中亚苦蒿醇提物大孔树脂30%乙醇洗脱部位免疫功能研究

目的探讨中亚苦蒿醇提物大孔树脂30%乙醇洗脱部位(AAEM-30%)对小鼠树突状细胞(DC)和免疫功能的作用。方法中亚苦蒿醇提物经AB-8型大孔树脂分离得到AAEM-30%,对其多糖、黄酮和萜类含量进行测定。体外通过流式细胞术检测AAEM-30%对DC表面分子分化簇(CD)40、CD80和CD86的表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测DC细胞因子白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达;体内通过不同给药剂量(50、100 mg/kg)和不同给药方式(皮下注射、腹腔注射、灌胃)检测AAEM-30%对ICR小鼠免疫功能的影响。结果AAEM-30%中多糖、黄酮、萜类的质量分数分别为24.30%、22.50%、28.19%。体外能够增强小鼠DC表面分子CD40、CD86以及DC细胞因子IL-6和TNF-α的表达(均P<0.001)。与对照组比较,3种给药方式的小鼠体质量比较差异均无统计学意义(均P>0.05);50、100 mg/kg AAEM-30%腹腔注射组的胸腺指数和50 mg/kg AAEM-30%灌胃组的脾脏指数均增加(均P<0.05)。100 mg/kg AAEM-30%腹腔注射组的CD19^(+)细胞数量增加(P<0.01),50 mg/kg AAEM-30%灌胃组的CD19^(+)细胞数量增加(P<0.05)。100 mg/kg AAEM-30%灌胃组的CD11b^(+)和CD11c^(+)数量增加(P<0.05)。灌胃和腹腔注射2种给药方式均能增加CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞的数量(均P<0.05)。结论AAEM-30%能够促进小鼠DC的成熟,增强小鼠免疫功能。     

小鼠Skint6基因突变对脾脏淋巴细胞亚群的影响北大核心CSCD

目的:制备Skint6基因突变小鼠模型,探究Skint6基因突变对小鼠脾脏各淋巴细胞亚群的影响。方法:利用CRISPR/Cas9技术定点突变小鼠Skint6基因,高分辨率熔解曲线(HRM)和DNA测序鉴定Skint6基因突变小鼠(B6-Skint6^(M));取6月龄B6-WT小鼠和B6-Skint6^(M)小鼠,qRT-PCR检测小鼠皮肤Skint6基因mRNA水平,考马斯亮蓝G-250法测定小鼠尿蛋白水平;计算小鼠体质量、脾脏指数和总细胞数并通过流式细胞术(FACS)检测其脾脏中各淋巴细胞亚群比例并计算细胞绝对数。结果:DNA测序结果显示B6-Skint6^(M)小鼠模型制备成功;qRT-PCR结果表明Skint6基因突变不影响皮肤Skint6 mRNA表达。B6-Skint6^(M)小鼠尿蛋白含量明显高于B6-WT小鼠(P<0.05)。Skint6基因突变对小鼠体质量、脾脏指数无显著影响(P>0.05)。FACS结果表明,与B6-WT组小鼠相比,B6-Skint6^(M)小鼠脾脏细胞数及淋巴细胞数明显增多(P<0.01);CD3^(+)T细胞比例及细胞绝对数明显上升(P<0.01,P<0.05),CD19^(+)B细胞比例下降(P<0.05);CD3^(+)T淋巴细胞亚群中CD8^(+)T细胞比例降低(P<0.01),双阴性T细胞(DNeg)比例及细胞绝对数明显上升(P<0.01,P<0.05);CD4^(+)CD69^(+)活化T细胞比例及细胞绝对数上升(P<0.05,P<0.01),CD4^(+)CD44^(hi)T细胞比例及细胞绝对数上升(P<0.01);Treg比例及细胞绝对数明显下降(P<0.001);Tfh细胞比例及细胞绝对数上升(P<0.05);Breg比例及细胞绝对数上升(P<0.05);CD3^(+)T淋巴细胞亚群中非典型CD3^(+)B220^(+)T细胞比例及其细胞绝对数增高(P<0.001)。结论:Skint6基因突变不影响皮肤中Skint6 mRNA表达,但可影响小鼠脾脏淋巴细胞亚群比例、细胞绝对数和活化状态,从而引起小鼠免疫功能紊乱。     

