LncRNA SLC16A1-AS1 通过靶向 miR-15a-5p 负向调控子宫颈癌细胞的增殖和侵袭

目的探讨LncRNA SLC16A1-AS1通过靶向miR-15a-5p调控子宫颈癌细胞增殖和侵袭的作用机制。方法采用qRT-PCR法检测SLC16A1-AS1在子宫颈癌组织、癌旁组织、人正常子宫颈上皮细胞(H8)及子宫颈癌细胞株(HeLa、HCC94、SiHa、C33A)中的表达水平。选择SLC16A1-AS1表达最少的子宫颈癌细胞株,分别转染阴性质粒和SLC16A1-AS1过表达质粒,标记为NC组和SLC16A1-AS1组。应用MTT法和Transwell实验分别检测过表达SLC16A1-AS1对子宫颈癌细胞增殖和侵袭能力的影响。生物信息学网站预测及双荧光素酶报告基因实验,验证SLC16A1-AS1与靶基因的靶向关系。qRT-PCR和Western blot法检测靶基因及相关蛋白的表达。结果子宫颈癌组织中SLC16A1-AS1的表达水平显著低于癌旁组织(P0.01)。与H8细胞相比,HeLa、HCC94、SiHa、C33A细胞中SLC16A1-AS1的表达水平降低(P0.05)。与NC组相比,过表达SLC16A1-AS1的C33A细胞增殖能力降低(P0.05),过表达SLC16A1-AS1的C33A细胞侵袭数下降(P0.01)。生物信息学网站预测显示,SLC16A1-AS1可与miR-15a-5p有特异性结合位点。双荧光素酶报告基因实验结果证实SLC16A1-AS1可与miR-15a-5p直接结合(P0.01)。SLC16A1-AS1可负向调控miR-15a-5p的表达(P0.01)。与NC组相比,SLC16A1-AS1组细胞增殖表型蛋白(如PCNA、Ki-67)和细胞侵袭表型蛋白(如N-cadherin、Slug)表达均降低。结论 SLC16A1-AS1在子宫颈癌中低表达,SLC16A1-AS1通过靶向下调miR-15a-5p的表达,抑制子宫颈癌细胞C33A的增殖和侵袭。     

基于β-catenin/Slug信号通路表达探讨LPCAT1对子宫颈癌生物学行为的影响

目的 观察β-catenin/Slug信号特异性抑制剂FH535与EMT的关系,探讨LPCAT1在调节子宫颈癌细胞侵袭、转移和生长中的作用。方法 采用sh-NC和sh-LPCAT1转染Hela细胞,利用载体(Vector)组和LPCAT1过表达质粒转染SiHa细胞,将SiHa细胞分为对照组(Con)、LPCAT1组、LPCAT1+FH535组和FH535组。运用CCK-8法和集落形成试验检测子宫颈癌细胞的增殖。通过伤口愈合试验和Transwell实验检测子宫颈癌细胞的转移、侵袭能力。应用Western blot分析细胞中LPCAT1、β-catenin/Slug信号通路和EMT相关蛋白的表达。结果 与Vector组相比,LPCAT1组SiHa细胞的活力、集落数、迁移和侵袭细胞数均显著增加(P<0.05);与sh-NC组相比,sh-LPCAT1组Hela细胞的活力、集落数、迁移和侵袭细胞数均显著降低(P<0.05)。与LPCAT1组相比,LPCAT1+FH535组SiHa细胞中Wnt4(1.18±0.05 vs 0.80±0.06)、β-catenin(1.05±0.08 v...     

