喘模型,并按照随机数表法等分为模型组,地塞米松组,桑菊饮低、中、高剂量组5组,剩余8只SD大鼠作为空白组。地塞米松组予以0.005 g·kg^-1灌胃,桑苏饮低、中、高剂量组分别予以2.1,4.2,8.4 g·kg^-1桑苏饮灌胃（给药体积0.01 L·kg^-1）,模型组和空白组分别予以给药体积0.01 L·kg^-1灌胃生理盐水,均每天1次,共7 d。比较干预后各组大鼠过敏反应分级;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组大鼠干预后血清,支气管肺泡灌洗液（BALF）白细胞介素-1β（IL-1β）,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,γ-干扰素（IFN-γ）水平;苏木精-伊红（HE）染色观察各组肺组织病理改变,比较肺组织炎症细胞浸润评分;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组肺组织TLR4,核转录因子-κB（NF-κB）mRNA表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组肺组织TLR4,NF-κB蛋白表达及磷酸化（p）-NF-κB水平。结果 模型组过敏反应分级、肺组织病理改变较空白组加重,其余各组较模型组均有所减轻;模型组血清,BALF IL-1β,TNF-α水平均高于空白组,其余各组均低于模型组（P<0.01）;模型组血清,BALF IFN-γ水平均低于空白组,其余各组均高于模型组（P<0.05,P<0.01）;模型组肺组织炎症细胞浸润评分,肺组织TLR4,NF-κB mRNA与蛋白表达,p-NF-κB蛋白水平均高于空白组,其余各组均低于模型组（P<0.01）,差异有统计学意义。结论 桑苏饮可抑制哮喘大鼠过敏反应、肺组织病变和气道炎症,可能是通过抑制TLR4通路,下调TLR4,NF-κB mRNA与蛋白表达,降低p-NF-κB水平实现。     

扶正抗癌汤免疫调节及抑制大鼠卵巢癌移植瘤生长的作用

目的 探讨扶正抗癌汤（FZKAD）的免疫调节及抑制大鼠卵巢癌移植瘤生长的作用。方法 昆明种小鼠随机分为正常组，香菇多糖（0.05 g·kg^-1）组及扶正抗癌汤高、中、低剂量（27.3，13.65，6.825 g·kg^-1）组，每组10只；测定血清半数溶血值（HC₅₀），抗体生成细胞水平及单核巨噬细胞吞噬功能等指标。Fischer 344大鼠右腋窝皮下接种卵巢癌NUTU-19细胞悬液，建立移植瘤模型，并随机分为模型组，顺铂组（0.002 g·kg^-1）及扶正抗癌汤高、中、低剂量（18.9，9.45，4.725 g·kg^-1）组，每组10只；另随机选择10只健康大鼠作为正常组。给药14 d后检测瘤质量，抑瘤率，T淋巴细胞亚群，血清细胞因子表达及肿瘤组织X盒结合蛋白1（XBP1），增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）表达。结果 与正常组比较，扶正抗癌汤高、中、低剂量组小鼠HC₅₀，抗体生成细胞水平，吞噬指数和吞噬活性均明显增加（P<0.05，P<0.01）。与模型组比较，扶正抗癌汤高、中、低剂量组大鼠瘤质量及XBP1蛋白表达显著降低（P<0.01），而抑瘤率，CD4⁺，CD8⁺ T细胞比例，CD4⁺/CD8⁺，肿瘤坏死因子-α（TNF-α），白细胞介素-2（IL-2），γ-干扰素（IFN-γ）表达及CHOP蛋白表达均明显增加（P<0.05，P<0.01）。结论 扶正抗癌汤具有提高正常小鼠免疫功能的作用，同时，也具有较好抑制大鼠卵巢癌移植瘤生长作用；免疫调节作用是扶正抗癌汤发挥抗卵巢癌作用的主要机制。     

