近红外照射下金纳米链及Anti-EGFR/Au共轭物对人喉癌Hep-2细胞的抑制

背景：金纳米颗粒在近红外激光照射下对肿瘤细胞具有杀伤效应。目的：评价金纳米链及anti-EGFR/Au共轭物近红外照射对人喉癌Hep-2细胞的生长抑制和热杀伤作用。方法：取对数生长期的Hep-2细胞,随机分为空白对照组、单纯照射组、金纳米链照射组和anti-EGFR/Au照射组,加入不同培养液后,各照射组进行近红外激光照射。观察照射后细胞凋亡情况和凋亡程度。结果与结论：倒置显微镜下观察显示空白对照组和单纯照射组Hep-2细胞仍具有活性,金纳米链照射组有明显的损伤,但anti-EGFR/Au照射组损伤程度更重。流式细胞分析显示金纳米链照射组及anti-EGFR/Au靶向照射组均有不同程度的Hep-2细胞凋亡,且照射时间越长,凋亡细胞越多。说明金纳米链近红外照射可以杀伤人喉鳞癌Hep-2细胞,anti-EGFR/Au靶向照射比金纳米链照射效果更好,并呈现一定照射时间的依赖性。     

金纳米链及抗表皮生长因子受体抗体/金纳米链共轭物近红外热疗可启动细胞凋亡通路

背景:金纳米颗粒在近红外激光照射下对肿瘤细胞具有杀伤效应。目的:评价金纳米链及抗表皮生长因子受体抗体/金纳米链共轭物近红外热疗对人喉癌Hep-2细胞的热杀伤作用并探讨其凋亡通路。方法:取生长良好的人喉鳞癌Hep-2细胞,分别应用金纳米链或抗表皮生长因子受体抗体/金纳米链共轭物溶液进行干预,在此基础上应用8W/cm2近红外激光(808nm)照射6min,以单独应用1640培养液培养及单独给予近红外激光照射的细胞作对照。结果与结论:透射电镜观察发现,金纳米链热疗后Hep-2细胞有明显的损伤,抗表皮生长因子受体抗体/金纳米链热疗后细胞的损伤程度最重。Westernblot检测显示,金纳米链热疗和抗表皮生长因子受体抗体/金纳米链热疗后细胞热休克蛋白70和促凋亡蛋白Bax表达明显增高,而抑凋亡蛋白Bcl-2表达明显降低。说明金纳米链及抗表皮生长因子受体抗体/金纳米链共轭物近红外热疗可通过启动细胞凋亡通路杀伤人喉癌Hep-2细胞。     

薏苡仁酯对人喉癌Hep-2细胞增殖和凋亡的作用

目的:观察不同浓度薏苡仁酯对人喉癌Hep-2细胞增殖和凋亡的作用。方法:实验于2005-12/2006-04在锦州医学院药理教研室完成。选用人喉癌细胞株Hep-2(北京同仁耳鼻喉研究所),培养于含体积分数为0.1的胎牛血清的RPMI1640培养基中,置37℃,体积分数为0.05的CO2孵箱中培养并传代。实验分4组,每8孔细胞为1组。对照组(加入等体积的无菌蒸馏水),5,10,20μmol/L薏苡仁酯(商品名:康莱特注射液,浙江康莱特药业有限公司,规格100g/L)组。应用四甲基偶氮唑蓝法观察不同浓度薏苡仁酯对Hep-2细胞增殖的抑制情况,测定其吸光度值;采用流式细胞术方法观察不同浓度薏苡仁酯对Hep-2细胞凋亡率的改变。结果:①四甲基偶氮唑蓝法测定:5,10,20μmol/L薏苡仁酯组作用48h后吸光度值(A540)明显低于对照组(分别为1.673±0.015,1.362±0.148,1.019±0.036,1.807±0.042,t=1.10,P<0.01),且呈现一定的浓度依赖性,各个剂量组之间的差异也存在显著性。②流式细胞仪测定:5,10,20μmol/L薏苡仁酯组作用48h后抑制Hep-2细胞的细胞凋亡率高于对照组,并能诱导Hep-2细胞凋亡,且呈浓度依赖性[(6.49±0.27)%,(11.33±0.12)%,(13.56±0.47)%,(0.08±0.06)%,t=16.27,P<0.05]。结论:薏苡仁酯可促进喉癌Hep-2细胞增殖抑制和凋亡,并呈浓度依赖性,为薏苡仁酯用于喉癌临床治疗提供了部分依据。     

