LncRNA CASC7/miR-21/Wnt2b轴介导糖尿病肾病小鼠肾纤维化的机制研究

目的 探究miR-21靶向调控肾纤维化的发生发展机制,为临床糖尿病肾病（DN）的治疗提供新的思路。方法 24只C57BLKS/J-Leprdb/db小鼠随机分为实验1组、实验2组与对照组,每组8只。实验1组进行单侧肾切除术,术后2月,实验1组和实验2组小鼠采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ）的方法建立糖尿病肾病动物模型。HE染色法观察肾组织病理学改变,Masson染色法观察肾组织纤维化状况,qRT-PCR法检测各组肾组织中LncRNA CASC7、miR-21、Wnt2b、SMAD7表达水平,western blot法检测Wnt2b和SMAD7的蛋白表达水平,荧光素酶报告系统鉴定LncRNA CASC7和miR-21靶向关系。Pearson相关性分析肾组织中LncRNA CASC7和miR-21的表达水平与糖尿病肾病肾纤维化之间的关系。结果染色试验中观察到实验1组与实验2组小鼠肾小球肥大,系膜细胞及系膜基质增生,肾小管上皮细胞空泡变性。肾组织存在炎性细胞浸润、肾小管萎缩与间质纤维化。肾组织纤维化评分：实验1组（2.87±0.66）分>实验2组（2.17±0.62）分>对照组（0...     

miR-155在糖尿病肾病大鼠及大鼠肾系膜细胞表达的研究

目的：探讨miR-155表达水平在链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病肾病（DN）大鼠及大鼠肾系膜细胞中是否存在同样的变化。方法：将雄性清洁sD大鼠8只随机分成实验组（DN组,n=4）和对照组（Nc组,n=4）,DN组大鼠腹腔注射足量STZ诱导DN大鼠。观察血糖及肾脏结构变化,用real—timePCR检测肾脏miR-155表达水平;大鼠肾系膜细胞分为高糖培养组和正糖培养组,培养24h、48h、72h,用real-timePCR检测miR-155表达水平。结果：与对照组相比,DN组大鼠肾脏miR-155表达水平下降（P〈0．05）：高糖培养的大鼠肾系膜细胞miR-155表达水平较正糖培养的表达水平下降（P〈0．05）,于48h表达水平最低。结论：miR-155在高糖培养大鼠肾系膜细胞表达下降。     

SRT2104对小鼠糖尿病肾病发病机制及SIRT1/P53/NRF2通路的影响

目的研究SRT2104对糖尿病肾病(DN)小鼠肾功能、肾纤维化、肾炎症及肾氧化应激的影响,并探讨其影响机制。方法将36只雄性BABL/c小鼠随机均分为3组:对照组、DN组和DN+S组,后两组小鼠通过连续5 d腹腔注射50 mg/kg的链脲佐菌素建立DN小鼠模型,之后DN+S组小鼠给予含有SRT2104的饮食喂养24周。最后检测各组小鼠的血糖及肾功能指标,以及肾皮质中肾纤维化、肾炎症及肾氧化应激相关指标和SIRT1/P53/NRF2通路分子的水平。结果 DN组和DN+S组的血糖均高于对照组(P 0. 05),但DN组和DN+S组组间对比无显著差异。DN组小鼠的尿白蛋白和尿肌酐的比率(UACR)、肾重量/胫骨长度、尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)和血β2-微球蛋白(β2-MG)的数值均显著高于对照组(P 0. 05),DN+S组显著低于DN组(P 0. 05)。DN组小鼠肾皮质中纤维化指标转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)的表达、炎症指标纤溶酶原激活剂抑制剂-1(PAI-1)和VCAM-1的表达和氧化应激指标诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的水平均显著高于对照组(P0. 05),DN+S组显著低于DN组(P 0. 05)。DN+S小鼠肾皮质中SIRT1和NRF2的表达均显著高于DN组(P 0. 05),P53乙酰化程度低于DN组(P 0. 05)。结论 SRT2104可降低DN小鼠肾纤维化、肾炎症及肾氧化应激,改善肾损伤,其机制与SIRT1/P53/NRF-2通路的激活有关。     