苦参素减轻三硝基苯磺酸诱导结肠炎大鼠的炎症损伤及其机制

目的研究苦参素对三硝基苯磺酸/乙醇混合溶液诱导的结肠炎大鼠中CD11c~+ CD103~+ E-cadherin~+细胞的调节作用。方法将40只SD成熟雄性大鼠随机分为正常组、模型组、苦参素组(20 mg/kg)以及美沙拉嗪组(150 mg/kg)。除去正常组,其余组使用三硝基苯磺酸/乙醇混合溶液建立大鼠结肠炎模型,模型建立后给药治疗7 d并每天称量大鼠体质量。给药结束后剪取大鼠结肠,测量结肠长度并称其质量,计算结肠质量指数, HE染色检测结肠病变情况。ELISA检测结肠组织白细胞介素10(IL-10)、 IL-2、细胞间黏附分子1(ICAM-1)的水平,流式细胞术检测结肠中CD11c~+ CD103~+E-cadherin~+细胞频数。结果与模型组比较,苦参素组大鼠体质量明显增加,结肠长度显著增加,结肠质量及结肠质量指数显著降低,且苦参素治疗组结肠黏膜损伤明显减轻, IL-2与ICAM-1水平显著降低, IL-10和CD11c~+ CD103~+ E-cadherin~+细胞水平明显增加。结论苦参素通过调节IL-10、 IL-2、 ICMA-1水平、增加CD11c~+ CD103~+ E-cadherin~+细胞数量,减轻大鼠结肠炎症。     

红芪多糖介导STAT3通路抑制卵巢癌小鼠肿瘤细胞免疫逃逸北大核心CSCD

目的探讨红芪多糖(HPS)介导信号转导子与转录激活子3(STAT3)通路抑制卵巢癌小鼠肿瘤细胞免疫逃逸的作用。方法取40只Balb/c小鼠通过皮下注射卵巢癌SKOV3细胞建立卵巢癌小鼠模型,将建模成功的小鼠随机分为模型组、米非司酮(MIF)组、HPS组、HPS^(+)MIF联合组。HPS组灌胃给予HPS(200 mg·kg^(-1)·d^(-1)),MIF组灌胃给予MIF(40 mg·kg^(-1)·d^(-1)),HPS^(+)MIF联合组灌胃给予HPS(200 mg·kg^(-1)·d^(-1))和MIF(40 mg·kg^(-1)·d^(-1)),模型组灌胃给予等量无菌生理盐水,连续干预14 d。观察记录各组小鼠瘤体积、瘤质量并计算抑瘤率;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测小鼠外周血白介素-2(IL-2)、白介素-10(IL-10)、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平;流式细胞术检测各组小鼠肿瘤组织中CD4^(+)、CD4^(+)CD25^(+)叉头框蛋白P3(^(+)Foxp3^(+))调节性T细胞(Treg)水平;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组小鼠肿瘤组织STAT3、程序性死亡配体-1(PD-L1)、程序性死亡受体1(PD-1)信使核糖核糖酸(mRNA)表达;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠肿瘤组织STAT3、PD-L1、PD-1蛋白表达。结果与模型组比,MIF组、HPS组、HPS^(+)MIF联合组小鼠瘤体积和瘤质量、外周血IL-2、IL-10、TGF-β1水平以及肿瘤组织CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg细胞水平降低,肿瘤组织中CD4^(+)细胞水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与MIF组和HPS组比,HPS^(+)MIF联合组小鼠瘤体积和瘤质量、外周血IL-2、IL-10、TGF-β1水平以及肿瘤组织CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg细胞水平降低,肿瘤组织中CD4^(+)细胞水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比,MIF组、HPS组、HPS^(+)MIF联合组小鼠肿瘤组织STAT3、PD-L1、PD-1 mRNA及蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与MIF组和HPS组比,HPS^(+)MIF联合组小鼠肿瘤组织STAT3、PD-L1、PD-1 mRNA及蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论HPS对卵巢癌小鼠肿瘤细胞免疫逃逸有一定抑制作用,推测可能是通过介导STAT3信号通路抑制STAT3、PD-L1、PD-1的表达实现上述作用的。     

