三种实验动物角膜活体共焦显微镜检测的比较解剖学研究

背景 海德堡视网膜厚度分析仪和角膜模块的结合实现了对眼表活体组织结构的非侵入性检查,利用共焦显微镜对常用实验动物角膜结构进行比较研究可为相关研究提供依据.目的 利用活体共焦显微镜比较新西兰大白兔、Lewis大鼠、Swiss小鼠的角膜结构,建立实验动物角膜的活体组织图像资料,为共焦显微镜的实验研究提供依据.方法 利用海德堡视网膜厚度分析仪(HRT-Ⅱ)的Rostock角膜模块对新西兰大白兔、Lewis大鼠、Swiss小鼠的角膜进行活体分析,角膜的每一层各采集20张共焦显微镜图片,比较分析实验动物角膜各层的形态学特点及角膜内皮细胞密度.结果 共焦显微镜下3种实验动物角膜表层上皮细胞表现为高反光或低反光的多形细胞,基底上皮细胞表现为暗的细胞质,细胞核不可见,细胞间排列紧密、规则；前弹力层均表现为含有丰富上皮下神经丛的无定形物质.兔角膜基质层在黑色背景中散布着高反光物质,即为角膜基质细胞核,后基质层细胞密度高于前基质层；大鼠和小鼠的角膜基质层仅观察到大量反光的星形结构,无明显的细胞核.3种实验动物的角膜内皮细胞形态相似,均表现为高反光的胞体,边界较暗且细胞排列成蜂窝状.新西兰兔前基质角膜细胞密度中位数为387.5个/mm2,后基质角膜细胞密度中位数为223.5个/mm2,明显少于前基质的细胞密度(U=0.000,P=0.000)；新西兰兔、Lewis大鼠、Swiss小鼠角膜内皮细胞密度中位数分别为2192.5、1936.0、1565.0个/mm2,总体差异有统计学意义(H=49.940,P=0.000),兔角膜内皮细胞密度明显高于大鼠和小鼠,差异均有统计学意义(x2=0.000,P=0.000；x2=0.000,P=0.000),大鼠和小鼠的角膜内皮细胞密度差异亦有统计学意义(x2=0.000,P=0.000).结论 共焦显微镜下新西兰大白兔、Lewis大鼠、Swiss小鼠角膜各层的细胞形态相似,但内皮细胞密度和基质细胞形态之间存在明显差异.HRT-Ⅱ的Rostock角膜模块可为动物实验提供角膜各层次的高分辨率图像.     

共焦显微镜下虹膜角膜内皮综合征的角膜形态学观察

目的 观察共焦显微镜下虹膜角膜内皮综合征(ICE)的角膜各层组织的形态学特点.方法 观察型系列病例研究.对2000年1月至2007年6月在复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科就诊的23例(23只眼)ICE患者,行共焦显微镜(NIDEK,Confoscan 3.0)下双眼检查.使用NAVIS软件记录和分析角膜各层组织图像,并使用SPSS 13.0软件对患眼的角膜内皮细胞密度、内皮细胞平均面积、六角形细胞比例及有核细胞比例进行单因素方差分析.结果 ICE患眼的角膜内皮细胞呈"风筝样"或"上皮细胞样",细胞形态失去正常的六角形外观,细胞排列紊乱,胞内可见高反光的细胞核,部分细胞内可见双核或细胞分裂象.随病程时间延长,患眼角膜内皮细胞密度和六角形细胞比例逐渐下降.病程短于1年、1～3年、3～5年及超过5年患者的角膜内皮细胞密度分别为(1687.1±122.6)、(1210.6±168.7)、(947.3±145.2)及(856.8±73.4)个/mm2;六角形细胞比例分别为(51.5±6.3)%、(39.8±9.2)%、(32.7±8.1)%及(24.1±5.6)%.随病程时间延长,患眼角膜内皮细胞平均面积和有核内皮细胞比例逐渐升高.病程短于1年、1～3年、3～5年及超过5年患者的内皮细胞平均面积分别为(678.3±56.3)、(928.7±96.2)、(1188.5±72.6)及(1337.5±60.8)μm2;有核细胞比例分别为(12.6±1.4)%、(56.8±3.7)%、(78.7±5.6)%及(84.3±2.8)%(F=7.158,7.736,6.876,14.452;均P=0.000).患眼基质细胞形态无异常,但是随病程延长,基质神经纤维逐渐增粗并明显扭曲.患眼上皮细胞的形态无异常.对侧眼角膜的各层形态结构无明显异常.结论 共焦显微镜下ICE患眼的角膜内皮细胞表现有一定特点,共焦显微镜对于判断ICE的病程进展有诊断价值.     