基于NF-κB信号通路探讨苓桂术甘汤对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的抗炎保护作用

目的 观察苓桂术甘汤对脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤（ALI）模型小鼠的疗效及相关作用机制。方法 将72只7周龄SPF级C57BL/6小鼠按体质量随机分为正常组、模型组、地塞米松组（5 mg·kg^-1）、苓桂术甘汤高、中、低剂量组（9.36、4.68、2.34 g·kg^-1）,每组12只。除正常组外,其余各组采用鼻滴法予LPS（50 μg/只）构建小鼠ALI模型。给药组分别在造模前连续灌胃给药7 d。造模后12 h取小鼠肺组织,测定双肺湿/干质量比（W/D）;苏木素-伊红（HE）染色观察肺组织病理形态学变化;支气管肺泡灌洗液（BALF）采用细胞计数仪计算总细胞数,瑞氏吉姆萨染色检测炎性细胞的分类（中性粒细胞、巨噬细胞）与数量;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测BALF中炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测核转录因子-κB（NF-κB）炎症通路中NF-κB抑制蛋白α（IκBα）、NF-κB p65及二者磷酸化蛋白的表达,并计算磷酸化蛋白/总蛋白比值。结果 与正常组比较,模型组小鼠肺组织严重损伤,肺泡完整结构被破坏,肺泡壁增厚,大量炎性细胞与红细胞浸润,肺水肿显著加重（P<0.01）。BALF中总细胞与炎性细胞数量,IL-6、TNF-α及肺组织NF-κB p65、IκBα磷酸化蛋白表达显著上调（P<0.01）;与模型组比较,苓桂术甘汤高、中、低剂量组与地塞米松组小鼠肺损伤明显缓解,肺水肿显著减轻（P<0.01）。BALF中总细胞与中性粒细胞数量,IL-6、TNF-α及肺组织NF-κB p65、IκBα磷酸化蛋白表达显著下调（P<0.01）,巨噬细胞数量明显减少（P<0.05）。结论 苓桂术甘汤对LPS-ALI小鼠具有抗炎保护作用,能有效减轻炎症、利水消肿,其机制可能与抑制NF-κB通路活化有关。     

肝豆汤对Wilson病模型TX小鼠脾脏免疫功能调节的作用

目的：探讨肝豆汤对Wilson病模型TX小鼠脾脏免疫功能的调节作用,并探讨相关的作用机制。方法：将小鼠分为正常组、模型组、四硫钼酸铵组、肝豆汤低、中、高剂量组,每组20只。正常组选取DL小鼠常规饲养30 d;模型组和肝豆汤低、中、高剂量组选取TX小鼠分别予生理盐水、肝豆汤（22,44,66 g·kg^-1）各2 mL·kg^-1·d^-1灌胃,四硫钼酸铵组予四硫钼酸铵2 mg·kg^-1·d^-1灌胃,每日2次,连续30 d。上述4组采用电感耦合等离子体-质谱法（ICP-MS）测脾组织微量元素,流式细胞术检测小鼠脾组织T淋巴细胞亚群CD4⁺,CD8⁺,CD4⁺/CD8⁺;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）,白细胞介素-8（interleukin-8,IL-8）,白细胞介素-17（interleukin-17,IL-17）,白细胞介素-18（interleukin-18,IL-18）,γ-干扰素（interferon-γ,IFN-γ）,肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的蛋白表达量。结果：ICP-MS结果显示：与模型组比较,肝豆汤可以降低TX小鼠脾组织铜含量（P<0.01）,流式细胞术检测显示,与正常组比较,模型组脾组织内CD4⁺,CD8⁺增高（P<0.01）,CD4⁺/CD8⁺降低（P<0.01）,与模型组比较,肝豆汤中、高剂量组脾组织内CD4⁺,CD8⁺降低（P<0.05）,CD4⁺/CD8⁺增高,但差异无统计学意义,肝豆汤低剂量组与模型组比较CD4⁺,CD8⁺降低,CD4⁺/CD8⁺增高,但差异均无统计学意义;Western blot检测显示,与正常组比较,模型组脾组织内IL-2,IL-8,IL-17,IL-18,TNF-α,IFN-γ的蛋白表达量增高（P<0.01）,与模型组比较,肝豆汤中、高剂量组及四硫钼酸铵组IL-2,IL-8,IL-17,IL-18,TNF-α,IFN-γ蛋白表达量均降低（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,低剂量肝豆汤组IL-2,IL-8,IL-17,TNF-α相对表达量降低（P<0.05）。结论：TX小鼠脾脏存在免疫功能紊乱,且以负向免疫调节为主。肝豆汤对TX小鼠脾脏免疫功能紊乱具有一定的改善作用。     