CD4^(+)T细胞诱导性缺失小鼠模型构建北大核心CSCD

目的构建白喉毒素诱导的CD4^(+)T细胞特异性缺失小鼠(Cd4-DTR)模型。方法利用CRISPR/Cas9技术,通过同源重组的方式,在C57BL/6小鼠Cd4基因终止密码子位点定点插入IRES-DTR表达元件。流式细胞术检测未经处理的Cd4-DTR小鼠脾和硬脑膜CD4^(+)T细胞数量及比例与野生小鼠有无差异,单次注射不同剂量白喉毒素后CD4^(+)T细胞的减少程度以及CD4^(+)T细胞缺失的持续时间。结果鼠尾PCR鉴定证明Cd4-DTR模型构建成功,未经处理的Cd4-DTR小鼠脾中的CD4^(+)T细胞数量及比例低于野生小鼠,但硬脑膜中没有差异。单次注射75 mg/kg白喉毒素后Cd4-DTR小鼠的脾和硬脑膜中的CD4^(+)T细胞数量及比例都大幅度下降且都有显著性差异(P<0.01),单次白喉毒素注射后脾脏中的CD4^(+)T细胞缺失持续时间超过1周。利用3%DSS诱导小鼠急性结肠炎,结果显示Cd4-DTR小鼠肠道的病理改变弱于对照小鼠。结论成功构建Cd4-DTR小鼠模型,为CD4^(+)T细胞功能研究提供了新的小鼠模型。缺失CD4^(+)T细胞可能减轻DSS诱导的小鼠急性结肠炎。     

早产小鼠肠道微生物群变化对外周血CD4^(+)T细胞协同刺激分子表达的影响北大核心CSCD

目的:探讨早产小鼠肠道定植微生物群丰富度、多样性及物种丰度改变对外周血CD4^(+)T细胞协同刺激分子CD28、CD278、CD152、CD279、CD272表达的影响。方法:常乐康灌胃获得早产组模型,16S rRNA基因高通量测序检测粪便微生物丰富度、多样性及丰度,流式细胞术检测外周血CD4^(+)T细胞协同刺激分子表达。结果:①实验组和足月组P21肠道菌群Alpha多样性Sobs、Chao、Ace、Shannon指数均高于早产组,Simpson指数低于早产组;检出的24个菌属有组间统计学意义;②P7:实验组外周血CD4^(+)CD28^(+)、CD152^(+)、CD272^(+)T细胞百分比显著低于早产组,而CD4^(+)CD278^(+)和CD279^(+)T细胞百分比显著高于早产组。P14:实验组外周血CD4^(+)CD28^(+)、CD152^(+)、CD279^(+)T细胞百分比均显著高于早产组和足月组;CD4^(+)CD272^(+)T细胞的百分比及CD272的表达均低于早产组。P21:实验组外周血CD4^(+)CD28^(+)、CD272^(+)T细胞百分比及CD28、CD272表达量均高于早产组。结论:早产小鼠肠道定植微生物群丰富度、多样性及物种丰度的改变在不同时期可能通过上调/下调CD4^(+)T细胞共刺激分子CD28、CD272和CD279表达,在早产小鼠免疫系统的发育和成熟中发挥重要作用。     

山柰酚调控Wnt/β-catenin途径对前列腺癌小鼠T细胞的影响及作用机制北大核心CSCD

目的:探究山柰酚调控Wnt/β-catenin途径对前列腺癌小鼠T细胞的影响及作用机制。方法:皮下注射人去势抵抗性前列腺癌细胞系PC3构建前列腺癌小鼠模型。将30只模型小鼠随机分为对照组、山柰酚低剂量组和山柰酚高剂量组(n=10)。山柰酚灌胃干预,剂量分别为15 mg/kg和30 mg/kg,检测肿瘤生长情况。Western blot检测增殖和转移相关蛋白Cyclin D1、Ki67、MMP2和MMP9表达,TUNEL染色检测细胞凋亡。比较各组Wnt/β-catenin通路的转录和翻译水平。流式细胞术和ELISA检测各组CD4^(+)、CD8^(+)、IFN-γ和IL-2水平。结果:三组小鼠各项指标比较差异有统计学意义(P<0.05)。山柰酚低剂量组和山柰酚高剂量组的肿瘤体积、质量、Cyclin D1、Ki67、MMP2、MMP9、Wnt3a、β-catenin mRNA和蛋白水平均显著低于对照组,凋亡指数均显著高于对照组(P<0.05)。且山柰酚高剂量组的肿瘤体积[(180.56±21.56)mm3]、质量[(0.21±0.03)g]、Cyclin D1、Ki67、MMP2、MMP9、Wnt3a、β-catenin mRNA和蛋白水平均显著低于山柰酚低剂量组,凋亡指数[(17.43±1.89)%]显著高于山柰酚低剂量组[(10.05±1.05)%](P<0.05)。三组小鼠的CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、IFN-γ和IL-2水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。山柰酚低剂量组和高剂量组中CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、IFN-γ、IL-2水平均显著高于对照组(P<0.05)。山柰酚高剂量组中CD4^(+)[(23.81±1.36)%]、CD4^(+)/CD8^(+)(1.51±0.13)、IFN-γ[(9.15±1.12)ng/ml]和IL-2[(1.78±0.11)ng/ml]水平均显著高于山柰酚低剂量组[(19.45±1.24)%、1.20±0.11、(7.23±0.87)ng/ml,(1.40±0.09)ng/ml,P<0.05]。结论:山柰酚可能通过调控Wnt/β-catenin途径抑制前列腺癌小鼠模型的肿瘤生长和转移,并缓解免疫抑制状态。     

