水蛭提取液对凝血酶诱导的视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的 观察渗滤法水蛭提取液对体外培养视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelium,RPE）增殖的影响.方法 利用体外培养的视网膜色素上皮细胞,观察水蛭提取液对凝血酶诱导的视网膜色素上皮细胞增殖的影响.结果 128mg/ml水蛭提取液对体外培养的视网膜色素上皮细胞具有抑制增殖的作用.结论 水蛭提取液对体外培养的视网膜色素上皮细胞具有抑制增殖的作用.     

脑心通胶囊对血管性痴呆模型大鼠海马神经细胞静息态[Ca~(2 )]i的影响

目的:观察脑心通胶囊对血管性痴呆模型大鼠海马神经细胞静息态游离Ca2 浓度([Ca2 ]i)的影响,初步探讨脑心通胶囊治疗血管性痴呆的机制。方法:采用大脑中动脉闭塞法(MCAO)制作血管性痴呆动物模型;使用胰蛋白酶消化法制备海马组织单细胞悬液,Fura-2/AM负载分离的神经细胞,双波长荧光法测定海马神经细胞内静息态[Ca2 ]i。结果:模型组大鼠海马神经细胞静息态[Ca2 ]i为437.42±32.14nmol/L,显著高于假手术组189.83±18.57 nmol/L(P<0.05);脑心通组和喜德镇组大鼠海马神经细胞静息态[Ca2 ]i为252.61±20.15 nmol/L、237.34±19.83 nmol/L,较模型组显著降低(P<0.05)。结论:脑心通胶囊可降低血管性痴呆模型大鼠海马神经细胞静息态[Ca2 ]i,这可能是脑心通胶囊治疗血管性痴呆的作用机制之一。     

用血清药理学方法观察毛茛提取液对家兔主动脉平滑肌细胞内钙的影响

目的:观察毛茛提取液含药血清对培养家兔主动脉平滑肌细胞内游离钙浓度的影响.方法:体外培养家兔主动脉平滑肌细胞(VSMC),用荧光指示剂INDO-AM负载细胞,灌胃给予不同浓度药物,观察不同稀释浓度含药血清及不同时相药物血清对由NE诱导细胞内游离钙浓度([Ca2 ]i)增加的影响.结果:毛茛提取液各含药血清组均能降低由NE诱发的细胞内[Ca2 ]i的升高.结论:毛茛提取液含药血清能减少VSMC细胞内[Ca2 ]i.     

复方水蛭滴眼液抑制H2O2诱导的晶状体上皮细胞凋亡的信号转导机制研究

目的 探讨复方水蛭滴眼液抑制H2O2诱导的晶状体上皮细胞(LEC)凋亡的信号转导机制.方法 采用牛LEC进行原代和传代培养,用H2O2诱导LEC凋亡,同时加入终浓度为1/1000的复方水蛭滴眼液共同孵育.荧光分光光度法及放射免疫法检测LEC内游离钙([Ca2+]i)、cAMP和cGMP浓度变化.结果 H2O2可明显升高LEC内[Ca2+]l和cAMP的水平,显著降低cGMP水平;加入复方水蛭滴眼液后,细胞内[Ca2+]i和cAMP浓度较H2O2组显著降低,而cGMP水平显著升高.结论 复方水蛭滴眼液抑制H2O2诱导的LEC凋亡的机制可能是通过降低LEC内[Ca2+],和cAMP的水平,阻断或抑制Ca2+-钙凋蛋白依赖性蛋白激酶途径、Ca2+-蛋白激酶C途径以及cAMP-蛋白激酶A(PKA)信号转导途径抑制LEC凋亡;同时通过升高LEC内cGMP浓度、激活cGMP-蛋白激酶C(PKC)信号转导途径抑制LEC凋亡.所以,复方水蛭滴眼液是通过多条途径抑制H2O2诱导的LEC凋亡.     