体外培育牛黄对人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证小鼠病证结合模型的效用特点

目的 研究药物—体外培育牛黄对人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证动物模型的药理作用特点。方法 按体质量等级将48只Balb/c小鼠随机分为6组,分别为空白组,人冠状病毒229E感染组,寒湿组,人冠状病毒肺炎疫毒袭肺复合模型组,体外培育牛黄高、低剂量组,每组8只。采用寒湿环境诱导+人冠状病毒229E感染形成复合动物病证结合模型,在感染当天给予体外培育牛黄（0.128,0.064 g?kg^-1）,灌胃给药,连续3 d,观察小鼠一般状态,小鼠肺指数和肺指数抑制率;采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测小鼠肺组织病毒载量;采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测小鼠血清胃动素（MTL）,胃泌素（GAS）含量,以及小鼠肺组织细胞因子白细胞介素（IL）-10,IL-6,肿瘤坏死因子（TNF）-α及γ-干扰素（IFN-γ）含量;采用流式细胞术检测小鼠血中CD4⁺ T淋巴细胞,CD8⁺ T淋巴细胞及B淋巴细胞。结果 体外培育牛黄高、低剂量组可明显改善模型小鼠的一般状态,与空白组比较,模型组小鼠肺指数显著升高（P<0.01）,小鼠肺组织核酸表达显著升高（P<0.01）,小鼠血清中MTL含量显著增高,GAS含量明显降低（P<0.05,P<0.01）,肺部组织细胞免疫因子TNF-α,IL-10和IL-6均显著增高（P<0.01）,小鼠外周血淋巴细胞CD4⁺ T细胞,CD8⁺ T细胞及B细胞均显著降低（P<0.01）;与模型组比较,体外培育牛黄高、低剂量组小鼠肺指数均显著降低（P<0.01）,小鼠肺组织核酸表达显著降低（P<0.01）,MTL含量显著降低（P<0.01）,小鼠肺组织中IL-6,IL-10,TNF-α,IFN-γ含量均显著降低（P<0.01）,体外培育牛黄高剂量组可显著升高CD4⁺ T细胞（P<0.05）,体外培育牛黄可一定程度减轻模型小鼠肺组织炎性渗出,肺间质水肿及瘀血等病理表现。结论 体外培育牛黄对人冠状病毒感染致疫毒袭肺证小鼠复合模型的药理作用有明显的改善效用,可显著改善小鼠行为及排泄物状态、降低模型小鼠肺指数、提高肺指数抑制率、降低小鼠肺组织核酸表达、减轻肺组织病理损伤、调节免疫机能和抑制炎性因子释放等作用环节发挥作用,为临床用药提供依据。     

肺肠合治法对LPS诱导急性肺损伤大鼠NF-κB炎症通路和巨噬细胞极化的影响

目的 探究肺肠合治法（麻黄汤+大承气汤）对脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）大鼠的作用与保护机制。方法 将Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、肺肠合治低、中、高剂量组、地塞米松组。通过LPS（10 mg·kg^-1）腹腔注射成功复制ALI大鼠模型。观察与记录各组大鼠一般状态;采用肛温测量法记录各组大鼠造模后0~8 h体温数值;造模后24 h取材,收集血清与肺组织。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-10（IL-10）、精氨酸酶-1（Arg-1）含量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠肺组织中核转录因子-κB p65（NF-κB p65）、磷酸化核转录因子-κB p65（p-NF-κB p65）、核转录因子抑制蛋白α（IκBα）、磷酸化核转录因子抑制蛋白α（p-IκBα）蛋白的表达量;免疫荧光双标检测大鼠肺组织经典激活型（M1）巨噬细胞标记物CD80、IL-1β、巨噬细胞标记物F4/80、IL-10表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠体温和热效应指数（TRI）显著升高,血清促炎因子TNF-α、IL-1β和抗炎因子IL-10水平显著升高（P<0.01）,肺组织p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达显著升高（P<0.01）,肺组织巨噬细胞标志物F4/80、M1巨噬细胞标志物CD80和IL-1β的表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,肺肠合治各组和地塞米松组大鼠体温与TRI指数降低（P<0.01）,血清炎症因子TNF-α、IL-1β水平降低（P<0.05,P<0.01）,血清抗炎因子IL-10、Arg-1水平升高（P<0.05,P<0.01）,肺组织p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）,肺组织M1巨噬细胞标志物CD80、IL-1β表达显著降低和IL-10表达显著升高（P<0.01）,巨噬细胞标志物F4/80表达无明显变化。结论 肺肠合治方剂对ALI大鼠的发热与炎症状态有明显的改善,其机制可能与NF-κB炎症通路被抑制,肺组织巨噬细胞向抗炎表型极化有关。     