双氢青蒿素通过调节TGF-β/Smad通路改善小鼠接触性皮炎北大核心CSCD

目的:探讨双氢青蒿素(DHA)对小鼠接触性皮炎(CHS)的抑制作用及机制。方法:0.5%2,4-二硝基氟苯(DNFB)涂抹小鼠腹部连续2 d致敏,5 d后用0.25%DNFB涂抹左耳发敏,右耳涂抹丙酮和橄榄油混合液作为对照,于致敏前2 d灌胃给予DHA处理。HE染色观察小鼠皮肤组织病理学变化,免疫组化染色观察小鼠耳部皮肤CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞浸润情况,测定脾脏指数。ELISA检测血清IL-6、IFN-γ、IL-10、TGF-β和单核细胞趋化蛋白(MCP)-1变化,Western blot检测皮肤Smad2和Smad3磷酸化水平,流式细胞术检测皮肤和脾脏免疫细胞浸润情况。结果:DHA可显著改善CHS小鼠耳朵肿胀、皮肤红斑及脾脏指数(P<0.05)。组织病理学结果显示,DHA处理可明显抑制CHS小鼠皮肤增厚和炎症细胞浸润。流式细胞术结果显示,DHA处理后皮肤和脾脏中浸润的CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、树突状细胞和巨噬细胞显著减少(P<0.05)。ELISA结果显示,相对于模型组,DHA处理组血清IL-6、IFN-γ、TGF-β和MCP-1水平明显降低(P<0.05)。Western blot结果表明DHA处理显著抑制皮肤Smad2和Smad3磷酸化水平(P<0.05)。结论:DHA通过减少免疫细胞浸润和调节TGF-β/Smad信号传导抑制CHS,为治疗CHS提供了新的药物选择和实验依据。     

NKT细胞在MRSA感染性肺炎中作用的初步研究北大核心CSCD

目的:初步探讨NKT细胞在耐甲氧西林金葡菌(MRSA)感染性肺炎模型中的作用。方法:MRSA经鼻黏膜感染C57BL/6野生型(WT)小鼠和CD1d^(-/-)小鼠。观察小鼠生存率,检测肺组织中细菌载量,ELISA检测肺组织中细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-17、IL-6含量,流式细胞术检测肺组织中CD3^(+)CD8^(+)T细胞、NK细胞和NKT细胞百分比。结果:MRSA致死剂量感染5 d,WT小鼠生存率显著低于CD1d^(-/-)小鼠(46.2%vs 90.0%,P<0.05)。感染12~48 h,WT小鼠肺组织中细菌载量显著高于CD1d^(-/-)小鼠(P<0.01);WT小鼠肺组织中TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-17含量较CD1d^(-/-)小鼠明显增高(P<0.01)。MRSA感染24 h,WT小鼠肺组织中NKT细胞、NK细胞百分比显著高于CD1d^(-/-)小鼠(P<0.01),而CD3^(+)CD8^(+)T细胞百分比低于CD1d^(-/-)小鼠(P<0.01)。结论:在MRSA肺炎中,NKT细胞被激活,从而加重肺部炎症反应,降低生存率,减缓细菌清除。     