针刺对局灶性脑缺血大鼠海马神经元细胞[Ca2+]i的影响

[目的]研究脑缺血不同时点大鼠海马神经元内游离Ca2+浓度[Ca2+]i及醒脑开窍针刺对其影响,探讨醒脑开窍针刺法早期干预对脑缺血的治疗作用。[方法]建立大脑中动脉所致局灶性脑缺血(MCAO)模型,采用醒脑开窍针刺法治疗,采用激光扫描共聚焦显微技术动态观察脑组织海马CA1区锥体细胞[Ca2+]i在不同时间点的变化。[结果]与正常组大鼠相比,模型组大鼠脑组织海马CA1区锥体细胞内游离[Ca2+]i(以细胞内Ca2+相对荧光强度表示)在局灶性脑缺血1 h时升高,持续升高至缺血24 h时(P<0.05)。假手术组与正常组相比[,Ca2+]i变化差异无统计学意义(P>0.05)。相应时间点非穴位针刺组与模型组[Ca2+]i比较,无统计学意义(P>0.05)。在相应时间点,醒脑开窍针刺组[Ca2+]i低于模型组(P<0.01)。[结论]急性局灶性脑缺血后大鼠海马神经细胞[Ca2+]i随缺血时间的延长而持续升高,提示细胞内钙超载;醒脑开窍针刺组能有效调节缺血区的[Ca2+]i,提示在缺血后针刺治疗效果越早越好,为临床及早应用针刺治疗缺血性脑血管病提供了理论依据。     

电针镇痛及CaCl2对小鼠脑突触体[Ca2+]i的影响

目的:探讨电针镇痛及CaCl2对小鼠下丘脑(HT)、导水管周围灰质区(PAG)、海马突触体游离Ca2 浓度的影响。方法:用荧光染料Fura-2/AM测定在电针镇痛期间,小鼠下丘脑、灰质区、海马突触体内游离钙浓度([Ca2 ]i)的改变。结果:电针镇痛时,下丘脑、灰质区、海马突触体[Ca2 ]i明显降低,向分离出的海马突触体培养液内加入CaCl2,电针后突触体[Ca2 ]i明显降低。结论:电针的镇痛效应可能与下丘脑、灰质区、海马等突触体内钙离子浓度的变化密切相关。     

甜菜碱对HepG2人肝癌细胞[Ca2+]i和细胞膜电位的影响

目的研究甜菜碱对肝癌HepG2细胞内游离Ca2 浓度([Ca2 ]i)和细胞膜电位的影响。方法Fluo-3/AM标记,激光扫描共聚焦显微镜观察HepG2细胞[Ca2 ]i,TMRE标记,激光扫描共聚焦显微镜测定细胞膜电位的影响。结果甜菜碱能够升高HepG2细胞[Ca2 ]i,降低细胞膜电位。升高[Ca2 ]i的强度具一定的剂量依赖性,随甜菜碱剂量的增大而升高。甜菜碱50、25mg/mL组与对照组比较差异非常显著(P<0.01),甜菜碱12.5mg/mL组与对照组比较差异显著(P<0.05)。给药48h时间段内细胞内的[Ca2 ]i升高的幅度较大,72h升高幅度相对较小。而降低膜电位上,在48h时间段内,甜菜碱50、25、12.5mg/mL各组膜电位均显著高于对照组(P<0.05),但在72h时间段内甜菜碱12.5mg/mL组与对照组比较没有显著性差异(P>0.05)。结论甜菜碱通过开放细胞膜上的通透性转换孔道(MPTP),从而升高HepG2细胞[Ca2 ]i,启动细胞凋亡机制,诱导HepG2细胞凋亡。     