Par3蛋白对体外培养子宫颈癌SiHa细胞生物学性状的影响

目的探讨Par3蛋白对子宫颈癌SiHa细胞生物学性状的影响。方法采用基因过表达和RNA干扰技术分别上调和下调子宫颈癌SiHa细胞中PARD3的表达;qRT-PCR和Western blot法检测PARD3 mRNA和Par3蛋白水平变化。Transwell小室体外实验检测其对SiHa细胞侵袭、迁移能力的影响;应用流式细胞术分析其对SiHa细胞周期及凋亡的影响。结果 SiHa细胞转染基因PARD3过表达质粒后mRNA和蛋白表达水平显著增高,PARD3 siRNA干扰SiHa细胞后PARD3 mRNA和Par3蛋白表达水平显著降低;Transwell小室体外实验表明Par3过表达后细胞侵袭、迁移能力降低,而经干扰组蛋白表达下调后细胞侵袭、迁移能力增强;流式细胞术检测提示与空白对照组相比,PARD3基因被干扰后细胞被阻滞在S期,干扰组细胞凋亡率明显降低(P0.01)。然而,上调PARD3的表达后细胞被阻滞在G_0/G_1期,过表达组细胞凋亡率明显增高(P0.01)。结论 Par3蛋白参与子宫颈癌SiHa细胞的增殖、迁移、侵袭以及凋亡的过程,PARD3基因的异常低表达很可能对子宫颈癌的发生、发展以及侵袭、转移起促进作用。     

MST1过表达抑制宫颈癌细胞系SiHa的增殖、迁移和侵袭

目的探讨哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)对子宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法Western blot检测正常宫颈上皮细胞H8与宫颈癌细胞SiHa中MST1的表达;构建p J3H-HA-MST1质粒并转染SiHa细胞系,Western blot检测MST1、Ki-67和MMP9的蛋白表达;MTS、划痕实验和Transwell分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。结果 SiHa细胞的MST1蛋白表达水平明显低于H8细胞(P0.05);SiHa细胞转染MST1质粒后,MST1蛋白表达明显升高,而Ki-67和MMP9蛋白表达水平显著下降(P0.05),SiHa细胞的增殖被明显抑制(P0.05),同时细胞的迁移和侵袭能力也显著降低(P0.01)。结论 MST1过表达可以抑制宫颈癌细胞SiHa的增殖、迁移和侵袭能力。     

肿瘤相关巨噬细胞对宫颈癌SiHa 细胞迁移和侵袭的影响

目的:探究THP-1来源的肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)对宫颈癌SiHa细胞迁移和侵袭的影响及其相关分子机制。方法:佛波脂(PMA)和IL-4将THP-1细胞诱导为TAMs,流式细胞仪检测其表面CD204和CD206分子的表达;将TAMs与SiHa细胞共培养,采用划痕实验、Transwell实验检测TAMs对SiHa细胞迁移和侵袭能力的影响;免疫印迹法检测共培养后SiHa细胞上皮间质转化相关蛋白的变化,RT-PCR检测转录因子Snail/Slug mRNA表达水平。结果:PMA作用于THP-1细胞24 h,IL-4继续作用72 h后,细胞表面CD204和CD206分子表达明显增加,TAMs诱导成功;与未共培养组相比,共培养组SiHa细胞迁移和侵袭能力显著增强(P0.001);共培养组SiHa细胞E-cadherin蛋白表达水平显著降低,N-cadherin、Vimentin蛋白、Snail/Slug mRNA表达水平显著升高(P0.05)。结论:TAMs可能通过上调转录因子Snail的表达促进SiHa细胞上皮间质转化进程,从而促进其侵袭和转移。     

Sox5促进胰腺癌细胞迁移侵袭和上皮间质化

目的:探讨Sox5对胰腺癌细胞迁移侵袭和上皮间质化的影响。方法:人正常胰腺细胞HPDE6-C7(HPDE6-C7组)、胰腺癌细胞PANC-1(PANC-1组)和AsPC-1(AsPC-1组)正常培养至对数生长期,采用qRT-PCR法和Western blot法分别检测各组细胞中Sox5mRNA和蛋白水平。将shSox5、shControl、pcDNA 3.1-Sox5和载体pcDNA 3.1以脂质体法转染胰腺癌细胞PANC-1,分别标记为shSox5组、shControl组、pcDNA 3.1-Sox5组和Scrambled组,采用qRT-PCR法检测各组细胞中Sox5、E-cadherin、N-cadherin、Vimetin、Snail和Twist1的mRNA表达;Western blot检测各组细胞中Sox5、E-cadherin、N-cadherin、Vimetin、Snail和Twist1的蛋白表达;Transwell法检测各组细胞的迁移和侵袭。结果:与HPDE6-C7组相比,PANC-1组和AsPC-1组中Sox5mRNA和蛋白水平均升高(P0.01);与shControl组比较,shSox5组Sox5、N-cadherin、Vimetin、Snail和Twist1的mRNA和蛋白以及细胞迁移和侵袭水平均显著降低(P0.01),E-cadherin mRNA和蛋白水平均显著升高(P0.01);与Scrambled组比较,pcDNA-3.1-Sox5组Sox5、N-cadherin、Vimetin、Snail和Twist1的mRNA和蛋白以及细胞迁移和侵袭水平均显著升高(P0.01),E-cadherin mRNA和蛋白水平均显著降低(P0.01)。结论:Sox5可促进胰腺癌细胞迁移、侵袭和EMT,将为胰腺癌的靶点治疗提供新靶标。     