铁碳纳米粒介导顺铂对喉癌细胞敏感性的研究

背景：应用纳米技术对化疗药物进行靶向性改进是增加肿瘤对化疗药物敏感性的有效手段之一。目的：观察铁碳纳米粒搭载顺铂对喉癌Hep-2细胞的抑制作用及对细胞Caspase3,SurvivinmRNA表达的影响。方法：分别应用铁碳纳米粒和（或）顺铂的生理盐水分散液干预喉癌Hep-2细胞,以生理盐水干预的细胞作为对照。结果与结论：MTT检测结果显示,顺铂可明显抑制Hep-2细胞的生长,与铁碳纳米粒联合应用对Hep-2细胞的抑制作用更强;表现为细胞生长不贴壁,增殖缓慢,出现凋亡征象。RT-PCR结果显示,共培养5d,铁碳纳米粒和顺铂联合及顺铂单独处理的Hep-2细胞Caspase3mRNA水平明显增高,而SurvivinmRNA水平明显降低,以铁碳纳米粒和顺铂联合作用效果更明显,而单独应用铁碳纳米粒对Hep-2细胞无影响。提示铁碳纳米粒搭载顺铂能够增加喉癌Hep-2细胞对顺铂的敏感性,提高药物化疗效果。     

姜黄素诱导Hep-2细胞凋亡及其对细胞周期各时相的影响

目的探讨姜黄素对Hep-2（人喉癌细胞株）细胞诱导分化机制，为喉癌治疗提供理论依据。方法应用MTT（塞唑兰）比色法和流式细胞仪检测Hep-2细胞增殖抑制率及细胞周期各时相的变化和凋亡率，并通过电子显微镜观察经姜黄素诱导分化后的亚细胞结构改变。结果姜黄素对Hep-2细胞增殖有明显的抑制作用，且呈剂量依赖性，流式细胞仪分析，G1期细胞增多，S期细胞减少，C2／M期细胞相对增多，亚细胞结构、细胞空化，染色质趋边凝集。结论姜黄素能够抑制Hep-2细胞增殖，阻止G1期细胞向S期的进程，促进Hep-2细胞凋亡。     

mTOR信号通路调控1,25二羟维生素D_3抑制喉癌细胞Hep-2细胞增殖的研究

目的研究1,25二羟维生素D3抑制喉癌细胞Hep-2细胞增殖作用以及对雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响。方法用不同剂量1,25二羟维生素D3(10-8 mol/L、10-7 mol/L、10-6 mol/L)分别处理Hep-2细胞24、48、72h,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测Hep-2细胞的增殖情况,并计算抑制率;采用流式细胞仪分析1,25二羟维生素D3对Hep-2细胞周期分布的影响,Western blot检测1,25二羟维生素D3对mTOR信号通路的影响。结果不同浓度1,25二羟维生素D3均可抑制Hep-2细胞增殖,改变细胞周期分布,使G0/G1期Hep-2细胞比例增高。1,25二羟维生素D3干预后Hep-2细胞TSC1、TSC2蛋白表达较对照组增高(P0.01),Rheb蛋白表达明显降低;mTOR蛋白及其磷酸化水平表达与对照组比较均降低(P0.01),mTOR蛋白磷酸化表达降低尤为明显(P0.01);4EBP-1蛋白表达较对照组增高(P0.01)。结论 1,25二羟维生素D3改变喉癌细胞Hep-2细胞周期分布,影响mTOR信号通路蛋白表达,从而抑制细胞增殖。     

薏苡仁酯对人喉癌Hep-2细胞增殖和凋亡的作用

目的：观察不同浓度薏苡仁酯对人喉癌Hep-2细胞增殖和凋亡的作用。方法：实验于2005-12／2006—04在锦州医学院药理教研室完成。选用人喉癌细胞株Hep-2（北京同仁耳鼻喉研究所），培养于含体积分数为0．1的胎牛血清的RPMI1640培养基中，置37℃，体积分数为0．05的CO2孵箱中培养并传代。实验分4组，每8孔细胞为1组。对照组（加入等体积的无菌蒸馏水），5，10，20μmol/L薏苡仁酯（商品名：康莱特注射液，浙江康莱特药业有限公司，规格100g／L）组。应用四甲基偶氮唑蓝法观察不同浓度薏苡仁酯对Hep-2细胞增殖的抑制情况，测定其吸光度值；采用流式细胞术方法观察不同浓度薏苡仁酯对Hep-2细胞凋亡率的改变。结果：①四甲基偶氮唑蓝法测定：5，10，20μmol／L薏苡仁酯组作用48h后吸光度值（A540）明显低于对照组（分别为1．673&;#177;0．015，1．362&;#177;0．148，1．019&;#177;0．036，1．807&;#177;0．042，t=1．10，P〈0．01），且呈现一定的浓度依赖性，各个剂量组之间的差异也存在显著性。②流式细胞仪测定：5，10，20μmol／L薏苡仁酯组作用48h后抑制Hep-2细胞的细胞凋亡率高于对照组，并能诱导Hep-2细胞凋亡，且呈浓度依赖性[（6．49&;#177;0．27）％，（11.33&;#177;0．12）％，（13．56&;#177;0．47）％，（0．08&;#177;0．06）％，t=16．27，P〈0．05]。结论：薏苡仁酯可促进喉癌Hep-2细胞增殖抑制和凋亡，并呈浓度依赖性。为薏苡仁酯用于喉癌临床治疗提供了部分依据.     