参苓白术散通过IκBα/NF-κB通路调控Lewis肺癌小鼠肿瘤自噬的研究

目的 观察培土生金法代表方参苓白术散对Lewis肺癌小鼠模型肿瘤组织IκBα/NF-κB信号通路以及肿瘤自噬的干预作用，探讨参苓白术散联合顺铂对肺癌的部分治疗机制。方法 选取SPF级雄性C57BL/6J小鼠40只，采用腋窝皮下接种肺癌Lewis细胞悬液法建立Lewis肺癌小鼠模型，建模成功后随机分为4组：模型组、顺铂组、中药组和中药+顺铂组，每组10只。模型组给予等量蒸馏水灌胃；顺铂组每周给与腹腔注射顺铂（5 mg·kg^-1）一次，共2次；中药组每日给与参苓白术散（9.36g·kg^-1）灌胃一次，连续14天；中药+顺铂组每日给与参苓白术散（9.36g·kg^-1）灌胃一次，连续14天，同时每周给与腹腔注射顺铂（5mg·kg^-1）一次，共2次。给药14天后，测定各组小鼠肿瘤体积，并计算相对肿瘤体积和相对肿瘤增殖率；采用ELISA法测定肿瘤组织中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）和白细胞介素-1（interleukin-1β， IL-1β）的含量；采用透射电镜观察肿瘤细胞超微形态的变化；采用免疫组化法测定核因子κB抑制蛋白α（NF-kappa-B inhibitor alpha， IκBα）和核因子-κB（nuclear factor-κ-gene binding， NF-κB）P65的蛋白表达水平；采用Western blot法测定自噬相关基因3（autophagy related gene 3， Atg3）、自噬相关基因5（autophagy related gene 5， Atg5）、自噬特异性基因（Beclin-1）和微管相关蛋白1轻链3（Microtubule-associated protein 1 light chain 3， LC3）的蛋白表达水平。结果 与模型组比较，顺铂组、中药组、中药+顺铂组小鼠肿瘤体积和相对肿瘤体积显著减小（P<0.01），肿瘤组织TNF-α、IL-1β含量显著降低（P<0.01），IκBα蛋白表达水平显著升高（P<0.01）、NF-κB P65蛋白入核率显著降低（P<0.01），Atg3、Atg5、Beclin-1和LC3II/LC3I的蛋白表达水平显著升高（P<0.01），和顺铂组比较，中药组和中药+顺铂组肿瘤组织TNF-α、IL-1β含量显著降低（P<0.01），中药+顺铂组肿瘤组织LC3II/LC3I的蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。结论 参苓白术散能够上调IκBα蛋白表达，抑制NF-κB的激活，降低肿瘤组织中促炎因子TNF-α、IL-1β的含量，调控肿瘤组织炎症反应，改变肿瘤微环境，并上调肺癌组织Atg3、Atg5、Beclin-1和LC3II/LC3I的蛋白表达水平，激活肿瘤发生自噬，抑制肿瘤的生长。     

基于“肺肠同治”的清肺化痰逐瘀汤治疗COPD的作用机制

目的 观察清肺化痰逐瘀汤对慢性阻塞性肺病（COPD）大鼠肺肠功能的影响并进一步探讨其体现肺肠同治的深层次机制。方法 将60只Wistar大鼠随机分为6组，每组10只，组别为正常组、模型组、急支糖浆组（10 g·kg^-1·d^-1）、清肺化痰逐瘀汤低、中、高剂量组（10、15、20 g·kg^-1·d^-1）。以脂多糖气管滴注合并烟雾吸入法建立COPD大鼠模型，急支糖浆组与清肺化痰逐瘀汤组分别以相应剂量浓度药液灌胃给药，其余组采用生理盐水灌胃对照，末次给药后监测大鼠肺功能和血气指标。镜下观察大鼠肺、肠组织病理学变化；酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定大鼠血清白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）与结肠组织分泌型免疫球蛋白A（IgA）表达；测定大鼠血清二胺氧化酶（DAO）、D-乳酸、丙二醛（MDA）等生化指标变化；免疫组化检测大鼠结肠组织紧密连接蛋白（Occludin）表达，采用免疫荧光测定大鼠肺组织F4/80阳性肺泡巨噬细胞、α-肌动蛋白（α-SMA）、结肠闭锁小带蛋白-1（ZO-1）表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肺组织磷酸化核转录因子-κB p65（p-NF-κB p65）、NF-κB p65和磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38 MAPK）、p38 MAPK蛋白表达，以及结肠组织Occludin和ZO-1表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠肺功能障碍，用力肺活量（FVC）、动脉血氧分压（PaO2）、动脉血氧饱和度（SaO₂）、肺动态顺应性（Cdyn）降低（P<0.01），肺、肠病理学改变明显，血清IL-6、TNF-α、DAO、D-乳酸、MDA表达增高（P<0.05，P<0.01），肺组织p-NF-κB p65/NF-κB p65和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达比值升高，肺组织F4/80阳性巨噬细胞表达增强，结肠组织IgA、Occludin、ZO-1表达减少（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，急支糖浆和清肺化痰逐瘀汤各剂量组大鼠肺功能明显改善，FVC、PaO₂、SaO₂、Cdyn升高（P<0.05，P<0.01），肺、肠组织病理学改善明显，血清IL-6、TNF-α、DAO、D-乳酸、MDA表达降低（P<0.05，P<0.01），肺组织F4/80阳性巨噬细胞表达减少，肺组织p-NF-κB p65/NF-κB p65和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达比值降低（P<0.01），结肠组织IgA、Occludin、ZO-1表达增高（P<0.01）。结论 清肺化痰逐瘀汤可以有效减轻COPD大鼠症状，其作用机制与抑制肺组织炎症反应，改善肠黏膜屏障功能有关。     