ICAT诱导巨噬细胞M2型极化促进宫颈癌HeLa细胞迁移及侵袭的体外研究

目的：探讨β-连环蛋白/T细胞因子抑制子(ICAT)是否影响巨噬细胞极化，分析极化后的巨噬细胞对宫颈癌细胞迁移及侵袭的作用。方法：使用生物信息学方法分析ICAT在宫颈癌中的表达情况及其与巨噬细胞的相关性；采用RNAi技术构建沉默ICAT表达的HeLa/si-ICAT及对照HeLa/si-NC重组细胞株；qRT-PCR及Western blot检测重组HeLa细胞中IL-10、TGF-β表达；收集重组HeLa细胞条件培养基(CM)分别处理巨噬细胞后，qRT-PCR及Western blot检测巨噬细胞表型变化；细胞划痕及Transwell试验评价极化后的巨噬细胞对HeLa细胞迁移及侵袭能力的影响。结果：生物信息学分析显示ICAT在宫颈癌组织中的表达显著高于正常宫颈组织，且与M2型巨噬细胞的数量呈正相关(P=0.002)；与HeLa/si-NC对照组相比，HeLa/siICAT细胞中IL-10、TGF-β表达降低；经HeLa/si-ICAT细胞CM处理后巨噬细胞M2型巨噬标志物Arg-1(P=1.82×10^-4)、TGF-β(P=0.009 4)、MR(P=0.014...     

子宫颈癌组织中BAG-1及MCM2的表达及临床意义

目的探讨BAG-1及MCM2在子宫颈癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化EnVision两步法检测121例子宫颈癌及51例正常子宫颈组织中BAG-1及MCM2蛋白的表达;采用RT-qPCR法检测34例子宫颈癌组织及27例正常子宫颈组织中BAG-1及MCM2 mRNA的表达,并分析两者表达与子宫颈癌临床病理特征的关系。结果 BAG-1在子宫颈癌及正常子宫颈组织中的高表达率为70.2%(85/121)及9.8%(5/51),两组相比差异有统计学意义(χ~2=52.545,P0.05);MCM2在子宫颈癌及正常子宫颈组织中的高表达率为82.6%(100/121)及5.9%(3/51),两组相比差异有统计学意义(χ~2=84.836,P0.05)。子宫颈癌组织中BAG-1及MCM2 mRNA相对表达量均高于正常子宫颈组织(P0.05)。BAG-1高表达与FIGO分期和淋巴结转移相关(P0.05),MCM2高表达与淋巴结转移相关(P0.05),两者高表达与患者年龄、肿瘤直径、分化程度、病理类型及浸润深度均无关(P0.05)。经Spearman相关分析显示,子宫颈癌中BAG-1与MCM2表达呈正相关(r=0.370,P0.05)。BAG-1与MCM2共同高表达与FIGO分期和淋巴结转移相关(P0.05)。结论 BAG-1及MCM2可能参与了子宫颈癌的发生、发展、侵袭及转移,检测两者的表达可以作为判断子宫颈癌侵袭及预后的依据。     