奥曲肽对Hep-2细胞增殖的抑制作用

目的喉癌是喉部最常见的恶性肿瘤,喉癌的发病率目前有逐年提高的趋势。近年来的研究表明,奥曲肽对许多实体肿瘤及正常组织有抗增生作用,还具有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡的作用。本实验旨在研究奥曲肽对喉癌Hep-2细胞增殖和凋亡的作用及其机制的初步探讨。方法通过MTT比色试验和测定细胞生长曲线研究奥曲肽对Hep-2细胞增殖的作用,经流式细胞仪检测研究奥曲肽对Hep-2细胞凋亡和细胞周期的影响。结果奥曲肽浓度在0.05μg/ml-20μg/ml范围内对Hep-2细胞均有抑制作用,48 h时最显著,但血清组与无血清组比较,抑制率明显下降(P0.05)。无血清组奥曲肽浓度在0.1μg/ml的奥曲肽抑制作用最为显著,为24.67%(P0.01,vs con-trol)。在奥曲肽作用下72 h内,Hep-2细胞的生长曲线有明显下降(P0.05),奥曲肽浓度在0.05μg/ml和0.1μg/ml范围内,Hep-2细胞生长曲线较低平。经流式细胞仪检测,Hep-2细胞出现G0/G1阻滞,0.1μg/ml的奥曲肽最显著(73.97±0.48)%(P0.05);实验组G2/M期细胞比例亦有下降(P0.05 vs control);而实验组与对照组S期细胞的比例无显著性差异(P0.05)。结论本研究结果提示奥曲肽抑制Hep-2细胞增殖可能是通过诱导G0/G1阻滞和诱导细胞凋亡而实现的,为喉癌的综合治疗提供了理论依据。     

姜黄素对喉癌Hep-2细胞增殖及Bcl-2、Bax基因表达的影响

目的探索姜黄素对喉癌细胞增殖的作用以及对细胞Bcl-2和Bax基因表达的影响。方法 Hep-2细胞暴露于含姜黄素(3-25μM)的培养基中,分别培养24h及48h,用MTT法检测对细胞增殖的影响;用RT-PCR法检测Bcl-2和Bax的mRNA表达水平。结果 MTT显示,姜黄素使Hep-2细胞增殖明显降低,并呈时间-剂量依赖性;RT-PCR结果显示,姜黄素使Bcl-2的mRNA表达水平降低,而使Bax的mRNA表达水平升高,并呈剂量和时间依赖性。结论姜黄素对人喉癌Hep-2细胞增殖具有显著的抑制作用。其作用机制可能与其下调Bcl-2基因表达水平及上调Bax基因表达水平,从而诱导细胞凋亡有关。     

MTT法检测纳米金粒子体外细胞毒性的研究

目的研究球形纳米金粒子对人成纤维细胞的体外细胞毒性作用;方法应用柠檬酸钠还原法制备纳米金溶胶,将纳米金溶胶制备成不同浓度的含金培养液,采用MTT法体外检测其对人成纤维细胞的细胞毒效应。结果培养液中加入不同浓度纳米金溶胶（1.875 mg.L-13、.750 mg.L-17、.500 mg.L-11、5.000 mg.L-13、0.000 mg.L-1）各组细胞相对增殖率（RGR）分别为112.653%,111.293%,89.524%,72.109%,46.803%,加入15.000 mg.L-1、30.000 mg.L-1纳米金溶胶组,其RGR与空白对照组有显著差异,1.875 mg.L-1、3.750 mg.L-1组毒性评级为0级,7.500 mg.L-1、15.000 mg.L-1组毒性评级为1级,倒置显微镜下细胞形态正常,生长良好,30.000 mg.L-1组毒性评级为3级,镜下可见细胞明显的空泡变性;结论此种纳米金粒子的体外细胞毒性呈剂量依赖关系,低浓度纳米金粒子具有良好的生物相容性,30.000 mg.L-1纳米金粒子有中度细胞毒性。     