甘草黄酮拮抗高糖诱导的视网膜色素上皮细胞损伤及分子机制

目的探讨甘草黄酮对高糖刺激下人视网膜色素上皮细胞(RPE)氧化应激的影响。方法采用40 mmol·L~(-1)的葡萄糖培养RPE细胞建立细胞氧化损伤模型,用10~(-9)mol/L、10~(-8)mol/L浓度的甘草黄酮干预,观察细胞活性、细胞内活性氧(ROS)水平、凋亡细胞比例及凋亡相关蛋白表达的变化。结果 MTT试验结果显示,用10-9mol/L、10-8mol/L浓度的甘草黄酮处理后,RPE细胞存活率分别提高到67.86%±3.23%和78.67%±2.57%,与高糖组(40.45%±3.27%)比较,差异具有统计学意义(P0.01);2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(H2DCFDA)荧光探针染色结果显示,甘草黄酮可不同程度抑制40 mmol/L葡萄糖处理后RPE细胞内ROS水平;此外,甘草黄酮可以抑制高糖诱导的RPE细胞凋亡及细胞内Caspase-3及Caspase-9的表达,其抑制效应与浓度呈正相关。结论甘草黄酮可以抑制高糖诱导的人眼RPE细胞氧化损伤及凋亡的发生,对糖尿病性视网膜病变具有预防作用。     

针刺对局灶性脑缺血大鼠海马神经元细胞[Ca~（2＋）]_i的影响

[目的]研究脑缺血不同时点大鼠海马神经元内游离Ca2＋浓度[Ca2＋]i及醒脑开窍针刺对其影响,探讨醒脑开窍针刺法早期干预对脑缺血的治疗作用。[方法]建立大脑中动脉所致局灶性脑缺血（MCAO）模型,采用醒脑开窍针刺法治疗,采用激光扫描共聚焦显微技术动态观察脑组织海马CA1区锥体细胞[Ca2＋]i在不同时间点的变化。[结果]与正常组大鼠相比,模型组大鼠脑组织海马CA1区锥体细胞内游离[Ca2＋]i（以细胞内Ca2＋相对荧光强度表示）在局灶性脑缺血1 h时升高,持续升高至缺血24 h时（P〈0.05）。假手术组与正常组相比[,Ca2＋]i变化差异无统计学意义（P〉0.05）。相应时间点非穴位针刺组与模型组[Ca2＋]i比较,无统计学意义（P〉0.05）。在相应时间点,醒脑开窍针刺组[Ca2＋]i低于模型组（P〈0.01）。[结论]急性局灶性脑缺血后大鼠海马神经细胞[Ca2＋]i随缺血时间的延长而持续升高,提示细胞内钙超载;醒脑开窍针刺组能有效调节缺血区的[Ca2＋]i,提示在缺血后针刺治疗效果越早越好,为临床及早应用针刺治疗缺血性脑血管病提供了理论依据。     

枸杞子含药血清对兔视网膜色素上皮细胞光损伤凋亡线粒体信号传导途径的影响

目的:研究兔视网膜色素(RPE)上皮细胞光损伤以及枸杞子含药血清干预防治后细胞中参与凋亡的蛋白分子表达量的变化,探讨枸杞子含药血清对兔视网膜色素上皮细胞光损伤保护可能的信号传导途径,为临床应用枸杞子治疗年龄相关性黄斑变性等视网膜光损伤性疾病提供理论依据。方法:体外培养兔RPE细胞,用三基色冷光灯模拟自然光源,选取(2500±500)Lux作为基础光照强度,照射4h建立光损伤模型。制备含不同效量的枸杞子含药血清,光照前1h孵育体外培养的兔RPE细胞后进行光照实验,设置四个实验分组:A组:空白对照组;B组:光损伤模型组;C组:低剂量组;D组:高剂量组。通过透射电子显微镜进行兔RPE细胞超微结构的观察及拍片;采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测兔RPE细胞内细胞色素C(Cyt-C)、caspase-9及caspase-3蛋白的表达量。结果:与空白对照组相比,光损模型组细胞内的Cyt-C、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达水平明显上调(P0.05);枸杞子含药血清能有效的抑制细胞内Cyt-C、Caspase-9、Caspase-3蛋白的表达,与光损模型组比较,差异有统计学意义(均P0.05),其中高浓度组可显著抑制细胞内Cyt-C、Caspase-9、Caspase-3蛋白的表达,与空白对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:枸杞子对RPE细胞具有一定的保护作用,这一保护作用可能是通过线粒体信号传导途径来实现的。     