siRNA沉默染色质解旋酶DNA结合蛋白1对卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的:探究siRNA沉默染色质解旋酶DNA结合蛋白1(CHD1L)对卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、侵袭、迁移及相关分子如核因子κB(NF-κB)、基质金属蛋白酶(MMP)的影响。方法:将si-CHD1L、si-NC质粒转染至卵巢癌HO-8910PM细胞,命名为si-CHD1L组、si-NC组,以未经转染细胞作为对照组,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞CHD1L mRNA表达; CCK-8法检测细胞增殖抑制情况;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室系统检测细胞迁移、侵袭能力;蛋白免疫印迹(WB)检测NF-κB、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果:与对照组、si-NC组比较,si-CHD1L组细胞CHD1L mRNA表达降低(P0.05),细胞增殖抑制率升高,细胞迁移能力降低,迁移、侵袭数量降低(P0.05)。与对照组、si-NC组相比,si-CHD1L组NF-κB、MMP-2、MMP-9蛋白表达降低(P0.05)。结论:siRNA沉默CHD1L能够抑制卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、侵袭、迁移,并能抑制NF-κB、MMP蛋白的表达,为卵巢癌的靶向治疗提供一定的理论依据。     

lncRNA CKMT2-AS1靶向miR-17-5p/TGFBR2分子轴调控子宫颈癌细胞的生物学行为

目的 探讨lncRNA CKMT2-AS1调控子宫颈癌细胞的生物学行为及其分子机制。方法 采用qPCR检测子宫颈癌组织和不同宫颈癌细胞系中CKMT2-AS1的表达。将CKMT2-AS1表达最低的子宫颈癌细胞系分为NC组(感染阴性对照慢病毒)和CKMT2-AS1组(感染CKMT2-AS1慢病毒)。分别采用MTT实验和细胞划痕愈合实验检测子宫颈癌细胞的活力和迁移变化。生物信息学方法和双荧光素酶报告基因实验验证CKMT2-AS1和miR-17-5p的靶向调控关系。qPCR和Western blot法分别检测CKMT2-AS1/miR-17-5p/TGFBR2分子轴的表达。结果 CKMT2-AS1在子宫颈癌组织中的表达显著低于癌旁组织(P<0.01)。CKMT2-AS1在子宫颈癌细胞中的表达显著低于正常子宫颈上皮细胞(P<0.05),CKMT2-AS1表达最低的子宫颈癌细胞是SiHa细胞(P<0.01)。与NC组相比,上调CKMT2-AS1可显著抑制SiHa细胞的增殖(P<0.05)和迁移(P<0.01)。CKMT2-AS1靶向调控miR-17-5p表达(P<...     

STIL基因通过调控IL-6/STAT3通路影响宫颈癌细胞增殖和凋亡

目的：探讨STIL基因对宫颈癌增殖和凋亡的影响并研究其机制。方法：RT-qPCR和Western blot检测STIL mRNA和蛋白在宫颈癌组织、癌旁组织、宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、caski、人正常宫颈上皮细胞HUCEC中的表达。将HeLa细胞分为对照（NC）组、si-NC组、si-STIL组、si-STIL+IL-6组。CCK-8和平板克隆实验检测各组细胞增殖和克隆能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。Western blot检测各组细胞IL-6、IL-6R和p-STAT3蛋白表达。将稳定转染sh-STIL的HeLa细胞注射到裸鼠背部,研究抑制STIL表达对肿瘤形成的影响。结果：宫颈癌组织中STIL mRNA和蛋白表达显著高于癌旁组织（P<0.05）。HeLa、SiHa、caski细胞中STIL mRNA和蛋白表达显著高于HUCEC细胞（P<0.05）。与si-NC组比较,si-STIL组细胞吸光度、克隆数及IL-6、IL-6R和p-STAT3蛋白水平显著降低（P<0.05）,凋亡率显著升高（P<0.05）。与si-STIL组比较,si-STIL+IL...     

喉鳞状细胞癌中Slug蛋白的表达及临床意义

目的探讨喉鳞状细胞癌中Slug的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法及Western blot法检测115例喉组织中Slug的表达,并分析其与临床病理特征及预后的关系。应用Transwell及划痕实验验证Slug对喉鳞状细胞癌细胞迁移及侵袭的作用。结果 Slug在正常喉组织(16.7%)、喉部鳞状上皮高级别上皮内瘤变(43.4%)及喉鳞状细胞癌组织(74.5%)中的阳性率逐渐升高(χ~2=27.061,P0.001),且与临床分期及淋巴结转移密切相关(P均0.05)。Slug在正常喉组织(0.13±0.03)及喉鳞状细胞癌组织(0.45±0.05)中的相对表达量逐渐升高(t=-27.691,P0.001)。敲低Slug可以抑制喉鳞状细胞癌细胞的迁移及侵袭。Slug阳性提示患者具有较短生存期(χ~2=9.282,P0.01),其是喉鳞状细胞癌患者生存期的预测指标(P0.05)。结论 Slug高表达提示喉鳞状细胞癌的进展和不良预后,有望成为喉鳞状细胞癌预后评估的潜在生物学标志物,为喉鳞状细胞癌患者的治疗提供新思路。     