维生素E在大鼠肾脏缺血再灌注中的作用

目的 观察维生素E(VE)对大鼠肾脏缺血再灌注(I/R)的作用.方法 18只健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、I/R组、VE+ I/R组,每组6只.所有动物于I/R术24h后处死,取肾组织进行光镜检查,留取血清测定尿素氮(BUN)和肌酐(SCr)的浓度.Western印迹测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白的表达.结果 HE、PAS染色结果显示,I/R组肾小管及间质病理损伤显著重于假手术组,VE+ I/R组小管间质损伤程度较肾脏I/R组明显减轻.与假手术组相比,I/R组以及VE+I/R组BUN和SCr均明显升高[BUN:(10.13±2.14)、(7.67±1.63)、(3.85±0.21) mmol/L,SCr:(80.33±7.15)、(63.67±5.40)、(48.67±3.61)μmol/L](P均＜0.05);VE+ I/R组较I/R组BUN和SCr水平显著降低(P均＜0.05).Western Blotting检测显示,VE+ I/R组肾组织TNF-α蛋白表达与I/R组相比显著降低(P＜0.05).结论 VE可能通过抑制TNF-α表达发挥对I/R中肾脏保护作用.     

曲尼司特对环孢素A慢性肾毒性大鼠肾脏TGF-β1、Ang Ⅱ及col Ⅲ的影响

目的:探讨曲尼司特(tranilast,TNL)对环孢素A(CsA)慢性肾毒性大鼠血清及肾脏血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及肾脏转化生长因子-β1(TGF-β1)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)的影响。方法:雄性SD大鼠24只,随机分成正常对照组、模型组、TNL治疗组、安博维治疗组。采用低盐饮食加CsA 20 mg/(kg.d)灌胃的方法建立CsA慢性肾毒性肾脏模型。观察TNL对大鼠肾脏病理及肾组织Ang Ⅱ、TGF-β1、ColⅢ的影响。结果:TNL能下调CsA慢性肾毒性大鼠血清及肾组织中AngⅡ的水平及肾组织TGF-β1、ColⅢ在肾脏的表达。结论:TNL可能通过抑制AngⅡ、TGFβ1及ColⅢ的表达而发挥其抗纤维化作用。     

肾炎四味片对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质NF-κB、MCP-1、ColⅢ表达的影响

目的:观察肾炎四味片对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质核转录因子-κB(NF-κB)、单核细胞趋化因子-1(MC-.1)、胶原Ⅲ(Col Ⅲ)的表达,并探讨其对肾间质纤维化的作用机制.方法:将SD大鼠60只随机分为假手术组(A组)、肾炎四味片假手术组(B组)、模型组(C组)和肾炎四味片治疗组(D组),分别于术后第3、7、14天处死各组大鼠.用HE和MASSON染色法观察肾脏病理改变,用免疫组化方法检测核转录因子-κB(NF-κB)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、胶原Ⅲ(Col Ⅲ)的表达情况.结果:A组和B组各指标组内及组间比较无统计学意义(P＞0.05).病理变化,C组和D组间质纤维化程度进行性加重,显著重于同期A组,D组间质纤维化程度较C组明显减轻(P＜0.05).免疫组化,C组NF-κB、MCP-1和Col Ⅲ在肾间质表达明显增强,与A组相比差异有显著性(P＜0.05);D组各因子的表达下调,与相应时间点C组相比差异有显著性(P＜0.05).结论:肾炎四味片可降低NF-κB、MCP-1、ColⅢ的表达,从而延缓肾间质纤维化.     