SPIO标记浓度对BMSCs生物学特性的影响及体外MRI表现

目的：观察不同浓度超顺磁性氧化铁（SPIO）标记对干细胞生物学特性的影响及SPIO标记后BMSCs体外的MRI特征。材料与方法分离、培养SD大鼠的BMSCs,取第四代的BMSCs,通过流式细胞仪检测表面抗原。不同浓度的SPIO标记液标记BMSCs,通过普鲁士兰染色检测标记效率,台盼兰活细胞计数检测细胞活力,MTT法检测细胞增殖活性。通过MRI检查,观察体外不同浓度SPIO标记细胞的信号变化情况。结果 SPIO在25～50μg/ml的浓度范围可以安全、高效地标记BMSCs,不会影响BMSCs的表型、活力和增殖等生物学特性;当SPIO浓度在75μg/ml以上时,BMSCs活性及增殖能力逐渐降低。随着SPIO标记浓度的增加,细胞内摄入的铁逐渐增多,而T2信号强度则逐渐降低;当SPIO浓度≥50μg/ml,标记细胞的T2信号强度与普通BMSCs相比较均有明显差异（P〈0.05）。结论适当浓度的SPIO标记BMSCs对其生物学活性没有明显影响,且MRI扫描能够有效检测其信号变化。     

汉防己甲素、雷洛昔芬及其联合应用逆转人肝癌耐药细胞株多药耐药性的研究

目的：探讨汉防己甲素（TTD）、雷洛昔芬及其联合应用对人肝癌多药耐药细胞株Hep-3B/ADM耐药性的逆转作用。方法：通过阿霉素（ADM）浓度梯度递增诱导法,建立人肝癌多药耐药细胞株Hep-3B/ADM。MTT法检测细胞对化学疗法药物的敏感性;流式细胞仪检测P-gp的表达及细胞内ADM强度。结果：ADM对Hep-3B和Hep-3B/ADM细胞的IC50分别为0.059μg/ml和2.131μg/ml,雷洛昔芬（4.90μmol/L）及TTD（1.00μmol/L）单用和两药联合处理Hep-3B/ADM细胞时,ADM的IC50值分别为0.234μg/ml、0.168μg/ml、0.096μg/ml。TTD及雷洛昔芬可降低耐药细胞株P-gp蛋白的表达,且联用有增强效果,同时还观察到逆转剂雷洛昔芬和TTD作用后细胞内阿霉素浓度增加,两药联合作用时效果增强。结论：TTD及雷洛昔芬均可逆转耐药,且联合作用效果增强。     

叶酸分子靶向载顺铂磁性纳米药物制备及表征

背景：醛基化海藻酸钠具有良好的水溶性和组织相容性,利用其改性Fe3O4磁性纳米颗粒可增加表面活性和稳定性,叶酸的修饰可赋予载体分子靶向性。目的：制备具有叶酸受体靶向及磁靶向的载顺铂磁性纳米药物（CDDP-FA-ASA-MNPs）。方法：采用高碘酸钠氧化法制备醛基化海藻酸钠,叶酸的羧基经二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺活化后合成FA与双端氨基聚乙二醇的耦连产物FA-PEG,化学共沉淀法制备Fe3O4,海藻酸钠侧链含有大量羧基,85℃下与Fe3O4纳米颗粒表面的羟基形成化学键结合,然后通过雪夫氏碱将FA-PEG与醛基化海藻酸钠相连接,最后根据配位络合的原理,顺铂分子中的-Cl被海藻酸钠的羧基取代,形成稳定的叶酸和醛基化海藻酸钠改性载顺铂磁性纳米复合物。结果与结论：所制备的磁性纳米药物呈颗粒状,稳定分散于水溶液中,Fe3O4磁核平均粒径为（8.116±0.24）nm,流体力学直径为（110.9±1.7）nm,zeta电位为（-26.45±1.26）mV,最大饱和磁化强度为56.2emu/g,顺铂包封率为（49.05±1.58）%,载药量为（14.31±0.49）%。体外实验证实,叶酸分子靶向载顺铂磁性纳米药物能被叶酸受体表达阳性的鼻咽癌细胞HNE-1和喉癌细胞Hep-2选择性摄取,而叶酸受体表达阴性的鼻咽癌细胞CNE-2则不摄取。提示所制备的CDDP-FA-ASA-MNPs具有良好的水溶性和稳定性,能被叶酸受体表达阳性的鼻咽癌和喉癌细胞摄取。     