正常中国汉族儿童角膜的共焦显微镜研究

目的采用角膜激光共焦显微镜对正常中国汉族儿童活体角膜各层组织结构进行观察,分析正常中国汉族儿童角膜各层细胞的活体细胞形态学特征及密度。方法 49例6～13岁正常中国汉族儿童中央部角膜进行活体共焦显微镜检查,研究角膜各层结构的图象特点,并分析角膜各层细胞的密度,与成年人进行对比。结果中国汉族儿童正常角膜上皮表层细胞排列疏松,边界清楚,胞体较大,核反光较强,又称翼状细胞;基底层细胞排列紧密,呈规则的蜂巢状,胞质反光弱,正常情况下未见细胞核,细胞平均密度为5947.58±769.3个/mm2。前弹力膜为无细胞结构的膜状物,可见串珠状的神经纤维走行。基质层中可见在相对较暗的背景下明亮的角膜基质细胞核。角膜基质内有神经纤维分布。前基质层角膜细胞平均密度为1621.12±123.26个/mm2,后基质层角膜细胞平均密度为984.71±113.17个/mm2,前后基质层细胞密度有显著性差别（P〈0.05）。后弹力层中无细胞结构,为均一无结构组织。内皮细胞层表现为规则的六边形结构,细胞结构清晰,细胞平均密度为3682.38±251.87个/mm2。左右眼及男女之间角膜各层细胞密度的差异无统计学意义（P=0.341～0.611和P=0.194～0.855）。各层角膜细胞的面积和密度与性别和眼别无差异。中国汉族儿童角膜各层细胞的密度较正常成人高。结论角膜激光共焦显微镜能够在实时、活体和三维空间从细胞水平清晰观察中国汉族儿童活体角膜各层细胞的形态结构,可以对角膜各层结构进行定性和定量分析,在儿童角膜病的研究和临床诊断方面是十分有用的工具。     

准分子激光原位角膜磨镶术不同厚度角膜瓣的临床评估

目的 利用共焦显微镜观察厚、薄角膜瓣各层组织在形态学方面改变的区别,同时比较准分子激光原位角膜磨镶术(LASIK)后厚、薄角膜瓣的视功能差异,以期为临床合理化手术提供客观依据.方法 病例对照研究.收集行LASIK手术的患者70例(70只眼),平均年龄(23±5)岁.按照角膜瓣厚度分为两组:薄角膜瓣组(A组,36只眼)和厚角膜瓣组(B组,34只眼),术前平均等值球镜屈光度数分别为(-4.76±2.30)和(-3.03±2.20)D.术前术后均进行视力、屈光度、波阵面像差、对比敏感度等视功能检查,同时应用共焦显微镜(海德堡视网膜断层扫描仪角膜模块,HRTⅢ)检测角膜中央各层组织.数据应用配对t检验进行统计学分析,以P<0.05作为差异有统计学意义.结果 术后3～6个月A、B组屈光度数分别为(0.35 ± 0.21)及(0.45±0.69)D,差异无统计学意义(t=0.78,P>0.05).IASIK术后两组角膜瓣厚度分别为(107.37±20.5)和(149±25.2)μm,皱褶厚度分别为(63.71±15.8)和(48.16±20.7)μm,无细胞区厚度分别为(69.93±15.8)和(55.63±23.7)μm,激活角膜细胞区厚度分别为(60.15±30.9)和(51.86±27.9)μm;前基质细胞密度分别为(825.14±156.9)和(853.54±126.8)个/mm2;各项差异均有统计学意义(t=2.679,1.974,3.051,2.196,3.146;P<0.01).而角膜后基质细胞密度差异无统计学意义(t=0.953,P>0.05).术前及术后不同时间两组的各阶像差及对比敏感度差异均无统计学意义(P>0.05).结论 准分子激光原位角膜磨镶术中采用的角膜瓣厚度不同,术后虽然其临床视功能比较并无明显差异,但是厚、薄角膜瓣愈合时在细胞水平存在较大差异,角膜瓣与基质之间是非瘢痕性愈合.角膜薄瓣在细胞水平对角膜组织损伤的程度重于角膜厚瓣.(中华眼科杂志,2009,45:587-593)     