抗纤灵对5/6肾切除诱导慢性肾脏纤维化小鼠模型细胞外基质的影响

目的探讨抗纤灵对5/6肾切除诱导的慢性肾脏纤维化小鼠模型肾组织细胞外基质(ECM)的影响。方法C57BL/6J雄性小鼠,采用5/6肾切除制备慢性肾脏纤维化模型,2周后根据肌酐水平把手术组小鼠分为模型组,雷帕霉素和抗纤灵组,同时设立假手术组,每组10只,雷帕霉素,抗纤灵组分别给予雷帕霉素(0.00 016 g/kg),抗纤灵(0.4 g/(kg·d)灌胃治疗,模型组和假手术组等量蒸馏水,连续用药4周后处死小鼠,免疫荧光法测定肾组织I型胶原(ColⅠ),Ⅲ型胶原(Col Ⅲ),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)纤维化面积;RT-PCR法检测肾组中,Co Ⅰ,Col Ⅲ,α-SMAmRNA的表达。结果与假手组比较,模型组Co Ⅰ,Col Ⅲ,α-SMA胶原纤维化面积比值明显增加,Co Ⅰ,Col Ⅲ,α-SMAmRNA显著增高(P < 0.01),与模型组比较,雷帕霉素,抗纤灵组胶原纤维面积比值,mRNA表达水平均有所降低(P < 0.01)。雷帕霉素与抗纤灵组比较,两者之间无显著性差异。结论抗纤灵具有雷帕霉素类似的作用,能够通过抑制小鼠肾组织Co Ⅰ,Col Ⅲ,α-SMAmRNA的表达,减少Co Ⅰ,Col Ⅲ,α-SMA纤维化面积,对肾纤维化有一定的改善作用。      

血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C与肾脏病理改变的相关性分析

目的通过探讨半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)、血清肌酐(SCr)与一些重要肾脏病理改变及临床指标的相关性,为Cys C的临床应用提供更多的循证医学证据。方法随机抽取260例肾活检患者,分别分析患者的Cys C、SCr与肾脏病理损害程度(全球硬化、肾小管萎缩、间质纤维化)评分、年龄、血红蛋白(Hb)的相关性。将患者按全球硬化0～4分划分为5组;按肾小管萎缩0～3分划分为4组;按间质纤维化0～3分划分为4组,再分别比较各病理组间Cys C及SCr的变化。结果 Cys C与SCr、全球硬化、肾小管萎缩、间质纤维化、年龄均呈明显正相关(r分别为0.850、0.471、0.592、0.610、0.197,P均<0.01);SCr与全球硬化、肾小管萎缩、间质纤维化均呈明显正相关(r分别为0.501、0.595、0.607,P均<0.01),但SCr与年龄无相关性(r=0.118,P>0.05);Cys C、SCr均与Hb呈明显负相关(r分别为-0.448、-0.369,P均<0.01)。各病理组间Cys C及SCr水平差异均有统计学意义(P均<0.01),随着病理损害程度的增加,各组Cys C及SCr水平也随之增加;当病理损害程度达到1～2分(<50%)时,大多数患者Cys C水平达到或超出参考范围上限,而大多数患者SCr水平仍在参考范围内。结论 Cys C与SCr均能较好地反映患者的肾脏病理损害及肾功能状况,Cys C评价早期肾损伤的敏感性要优于SCr,但两者均存在影响因素。因此在选择评估肾功能的指标时应以患者存在的影响因素为参考,必要时可联合多项指标以提高评估肾功能的准确性。     