吡咯喹啉醌对许旺细胞增殖及Sox10表达的影响

背景：许旺细胞是神经组织工程的种子细胞,但其体外增殖缓慢,难以满足科研与临床对其的需要,而吡咯喹啉醌可以对多种细胞的增殖产生促进作用。目的：观察吡咯喹啉醌对许旺细胞的增殖作用并探讨其对许旺细胞Sox10基因表达的影响。方法：体外培养及纯化大鼠许旺细胞,S-100免疫荧光鉴定许旺细胞;细胞经无血清培养12h后,加入10nmol/L吡咯喹啉醌继续培养24h观察其形态学改变;加入不同浓度（0,1,10,100,1000,10000nmol/L）吡咯喹啉醌于许旺细胞培养24h,利用RT-PCR技术检测Sox10的mRNA表达。结果与结论：吡咯喹啉醌促使许旺细胞发生形态学改变,多数呈束状或并排生长,且细胞数目增多;1~1000nmol/L吡咯喹啉醌可使许旺细胞Sox10mRNA表达增高,100nmol/L时表达最高;10000nmol/L时对Sox10的表达表现为抑制作用（P〈0.05）。     

人工合成多肽FGL对神经细胞模型PC12细胞增殖与凋亡的影响

背景：FGL是NCAM的核心活性多肽片段,可直接作用于成纤维细胞生长因子受体1,激活NCAM的信号传导途径。目的：观察FGL人工合成多肽联合培养对PC12细胞增殖和凋亡的作用。方法：将培养的PC12细胞分为对照组和实验组,实验组预先加入1%的FGL多肽溶液。分别于培养1,3,5,7,9d采用细胞计数试剂8法检测细胞增殖情况。将PC12细胞分为正常组、实验组和损伤组,损伤组加入H2O2刺激16h。实验组加入H2O2与FGL人工合成多肽刺激16h,流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光定量PCR法检测PC12中的核转录因子κBmRNA表达。结果与结论：FGL人工合成多肽与PC12复合培养细胞生长良好,可明显促进PC12细胞的活性并且减低PC12细胞凋亡并可明显降低凋亡模型中PC12细胞核转录因子κB基因的表达。说明FGL多肽可以明显促进PC12细胞增殖,并可以抑制PC12细胞凋亡。     

短发夹核糖核酸沉默EZH2基因对人脑胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨短发夹核糖核酸（sh RNA）对高表达EZH2的人胶质瘤细胞株U251增殖和侵袭的影响。方法构建针对EZH2的sh RNA重组质粒,采用电穿孔的方法转染至U251细胞中,分为对照组、control-sh RNAGFP空载体转染组和EZH2-sh RNA重组质粒转染组。分别通过逆转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测各组细胞EZH2基因和蛋白的表达,以噻唑蓝法测各组细胞的增殖活性,蛋白质印迹法检测各组细胞的EZH2蛋白表达水平;Transwell小室检测细胞侵袭力。结果对照组、control-sh RNA-GFP空载体转染组、EZH2-sh RNA重组质粒转染组U251细胞EZH2基因的表达分别为1.13±0.05、1.15±0.05、0.19±0.02,U251细胞EZH2蛋白的表达分别为1.03±0.03、0.97±0.06、0.20±0.02,转染后24 h细胞增殖能力分别为100.00%±9.31%、100.03%±9.35%、60.13%±3.15%,转染后48 h细胞增殖能力分别为100.00%±9.13%、99.58%±9.27%、53.01%±3.14%,重组质粒转染组较另两组均明显下降,差异有统计学意义（P〈0.05）;重组质粒转染组转染48 h后细胞磷酸化蛋白激酶B和磷酸化叉头框蛋白O1水平降低、细胞周期蛋白D1表达减少、p27蛋白表达增多,差异有统计学意义（P〈0.05）。Transwell小室侵袭实验显示侵袭至Transwell小室滤膜下表面的细胞数在EZH2-sh RNA重组质粒转染组[（46.00±2.82）个]低于对照组[（60.67±5.71）个]和control-sh RNA-GFP空载体转染组[（61.00±2.48）个],差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 EZH2基因沉默能有效抑制人胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力,为深入研究EZH2在胶质瘤中作用提供了研究基础。