痰瘀同治调控TLR4/NF-κB/IκB通路对糖尿病大鼠心肌炎症反应的影响

目的 观察痰瘀同治对糖尿病大鼠心肌Toll样受体4（TLR4）/核转录因子-κB（NF-κB）/核转录因子-κB抑制蛋白（IκB）信号通路的干预作用,探讨其改善糖尿病大鼠心肌炎症病变的相关机制。方法 选取清洁级雄性SD大鼠45只,随机分为正常组、化痰组、化瘀组、痰瘀同治组、阿拉氯胺组、模型组。除正常组外,其余各大鼠单次腹腔注射链脲佐菌素（STZ）55 mg·kg^-1建立糖尿病模型,正常喂养3周后,化痰组、化瘀组、痰瘀同治组每日分别给予小陷胸汤（4.05 g·kg^-1）,血府逐瘀汤（7.02 g·kg^-1）,抵当陷胸汤（8.10 g·kg^-1）灌胃,阿拉氯胺组每日予阿拉氯胺（3 mg·kg^-1）灌胃,连续给药8周后麻醉取材。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测心肌组织TLR4蛋白及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平;免疫组化法检测NF-κB p65和NF-κB抑制蛋白α（IκBα）表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠心肌TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α的mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α蛋白和mRNA表达水平显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各用药组TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α蛋白和mRNA表达水平均有不同程度下降（P<0.01）;组间比较发现,痰瘀同治组TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α蛋白和mRNA表达水平比化瘀组和化痰组下降更明显（P<0.05,P<0.01）。结论 痰瘀同治法能够改善糖尿病大鼠心肌炎症病变,且效果优于单独使用化痰法或化瘀法,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB/IκB信号通路的激活有关。     

基于“肺主行水”理论探究小青龙汤调节肺水转运蛋白的作用机制

目的 观察小青龙汤及其方元对于肺水转运蛋白的调节作用，初步阐释“肺主行水”的生物学内涵，并从该角度探索其作用机制。方法 根据经方的组方规律，将小青龙汤（11.22 g·kg^-1）拆分为桂枝甘草（2.70 g·kg^-1）、芍药甘草（2.70 g·kg^-1）、姜辛味（3.90 g·kg^-1）、半夏麻黄（3.27 g·kg^-1） 4个方元。通过“形寒+饮冷+冷水浴”法建立寒饮蕴肺证大鼠病理模型，给予小青龙汤及其方元进行干预。肺功能分析系统测定大鼠用力肺活量（FVC）、功能残气量（FRC）、平均呼气中期流量（MMEF）、吸气时间（tI）和呼气时间（tE）等参数；苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠肺组织病理形态学改变；免疫组化法（IHC）检测大鼠肺组织中水通道蛋白（AQP）1、AQP5、上皮细胞钠通道α亚单位（α-ENaC）和钠钾泵（Na⁺-K⁺-ATPase）表达；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肺组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肺组织中环磷酸腺苷（cAMP）、蛋白激酶A（PKA）和cAMP反应元件结合蛋白（CREB）mRNA分子表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肺组织中cAMP、PKA、CREB和磷酸化（p）-CREB蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠FVC、FRC和MMEF功能显著下降（P<0.01），tI与tE时间明显延长（P<0.05，P<0.01）；肺组织中TNF-α含量显著升高（P<0.01）；肺组织中cAMP、PKA、CREB mRNA及蛋白表达显著降低（P<0.01）；肺组织中AQP5及α-ENaC表达明显减少；大鼠肺泡腔内充满水肿液，周围组织充血，炎性细胞浸润，支气管黏膜上皮黏连。与模型组比较，小青龙汤及其方元组可以明显增强模型大鼠FVC、FRC与MMEF功能（P<0.05，P<0.01），部分方元组可缩短tI与tE时间（P<0.05，P<0.01）；小青龙汤组、桂枝甘草组及半夏麻黄组肺组织TNF-α的含量显著下调（P<0.01）；小青龙汤组cAMP、PKA和CREB的mRNA的表达显著上调（P<0.01），桂枝甘草组、姜辛味组及半夏麻黄组显著上调cAMP和PKA的mRNA表达（P<0.01）；小青龙汤组、桂枝甘草组、姜辛味组及半夏麻黄组显著上调cAMP、PKA和CREB的蛋白表达（P<0.01），芍药甘草组明显上调CREB蛋白的表达（P<0.05）；小青龙汤可以上调AQP5和α-ENaC的阳性表达，桂枝甘草组可以上调α-ENaC的阳性表达；小青龙汤及其方元各组可以减少模型大鼠肺组织水肿，炎性细胞浸润明显减少，支气管黏膜黏连程度减轻。结论 小青龙汤及其方元可以通过提高肺水转运相关蛋白AQP1、AQP5和α-ENaC的表达，减轻寒饮蕴肺证大鼠病理模型中肺水肿，抑制肺部炎症状态，改善大鼠肺功能，从而恢复肺脏的生理功能，cAMP/PKA信号通路可能参与了该过程，Na⁺-K⁺-ATPase在肺水转运调节中可能发挥了辅助作用，从肺水转运相关蛋白角度初步阐释“肺主行水”的内涵具有一定的客观依据。     