糖尿病肾病中肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化的意义

目的:通过糖尿病肾病(DN)患者肾脏标本及DN大鼠模型,探讨肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化(EMT)在DN中的意义。方法:肾穿刺活检取DN患者肾脏组织,通过Western blot检测E-cadherin及α-SMA蛋白的表达,免疫组化观察E-cadherin及α-SMA的表达,Real time-PCR检测ColⅠRNA基因的表达,并检测空腹血糖、血清肌酐及24h尿蛋白水平。注射链脲佐菌素建立大鼠DN模型,分别于建模后1、2、4、8、12及24周处死动物并取肾脏组织,并用上述同样方法检测相关指标。结果:DN患者中E-cadherin表达下降,α-SMA及ColⅠ mRNA表达上调。DN组大鼠肾组织α-SMA蛋白及ColⅠ mRNA水平明显高于正常对照组(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著低于正常对照组(P<0.05);相关分析结果提示,DN组大鼠α-SMA、ColⅠ的变化趋势与血糖、24h尿道白及肌酐的变化呈正相关;E-cadherin蛋白表达与上述生化指标的变化呈负相关。结论:EMT能够导致DN患者肾功能的下降,在DN进展中起重要作用。     

低氧诱导因子短期活化后诱导miR-29c 表达上调可延缓5/6肾切除大鼠的肾病进展

目的:探讨适度活化低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)对延缓残肾慢性肾脏病进展的作用及可能机制。方法:雄性SD大鼠采用二步法5/6肾大部切除术建立残肾模型,随机分为L-mimosine(L-Mim)治疗组(术后5~12周短期给予脯氨酸羟化酶抑制剂,隔日50 mg/kg腹腔给药)和未治疗残肾组,同时设立假手术对照组。术后12周末处死大鼠留取标本。结果:L-Mim治疗组大鼠血肌酐水平[(82.4±6.3)比(130.1±24.1)μmol/L,P0.05]、24 h尿蛋白水平[(0.7±0.1)比(1.7±0.5)g/d,P0.05]以及残肾病理改变较未治疗残肾组大鼠有显著改善。miRNA芯片分析结果提示:L-Mim治疗组肾皮质miR-29c丰度高于未治疗残肾组,伴HIF-1α和HIF-2α表达增强。经荧光素酶报告检测系统和体外突变实验明确原肌球蛋白1(TPM1)为miR-29c靶基因之一。HK2细胞转染pre-miR-29c寡核苷酸后可以抑制TGF-β1(3 ng/mL,24 h)诱导的原肌球蛋白水平上调(P0.05或0.01)。结论:大鼠残肾肾间质纤维化病变明显并伴miR-29c水平下调,适度活化HIF水平可通过上调miR-29c表达延缓残肾功能恶化。     

糖尿病肾病患者血清miR-135b水平检测与疾病预后的相关性研究

目的 探讨血清miR-135b水平与糖尿病肾病(DN)患者预后的关系。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测158例DN患者(DN组)和60例健康体检者(对照组)血清miR-135b水平,分析miR-135b与DN患者不同临床指标的关系。采用肾小球分级、间质性纤维化和小管萎缩评分(IFTA)及间质炎症来评价肾脏损伤情况,并应用ROC曲线分析血清miR-135b水平预测DN患者发生终末期肾病(ESRD)的价值。结果 DN组血清miR-135b水平为3.94±0.75,明显高于对照组0.64±0.13,差异有统计学意义(t=9.317,P<0.01)。血清miR-135b水平与蛋白尿定量、Cr,BUN及eGFR水平相关(P<0.05)。DN患者血清miR-135b水平与肾小球分级、IFTA及间质炎症均有关,且随着肾脏病理损伤程度的增加,血清miR-135b水平明显升高(P<0.05)。终末期肾病(ESRD)患者血清miR-135b水平(5.39±1.26)明显高于非ESRD患者(3.46±0.68),差异有统计学意义(t=4.157,P=0.025)。ROC曲线显示,血清miR-135b水平预测DN患者发生ESRD的最佳截值取4.96时,其AUC[0.912(95%CI:0.850～0.973)]最大,敏感度(91.3%)和特异度(87.5%)较好。Spearman相关分析显示,DN患者血清miR-135b水平与蛋白尿定量、Cr,BUN,肾小球分级,IFTA及间质炎症呈正相关(r=0.504,0.396,0.438,0.475,0.351和0.559,均P<0.01),与eGFR呈负相关(r=-0.637,P<0.01)。结论 血清miR-135b水平在DN患者中明显上调,且与DN患者肾脏损伤及预后不良有关。     