实时荧光定量PCR检测WISP-1/NGX6基因体系与子宫颈癌细胞增殖转移的关系

目的探讨原癌基因WISP-1和抑癌基因NGX6与子宫颈癌细胞增殖转移的关系。方法参考人WISP-1、NGX6基因mRNA序列分别设计引物与探针。提取人正常子宫颈组织（30例）、子宫颈浸润癌（均为子宫颈鳞状细胞癌）组织未转移组及转移组（各30例）总RNA,采用实时荧光定量PCR技术分别检测各组标本组织中WISP-1、NGX6基因的表达量并进行对比分析。结果原癌基因WISP-1在子宫颈癌组织转移组及未转移组中的表达量均明显高于正常子宫颈组织（均P〈0．001）,在子宫颈癌组织转移组中的表达量明显高于未转移组（P〈0．001）。抑癌基因NGX6在子宫颈癌组织转移组及未转移组中的表达量均低于正常子宫颈组织（均P〈0．001）,在子宫颈癌组织转移组中的表达量明显低于未转移组（P〈0．05）。结论WISP-1／NGX6基因体系与子宫颈癌的细胞增殖有关,并且与子宫颈癌细胞的转移亦有相关性。     

敲除EZH2抑制人宫颈癌细胞系迁移和侵袭

目的 研究zeste基因同源蛋白2(EZH2)对人宫颈癌细胞系迁移和侵袭的影响,并初步探讨其作用机制.方法 利用CRISPR/Cas9敲除人宫颈癌HeLa和人子宫颈鳞癌SiHa细胞系中EZH2的表达.划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室法检测细胞体外迁移和侵袭;实时荧光定量PCR检测STAT3 mRNA水平;W...     

长链非编码RNA GAS5在卵巢癌中的表达及对SKOV-3细胞增殖与侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA GAS5在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞株SKOV-3增殖与侵袭能力的影响。方法 qRT-PCR检测39例卵巢癌组织及对应癌旁正常卵巢组织lncRNA-GAS5的表达;通过重组质粒过表达SKOV-3细胞lncRNA-GAS5,采用CCK8法与Transwell侵袭实验分别检测过表达lncRNA-GAS5后SKOV-3细胞增殖与侵袭能力的变化;qRT-PCR及Western blot检测PTEN表达变化。结果 lncRNA-GAS5在卵巢癌组织表达水平低于对应癌旁正常卵巢组织,P0.01。lncRNA-GAS5重组质粒转染SKOV-3细胞后可抑制细胞的增殖与侵袭能力;qRT-PCR与Western blot结果证实,过表达lncRNA-GAS5后,SKOV-3细胞PTEN的表达上调,P0.01。结论 lncRNA-GAS5在卵巢癌组织中表达降低,lncRNA-GAS5可能通过上调PTEN的表达来抑制SKOV-3细胞的增殖与侵袭。     

Nir1表达对胶质瘤细胞侵袭能力的影响

目的探讨Nir1在胶质瘤细胞中引起向细胞间叶性转变的分子机制。方法采用Western blot检测Nir1在不同胶质瘤细胞系中的表达;应用已构建的pc DNA3.1-Nir1质粒转染人胶质瘤H4细胞,采用Western blot法检测转染后H4细胞中Nir1、T-cadherin、间叶细胞标志物vimentin、N-cadherin及转录因子Snail、Slug、Twist1、Zeb1的表达;体外侵袭实验检测转染后细胞的侵袭能力。结果 Nir1在低侵袭力胶质瘤细胞H4中的表达低于高侵袭力胶质瘤细胞;细胞转染后,H4细胞中Nir1的蛋白表达明显增强,侵袭并穿透Matrigel胶的细胞数目明显比对照组多(P=0.00);与CCL18共同孵育72 h后细胞内vimentin、Ncadherin的表达明显增多,转录因子中只有Snail的表达明显增多而Slug、Twist1、Zeb1的表达差异无显著性。结论在胶质瘤细胞中存在并表达Nir1蛋白,Nir1可促进胶质瘤细胞间质转化(mesenchymal transition,MT),进而调控胶质瘤细胞的运动和侵袭能力。     