慢性阻塞性肺疾病肺脾气虚证大鼠模型的建立及评价

目的 建立并评价慢性阻塞性肺疾病（COPD）肺脾气虚病证结合模型。方法 采用“香烟烟熏法+脂多糖（LPS）气管滴注联合番泻叶浸液灌胃”构建COPD肺脾气虚证大鼠模型。将40只SPF级SD雄性大鼠随机分成空白组、模型组、番泻叶低、中、高剂量病证结合模型组，共5组。除空白组外各组均每日烟熏，并于第1天、第14天气管内滴注LPS。番泻叶低、中、高剂量病证结合模型组在造模第28天予4 ℃不同剂量番泻叶浸液（5、10、20 g·kg^-1）灌胃3周，造模共49 d。采集宏观指标：一般情况（体质量、摄食量、粪便含水量、肛温）及行为学指标（抓力测试、鼠尾悬挂实验）。测定肺功能，肺组织病理，血清D-木糖、淀粉酶、胃泌素含量，肺泡灌洗液白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）水平，外周血T淋巴细胞亚群（CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺/CD8⁺）水平，计算胸腺指数、脾指数。结果 一般情况方面，番泻叶高剂量组大鼠死亡2只。与空白组比较，番泻叶中、高剂量组体质量、摄食量均显著降低（P<0.01），粪便含水量显著升高（P<0.01），番泻叶高剂量组肛温较空白组显著降低（P<0.01）。行为学指标方面，与空白组比较，各造模组大鼠抓力均显著降低（P<0.01）；番泻叶中、高剂量组静止不动时间明显增加（P<0.05，P<0.01）。肺功能方面，与空白组比较，各造模组大鼠第0.3秒用力呼气容积（FEV_0.3）、FEV_0.3/用力肺活量（FVC）均显著降低（P<0.01）。肺组织苏木素-伊红（HE）染色可见各造模组大鼠支气管壁增厚，杯状细胞增生，部分肺泡融合呈肺气肿改变。胃肠功能指标方面，与空白组比较，番泻叶中、高剂量组D-木糖、胃泌素、α-淀粉酶水平均显著降低（P<0.01）。免疫炎症指标方面，与空白组比较，番泻叶中、高剂量组脾、胸腺指数均显著减小（P<0.01），各造模组大鼠外周血CD4⁺水平均显著降低（P<0.01），CD4⁺/CD8⁺明显下降（P<0.05，P<0.01），肺泡灌洗液IL-1β、IL-6显著升高（P<0.01）。结论 利用香烟烟熏加LPS气管滴注同时联合番泻叶灌胃能够成功建立COPD肺脾气虚病证结合模型。结合宏观及微观评价，推荐番泻叶浸液剂量10 g·kg^-1（番泻叶中剂量组）作为COPD肺脾气虚病证结合模型造模灌胃浓度。     