糖尿病肾病患者肾小球内10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因及desmin表达的意义

目的探讨糖尿病肾病（DN）患者肾小球内10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因（PTEN）及结蛋白（desmin）表达的意义。方法经临床和病理证实为DN患者的肾组织30例,根据肾小球病变分为Ⅰ级病变组、Ⅱ级病变组和Ⅲ级病变组,10例肾肿瘤患者远端正常肾组织作为对照。采用免疫组织化学方法检测各组肾小球内PTEN及desmin的表达。结果随着肾小球病变加重,肾小球内desmin表达逐渐增多,PTEN表达逐渐减弱。肾小球内PTEN表达与24 h尿蛋白水平和desmin的表达呈负相关（r=-0.675、-0.642,P均＜0.01)。结论PTEN表达下调可能介导了DN的足细胞损伤,加剧DN的进展。     

miRNA-146a-5p对癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路的影响

目的观察miRNA-146a-5p(miR-146a-5p)对癫痫大鼠海马神经元核因子κB(NF-κB)信号转导通路的影响。方法体外培养新生SD大鼠海马神经元,随后制备癫痫海马神经元模型,随机分为三组,空白对照组(control组):转染时添加等体积opti-MEM培养基;阴性对照组(NC组):转染80 n M浓度NC至癫痫大鼠海马神经元; miR-146a-5p组:转染80 n M浓度miR-146a-5p mimics至癫痫大鼠海马神经元。转染后培养24 h,再用200 ng/ml脂多糖(LPS)诱导6 h,采用免疫荧光双染法鉴定体外培养海马神经元,采用膜片钳技术检测正常大鼠海马神经元和癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测未经LPS诱导各组海马神经元miR-146a-5p表达水平及经LPS诱导后各组海马神经元核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化IκBα(p IκBα)、NF-κB P65、IKB激酶-β(IKKβ) mRNA表达水平,采用Western blot法检测经LPS诱导后各组海马神经元IκBα、p IκBα、NF-κB P65、IKKβ蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测经LPS诱导后各组细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达水平。结果体外培养7 d的癫痫大鼠海马神经元与正常大鼠海马神经元相比较形态未见明显异常;癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率明显较正常大鼠海马神经元明显增加(P 0. 05); miR-146a-5p组海马神经元miR-146a-5p表达水平明显高于control组和NC组(P 0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组海马神经元p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达水平明显低于control组和NC组(P 0. 05),而IκBαmRNA及蛋白表达水平明显高于control组和NC组(P 0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组细胞培养液中TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1表达水平明显低于control组和NC组(P 0. 05)。结论miR-146a-5p可抑制LPS诱导的癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路中p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达,促进IκBαmRNA及蛋白表达,减少TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1等炎症因子的释放。     

MiR-29a和PTEN在肾缺血再灌注损伤中的临床意义

目的探讨miR-29a和PTEN在肾缺血再灌注损伤中的表达以及临床意义。方法饲养SD大鼠50只,构建肾缺血再灌注损伤模型,全自动生化分析仪检测大鼠血清血肌酐、尿素氮水平,qRT-PCR检测miR-29a的表达,western blot检测PTEN的表达,分析miR-29a、PTEN和肾功能的相关性。结果肾缺血再灌注损伤模型中大鼠血清血肌酐、尿素氮水平以及PTEN表达水平显著升高,miR-29a的表达水平显著降低。相关性分析表明miR-29a和PTEN、Scr和BUN均有显著负相关性;而PTEN和Scr、BUN水平均有显著正相关性。结论在RIRI中,miR-29a和PTEN的表达和肾缺血再灌注损伤导致的肾功能损伤有显著的联系,为针对miR-29a及PTEN基因靶向治疗RIRI提供一定的实验基础。     