人参皂苷衍生物AD-1对CD4^(+)T细胞亚群的调控及对DSS诱导的实验性结肠炎小鼠的影响北大核心CSCD

目的:探讨新型人参皂苷衍生物AD-1对体外分化CD4^(+)T细胞亚群的影响及对DSS诱导的实验性结肠炎小鼠CD4^(+)T细胞亚群的调控作用。方法:采用磁珠阴性选择法获得正常小鼠幼稚CD4^(+)T细胞,定向分化为Th1、Th2、Th17细胞、Treg,流式细胞术检测AD-1对其分化的影响。3%DSS三次循环法建立小鼠实验性结肠炎模型,AD-1药物干预后,流式细胞术、HE染色检测结肠、脾脏、肠系膜淋巴结中Th1、Th2、Th17细胞、Treg所分泌的细胞因子和特异性转录因子。结果:细胞活化后,早期标志物CD69无显著变化;AD-1下调Th1和Th17细胞分泌的细胞因子IFN-γ和IL-17A表达,上调Th2细胞分泌的细胞因子IL-4和Treg转录因子Foxp3及表面标志物CD25表达。AD-1可通过下调脾脏和肠系膜淋巴结中Th1和Th17细胞表达及上调Th2和Treg表达改善DSS诱导的小鼠实验性结肠炎。结论:AD-1对CD4^(+)T细胞活化无影响,但可抑制Th1和Th17细胞分化,促进Th2细胞和Treg分化,同时通过调节CD4^(+)T细胞亚群改善DSS诱导的小鼠实验性结肠炎。     

CD4^(+)/CD8^(+)和自噬蛋白Beclin-1与子宫内膜容受性改变和不孕发生相关性探究北大核心CSCD

目的:研究CD4^(+)/CD8^(+)和自噬蛋白Beclin-1与子宫内膜容受性改变和不孕发生的相关性。方法:选取2019年2月至2021年4月青海省人民医院收治的137例不孕症患者作为研究对象,另选同期体检的60例健康女性作为对照。流式细胞术检测外周血CD4^(+)、CD8^(+)水平,并计算CD4^(+)/CD8^(+);免疫组化染色法检测Beclin-1表达;阴道彩色多普勒超声诊断仪检测子宫内膜容受性(血流阻力指数、搏动指数、子宫内膜厚度与容积)变化。Spearman分析CD4^(+)/CD8^(+)、Beclin-1阳性表达与子宫内膜容受性相关指标的关系。结果:不孕组CD4^(+)水平、CD4^(+)/CD8^(+)高于健康组,CD8^(+)水平低于健康组(P<0.05)。健康组Beclin-1阳性表达58例,不孕组阳性表达101例,不孕组阳性率(73.72%)低于健康组(96.67%,P<0.05)。不孕组血流阻力指数、搏动指数高于健康组,子宫内膜厚度与容积低于健康组(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,CD4^(+)/CD8^(+)与血流阻力指数、搏动指数呈正相关,与子宫内膜厚度与容积呈负相关(P<0.05);Beclin-1阳性表达与血流阻力指数、搏动指数呈负相关,与子宫内膜厚度与容积呈正相关(P<0.05)。结论:不孕症女性外周血CD4^(+)/CD8^(+)显著升高,自噬蛋白Beclin-1阳性表达下调,可能与机体子宫内膜容受性变化与不孕发生密切相关。     

mTORC1抑制剂通过影响肿瘤浸润T淋巴细胞生物学活性抑制KRAS基因突变型结肠癌的进展北大核心CSCD

目的研究mTORC1抑制剂通过肿瘤浸润T淋巴细胞生物学活性影响KRAS基因突变型结肠癌的进展。方法建立KRAS突变型结肠癌小鼠模型,将小鼠随机分为4组:对照组,KRAS突变组,mTORC1抑制剂组和KRAS突变+mTORC1抑制剂组;流式细胞术检测肿瘤组织中肿瘤浸润淋巴T细胞的数量;ELISA法检测小鼠血清中IL-2、IL-10、IFN-γ、TGF-β的表达情况;另外构建KRAS突变型结肠癌细胞系HT29,将细胞分为4组:HT-29组,KRAS突变组,mTORC1抑制剂组和KRAS突变+mTORC1抑制剂组;CCK-8法检测结肠癌细胞的增殖情况;流式细胞术检测其凋亡情况;Western blot法检测p53、Bcl-2、Bax、cleaved caspase3蛋白的表达水平。结果与KRAS突变组结肠癌小鼠相比较,KRAS突变+mTORC1抑制剂组小鼠肿瘤组织中CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞数量增加(P<0.01,P<0.001),Foxp3^(+)Treg细胞的数量减少(P<0.0001),小鼠血清中IL-2、IFN-γ的水平升高(P<0.0001,P<0.001),IL-10、TGF-β的水平降低(均P<0.001);另外,与KRAS突变型HT29组细胞相比,KRAS突变+mTORC1抑制剂组细胞的增殖能力减弱(P<0.05),并且凋亡情况显著提高(P<0.0001),并且Bcl-2蛋白水平降低(P<0.001),Bax、cleaved caspase3、p53蛋白水平显著升高(P<0.01,P<0.001,P<0.001)。结论mTORC1抑制剂通过影响肿瘤浸润淋巴细胞的分布情况以及通过p53/caspase相关通路抑制KRAS基因突变型结肠癌的进展。     