人视网膜色素上皮细胞的体外分离培养冻存复苏

目的为研究色素上皮相关疾病的发病机制及探讨中医中药治疗此类疾病的作用机制提供细胞模型。方法用胰蛋白酶消化法获得人视网膜色素上皮细胞,免疫细胞化学法对其进行鉴定。采用超低温冷冻的方法对细胞进行冻存,复苏后观察细胞活性。结果人视网膜色素上皮细胞在体外生长良好,胞浆内充满了棕黑色色素颗粒,随着传代的增加,色素颗粒逐渐减少至消失。冻存后复苏的人视网膜色素上皮细胞生长良好,增生活跃。结论成功建立了人视网膜色素上皮细胞的体外培养模式。冻存的细胞复苏后细胞活性不受影响。     

凉血化瘀方对蓝光诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响

目的探讨唐由之研究员经验方凉血化瘀方对蓝光诱导体外培养的人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium，RPE）细胞凋亡的影响。方法将RPE细胞分为四组，用波长为470．500nm，光照强度在（2000±500）LUX的蓝光照射12小时，处理组分别于光照前30分钟加入不同浓度的凉血化瘀方中药粗提物及100umot／L的维生素C，终止光照后用，用荧光素标记的连接素V／碘化丙锭（Annexin V—fluorescein isothiocyanate／Propidium iodium，Annexin V—FITC／PI）双染色法，上流式细胞仪检测，观察细胞凋亡的情况及不同浓度的凉血化瘀方中药粗提物对蓝光诱导RPE细胞凋亡的影响。结果蓝光照射体外培养人RPE细胞后，引起的细胞变化以细胞凋亡为主，光照前加入不同浓度的凉血化瘀方中药粗提物及维生素C后，凋亡细胞数量明显减少，且凉血化瘀方组凋亡细胞数量少于维生素C组。结论凉血化瘀方对蓝光诱导体外培养的人视网膜色素上皮凋亡具有保护作用。     

体外培养视网膜细胞高糖损伤模型的研究进展

尽管体内实验更接近真实状态,但体内实验影响因素较多,受多种因素干扰.建立合理的体外培养视网膜细胞高糖损伤模型,对进一步深入研究糖尿病视网膜病变的病理特性、药物作用机制和功能重建具有重要的作用.本文拟对体外培养的视网膜血管内皮细胞、视网膜色素上皮细胞、视网膜Müller细胞以及视网膜神经节细胞高糖损伤模型的建立进行综述.     

脉心康胶囊对载脂蛋白E基因敲除小鼠肝细胞内Ca2+及线粒体膜电位的影响

目的观察脉心康胶囊对载脂蛋白E基因敲除[ApoE（-/-）]小鼠肝细胞内Ca^2＋浓度及线粒体膜电位的影响.方法采用胶原酶消化法分离ApoE（-/-）小鼠肝细胞,体外原代培养8天后,加入10%含药大鼠血清的培养液,48 h后以Flou-3和Jc-1为探针,应用激光共聚焦显微镜测量肝细胞内Ca^2＋浓度和线粒体膜电位.结果脉心康可明显降低ApoE（-/-）小鼠肝细胞内Ca^2＋浓度,与生理盐水及洛代他汀组比较差异有显著性（P＜0.01）;同时,脉心康可明显提高ApoE（-/-）小鼠肝细胞线粒体膜电位（P＜0.01）,脉心康的这两种作用无明显的剂量效应关系.结论脉心康可降低ApoE（-/-）小鼠肝细胞内Ca^2＋浓度,提高线粒体膜电位,从而调节脂代谢、对抗高脂血症及动脉粥样硬化的发生和发展.     