参芎葡萄糖注射液对冠心病所致慢性心力衰竭患者血清Gal-3、PLGF的影响及机制研究

目的探讨参芎葡萄糖注射液(SGI)对慢性心力衰竭患者心肌纤维化因子半乳糖凝集素-3(Gal-3)、胎盘生长因子(PLGF)的作用及其机制。方法 88例冠心病所致慢性心力衰竭患者随机分为观察组(47例)和常规治疗组(41例)。两组均采用常规治疗,观察组在此基础上静脉注射SGI 100 mg/次/d,共14 d,采用ELISA法检测两组患者血清中Gal-3及PLGF的表达变化。将30只Wistar大鼠随机分为对照组(正常喂养+腹腔注射等体积生理盐水)、模型组[异丙肾上腺素(ISO)5 mg皮下注射+腹腔注射等体积生理盐水]及治疗组(ISO 5 mg皮下注射+SGI 20 mg/kg),连续注射7 d,停药后观察4周。停药第四周末后行高频超声心动图检查,测定各项心功能指标;处死大鼠,取心脏,行HE、Masson染色进行心肌组织胶原容积分数分析;采用ELISA法检测各组血清中Gal-3及PLGF的表达及左心室Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)及Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)的表达;采用Western blot检测大鼠左心室细胞外调节蛋白激酶(ERK)及磷酸化ERK(p-ERK)的表达。结果观察组患者血清Gal-3及PLGF表达明显高于常规治疗组(P0.05);与对照组相比,模型组大鼠脏彩超结果显示LVEDd及LVESd明显增大,LVEF及FS%减少(P0.05),而与模型组比较,治疗组大鼠上述指标均明显改善(P0.05);治疗组大鼠心肌纤维化病理积分及纤维化相关因子Gal-3及PLGF表达明显下降(P0.05);治疗组大鼠心肌组织ColⅠ、ColⅢ、ERK及p-ERK表达明显降低(P0.05)。结论 SGI可能通过降低Gal-3及PLGF的表达,使心肌组织ColⅠ、ColⅢ合成减少,抑制ERK蛋白磷酸化,达到抗心肌组织纤维化、改善心脏功能的作用。     

红景天苷通过抑制PI3K/AKT/GSK3β通路对AMI后心衰大鼠ColⅠ和Profilin-1蛋白表达的影响

目的探究红景天苷通过抑制PI3K/AKT/GSK3β通路对急性心肌梗死(AMI)后心衰大鼠胶原蛋白Ⅰ(ColⅠ)、前纤维蛋白-1(Profilin-1)蛋白表达的影响。方法 45只SD大鼠随机分为3组(n=15),假手术组,模型组和红景天苷组。模型组和红景天苷组建立AMI后心力衰竭模型,红景天苷组大鼠使用红景天苷灌胃干预。通过心电图和血清B型脑钠肽(BNP)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平评估心衰情况。HE染色和Masson染色检测心肌组织变化和纤维化情况。分别使用Western blot和qRT-PCR检测PI3K/AKT/GSK3β通路和ColⅠ、Profilin-1表达水平。结果模型组大鼠血清BNP、AngⅡ水平显著高于假手术组,并且BNP水平均高于100 pg/ml;红景天苷组的血清BNP、AngⅡ水平显著低于模型组。模型组心肌细胞形状发生改变,排列紊乱,细胞间系变小,出现炎性反应,并出现纤维化状态。红景天组细胞排列异常、炎性反应及纤维化情况均较轻。模型组出现大量的纤维化组织,红景天苷组的纤维化情况显著低于模型组。与假手术组比较,建模后大鼠心肌组织中Col I和Profilin-1的表达水平均显著升高,红景天苷组的Col I和Profilin-1蛋白和mRNA水平均显著低于模型组;建模后大鼠心肌组织中PI3K/AKT/GSK3β通路蛋白磷酸化水平显著升高,红景天组的大鼠心肌组织中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-GSK3β/GSK3β水平显著低于模型组。结论红景天苷通过抑制PI3K/AKT/GSK3β通路中蛋白的磷酸化,抑制AMI后心力衰竭大鼠心肌组织中ColⅠ、Profilin-1蛋白表达,减轻心肌纤维化水平,减轻心力衰竭。     