姜黄素对结肠炎小鼠脾脏树突状细胞亚群及表面共刺激分子的调节作用

目的探讨姜黄素对结肠炎小鼠脾脏树突状细胞(DC)亚群及其表面活性分子的影响。方法雄性C57小鼠40只,随机分成正常组、200 mg/kg姜黄素组,300 mg/kg美沙拉嗪对照组。三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇法制备结肠炎小鼠模型。给药7 d后,处死小鼠,分离结肠测量其长度并称取其质量,取小鼠脾脏并分离DC,采用流式细胞术检测结肠炎小鼠CD205~+、CD4~+CD205~+、CD8~+CD205~+DC和表面分子主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)、Toll样受体2(TLR2)、TLR4、CD83的表达情况。同时观察其结肠病理损伤。结果经姜黄素治疗后,与模型组相比,结肠炎小鼠结肠质量指数明显下降,而结肠长度延长,病理性损伤明显缓解,同时其脾脏CD205~+、CD4~+CD205~+、CD8~+CD205~+DC亚群数量下降及其TLR2、TLR4、MHCⅡ的表达明显抑制,而CD83表达水平则显著增高。结论姜黄素治疗小鼠结肠炎可与调节结肠炎小鼠DC亚型比例及其表面共刺激分子的表达有关。     

新生期肺炎链球菌肺炎对肺部树突状细胞和Foxp3~+Tregs、Th17表达的影响

目的研究新生期肺炎链球菌肺炎对肺部树突状细胞、Foxp3~+Tregs和Th17的影响。方法清洁级新生Balb/c鼠(7日龄)随机分为对照组(mock组)及肺炎链球菌肺炎组(S.pneumonia组)。S.pneumonia组给予鼻腔滴注肺炎链球菌,对照组给予鼻腔滴注等量PBS。流式细胞技术检测肺炎链球菌感染后第2、5、7和14天肺组织中CD103~+DCs、CD11b~+DCs、DCs表面共刺激分子CD40/CD80/CD86及Foxp3~+Tregs和IL-17~+CD4~+T细胞的表达水平。结果新生期肺炎链球菌肺炎后肺组织DCs表面CD40、CD86表达增强(P0.05),CD103~+DCs、Foxp3~+Tregs水平较对照组显著减少(P0.05),CD11b~+DCs及IL-17~+CD4~+T细胞较对照组显著增高(P0.01)。对照组肺部CD103~+DCs和Foxp3~+Treg表达呈正相关(P0.01,r=0.593),而新生期感染肺炎链球菌后CD103~+DCs和Foxp3~+Treg表达无相关性(P0.05,r=0.015)。结论新生期肺炎链球菌肺炎抑制肺部CD103~+DCs和Foxp3~+Tregs发育,促进CD11b~+DCs及Th17表达,影响固有免疫及适应性免疫应答,可能同后续慢性气道炎症及哮喘形成相关。     