宣肺止嗽方对COPD模型大鼠IL-17信号通路的影响

目的 探讨宣肺止嗽配方对慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型大鼠白细胞介素-17（IL-17）信号通路的影响。方法 将60只Wistar大鼠随机分为空白组10只和造模组50只,采用气管滴注脂多糖联合被动烟熏建立COPD模型大鼠。造模成功后采用随机数字表法分为模型组、地塞米松组、宣肺止嗽方高、中、低剂量组（3.6、1.8、0.9 g·kg^-1·d^-1）。空白组和模型组给予10 mL·kg^-1·d^-1生理盐水灌胃,宣肺止嗽方各干预组灌胃给药,地塞米松组给予2.57×10^-4 g·kg^-1·d^-1地塞米松灌胃,持续治疗28 d。肺功能检测仪进行肺功能指标水平测定;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）、IL-17、白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量;免疫组化（IHC）检测肺组织IL-17A、白细胞介素-17受体A（IL-17RA）、核转录因子-κB激活剂1（Act1）、肿瘤坏死因子相关因子6（TRAF6）、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38 MAPK）、核转录因子-κB p65（NF-κB p65）及磷酸化阳性表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肺组织IL-17A、IL-17RA、Act1、TRAF6蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）测定肺组织IL-17A、IL-17RA、Act1、TRAF6 mRNA的情况。结果 与空白组比较,模型组血清中IL-6、IL-8、IL-17、IL-1β、TNF-α含量明显升高（P<0.05）,肺功能流速指标和容量指标明显下降（P<0.05）,时间指标和其他指标均明显升高（P<0.05）,肺组织IL-17A、IL-17RA、Act1、TRAF6 mRNA和蛋白水平及下游NF-κB p65、p-NF-κB p65、p-p38 MAPK阳性表达均明显升高（P<0.05）;与模型组比较,各治疗组血清中IL-6、IL-8、IL-17、IL-1β、TNF-α含量均有不同程度的降低（P<0.05）,肺功能指标均有不同程度的改善（P<0.05）,宣肺止嗽方高、中剂量组IL-17A、IL-17RA、Act1、TRAF6 mRNA和蛋白水平及下游NF-κB p65、p-NF-κB p65、p-p38 MAPK阳性表达明显减弱（P<0.05）。结论 宣肺止嗽方能有效对抗COPD炎症反应,其机制可能与下调IL-17A、IL-17RA、Act1、TRAF6蛋白表达,进而抑制下游NF-κB、p38 MAPK信号通路,减少IL-6、IL-8、TNF-α、IL-17、IL-1β的释放,进而减轻气道炎症反应有关。     

玉郎伞提取物对大鼠急性肺损伤的影响

目的：探讨玉郎伞（YLS）提取物对大鼠急性肺损伤（ALI）的影响。方法：将Wistar大鼠随机分为7组,分别为正常组,模型组,阳性对照组（地塞米松,3 mg·kg^-1）,玉郎伞水提物（TYLS）高、低剂量组（按生药量计60,30 g·kg^-1）,YLS总黄酮（FYLS）高、低剂量组（0.1,0.05 g·kg^-1）,每组动物连续灌胃给药7 d,于末次给药后30 min,采用腹腔注射20%酵母混悬液5 mL·kg^-1 2次诱发大鼠急性肺损伤模型。最后测定肺组织的湿干比重（W/D）和肺组织髓过氧化物酶（MPO）的活性,免疫组化法测定大鼠肺组织中核因子-κB p65（NF-κB p65）的表达、ELISA法测定肺组织白介素-1β（IL-1β）的含量,并HE染色观察肺组织病理形态改变。结果：与正常组比较,模型组肺W/D和MPO活性增大、肺组织IL-1β含量增加、NF-κB p65表达升高（均P<0.01）,肺组织有炎性病理改变。与模型组比较,TYLS高、低剂量组（4.31±0.15）,（4.72±0.35）及FYLS高剂量组（4.74±0.23）肺W/D低于模型组（5.01±0.33）（P<0.05,P<0.01）;TYLS高剂量组及FYLS高剂量组的肺MPO活性为（1.000±0.304）,（0.956±0.139）U·g湿片^-1,肺IL-1β含量为（265.58±47.05）,（222.31±53.99）ng·L^-1,肺组织细胞NF-κB p65阳性率为（51.00±8.62）%,（48.88±11.80）%,均比模型组明显降低（P<0.05,P<0.01）;另外,从组织病理学角度上看,TYLS及FYLS组肺损伤程度也有所减轻,以高剂量组较为明显。结论：预先给予TYLS或FYLS可明显减轻ALI大鼠肺组织炎症反应及肺水肿程度,其机制可能是通过干扰NF-κB途径从而抑制IL-1β生成。     

基于TLR4/NF-κB通路探讨蛤蚧提取物对利血平诱导抑郁大鼠神经炎症的影响

目的 观察蛤蚧提取物的抗抑郁作用,并探讨其作用机制。方法 腹腔注射利血平（0.5 mg·kg^-1）诱导大鼠抑郁模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组,氟西汀组（1.8 mg·kg^-1）,蛤蚧提取物高、低剂量组（12,6 g·kg^-1）,分别给予相应剂量药物,1次/d,连续给药10 d。给药结束后,通过酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测大鼠血清和前额皮层中神经递质及炎症因子的水平;通过苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠海马组织中细胞的变化情况;通过实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠海马组织中白细胞介素-6（IL-6）,核转录因子-κB（NF-κB）,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA的水平;通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠海马组织中Toll样受体4（TLR4）,NF-κB蛋白水平。结果 与正常组比较,蛤蚧提取物能明显缩短大鼠的悬尾不动时间和游泳不动时间;与模型组比较,蛤蚧提取物能明显减少大鼠眼睑下垂现象和圈内保留时间（P<0.05）;升高血清中5-羟色胺（5-HT）,多巴胺（DA）的水平（P<0.05）,降低血清和前额皮层中MAO,IL-6,TNF-α的水平（P<0.05）;降低大鼠海马组织中炎症因子IL-6,NF-κB,TNF-α mRNA的水平以及TLR4,NF-κB蛋白的表达（P<0.05,P<0.01）;改善大鼠海马组织的病理症状。结论 蛤蚧提取物通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低大鼠海马组织中NF-κB,IL-6等炎症因子的表达,减轻抑郁病理损伤,从而减轻抑郁症状。     