颗粒状角膜营养不良活体共焦显微镜形态学研究

目的研究颗粒状角膜营养不良角膜各层组织的共焦显微镜形态改变。方法应用Confoscan2.0共焦显微镜对13例(26眼)颗粒状角膜营养不良患者的角膜进行扫描检查,记录与分析各层角膜图像。结果所有患眼前基质细胞及16/26眼后基质细胞结构不清,排列紊乱,并可见短棒状多形性强反光;6/26眼前弹力层不规则并增厚,神经纤维密度明显下降;6/26眼角膜上皮基底细胞层可见不定型的强反光;2/26眼角膜上皮细胞边界不清,排列呈疏松的蜂窝状,并出现不透明的强反光;所有患者角膜内皮细胞形态基本正常。视力0.3以下的患眼角膜上皮细胞层、上皮基底细胞层、前弹力层、后基质层发生形态异常的比例高于0.3以上的患眼(P<0.05)。结论1.共焦显微镜可活体检查颗粒状角膜营养不良角膜组织各层结构,起到类似病理组织切片的作用。2.前基质层形态异常可能是颗粒状角膜营养不良最基本的共焦显微镜形态特征,病情越重,前基质层以外的其它层次发生形态异常的可能性越大,但内皮细胞层一般不受累。3.共焦显微镜检查对颗粒状角膜营养不良手术方式的选择具有一定的参考价值。     

中国人正常角膜的共焦显微镜检查

摘要目的探讨正常人共焦显微镜下角膜各层细胞的活体细胞形态学特征及密度.方法对28例(年龄36.6士14.5岁,范围19～68岁)41眼(男14眼,女27眼)正常人中央部角膜进行活体共焦显微镜检查,描述角膜各层结构的图象特点,并分析角膜各层细胞的密度与年龄的相关性.结果上皮表层细胞排列疏松,边界清楚,核反光较强;基底层细胞排列紧密,胞质和核反光弱,偶尔可见点状细胞核,细胞平均密度为5724.41士562.5个/mm2.Bowman's膜为无一定形状的膜状物,仅可分辨的结构是上皮下的念珠状神经纤维.基质层中可见相对较暗的背景下明亮的角膜细胞核.前基质内有放射状分布的神经纤维.前基质层角膜细胞平均密度为1099.10士164.90个/mm     

板层角膜移植术后全层角膜组织改变的共焦显微镜观察

目的研究活体扳层角膜移植术后角膜各层组织的共焦显微镜(confocal microscopy)形态学改变，方法应用Confoscan 2.0共焦显微镜对板层角膜移植术后3月～3年，角膜植片稳定的患者共17例17眼，进行扫描检查，记录与分析各层角膜图像。结果共焦显微镜上能够清楚地观察到稳定角膜的上皮细胞、基底层细胞、前弹力层，它们同正常角膜的相应细胞在图像上没有显著差别。但植片与植床的基质细胞在共焦显微镜图像上有着明显的差异。板层角膜移植术后稳定角膜植片的基质细胞，细胞核较小呈中等反光，排列较植床的基质细胞紊乱。而角膜植床的基质细胞，细胞核较大也呈中等反光，排列较植片的基质细胞稍整齐，结论1、Confoscan 2.0共焦显微镜可活体检查，板层角膜移植术后角膜组织结构和细胞的病理改变。2、板层角膜移植术后可成功的重建眼表。3、活体板层角膜移植术后稳定角膜上有自体角膜基质细胞与异体的角膜基质细胞同时共存，角膜内发细胞的形态结构正常。4、角膜板层间的不平滑与植片基质细胞结构紊乱可能是导致板层角膜移植术后视力不佳的重要原因。     