生长分化因子11对鼻咽癌转移抑制及其放射处理后免疫功能的保护作用北大核心CSCD

目的:探究生长分化因子11(GDF11)对鼻咽癌转移的影响,及其对裸鼠鼻咽癌移植瘤模型放射处理后免疫功能的作用。方法:使用不同浓度的GDF11(10、50、100μg/L)处理鼻咽癌5-8F细胞,以正常培养的5-8F细胞作为对照组,CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期分布,Transwell实验检测细胞迁移与侵袭,细胞划痕实验检测划痕愈合情况。裸鼠左后肢皮下接种5-8F细胞悬液构建鼻咽癌移植瘤模型,将建模成功的15只裸鼠随机分为3组,每组5只,并进行相应处理:6 Gy组裸鼠给予6 Gy局部照射,1次/6 d,共3次,同时腹腔注射生理盐水;6 Gy^(+)GDF11组裸鼠给予6 Gy局部照射,1次/6 d,共3次,同时腹腔注射0.5 mg/kg GDF11;对照组裸鼠不给予照射,腹腔注射生理盐水。每隔2 d测量裸鼠移植瘤体积,18 d末次照射给药结束后,麻醉裸鼠,腹主动脉取血,处死裸鼠取其肿瘤、淋巴结、胸腺、脾脏、肺、肝、肾组织,电子天平称量肿瘤、胸腺、脾脏组织重量,HE染色观察肺、肝、肾组织病理学变化,全自动动物血液分析仪测定血常规指标红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血小板(PLT),计算胸腺指数和脾脏指数,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群CD4^(+)、CD8^(+)表达比例。结果:与对照组5-8F细胞比较,经过10、50、100μg/L GDF11处理48 h、72 h、96 h后细胞增殖活性下降,细胞发生G0/G1期阻滞,细胞迁移数目和侵袭数目减少,细胞划痕愈合率降低,差异均具有统计学意义(P<0.01);与对照组裸鼠比较,在处理6 d、9 d、12 d、15 d、18 d后6 Gy组和6 Gy^(+)GDF11组的裸鼠肿瘤体积变小,18 d测量发现裸鼠肿瘤块和质量减小,均未发生淋巴结转移,RBC、PLT和WBC降低,T淋巴细胞亚群CD4^(+)、CD8^(+)比例降低,差异均具有统计学意义(P<0.01);相较于6 Gy组裸鼠,6 Gy^(+)GDF11组的裸鼠肿瘤体积变小,18 d的裸鼠肿瘤块和质量减小,RBC、PLT和WBC水平升高,T淋巴细胞亚群CD4^(+)、CD8^(+)比例升高,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论:GDF11能够抑制鼻咽癌细胞的生长与转移,抑制裸鼠鼻咽癌移植瘤模型的肿瘤生长,并在放射处理后发挥裸鼠免疫功能的保护作用。     

肺炎链球菌肺炎对肺部树突状细胞及CD4~+T细胞的影响

目的探讨肺炎链球菌肺炎对Balb/c小鼠肺部树突状细胞及CD4~+T细胞的影响。方法 6~8周Balb/c小鼠随机分为对照组及肺炎链球菌感染组,流式细胞术检测肺炎链球菌感染后2 d、5 d肺组织中CD103~+DCs、CD11b~+DCs、p DCs及CD4~+T细胞亚类水平。结果肺炎链球菌肺炎致肺组织CD103~+DCs及p DCs水平显著增高,与对照组比较差异有统计学意义(P0.01),而肺组织CD11b~+DCs水平显著低于对照组。肺炎链球菌肺炎促进肺组织IL-17A~+CD4~+T细胞和Foxp3~+Tregs表达,与对照组比较,感染后2 d、5 d差异均有统计学意义(P0.05),随着感染控制,Foxp3~+Tregs表达水平回降,感染后5 d Foxp3~+Tregs水平显著低于感染后2 d水平(7.3%±0.41%vs 9.38%±1.34%,P0.01)。肺炎链球菌肺炎对肺部Th2表达水平无显著影响,感染后5 d IFN-γ~+CD4~+T细胞水平显著升高,与对照组、感染后2 d组比较,差异有统计学意义(P0.01)。结论肺炎链球菌肺炎促进肺组织CD103~+DCs、p DCs表达,诱导CD4~+Th17、Tregs细胞分化发育。     

泛素调控蛋白A20对慢性乙肝患者单核细胞活性的影响北大核心CSCD

目的:观察泛素调控蛋白A20在慢性乙肝患者外周血中的变化及其对CD14^(+)单核细胞功能的影响。方法:选取慢性乙肝患者47例和健康对照者26例,纯化外周血CD14^(+)单核细胞和CD4^(+)T细胞,流式细胞术检测CD14^(+)单核细胞中A20水平,实时定量PCR检测CD14^(+)单核细胞中A20 mRNA相对表达量。A20 siRNA或对照siRNA转染慢性乙肝患者纯化的CD14^(+)单核细胞,ELISA检测上清中炎症细胞因子水平,实时定量PCR检测FasL和TRAIL mRNA相对表达量。CD14^(+)单核细胞与HepG2.2.15细胞共培养,检测CD14^(+)单核细胞诱导靶细胞死亡的比例。CD14^(+)单核细胞与CD4^(+)T细胞共培养,流式细胞术检测CD4^(+)T细胞分泌IFN-γ和IL-17的比例。结果:慢性乙肝患者外周血CD14^(+)单核细胞中A20^(+)细胞比例高于健康对照者(P=0.0004),慢性乙肝患者外周血CD14^(+)单核细胞中A20平均荧光强度和A20 mRNA相对表达量亦高于健康对照者(P<0.001)。A20 siRNA转染慢性乙型肝炎患者纯化的CD14^(+)单核细胞后,分泌炎症细胞因子水平高于未转染细胞和对照siRNA转染细胞(P<0.05),但FasL和TRAIL mRNA未见明显变化(P>0.05)。A20 siRNA转染的CD14^(+)单核细胞诱导靶细胞死亡的比例高于未转染细胞和对照siRNA转染细胞(P<0.05),诱导CD4^(+)T细胞分泌IFN-γ和IL-17的比例亦高于未转染细胞和对照siRNA转染细胞(P<0.05)。结论:慢性乙肝患者CD14^(+)单核细胞中高表达的A20有抑制细胞毒性及CD4^(+)T细胞活化的作用,可能与导致乙型肝炎病毒感染慢性化相关。     