川芎嗪对糖尿病肾病大鼠肾组织GSK-3β、VEGF和ICAM-1表达的影响

目的探讨川芎嗪对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织糖原合成酶激酶(GSK-3β)、血管内皮生长因子(VEGF)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法将30只SD大鼠随机分为对照组、模型组和川芎嗪组各10只,模型组和川芎嗪组饲喂高脂高糖饮食,腹腔注射小剂量链脲佐菌素(25 mg/kg)建立DN大鼠模型。川芎嗪组灌胃150 mg/(kg·d)的川芎嗪,1次/d,持续8周,模型组和对照组分别灌胃等量的生理盐水。于治疗前后,测定各组大鼠空腹血糖(FBG);治疗后,测定肾功能相关指标血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)的水平和24 h尿蛋白含量;采用Western Blot测定GSK-3β、VEGF和ICAM-1的蛋白表达水平; HE染色观察肾脏组织病理变化。结果与对照组相比,模型组和川芎嗪组大鼠FBG显著升高(P 0. 05),肾功能相关指标SCr、BUN和24 h尿蛋白含量显著升高(P 0. 05),GSK-3β、VEGF和ICAM-1的蛋白表达显著升高(P 0. 05);与模型组相比,川芎嗪组大鼠FBG显著降低(P 0. 05),肾功能相关指标SCr、BUN和24 h尿蛋白含量显著降低(P 0. 05),GSK-3β、VEGF和ICAM-1的蛋白表达显著下降(P 0. 05),HE染色显示肾脏病理变化明显减轻。结论川芎嗪可能通过抑制GSK-3β、VEGF和ICAM-1的表达,改善DN大鼠的肾脏功能。     

阿托伐他汀对高血压大鼠血管纤维化及结缔组织生长因子的影响

目的:探究阿托伐他汀(atorvastatin)对肾血管性高血压血管纤维化及结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法:24只SD大鼠随机分为假手术组(N组)、高血压组(RH组)、阿托伐他汀组(他汀组)各8只;将RH组及他汀组大鼠建立二肾一夹肾血管性高血压(2K1C-RH)大鼠模型。术后4周末,他汀组开始以阿托伐他汀(10mg.Kg-1.d-1)灌胃,共8周。治疗前后RT-PCR法检测各组大鼠收缩压、胸主动脉CTGF、纤维连接蛋白(FN)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)的表达,并用免疫组化显示CTGF的表达。结果:与N组比较,RH组大鼠胸主动脉CTG-FmRNA、FNmRNA、ColⅢmRNA显著增加(P0.01);他汀组与RH组比较则3项指标明显下调(P0.05)。结论:阿托伐他汀能抑制高血压血管纤维化,可能与下调CTGF的表达有关。     