人参皂甙和维生素E防护牛视网膜色素上皮细胞脂质过氧化作用的实验研究

目的：探讨人参皂甙Ｒｂ１、Ｒｇ１及维生素Ｅ对氧化损伤后的牛视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ,ＲＰＥ）细胞的抗氧化作用。方法：建立牛ＲＰＥ细胞氧化损伤的模型,并分为正常对照组（１ｍｌＤＭＥＭ培养液）,次黄嘌呤（ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅ,ＨＸ）／黄嘌呤氧化酶（ｘａｎｔｈｉｎｅｏｘｉｄａｓｅ,ＸＯ）损伤组（ＨＸ／ＸＯ组）,Ｒｂ１组,Ｒｇ１组和维生素Ｅ组。利用硫代巴比妥酸比色法,检测各组ＲＰＥ细胞培养上清液中脂质过氧化（ｌｉｐｉｄｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ,ＬＰＯ）产物丙二醛（ｍａｌｏｎｄｉ－ａｌｄｅｈｙｄｅ,ＭＤＡ）含量。结果：ＨＸ／ＸＯ组ＭＤＡ与正常对照组相比有显著性差异（Ｐ＜０．０５）,Ｒｂ１、Ｒｇ１和维生素Ｅ组中两种药物浓度均能有效地降低ＭＤＡ的生成（Ｐ＜０．０５）。结论：人参皂甙和维生素Ｅ对ＲＰＥ细胞ＬＰＯ产物ＭＤＡ增多具有抑制作用     

渗出型老年性黄斑变性荧光素眼底血管造影和吲哚青绿血管造影的表现

目的 观察渗出型老年性黄斑变性患者荧光素眼底血管造影和吲哚青绿脉络膜血管造影的表现。方法 对20例渗出型老年性黄斑变性患者荧光素眼底血管造影和吲哚青绿脉络膜血管造影检查的资料进行了分析。结果荧光素眼底血管造影表现为隐匿性血管性色素上皮病变的12眼中有3眼在吲哚青绿脉络膜血管造影检查中表现为典型脉络膜新生血管，荧光素眼底血管造影表现为隐匿性血管性色素上皮脱离的3眼中有1眼吲哚青绿脉络膜血管造影表现为典型脉络膜新生血管。结论 荧光素眼底血管造影与吲哚青绿脉络膜血管造影检查在老年性黄斑变性研究中具有重要作用。     

灵杞黄斑颗粒含药血清预处理对人视网膜色素上皮细胞衰老的保护作用

目的探讨中药灵杞黄斑颗粒(LQHB)含药血清预处理对氧化应激诱导的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞衰老的保护作用。方法运用血清药理学方法制备不同剂量LQHB含药血清,以过氧化氢(H2O2)(150μmol/L)诱导建立体外人RPE细胞衰老模型,分为正常对照(NC)组、模型(M)组、模型+空白血清(MB)组、模型+低剂量药物血清(ML)组和模型+高剂量药物血清(MH)组,分别采用MTS法、流式细胞法检测各组RPE细胞的活力和周期,衰老相关-β-半乳糖苷酶试剂盒检测各组RPE细胞的衰老情况。相关统计分析采用SAS 9.13统计学软件。结果模型组RPE细胞活力较正常对照组明显降低,而LQHB含药血清组细胞活力虽低于正常对照组,但高于模型组。LQHB含药血清组停滞在G1期的RPE细胞较模型组少。模型组衰老相关-β-半乳糖苷酶活性染色阳性的细胞高达70%,而正常对照组仅占5%,LQHB含药血清组衰老细胞百分比介于两者之间,但不同剂量间无统计学意义的差异。结论 LQHB含药血清对氧化应激诱导的人RPE细胞衰老损伤具有一定的保护作用。     

补脾方药对脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体及细胞内[Ca2+]i作用的观察

目的:观察脾虚模型大鼠壁细胞胃泌素受体及受体后信号细胞内钙离子的变化,并观察补脾方药党参、白术、补中益气汤对其的影响。方法:大鼠壁细胞采用EDTA-Pronase酶法消化而来。胃泌素受体检测采用放射配基结合实验,壁细胞内[Ca2 ]i变化测定采用双波长荧光法。结果:大黄脾虚模型大鼠壁细胞胃泌素受体结合位点数有显著降低,经补脾方药治疗后有所恢复;同时脾虚模型壁细胞内静息钙离子浓度明显低于正常组,经胃泌素刺激后壁细胞内[Ca2 ]i有所升高,且脾虚模型升高幅度明显高于正常组,经治疗后此状态有所恢复,但无统计学意义。结论:脾虚证可能与胃泌素受体低表达相关,且壁细胞内钙离子处于低代谢状态,但对于胃泌素刺激的反应性增强,进而可能导致酸分泌敏感性相对增高,胃黏膜易损性增强。补脾方药对其有一定的调节作用。