AEG-1表达下调对人宫颈癌细胞细胞周期和侵袭能力的影响及其机制

 目的：研究星形细胞上调基因1（astrocyte elevated gene-1,AEG-1）在人宫颈鳞癌细胞和组织中的表达,探讨AEG-1表达下调对宫颈癌SiHa细胞细胞周期和侵袭能力的影响,并分析其可能的分子机制。方法：采用Western blotting检测正常宫颈组织、宫颈鳞癌组织、HeLa、SiHa和CaSki细胞中AEG-1蛋白的表达。将对照siRNA和AEG-1 siRNA分别转染SiHa细胞,利用Western blotting检测SiHa细胞中AEG-1蛋白的表达,采用流式细胞术检测细胞周期分布的变化,采用Boyden小室检测细胞侵袭能力的变化,最后采用Western blotting检测cyclin D1、细胞周期素依赖性激酶 2（CDK2）和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达的变化。结果：宫颈鳞癌组织中AEG-1蛋白表达显著高于正常宫颈组织（P<0.05）,同时3株宫颈癌细胞中AEG-1蛋白表达均显著高于正常宫颈组织,其中SiHa细胞中AEG-1蛋白表达最高（P<0.05）。此外,AEG-1 siRNA能显著下调SiHa细胞中AEG-1蛋白的表达（P<0.05）,其表达下调能明显促使SiHa细胞在G0/G1期的比例增加和降低其侵袭能力。Western blotting结果表明,AEG-1 siRNA组中cyclin D1、CDK2和MMP-9蛋白的表达均显著低于未处理组和对照siRNA组（P<0.05）。结论：AEG-1在宫颈癌中的高表达可能与宫颈癌的发生发展密切相关,其表达下调介导的细胞周期静止和侵袭能力降低可能与cyclin D1、CDK2和MMP-9蛋白表达下调密切相关。     

Twist促进人三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭

目的研究Twist基因沉默对人三阴性乳腺癌细胞Hs578T迁移和侵袭的影响及其潜在机制。方法构建靶向Twist基因的慢病毒载体(sh Twist)及其阴性对照病毒(shNC),转染人三阴性乳腺癌细胞Hs578T,建立Twist基因沉默的稳定细胞系;实验设对照组(blank)、阴性对照组(shNC)以及Twist基因沉默组(sh Twist);经嘌呤霉素筛选后,倒置荧光显微镜观察各组细胞的荧光表达和感染效率,用RT-q PCR和Western blot检测Twist mRNA和蛋白的表达水平;Transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blot进一步检测Twist下游p-AKT、AKT、p-ERK1/2和ERK1/2蛋白水平。结果成功构建Twist基因稳定沉默人三阴性乳腺癌细胞系Hs578T;与blank组和sh NC组细胞相比,sh Twist组细胞迁移和侵袭能力明显减弱(P0.05,P0.05);Twist下游p-AKT和p-ERK1/2蛋白水平显著下调(P0.05,P0.05)。结论在人三阴性乳腺癌细胞Hs578T中,Twist可能通过AKT和ERK信号通路促进细胞迁移和侵袭。     