PD-L1阻断对脓毒症小鼠T淋巴细胞凋亡及单核细胞功能的影响北大核心CSCD

目的:探讨程序性死亡受体-1配体(PD-L1)阻断对脓毒症小鼠T淋巴细胞凋亡及单核细胞功能的影响。方法:30只8~10周龄清洁级C57BL/6雄性小鼠随机分为3组:sham组、模型组、PD-L1拮抗组,每组10只,模型组、PD-L1拮抗组小鼠采用盲肠结扎穿孔手术(CLP)构建脓毒症小鼠模型,sham组小鼠暴露盲肠后即进行伤口缝合,不结扎。PD-L1拮抗组小鼠术后腹腔注射抗PD-L1抗体(50μg/只),每6 h注射1次,连续4次,sham组和模型组小鼠腹腔注射等剂量生理盐水。流式标记法检测各组小鼠CD3+T细胞表面PD-1和单核细胞CD11b+表面PD-L1表达,HE染色观察组织病理学改变,电镜下观察脾脏和胸腺超微病理结构改变,TUNEL染色检测脾脏和胸腺组织细胞凋亡、流式细胞术检测胸腺组织T淋巴细胞凋亡,ELISA检测Caspase-3和TNF-α、IL-6及IL-10表达。结果:与sham组相比,模型组小鼠CD3^(+)、CD11b^(+)表面PD-1和PD-L1表达、脾脏和胸腺组织细胞凋亡率、T淋巴细胞凋亡率、Caspase-3、TNF-α、IL-6、IL-10蛋白表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,PD-L1拮抗组小鼠CD3^(+)、CD11b^(+)表面PD-1和PD-L1表达、脾脏和胸腺组织细胞凋亡率、T淋巴细胞凋亡率、Caspase-3、TNF-α、IL-6蛋白表达明显降低,IL-10表达明显升高(P<0.05)。结论:PD-L1阻断可有效降低脓毒症小鼠T细胞凋亡率,改善其单核细胞功能。     

瘤内注射MIP-3α对小鼠肝癌生长抑制作用的研究

目的:探讨瘤内注射巨噬细胞炎症蛋白-3α(macrophage inflammatory protein-3α,MIP-3α)能否趋化外周树突状细胞(Dendritic cells,DCs)至肿瘤组织内,诱导特异性免疫应答。方法:成功建立小鼠皮下肝癌模型后随机分为3组,第10天起分别向MIP-3α治疗组、PBS对照组的小鼠皮下肿瘤内注射MIP-3α溶液及PBS,空白对照组小鼠不予任何处理。20天后取肿瘤组织,免疫组化法检测肿瘤内DCs、CD4+、CD8+细胞浸润情况,流式细胞术检测肿瘤内DCs浸润数量及其表型。另外,每组各10只小鼠持续观察,用于绘制肿瘤生长曲线并观察生存时间。结果:①MIP-3α治疗组的小鼠肿瘤内浸润的CD4+、CD8+细胞及DCs数量均显著高于其他两组。②MIP-3α治疗组小鼠肿瘤内浸润性DCs的CD80、CD86表达率显著高于其他两组(P<0.05)。③MIP-3α治疗组小鼠肿瘤生长速率显著低于对照组(P<0.001),生存时间较对照组明显延长(P<0.05)。结论:①瘤内注射MIP-3α可在小鼠肝癌病灶内趋化、募集外周的树突状细胞,使其摄取并提呈肿瘤抗原,有效诱导针对肝癌细胞的特异性免疫应答。②MIP-3α在小鼠皮下肝癌模型的局部微环境下可能具有促进树突状细胞成熟的作用。