圆锥角膜患者长期配戴透气性硬性角膜接触镜对眼表的影响

目的 观察圆锥角膜患者连续3年以上配戴透气性硬性角膜接触镜(RGPCL)对眼表的影响.设计 回顾性病例系列.研究对象 73例圆锥角膜患者.方法 收集2001年7月～2004年7月在北京大学医学部眼视光学研究中心连续3年以上配戴RGPCL的73例患者(142眼),分别于戴镜前、戴镜1年、2年、3年用非接触式角膜内皮显微镜检测角膜内皮细胞密度及形态学改变;用A超角膜测厚仪测量眼轴长、中央及旁周边角膜厚度;定期复查,通过裂隙灯显微镜观察有无眼表并发症.主要指标 角膜内皮细胞密度及形态学改变、角膜厚度、眼轴长、眼表改变.结果 患者戴镜前、戴镜1年、2年、3年的角膜内皮细胞密度分别为(2901.92±445.20)个/mm2、(2862.78±497.13)个/mm2、(2854.71±526.80)个/mm2、(3015.61±421.22)个/mm2,差异无统计学意义(F=1.571,P=0.20);其他形态学改变也均无统计学意义.眼轴长分别为(25.15±1.50)mm、(24.93±1.36)mm、(24.78±1.25)mm、(25.39±1.31)mm,差异无统计学意义(F=2.218,P=0.10).中央角膜厚度分别为(489.09±59.64)μm、(484.02±60.80)μm、(496.61±59.74)μm、(487.44±54.25)μm,差异无统计学意义(F=0.991,P=0.40);旁周边角膜厚度的改变也均无统计学意义.随访期间裂隙灯检查发现轻度结膜充血69眼,角膜点染12眼,角膜上皮粗糙6眼,无其他异常表现.结论 圆锥角膜患者科学合理地长期配戴RGPCL,不会引起显著的眼表异常变化,无明显的眼部并发症发生.     

应用共聚焦显微镜观察正常老年人角膜形态学的特点

目的:探讨正常老年人共焦显微镜下角膜各层组织的活体细胞形态学特征。方法:正常老年人19例22眼中央角膜应用共聚焦显微镜(confocal microscope through focus,CMTF)进行观察,记录上皮翼状细胞层、上皮基底细胞层、前基质层、后基质层、内皮层的细胞密度,选取每人上皮基底细胞层下神经丛和中后基质层神经最清晰图像,并记录此幅图像中神经纤维总长度、神经纤维直径、神经纤维数目和每100μm神经纤维包含的念珠状结构(beads)数目,同时比较不同眼别及不同性别之间上述计量和计数资料之间的差别;观察上皮翼状细胞层、上皮基底细胞层、前基质层、后基质层、内皮层及上皮基底细胞层下神经丛(subbasal epithelial nerve plexus)和中后基质层神经(stromal nerves)的组织形态。结果:上皮翼状细胞层、上皮基底细胞层、前基质层、后基质层、内皮层的细胞密度分别为2150±315,5270±539,859±137,627±184,2529±654个/mm2,上皮基底细胞层下神经丛每幅图像中神经纤维总长度、神经纤维直径和数目、每100μm神经纤维包含的念珠状结构分别为944±176μm,2.3±0.5μm,9.0±1.3条,4.9±1.4;中后基质层神经每幅图像中神经纤维总长度、神经纤维直径和数目、每100μm神经纤维包含的念珠状结构分别为306±138μm,5.6±1.7μm,1.8±1.5条,0.0±0.0。上述计量和计数资料左、右眼和男、女之间无统计学差异。同时观察到排列疏松、细胞间夹杂有无结构暗区的表层上皮细胞层,过度形态的翼状上皮细胞层,呈"斑马皮样"外观的基底细胞层,在角膜中后基质层有4眼(18%)可见到微皱褶(microfolds),在排列规则、多呈六边型的角膜内皮层发现有2眼(9%)出现类似滴状赘疣(pseudoguttata-like)结构。结论:共焦显微镜可以在实时、活体和三维空间从细胞水平对角膜各层结构进行定量和定性分析。     