mortalin蛋白在宫颈鳞癌中的表达及其对肿瘤转移能力的影响

目的:探讨寿命蛋白(mortalin)在子宫颈鳞癌组织中过表达的临床病理学意义及其与子宫颈鳞癌转移之间的关系。方法:应用免疫荧光染色在人子宫颈鳞癌SiHa细胞系中检测mortalin的定位情况,并采用免疫组化EnVision法检测mortalin在59例正常宫颈上皮组织和93例子宫颈鳞癌组织中的表达,分析mortalin表达与子宫颈鳞癌患者临床病理特征之间的关系;通过MTT实验筛选mortalin抑制剂MKT-077作用浓度及时间后,抑制SiHa细胞中mortalin表达并进行细胞划痕及迁移实验,Western blot检测参与上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白的表达。结果:免疫荧光结果显示,mortalin定位于子宫颈鳞癌SiHa细胞质中。免疫组化结果表明,mortalin在子宫颈鳞癌组织中表达的阳性率和强阳性率分别为89.2%(83/93)和62.4%(58/93),显著高于正常宫颈上皮组织(23.7%和5.1%,P<0.01);mortalin表达水平与子宫颈鳞癌患者肿瘤组织学分级、临床分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05)。通过MKT-077抑制SiHa细胞中mortalin的表达后,细胞划痕及迁移实验结果显示SiHa细胞的迁移能力下调,Western blot结果表明E-cadherin的表达明显上调,vimentin及Snail的表达明显下调(P<0.05)。结论:mortalin的表达水平与子宫颈鳞癌的发生发展及转移密切相关,该蛋白有望成为子宫颈癌患者预后评估的分子指标。     

lncRNA PSMA3-AS1 靶向 miR-3619-5p 调控宫颈癌 SiHa 细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制研究

目的 探讨 lncRNA PSMA3-AS1 调控宫颈癌细胞增殖、 迁移及侵袭的分子机制。 方法 收集 2020 年 3 月至 2021 年 6 月西安医学院第二附属医院收治的 42 例宫颈癌患者的癌组织及其癌旁组织标本, 采用 qRT-PCR 法检测宫颈癌组织、 癌旁组织、 人宫颈上皮永生化细胞 H8、 与人宫颈癌细胞系 SiHa、 HeLa、 Caski 中 lncRNA PSMA3-AS1、 miR-3619-5p 的表达量; 以 SiHa 细胞为研究对象, 分组为: si-NC 组、 si-lncRNA PSMA3-AS1 组、 miR-NC 组、 miR-3619-5p 组、 anti-miR-NC + si-lncRNA PSMA3-AS1 组、 anti-miR-3619-5p + si-lncRNA PSMA3-AS1 组; MTT 法与 Transwells 实验分别检测每组 SiHa 细胞的增殖活力、 迁移及侵袭能力; 双 荧光素酶报告实验检测 miR-3619-5p 过表达对野生型载体 lncRNA PSMA3-AS1-WT、 突变型载体 lncRNA PSMA3-AS1-MUT 荧光素酶活性的影响; Western 印迹检测 MMP2、 MMP9 蛋白表达量。 结果 宫颈癌组织中 lncRNA PSMA3-AS1 的表达量比癌旁组织增加 ( P < 0. 01), miR-3619-5p 的表达量比癌旁组织减少 ( P < 0. 01); 与 H8 细胞比较, SiHa、 HeLa、 Caski 细胞中 lncRNA PSMA3-AS1 的表达量升高 (P< 0. 01), miR-3619-5p 的表达量降低 (P< 0. 01); 与 si-NC 组比较, si-lncRNA PSMA3-AS1 组细胞活力和 MMP2、 MMP9 蛋 白水平降低 (P< 0. 05), 迁移及侵袭细胞数减少 (P< 0. 05); 与 miR-NC 组比较, miR-3619-5p 组细胞活力 和 MMP2、 MMP9 蛋白水平降低 (P< 0. 01), 迁移及侵袭细胞数减少 (P< 0. 05); miR-3619-5p 过表达可抑 制 lncRNA PSMA3-AS1-WT 的荧光素酶活性 (P< 0. 01), 而未能影响 lncRNA PSMA3-AS1-MUT 的荧光素酶活 性; 与 anti-miR-NC + si-lncRNA PSMA3-AS1 组比较, anti-miR-3619-5p + si-lncRNA PSMA3-AS1 组细胞活力和 MMP2、 MMP9 蛋白水平升高 (P< 0. 01), 迁移及侵袭细胞数增多 (P< 0. 01)。 结论 干扰 lncRNA PSMA3- AS1 表达可通过促进 miR-3619-5p 而降低宫颈癌细胞增殖、 迁移及侵袭能力。