基于TNF-α/TNFR1/RIPKs通路探讨二陈汤加味对COPD炎症的作用机制

目的 基于肿瘤坏死因子-α（TNF-α）/肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）/受体相互作用蛋白激酶（RIPKs）信号通路,研究二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠模型炎症的影响,探讨其作用机制。方法 SD大鼠60只,随机分为正常组、模型组、二陈汤加味高、中、低剂量组、消咳喘组,每组10只。采用香烟烟雾联合脂多糖（LPS）方法制备COPD大鼠模型,二陈汤加味高、中、低剂量组分别以20、10、5 g·kg^-1·d^-1灌胃,消咳喘以3.5 mL·kg^-1·d^-1灌胃,正常组与模型组灌胃等量生理盐水,持续干预21 d。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中TNF-α、TNFR1的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肺组织中受体相互作用蛋白激酶1（RIPK1）、受体相互作用蛋白激酶3（RIPK3）、混合系列激酶样结构域蛋白（MLKL） mRNA表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肺组织中RIPK1、RIPK3、MLKL蛋白表达,苏木素-伊红（HE）染色观察肺组织的病理变化。结果 与正常组比较,模型组大鼠BALF中TNF-α、TNFR1含量显著升高（P<0.01）,肺组织中RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,二陈汤加味高、中、低剂量组及消咳喘组大鼠BALF中TNF-α、TNFR1含量显著降低（P<0.01）,肺组织中RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA及蛋白表达水平有不同程度的降低（P<0.05,P<0.01）。结论 二陈汤加味能够有效改善COPD大鼠肺组织的炎症反应,其机制可能是通过抑制TNF-α/TNFR1/RIPKs信号通路。     

基于内质网应激探讨扶正解毒方联合5-Fu对胃癌荷瘤小鼠术后复发及转移的影响

目的 研究扶正解毒方联合5-氟尿嘧啶（5-Fu）对胃癌荷瘤小鼠术后复发转移的抑制作用，并通过肿瘤微环境中CD4⁺ T细胞，CD8⁺ T细胞，调节性T（Treg）细胞含量的改变，内质网应激途径及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路，探讨其可能的分子机制。方法 40只615小鼠随机分为模型组，扶正解毒方（25 g·kg^-1）组，5-Fu（25 mg·kg^-1）组，联合组（扶正解毒方25 g·kg^-1+5-Fu 25 mg·kg^-1），每组各10只，将小鼠前胃癌细胞（MFC细胞）接种于左后肢内侧爪垫下，通过手术切除移植瘤建立术后复发模型。苏木素-伊红（HE）染色法观察术后复发胃癌荷瘤小鼠肺转移病理形态的改变；流式细胞术检测复发瘤中CD4⁺/CD8⁺ T值及脾脏中Treg细胞［CD4⁺，CD25⁺，叉头框蛋白P3（FOXP3）⁺细胞］的含量；蛋白免疫印迹法（Western blot）及免疫组化法（IHC）检测内质网应激相关蛋白［葡萄糖调节蛋白78（GRP78），肌醇需求酶1α（IRE1α），激活转录因子6（ATF6），蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）］含量，以及PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白表达。结果 与模型组比较，联合组复发抑制率明显升高（P<0.05）；各治疗组复发瘤重均明显降低（P<0.05）；各治疗组肺转移数均降低，转移率均有所降低，联合组肺转移总数最少，转移率最低，但差异无统计学意义；扶正解毒方组、联合组CD4⁺/CD8⁺ T值明显升高（P<0.05），Treg细胞含量明显降低（P<0.05）；5-Fu组Treg细胞含量明显升高（P<0.05）。IHC结果显示，与模型组比较，各治疗组ATF6蛋白表达明显下降（P<0.05，P<0.01），IRE1α表达明显下降（P<0.05），Akt表达显著下降（P<0.01）；5-Fu组及联合组mTOR表达明显下降（P<0.05）。Western blot结果显示，与模型组比较5-Fu组GRP78表达明显下降（P<0.05），5-Fu组及联合组PI3K，磷酸化Akt（p-Akt），mTOR表达明显下降（P<0.05）。结论 扶正解毒方联合5-Fu可以抑制荷瘤小鼠术后复发转移，机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR的信号通路，下调内质网应激，改善肿瘤免疫抑制微环境有关。