共焦显微镜对翼状胬肉及其周围角膜的组织病理学观察

目的 探讨角膜共焦显微镜下翼状胬肉及其周围角膜的组织病理学和细胞学特征.方法 前瞻性自身对照研究.单眼初发性翼状胬肉患者40例,应用角膜共焦显微镜观察胬肉形态,对侧无胬肉眼为对照.记录翼状胬肉、中央角膜、翼状胬肉周边角膜各层细胞图像,并对各层细胞形态、密度的结果采用配对t检验进行分析.结果 共焦显微镜下翼状胬肉的表层细胞胞体发亮,边界发暗,胬肉基质中可见毛细血管内血流,有时可见内含小圆形细胞的微囊样结构及Langerhans细胞.翼状胬肉周边角膜翼状上皮细胞、基底上皮细胞形态不规则,部分被拉长并扭曲;中央及周边各层上皮细胞平均密度小于对照眼(t=-3.92、-3.55、-3.36、-2.61、-4.31、-4.11,P均＜0.05);翼状胬肉眼角膜上皮下Langerhans细胞平均密度大于对照眼(t=3.75、4.23,p均＜0.05);角膜上皮基底细胞层下神经纤维比较杂乱,神经弯曲度大(t=5.02,P＜0.01),分支多(t=2.51,P＜0.05).结论 共焦显微镜可观察到翼状胬肉细胞水平的特征.翼状胬肉患者胬肉周边角膜上皮细胞、上皮下Langerhans细胞、上皮基底细胞层下神经、前基质细胞及角膜厚度均有变化.     

Strabisme Alternant - Etude clinique - traitement

The author defines motor and sensory alternation: the term alternation should not be used in isolation, it should always be accompanied by the name of the parameter concerned. Sensory alternation is always found together with motor alternation but the reverse is not true.The examining criteria for a diagnosis of sensory alternation are given, sensory alternation must not be confused with alternating inhibition. Working from clinical observations of cases of motor alternating strabismus, the author selects 2 types of binocular sensory relations which allow one to differentiate between:- cases of primary alternating strabismus- cases of secondary alternating strabismusThese forms will develop in different ways; in both cases a cure is possible providing that the right treatment is prescribed and once prescribed carefully followed, etc. It is always a case of serious forms of strabismus whose developmental period is spread over several years.According to the authors, the frequency of cases of true primary strabismus is from 1–3%, the frequency of cases of secondary alternating strabismus varies according to the type of therapy practised on cases of monocular strabismus with amblyopia. These latter will become cases of alternating strabismus under the influence of certain types of therapy carried out over several years (penalization, rocking, alternated occlusion, etc...).Experimental data on kittens confirm clinical data; kittens placed in abnormal environments during the sensitive period will show modification in the distribution of cortical cells and the absence of binocular cells (either because the excitation of the two eyes was not simultaneous, or not identical: artificial strabismus, occlusion, opaque glasses). This disturbances become irreversible after a certain period of exposure (a function of age, length of exposure, etc...).It is thus necessary to bear in mind: 1) the iatrogenic risks of certain orthoptic treatments, 2) the necessity for a binocular form of treatment as soon as possible, as once a certain stage is passed, cortical plasticity diminishes and the elaboration of normal binocular relations becomes impossible.

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