活性维生素D_3对大鼠肾小管间质纤维化的影响及其机制研究

目的:观察活性维生素D_3对大鼠肾小管间质纤维化的影响及其可能机制。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)、模型组(UUO组)、UUO+低剂量活性维生素D_3组(LV组)、UUO+大剂量活性维生素D_3组(HV组),每组10只。采用单侧(左)输尿管结扎法建立梗阻性肾小管间质纤维化大鼠模型。Sham组只游离左侧输尿管而不结扎。LV组与HV组分别予以0.03μg/(kg·d)、0.06μg/(kg·d)活性维生素D_3(溶于花生油)腹腔注射,Sham组和UUO组均予以等体积花生油腹腔注射。术后14 d处死大鼠,采集血、肾脏标本,并检测血清钙、磷、肌酐(SCr)、甲状旁腺激素(PTH)。制作肾脏病理组织切片,行H-E、Masson染色,在光镜下观察肾小管间质损伤及纤维化情况。采用免疫组织化学法检测肾小管间质中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cadherin)与转化生长因子β(TGF-β)的表达。结果:与UUO组相比,LV组和HV组SCr水平[(39.0±1.83)μmol/L、(36.0±2.11)μmol/L比(43.1±5.55)μmol/L]、肾小管间质纤维化指数(2.00±0.12、1.70±0.10比2.80±0.11)、α-SMA表达(0.22±0.02、0.20±0.03比0.24±0.02)、TGF-β表达(0.26±0.03、0.25±0.03比0.32±0.04)均显著下降(P0.05),E-cadherin表达(0.30±0.08、0.34±0.11比0.22±0.07)明显升高。与LV组相比,HV组SCr水平肾间质纤维化指数、肾间质损伤指数、α-SMA表达、TGF-β表达明显下降(P0.05),E-cadherin表达上升(P0.05)。相关性分析显示,TGF-β、α-SMA表达与肾间质纤维化指数正相关,E-cadherin表达与肾间质纤维化指数负相关;TGF-β表达与α-SMA表达正相关,E-cadherin与TGF-β负相关;α-SMA表达与E-cadherin表达负相关。结论:活性维生素D_3可改善UUO大鼠肾小管间质纤维化,大剂量活性维生素D_3改善作用优于小剂量,其机制可能是:通过抑制TGF-β的过度表达从而抑制UUO大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化进而改善肾小管间质纤维化。     

血清miR-141水平与糖尿病肾病患者肾脏损伤及远期预后的关系

目的探讨血清miR-141水平与糖尿病肾病(DN)患者肾脏损伤及远期预后的关系。方法收集2012年1月至2015年12月的114例DN患者及119例健康体检者(对照组)的血清标本并采用实时定量PCR检测miR-141水平,分析血清miR-141水平与常见临床指标(性别、年龄、BMI、糖尿病病程、蛋白尿定量、血钙、空腹血糖、Hb A1c及e GFR)的关系,采用肾小球分级、间质性纤维化和小管萎缩评分(IFTA)及间质炎症来评价肾脏损伤情况,并分析不同肾脏损伤程度的miR-141水平,根据miR-141水平的中位值分组后分析miR-141水平与预后的关系。结果 q PCR检测发现DN患者的血清miR-141水平为(6.312±1.804)(中位值为5.816),高于健康对照组的(1.247±0.219),差异有统计学意义(P0.05)。DN患者的血清miR-141水平与性别、年龄和血钙无关,但与BMI、糖尿病病程、蛋白尿定量、空腹血糖、Hb A1c及e GFR有关(P0.05);DN患者的血清miR-141水平与肾小球分级、IFTA及间质炎症均有关,且随着肾脏病理损伤程度的增加,血清miR-141水平和高表达率均升高(P0.05)。经Spearman相关分析发现,DN患者的血清miR-141水平与肾小球分级、IFTA和间质炎症均呈正相关,相关系数依次为0.329、0.226和0.426(P0.05)。114例DN患者有42例在随访期间进入终末期肾病(ESRD),其血清miR-141水平为(7.153±2.018),高于72例未进入ESRD的(5.821±1.775),差异均有统计学意义(P0.05),且miR-141高水平组相对于低水平进入ESRD的风险升高6.333倍。结论 DN患者的血清miR-141水平升高,且其水平与DN患者肾脏损伤及预后有关,miR-141较高者的肾脏损伤程度较严重且预后较差,在DN病情预测及预后评估上有一定价值。